Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2016-10-17T16:03:22Z No. of bitstreams: 1 2015 - Paula Cardoso de Almeida Silva.pdf: 2121155 bytes, checksum: b827c0e7a20bdec7ae36fca85e2c8455 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-17T16:03:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015 - Paula Cardoso de Almeida Silva.pdf: 2121155 bytes, checksum: b827c0e7a20bdec7ae36fca85e2c8455 (MD5) Previous issue date: 2015-11-06 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Embryo transfer and other biotechnologies are intensivelyused for equine reproduction and other species as well. Even though there is an expansion of the mule market and an increase in the number of animals, researches working with reproduction of these animals are still scarce. The aim of this study was to evaluate aspects of embryo transfer, embryo morphology and gender identification of hybrid (horses x donkeys) embryos, checking either their similarity or divergence with the characteristics already known of equine embryos. Attempts of embryo collection on Day 6 -9 after OV were performed in mares previously bred with a P?ga donkey. The embryo recovery rates, the characteristics related to age, morphology and embryonic diameter were evaluated. After these assessments, a group of embryos was cut using an adapted technique, where, the cutting process was carried out with the aid of an ophthalmic scalpel blade. The resulting biggest cut portion was used for embryo transfer, and the smallest parts and the others whole embryos to determination of the embryo gender. Data were analyzed using Fisher's exact test, with 5% significance, except the daily growth of embryos, which was analyzed by linear regression. The overall embryo recovery rate was 55,9% (71/127), and for each group D6, D7, D8 and D9, was 57,1% (28/49), 51% (25/49), 63% (15/24) 60% (3/5), respectively. The developmental stage of the collected embryos were, morula: 18.3% (13/71); early blastocysts: 26,8% (19/71); blastocyst: 29,6% (21/71); and expanded blastocysts: 25,3% (18/71). The measured diameter revealed that the size of the embryos ranged from 147 to 1688?m, the mean diameter of all collected embryos was 438,04?m, and according to different groups, the average size (smallest and largest diameter) of embryos were D6 (n = 29) - 183,4?m (147 - 253?m), D7 (n = 24) - 463,2?m (168 - 886?m), D8 (n = 15) - 727,2?m (422 - 1224?m ) and D9 (n = 3) - 1350,6?m (844 - 1688?m), and daily growth rate was 312,7?m. After the section, the 23 embryos were transfered, only one recipient mare was diagnosed as pregnant at 15 days after ovulation, however after 30 days the embryo was lost. The efficiency of the sex identification by PCR using the primers SRY and ZFX / ZFY was 85,9% (61/71), being 55,7% (34/61) determined as female: and 39,3% (27/61) as male. Embryo transfer has shown to be favorable to aid mule reproduction, whereas the recovery rate and the characteristics of the embryos are similar to equine embryos. Altough, the methodology used to section of embryos had unable the gestational development, the most part of the biopsy derived cutting allowed sexing of the embryos / A transfer?ncia de embri?es e outras biotecnologias reprodutivas s?o cada vez mais utilizadas para a produ??o de equinos e de outros animais, entretanto, mesmo com a expans?o do mercado de muares e com crescimento do n?mero de animais, as pesquisas relacionadas com a produ??o desses animais ainda s?o raras. O presente estudo avaliou as caracter?sticas relacionadas ? transfer?ncia de embri?es, a morfologia e a identifica??o do sexo de embri?es h?bridos (muares), verificando sua semelhan?a ou diverg?ncia com as caracter?sticas j? conhecidas em equinos. Foram realizadas colheitas de embri?es provenientes do cruzamento de ?guas com um jumento P?ga, nos dias 6, 7, 8 e 9 ap?s a ovula??o, a taxa de recupera??o embrion?ria, e as caracter?sticas relacionadas com a idade, morfologia e di?metro embrion?rio foram avaliadas para os diferentes dias. Ap?s essas avalia??es, uma parte dos embri?es coletados foi seccionada, com uma t?cnica adaptada onde o corte foi realizado com o aux?lio de uma l?mina de bisturi oftalmol?gico. A maior por??o resultante do corte foi destinada para transfer?ncia de embri?es e a menor parte, juntamente com os embri?es inteiros, foram utilizados para verificar a efici?ncia dos primers SRY e ZFX/ZFY, na an?lise molecular para a determina??o do sexo dos embri?es. Os dados foram analisados pelo teste Exato de Fisher, com 5% de signific?ncia, exceto o crescimento di?rio dos embri?es que foi analisado atrav?s da regress?o linear. A taxa de recupera??o embrion?ria total foi de 55,9% (71/127), e para os diferentes dias de colheita D6, D7, D8 e D9, foi 57,1% (28/49), 51% (25/49), 63% (15/24), 60% (3/5), respectivamente. Os embri?es coletados apresentavam-se nos seguintes est?gios de desenvolvimento, m?rulas: 18,3% (13/71); blastocistos iniciais: 26,8% (19/71); blastocistos: 29,6% (21/71); e blastocistos expandidos: 25,3% (18/71). O di?metro mensurado revelou que o tamanho dos embri?es variou entre 147 - 1688?m, a m?dia do di?metro de todos os embri?es recolhidos foi de 438,04?m, e de acordo com os diferentes dias de colheita, o tamanho m?dio (maior e menor di?metro) dos embri?es foi de: D6 (n = 29) ? 183,4?m (147 - 253?m), D7 (n = 24) ? 463,2?m (168 - 886?m), D8 (n = 15) ? 727,2?m (422 - 1224?m) e D9 (n = 3) ? 1350,6?m (844 ? 1688?m), e a taxa de crescimento di?ria foi de 312,7?m. Ap?s a sec??o e transfer?ncia de 23 embri?es, apenas uma receptora foi diagnosticada como gestante aos 15 dias, mas aos 30 dias, o embri?o tinha sido absorvido. A identifica??o do sexo atrav?s da t?cnica de PCR, utilizando os primers SRY e ZFx/ZFy foi de 85,9% (61/71), sendo determinado f?meas: 55,7% (34/61) e machos: 39,3% (27/61). A transfer?ncia de embri?es ? favor?vel para auxiliar na produ??o de muares, a taxa de recupera??o e as caracter?sticas dos embri?es s?o semelhantes aos embri?es equinos. A metodologia de sec??o dos embri?es, inviabilizou o desenvolvimento gestacional, entretanto a biopsia oriunda do corte permitiu a sexagem da maioria dos embri?es coletados.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2015-11-12T01:11:08Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o Adriana Fidelis - Vers?o Definitiva.pdf: 9437752 bytes, checksum: f708082e56eba193c45496d67cab5993 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-12T01:11:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o Adriana Fidelis - Vers?o Definitiva.pdf: 9437752 bytes, checksum: f708082e56eba193c45496d67cab5993 (MD5) Previous issue date: 2013-03-13 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / In the 1960? the mining company Plumbum Mineradora was installed in the Satate of Bahia, Brazil. This company, which produced lead ingots for 33 years, left over 400,000 tons of slag, which contained, among other pollutants, cadmium and lead. These metals are currently found in the soil surrounding the old factory, in concentrations considered highly toxic. A study was started to investigate possible bioremediation in the area with the isolation of bacteria from the rhizosphere of local plants, followed by the test in their performance in metals contaminant tolerance. Finally, identification of the bacteria was made based on molecular marker 16S rRNA. The isolation protocol was carry out using Nutrient Agar and after obtaining a pure culture. The isolates were then subjected to tests of Minimum Inhibitory Concentration (CIM). Each isolate served as a source for extraction of DNA for molecular analysis with 16S rRNA region. Among the rhizospheres collected, those from which the greatest number of species were isolated from plants with a perennial habit, among them the castor bean (Ricinus communis L.) and emba?ba (Cecropia pachystachya Tr?cul) which together comprised approximately 38% of all species of bacteria obtained. Interestingly, from the castor bean (an exotic plant in Brazil), 2/3 of the bacteria were Gram negative, while from the emba?ba (a native plant of Brazil), ? of the bacteria isolated were of Gram positive. Regardless of the classification of Gram, the bacteria studied showed higher tolerance to lead; 70% of Gram negative bacteria showed conspicuous morphological changes, whereas of those that were Gram positive, only 13% demonstrated. In addition, these bacteria have been identified by molecular analysis using the 16S rRNA marker. The used methodology based on analysis of parsimony and distance trees. As a result, the region 16S was able to identify only 22% of species while the remain species could only be identified to genus or to infra-generic groups. Therefore, the data suggest that the Gram negative and Gram positive bacteria have distinct mechanisms of adaptation in environments polluted by lead and cadmium and that the 16S region is not an efficient universal barcode marker, which should be used only as the first step on the identification of bacteria. Although this study does not provide a final parameter for ecological factors under consideration here, it provides an insight into the influence of the plant habitat on bacterial communites, and the role of Gram in the mechanisms of tolerance. It is hope to explore these aspects in the further studies. / Na d?cada de 60, a empresa de minera??o Plumbum Mineradora foi instalada no Estado da Bahia, Brasil. Esta empresa, a qual produziu lingotes de chumbo por 33 anos, deixou mais de 400.000 toneladas de esc?ria, a qual continha, dentre outros poluentes, c?dmio e chumbo. Estes metais s?o, atualmente, encontrados no solo do entorno das antigas instala??es da f?brica, em concentra??es consideradas altamente t?xicas. Este estudo come?ou a investigar a biorremedia??o da ?rea com o isolamento de bact?rias das rizosferas de plantas locais, seguido por testar a toler?ncia das bact?rias a esses metais. Finalmente, a identifica??o de bact?rias foi feita baseada no marcador molecular 16S rRNA. O protocolo de isolamento foi realizado em meio de Agar Nutriente e ap?s a obten??o de cultura pura, os isolados foram submetidos a testes de Concentra??o Inibit?ria M?nima (CIM). Cada isolado serviu de fonte para extra??es de DNA para an?lise molecular com a regi?o 16S rRNA. Dentre as rizosferas coletadas, as que mais se destacaram em rela??o a quantidade de esp?cies isoladas foram as plantas de h?bito perene, dentre elas, a mamona (Ricinus comunis L.) e a emba?ba (Cecropia pachystachya Tr?cul), que abrigaram juntas aproximadamente 38% de todas as esp?cies de bact?rias obtidas. Interessante notar que da mamona (uma planta ex?tica no Brasil), 2/3 das bact?rias foram Gram negativas, enquanto que da emba?ba (uma planta nativa do Brasil), 3/4 das bact?rias isoladas foram Gram positivas. Independentemente da classifica??o do Gram, as bact?rias apresentaram maior resist?ncia ao chumbo; 70% das Gram negativas apresentaram mudan?as morfol?gicas acentuadas, enquanto que estas, nas Gram positivas, manifestaram-se em apenas 13%. Al?m disso, estas bact?rias foram identificadas por meio de an?lise molecular, com o uso do marcador 16S rRNA. A metodologia usada foi baseada em an?lise de ?rvores de parcim?nia e dist?ncia. Como resultado, a regi?o 16S foi capaz de identificar 22% das esp?cies, enquanto que para o restante mostrou-se eficiente para classifica??o at? g?nero ou para agrupamentos infragen?ricos. Portanto, os dados sugerem que as bact?rias Gram negativas e Gram positivas possuem mecanismos de adapta??es distintos em ambientes polu?dos por chumbo e c?dmio e que a regi?o 16S n?o ? eficiente como marcador universal tipo ?c?digo de barras?, o qual deve ser utilizado apenas como a primeira ferramenta de identifica??o de bact?rias isoladas. Apesar deste estudo n?o servir como par?metro definitivo para considera??es ecol?gicas, ele fornece conhecimento sobre a influ?ncia do h?bito da planta sobre a comunidade bacteriana e o papel da estrutura morfol?gica das bact?rias (Gram) nos mecanismos de toler?ncia. Espera-se que estes dados possam ser explorados em estudos posteriores.