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A series of six experiments was conducted on female cattle and guinea-pigs to investigate the effects of some anabolic compounds on both growth and reproductive functions in the two species. The results indicate that trenbolone acetate increased significantly, the live-weight gains of heifers and improved the efficiency of food conversion. Zeranol and oestradiol-17 treatments had no effect on growth performance. Trenbolone acetate inhibited or delayed ovulation and resulted in elevation of plasma oestradiol-17 concentrations. Zeranol and oestradiol-17 had no effect on estrous cycle occurrence nor ovulation as determined by plasma progesterone concentrations. It is concluded from studies investigating the response to gonadotrophin releasing hormone (Gn-RH), oestradiol benzoate (OE2-B) and pregnant mares' serum gonadotrophins (PMSG) that trenbolone acetate acts (1) on the pituitary gland to decrease the sensitivity to Gn-RH, (2) on the ovary to decrease the sensitivity of the ovarian follicles to gonadotrophins and (3) acts on the pituitary gland and/or the hypothalamus to block the positive feedback effect of oestrogen to release the LH-surge. In the guinea-pig, trenbolone acetate at dose levels of 2 and 10 mg/kg body-weight inhibited ovulation. At a dose level of 0.4 mg/kg body weight, trenbolone acetate prolonged the length of the oestrous cycle. When trenbolone and testosterone, at dose levels of 3.1 and 15.7 mmol/l each, were compared, trenbolone was shown to have more general promoting activity than testosterone. The high dose of both hormones inhibited ovulation and increased the rate of occurrence of atretic follicles. However, only testosterone at the higher dose decreased the weight of the ovaries and lowered the number of follicles. From studies measuring the response to follicles stimulating hormone (FSH) and human chorionic gonadotrophin (HCG), it is concluded that, in the female guinea-pig, trenbolone acetate had no effect on LH-surge mechanism, but it may act on the pituitary gland to block the release of FSH.

Methods were established for the serum-free primary culture of rat and sheep hepatocytes. These were used to study the IGF-1 production by the cells. IGF-1 in media was separated by acid gel filtration or HPLC prior to RIA. IGF-1 production by both rat and sheep hepatocytes were time-dependent over 30 hours of culture. Production rates by rat cells in modified Eagle's medium, sheep cells modified Eagle's medium and Waymouth's medium were 13.1, 4.4 and 6.4 pmol/mg cell DNA/10 hours respectively. IGF-1 production by rat cells was very sensitive to altering concentrations of amino acids, glucose and both in the medium. IGF-1 production by sheep cells was also controlled by nutrients in modified Eagle's medium, but was not as sensitive as in rat cells. Growth hormone (GH), unlike insulin and T₃, had no effect on hepatic IGF-1 production in rat cells. In contrast, omitting GH from the medium for sheep cells decreased IGF-1 production by 20-60% in sheep cells. Insulin also controlled hepatic IGF-1 production in sheep. The results show the species difference in the hepatice IGF-1 production and control between rats and sheep. Data in this thesis are thought to provide the first published evidence of a direct nutritional control over IGF-1 production in rat hepatocytes and to give the first direct evidence that sheep hepatocytes produce IGF-1 and this is directly controlled by GH.

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Made available in DSpace on 2014-10-09T12:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:56:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP / FAPESP:06/58510-0

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:56:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Queratinócitos são células bastante atrativas para a transferência gênica ex vivo e liberação sistêmica, uma vez que as proteínas secretadas por estas células podem atingir a circulação via um mecanismo similar ao processo natural. No presente trabalho, queratinócitos transduzidos mediante um vetor retroviral com o gene do hormônio de crescimento de camundongo (mGH) foram submetidos a um tratamento de aderência ao colágeno e à análise clonal, com o intuito de enriquecer esta população de queratinócitos em células-tronco. O principal resultado foi um aumento da viabilidade celular in vitro dos queratinócitos tratados, que poderá se refletir num aumento da durabilidade da secreção do hormônio in vivo, quando realizado o implante de culturas organotípicas em camundongos anões imunodeficientes (lit/scid). Foi também utilizado um modelo de terapia gênica in vivo, baseado na eletrotransferência de DNA plasmidial (naked DNA), contendo o gene do hormônio de crescimento humano (hGH), no músculo quadríceps de camundongos anões (lit/lit) e anões imunodeficientes (lit/scid). Foram padronizadas as condições de eletroporação em 8 pulsos de 50 V e 20 ms com 0,5 s de intervalo, utilizando um plasmídeo com o promotor da ubiquitina C e a sequência genômica do hGH. A administração de uma dose única de 50 g do plasmídeo pUC-UBI-hGH em camundongos lit/scid, seguida de eletroporação, propiciou pela primeira vez na literatura obtenção de níveis sustentáveis na circulação de 1,5-3,0 ng hGH/ml, durante 60 dias. Esses animais tratados com DNA apresentaram um aumento de peso altamente significativo (P<0,001) de 33,1%, comparado a uma perda de peso, não significativa, no grupo controle (camundongos injetados com salina + eletroporação). Os músculos quadríceps dos animais tratados apresentaram um aumento de 48%, quando comparados aos dos animais do grupo controle (P<0,001). Outro estudo de eletrotransferência foi realizado comparando a utilização da sequência genômica do hGH (gDNA) com a complementar (cDNA), em plasmídeos sob o controle do promotor de citomegalovírus (CMV). Foi observado que o cDNA do hGH foi expresso de maneira mais eficiente na circulação de camundongos lit/scid, por um período de 21 dias. Foram também construídos vetores lentivirais com os genes do hGH (cDNA e gDNA) e do mGH (cDNA), que serão utilizados num próximo estudo, tanto para a transdução de queratinócitos, como para a eletrotransferência in vivo. Vetores lentivirais serão de fato necessários para futuros estudos devido a sua reduzida toxicidade em comparação com os retrovirais. Os resultados deste trabalho, assim como as perspectivas de estudo abertas, têm como meta estabelecer condições para que a terapia gênica seja num futuro próximo uma alternativa viável e segura para o tratamento da deficiência de GH e de outras doenças sistêmicas. / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP / FAPESP:06/58510-0