Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2001. / Härtill 6 uppsatser.

Thesis (Ph. D.)--Cornell University, May, 2007. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 324-341).

Frankfurt (Main), Univ., Diss., 2004.

University, Diss., 2003. --(Nicht für d. Austausch)--Frankfurt (Main). / Zeichendarst. im Sachtitel teilw. nicht vorlagegemäß wiedergegeben.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-21T11:12:03Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 336431 bytes, checksum: 887553804bbe90d701abf5a9a80de79d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-21T11:12:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 336431 bytes, checksum: 887553804bbe90d701abf5a9a80de79d (MD5) Previous issue date: 2001-10-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Foram avaliadas pela técnica de ATP-bioluminescência i) a qualidade microbiológica da água do manancial de captação para tratamento na ETA/UFV, da água de resfriamento de amônia e da água industrial de uso em um laticínio, ii) a adesão de Escherichia coli K12 e de esporos de Bacillus sporothermodurans, em suspensões, contendo cerca de 10 4 e 10 6 UFC/mL, em aço inoxidável e em polietileno de baixa densidade a 37°C e tempo de adesão de 24h. e, iii) o procedimento de higienização em superfícies de caminhão tanque, tanque de resfriamento de leite cru, tanque de equilíbrio do pasteurizador, desnatadeira, tanque de armazenamento de leite pasteurizado e tanque de equilíbrio para empacotamento de leite pasteurizado. Nas águas foram efetuadas, também, as contagens de mesófilos aeróbios, expressos em UFC/mL e coliformes totais, expressos em NMP/100mL. Nas superfícies foram determinados os números de mesófilos aeróbios aderidos, expressos em UFC/cm 2 . Foi utilizado o luminômetro UNILITEX-cel (BIOTRACE), para os testes de determinação de ATP, expressos em Unidades Relativas de Luz (URL), incluindo ATP total e livre. Em relação à água industrial, houve a concordância entre os métodos de bioluminescência e de contagem de mesófilos aeróbios e coliformes totais. As amostras de água de manancial e de resfriamento não apresentaram diferença (p<0,05), pelo teste de Tukey, para as quantidades de ATP total, livre e também para as contagens microbianas. Constataram-se concentrações de ATP microbiano diferentes para essas amostras de água. Os resultados indicam que teste de ATP total é mais recomendado e sugerem que qualidade físico-química da água diminui a medida de luz. A bioluminescência não foi apropriada para avaliar a presença de esporos de B. sporothermodurans e de E. coli nas superfícies avaliadas. A determinação das URL foi afetada pelas condições de adesão da E. coli. Os resultados mostram que tanto a concentração de ATP total e a contagem de mesófilos aeróbios foram diferentes (p<0,05) quando se comparou antes - 9772 URL e 1,20 X10 3 UFC/cm 2 - e após - 2511 URL e 1,10x10 1 UFC/cm 2 - o procedimento de higienização. A bioluminescência considerou 100% das superfícies em condições higiênicas insatisfatórias e contagem em placas apenas detectou 50%, considerando a recomendação da APHA e 28% a recomendação da OMS. Não houve concordância entre bioluminescência e a contagem microbiana na classificação quanto às condições higiênicas das diferentes superfícies. Observou-se grande variação na leitura de URL, sugerindo a necessidade de se efetuar mais de uma análise na superfície avaliada. A técnica de ATP-bioluminescência pode ser usada como indicadora das boas condições de limpeza, não apresentando relação com a contagem microbiana, indicando também a possibilidade de adesão microbiana e formação de biofilmes. / ATP-bioluminescence techniques were used to evaluate i) the microbiological quality of the ETA/UFV, treatment water, ammonia-cooling water and industrial water at a dairy, ii) the adhesion of Escherichia coli K12 and Bacillus sporothermodurans spores, in suspensions containing around 10 4 to 10 6 UFC/mL on stainless steel, at 37oC and adhesion time of 24 h and, iii) hygiene monitoring of truck surfaces, raw milk cooling tanks, pasteurizering tanks, milk centrifuge, pausterized milk storing tank and pausterized milk packaging tank. Aerobic mesophyllic and total coliform countings were also conducted in the water samples, respectively, expressed as UFC/mL and NMP/100 mL. The numbers of Aerobic mesophylls, expressed in UFC/cm 2 were determined on the surfaces. The UNILITEX-cel (Biotrace) luminometer was used for determining ATP, expressed as Relative Units of Light (RUL), including total and free ATP. For industrial water, there was an agreement between the bioluminescence and the counting methods of aerobic mesophylls and total coliforms Treatment and cooling water samples did not present any difference (p > 0.05) by the Tukey test for total and free ATP amounts nor for the microbial countings. Different microbial ATP concentrations were found for these water samples. The results indicate that the total ATP test is more adequate, suggesting that the physical chemical quality of water decreases light measurement. Bioluminescence was not appropriate to evaluate the presence of B. sporothermodurans and E. coli spores on the surfaces evaluated. RUL determination was affected by E. coli adhesion conditions. The results show that both total ATP and aerobic mesophyll countings were different (p < 0.05) when hygiene monitoring was compared before - 9772 RUL and 1.20 x 10 3 UFC/cm 2 - and after - 2511 RUL and 1.10 x 10 1 UFC/cm 2 . Biolominescence considered 100% of the surfaces to be under inadequate hygiene conditions while plate counting detected only 50%, based on APHA recommendation and 28%, based on WHO recommendation. There was no agreement between bioluminescence and microbial counting for hygiene condition classification under different surfaces. A great variation in RUL reading was observed, suggesting the need to carry out more than just one analysis on the surface evaluated. / Dissertação importada do Alexandria

magister en fisiología / El transportador ATP Binding Cassette A1 (ABCA1) facilita el flujo de salida de colesterol hacia las apolipoproteinas A-1 (apoA-1) libre de lípidos, siendo una proteína de membrana esencial en las etapas iniciales de la biogénesis de las lipoproteínas de alta densidad (HDL, High Density Lipoprotein, de sus siglas en inglés). Evidencia reciente sugiere que ABCA1 regula el contenido lipídico, la tolerancia a la glucosa y la sensibilidad a la insulina en el tejido adiposo. La mayor parte del transporte de glucosa mediado por GLUT4 ocurre en los túbulos transversales (TT), un sistema de membrana especializado enriquecido en colesterol y esfingolípidos presente en las células del músculo esquelético. De manera interesante, el contenido de colesterol en los TT está aumentado en ratones con resistencia a la insulina (RI). Sin embargo, aún es desconocido el papel de ABCA1 en el metabolismo de la glucosa del músculo esquelético. El objetivo principal de este trabajo fue evaluar el papel funcional del transportador ABCA1 sobre la homeostasis de la glucosa y la acumulación de colesterol en el músculo esquelético. Ratones C57BL/6J fueron alimentados por 8 semanas con una dieta control (NCD, Normal Chow Diet, de sus siglas en inglés) o una dieta alta en grasas (HFD, High Fat Diet, de sus siglas en inglés). Se realizaron ensayos de qPCR y Western blot sobre homogeneizados del músculo completo e inmunofluorescencia en fibras aisladas de músculo. Los ratones alimentados con NCD fueron electroporados con plasmidios shABCA1-RFP o scrambled y posteriormente se evaluó la vía de señalización dependiente de insulina, la captación de glucosa medida por 2-NBDG y el contenido de colesterol con la tinción de Filipina III en fibras aisladas del músculo flexor digitorum brevis (FDB). Los niveles de ARNm y el contenido de ABCA1 fue menor en los homogeneizados de músculo de ratones alimentados con HFD comparado con los ratones alimentados con NCD. ABCA1 fue localizado en los TT de fibras aisladas de FDB y la inmunotinción fue menor en fibras provenientes de músculos de ratones HFD comparados con los NCD. La electroporación in vivo del plasmidio shABCA1-RFP de los músculos FDB de ratones NCD resultó en una disminución del 70% del contenido de la proteína ABCA1, con un aumento de 1,6 veces el contenido de colesterol y una disminución de la fosforilación de Akt y de la captación de 2-NBDG dependiente de insulina, comparada con las fibras electroporadas con el plasmidio scrambled-RFP. Basado en estos resultados concluimos que ABCA1 regula el contenido de colesterol y afecta la captación de glucosa en fibras aisladas de músculo esquelético. La evidencia presentada en este trabajo, podría ayudarnos a definir si los cambios en la expresión/función de ABCA1 contribuye a la acumulación anómala de colesterol y el transporte alterado de glucosa, observado en las membranas de los TT del músculo esquelético en una condición de RI.

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京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(生命科学) / 甲第18430号 / 生博第310号 / 新制||生||41(附属図書館) / 31288 / 京都大学大学院生命科学研究科高次生命科学専攻 / (主査)教授 垣塚 彰, 教授 石川 冬木, 教授 松田 道行 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Philosophy in Life Sciences / Kyoto University / DFAM

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La F1FO-ATP synthase mitochondriale produit la majorité de l’énergie cellulaire chezles eucaryotes aérobes sous forme d’ATP par le processus des oxydations phosphorylantes.Chez la plupart des espèces, cette enzyme possède une origine génétique double, nucléaire etmitochondriale. Dans la première partie de ce travail, je décris la construction de modèles delevure de mutations du gène mitochondrial ATP6 de l’ATP synthase découvertes chez despatients atteints de maladies neurologiques (9185T>C and 9191T>C) ou dans des tumeurs(8716A>G, 8914C>A, 8932C>T, 8953A>G and 9131T>C). Le gène ATP6 code une sousunitéessentielle (a/6) du domaine FO de l’ATP synthase. J’ai trouvé que la mutation 9185T>Cn’affecte pas l’assemblage de l’ATP synthase, mais conduit à une diminution de la vitesse desynthèse d’ATP d’environ 30%. La mutation 9191T>C empêche presque entièrementl’incorporation de la sous-unité a/6 dans l’ATP synthase. Les cinq mutations identifiées dansles tumeurs ont un effet modeste à nul, indiquant que ces mutations ne favorisent pas latumorigenèse en affectant le processus énergétique mitochondrial, comme évoquéprécédemment. J’ai ensuite étudié la régulation de la synthèse des sous-unités a/6 et 9 dans lesmitochondries de levures. La sous-unité 9 est présente sous la forme d’un anneau de 10 copiesqui interagit avec la sous-unité 6. Durant la catalyse, la rotation de cet anneau provoque deschangements conformationnels favorisant la synthèse d’ATP dans le secteur F1 de l’ATPsynthase. Je montre que la synthèse de ces protéines est couplée à leur assemblage, demanière à ce qu’elles soient produites dans une stoechiométrie adéquate et pour éviterl’accumulation d’intermédiaires d’ATP synthase potentiellement délétères / Mitochondrial F1FO-ATP synthase produces most of the cellular energy in aerobiceukaryotes under the form of ATP in the process of oxidative phosphorylation. This enzymehas in most species a double genetic origin, nuclear and mitochondrial. In the first part of thiswork, I describe the construction of yeast models of ATP synthase mutations in themitochondrial ATP6 gene, that have been found in patients presenting with neurologicaldisorders (9185T>C and 9191T>C) and in tumors (8716A>G, 8914C>A, 8932C>T,8953A>G and 9131T>C). The ATP6 gene encodes an essential subunit (called a/6) of theATP synthase proton-translocating domain (FO). The 9185T>C mutation had no effect on theassembly of ATP synthase, but reduces the rate of ATP synthesis by 30%. The 9191T>Cmutation almost completely prevented incorporation of the subunit a/6 into the ATP synthase.The five mutations found in tumors had modest, if at all, effect, indicating that thesemutations probably do not favor tumorigenesis, as was hypothesized. In the second part of mythesis, I studied the regulation of synthesis of subunits a/6 and 9 in yeast mitochondria. Thesubunit 9 is present in 10 copies forming a ring that interacts with subunit 6. Protonmovements through the FO induce the rotation of the subunit 9-ring, which results inconformational changes that promote ATP synthesis in the catalytic sector (F1) of ATPsynthase. I discovered mechanisms that enable the coupling of the synthesis of these proteinsto their assembly, as a means to ensure the production of subunits 6 and 9 in the rightstoichiometry and to avoid accumulation of potentially harmful assembly intermediates of theATP synthase.