Moniliophthora perniciosa é o agente causal da doença vassoura-de-bruxa em cacaueiro (Theobroma cacao). Os sintomas da doença compreendem perda de dominância apical, inchamento e excesso de brotações em ramos novos, reversão de meristemas florais em vegetativos, partenocarpia e lesões necróticas em frutos, sugerindo a ocorrência de alterações hormonais no hospedeiro. A disponibilidade de isolados do biótipo-S capazes de infectar o tomateiro, permitiu a utilização da cultivar miniatura \'Micro-Tom\' (MT) como um modelo para estudo da interação Moniliophthora perniciosa x Solanum lycopersicum. Além de provocar sintomas característicos no MT, a disponibilidade de mutantes e linhas transgênicas introgredidos em MT, com alterações que afetam o metabolismo e sensibilidade hormonal, permitem investigar o papel dos hormônios vegetais no desenvolvimento dos sintomas. Inicialmente, foi avaliada a agressividade de três isolados do biótipo-S no MT, sendo que um isolado de Tiradentes apresentou maior agressividade, com maior incidência dos sintomas, maior engrossamento do caule, redução na altura das plantas, aumento no número de lóculos nos frutos e redução na biomassa radicular. Mutantes com alterações na percepção para auxina (diageotropica e entire) e uma linha transgênica expressando uma citocinina oxidase de Arabidopsis (35S::AtCKX2) diferiram para o engrossamento do caule e distribuição do número de lóculos nos frutos em relação ao MT. A linha transgênica 35S::AtCKX2 diferiu significativamente de MT com menor incidência de infecção. O engrossamento do caule associa-se ao aumento na área do córtex e, principalmente do xilema e floema. A aplicação exógena de citocinina sintética benzil-adenina (BA) e da auxina sintética ácido naftaleno acético (ANA) em MT evocam sintomas similares aos de plantas infectadas com M. perniciosa. Linhas transgênicas repórter de sinalização por citocinina (ARR5::GUS) ou auxina (DR5::GUS) indicaram sinalização diferencial por citocinina a 24 h e 36 h após inoculação (HAI) e 48 HAI por auxina. A infecção por M. perniciosa aumentou os níveis de ácido jasmônico, ácido salicílico (AS) e auxina em MT entre 5 d a 30 DAI, com maior incremento aos 5 DAI, enquanto que o nível de ácido abscísico aumentou aos 20 d e 30 DAI, e AS foi o único detectado em micélio dicariótico do biótipo-S. Genes de biossíntese de citocinina (IPT), ativação (LOG), degradação (CKX) e resposta à citocinina (ARRs e CRF) e auxina (AUX/IAA, ARFs, SAUR e GH3) foram induzidos em MT inoculado de 12 h a 5 DAI, mas com maior acúmulo de transcritos aos 30 DAI. M. perniciosa induziu maior expressão desses genes citados e de biossíntese auxina, nos momentos iniciais da interação (12 h a 5 DAI) em 35S::AtCKX2 do que no MT. O efeito da infecção em aumentar o número de lóculos nos frutos parece ser independente ou downstream a mutação fasciated, Mouse ears e ovate. A mutação Lanceolate parece ter um papel na redução do efeito da infecção em aumentar o número de lóculos. Os resultados obtidos sugerem que a infecção pelo M. perniciosa em MT altere os níveis/sinalização dos hormônios vegetais, principalmente auxina e citocinina, provocando o engrossamento do caule (aumento no xilema, floema e córtex), redução no crescimento e na biomassa radicular e aumento no número de lóculos nos frutos / Moniliophthora pernicisa is the causal agent of witches\' broom disease in cocoa (Theobroma cacao). The disease symptoms comprise loss of apical dominance, thickening and proliferation of axillary shoots, shift from inflorescence into vegetative meristem, parthernocarpy and necrotic lesions on fruits, suggesting a host hormonal imbalance. The availability of an isolated of S-biotype M. perniciosa, which colonizes tomato, enabled the utilization of the miniature tomato (Solanum lycopersicum) cultivar \'Micro-Tom\' (MT) as a suitable model to study the pathosystem M. perniciosa x S. lycopersicum. In addition to the characteristic symptoms of the infection in MT, the availability of mutants and transgenic lines introgessed into MT, with changes in plant metabolism and hormonal sensitivity, enable the investigation of the role of plant hormones in the development of symptoms. Initially, we evaluated the aggressiveness of three S-biotype M. perniciosa isolates. The isolate \'Tiradentes\' showed greater aggressiveness infecting MT, with higher plant infection incidence, greater stem thickening, reduction in plant height, increase in fruit locule number and reduction in root dry weight. Mutants with altered auxin perception (diageotropica e entire) and the transgenic line expressing a cytokinin oxidase gene of arabidopsis (35S::AtCKX2) differed in stem thickening and fruit locule number distribution, as compared to MT. The transgenic line 35S::AtCKX2 differed significantly from MT, showing lower incidence of infection. The thickening of the stem may be related with an increase in area of the cortex, especially xylem and phloem. The exogenous application of synthetic cytokinin benzyl adenine (BA) and auxin naphthalene acetic acid (NAA) in MT induces similar symptoms to plants infected with M. perniciosa. Cytokinin (ARR5::GUS) and auxin (DR5::GUS) signaling reporter transgenic lines revealed differential cytokinin signaling 24 h e 36 h hours after inoculation (HAI) and differential auxin signaling in 48 HAI. Infection of MT by M. perniciosa increased the content of JA, SA and auxin during the development of symptoms from 5 d to 30 DAI, with greater increase at an early stage of symptoms development (5 days after inoculation - DAI), whereas abcisic acid content increased in 20 and 30 DAI, and only AS was detected in dicariotic mycelium of the S-biotype M. perniciosa. Cytokinin biosynthesis (IPT), activating (LOG), and breakdown (CKX) genes and response to cytokynin genes (ARRs e CRF) and auxin (AUX/IAA, ARFs, SAUR e GH3) were induced in MT infected in 12 h a 5 DAI, with greater accumulation of transcripts in 30 DAI. M. perniciosa induced higher levels of IPT, LOG, CKX, ARRs, and CRF genes and auxin biosynthesis genes at an ealry stage of infection (12 h a 5 DAI) in 35S::AtCKX2, as compared to MT. The effect of the infection on increasing fruit locule number seems to be independent or downstream fasciated, Mouse ears and ovate mutation. Lanceolate mutation seems to play a role in reducing M. perniciosa ability of increasing fruit locule number. The results suggest infection of MT by S-biotpye M. perniciosa alters levels/signaling of the hormones, especially auxin and cytokinin, inducing stem thickening (increasing xylem, phloem and cortex), reduction in plant height, root dry weight and increase in fruit locule number

Moniliophthora perniciosa é o agente causal da doença vassoura-de-bruxa em cacaueiro (Theobroma cacao). Os sintomas da doença compreendem perda de dominância apical, inchamento e excesso de brotações em ramos novos, reversão de meristemas florais em vegetativos, partenocarpia e lesões necróticas em frutos, sugerindo a ocorrência de alterações hormonais no hospedeiro. A disponibilidade de isolados do biótipo-S capazes de infectar o tomateiro, permitiu a utilização da cultivar miniatura \'Micro-Tom\' (MT) como um modelo para estudo da interação Moniliophthora perniciosa x Solanum lycopersicum. Além de provocar sintomas característicos no MT, a disponibilidade de mutantes e linhas transgênicas introgredidos em MT, com alterações que afetam o metabolismo e sensibilidade hormonal, permitem investigar o papel dos hormônios vegetais no desenvolvimento dos sintomas. Inicialmente, foi avaliada a agressividade de três isolados do biótipo-S no MT, sendo que um isolado de Tiradentes apresentou maior agressividade, com maior incidência dos sintomas, maior engrossamento do caule, redução na altura das plantas, aumento no número de lóculos nos frutos e redução na biomassa radicular. Mutantes com alterações na percepção para auxina (diageotropica e entire) e uma linha transgênica expressando uma citocinina oxidase de Arabidopsis (35S::AtCKX2) diferiram para o engrossamento do caule e distribuição do número de lóculos nos frutos em relação ao MT. A linha transgênica 35S::AtCKX2 diferiu significativamente de MT com menor incidência de infecção. O engrossamento do caule associa-se ao aumento na área do córtex e, principalmente do xilema e floema. A aplicação exógena de citocinina sintética benzil-adenina (BA) e da auxina sintética ácido naftaleno acético (ANA) em MT evocam sintomas similares aos de plantas infectadas com M. perniciosa. Linhas transgênicas repórter de sinalização por citocinina (ARR5::GUS) ou auxina (DR5::GUS) indicaram sinalização diferencial por citocinina a 24 h e 36 h após inoculação (HAI) e 48 HAI por auxina. A infecção por M. perniciosa aumentou os níveis de ácido jasmônico, ácido salicílico (AS) e auxina em MT entre 5 d a 30 DAI, com maior incremento aos 5 DAI, enquanto que o nível de ácido abscísico aumentou aos 20 d e 30 DAI, e AS foi o único detectado em micélio dicariótico do biótipo-S. Genes de biossíntese de citocinina (IPT), ativação (LOG), degradação (CKX) e resposta à citocinina (ARRs e CRF) e auxina (AUX/IAA, ARFs, SAUR e GH3) foram induzidos em MT inoculado de 12 h a 5 DAI, mas com maior acúmulo de transcritos aos 30 DAI. M. perniciosa induziu maior expressão desses genes citados e de biossíntese auxina, nos momentos iniciais da interação (12 h a 5 DAI) em 35S::AtCKX2 do que no MT. O efeito da infecção em aumentar o número de lóculos nos frutos parece ser independente ou downstream a mutação fasciated, Mouse ears e ovate. A mutação Lanceolate parece ter um papel na redução do efeito da infecção em aumentar o número de lóculos. Os resultados obtidos sugerem que a infecção pelo M. perniciosa em MT altere os níveis/sinalização dos hormônios vegetais, principalmente auxina e citocinina, provocando o engrossamento do caule (aumento no xilema, floema e córtex), redução no crescimento e na biomassa radicular e aumento no número de lóculos nos frutos / Moniliophthora pernicisa is the causal agent of witches\' broom disease in cocoa (Theobroma cacao). The disease symptoms comprise loss of apical dominance, thickening and proliferation of axillary shoots, shift from inflorescence into vegetative meristem, parthernocarpy and necrotic lesions on fruits, suggesting a host hormonal imbalance. The availability of an isolated of S-biotype M. perniciosa, which colonizes tomato, enabled the utilization of the miniature tomato (Solanum lycopersicum) cultivar \'Micro-Tom\' (MT) as a suitable model to study the pathosystem M. perniciosa x S. lycopersicum. In addition to the characteristic symptoms of the infection in MT, the availability of mutants and transgenic lines introgessed into MT, with changes in plant metabolism and hormonal sensitivity, enable the investigation of the role of plant hormones in the development of symptoms. Initially, we evaluated the aggressiveness of three S-biotype M. perniciosa isolates. The isolate \'Tiradentes\' showed greater aggressiveness infecting MT, with higher plant infection incidence, greater stem thickening, reduction in plant height, increase in fruit locule number and reduction in root dry weight. Mutants with altered auxin perception (diageotropica e entire) and the transgenic line expressing a cytokinin oxidase gene of arabidopsis (35S::AtCKX2) differed in stem thickening and fruit locule number distribution, as compared to MT. The transgenic line 35S::AtCKX2 differed significantly from MT, showing lower incidence of infection. The thickening of the stem may be related with an increase in area of the cortex, especially xylem and phloem. The exogenous application of synthetic cytokinin benzyl adenine (BA) and auxin naphthalene acetic acid (NAA) in MT induces similar symptoms to plants infected with M. perniciosa. Cytokinin (ARR5::GUS) and auxin (DR5::GUS) signaling reporter transgenic lines revealed differential cytokinin signaling 24 h e 36 h hours after inoculation (HAI) and differential auxin signaling in 48 HAI. Infection of MT by M. perniciosa increased the content of JA, SA and auxin during the development of symptoms from 5 d to 30 DAI, with greater increase at an early stage of symptoms development (5 days after inoculation - DAI), whereas abcisic acid content increased in 20 and 30 DAI, and only AS was detected in dicariotic mycelium of the S-biotype M. perniciosa. Cytokinin biosynthesis (IPT), activating (LOG), and breakdown (CKX) genes and response to cytokynin genes (ARRs e CRF) and auxin (AUX/IAA, ARFs, SAUR e GH3) were induced in MT infected in 12 h a 5 DAI, with greater accumulation of transcripts in 30 DAI. M. perniciosa induced higher levels of IPT, LOG, CKX, ARRs, and CRF genes and auxin biosynthesis genes at an ealry stage of infection (12 h a 5 DAI) in 35S::AtCKX2, as compared to MT. The effect of the infection on increasing fruit locule number seems to be independent or downstream fasciated, Mouse ears and ovate mutation. Lanceolate mutation seems to play a role in reducing M. perniciosa ability of increasing fruit locule number. The results suggest infection of MT by S-biotpye M. perniciosa alters levels/signaling of the hormones, especially auxin and cytokinin, inducing stem thickening (increasing xylem, phloem and cortex), reduction in plant height, root dry weight and increase in fruit locule number

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franciane Gomig.pdf: 1491620 bytes, checksum: 9e4413251eb0f4e70622124b18ded1a5 (MD5) Previous issue date: 2013-04-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Urinary tract infections show a high incidence in the population, mainly in women, the elderly and pregnant women. The main etiological agent is E. coli, especially in Community infections. Antimicrobial therapy is performed extensively with the Quinolones and resistance emergence is striking and upward. It is known E. coli resistance mechanisms are related with QRDR (Quinolone Resistance Region Determining) mutations in gyrA and parC genes that are the drug targets. These genes encode respectively DNA Girase and Topoisomerase IV subunits responsible for DNA supercoiling and DNA decatenating. Another resistance mechanism that come from plasmids is qnr genes encoding a protein that can protect DNA girase and Topoisomerase IV. Another plasmidial gene is aac(6´)-Ib-cr encoding an aminoglycoside acetyltransferase that can inactivate ciprofloxacin and norfloxacin. This study analyzed 58 E. coli lactose negative samples from urine, in order to draw a profile of resistance in this population from the region of Ponta Grossa and analyze the resistance mechanisms involved. There was a high resistance rate of 48%, among which 79% were resistant to all quinolones tested: nalidixic acid, ciprofloxacin, norfloxacin and ofloxacin. There was also a direct relationship between the biotypes 971 and resistance in contrast to biotype 981 and sensitivity. Therefor Quinolones are not recommended in infection due to E. coli biotype 971. On molecular analysis on the multiresistant samples mutations with aminoacid substitution were found in three positions: the gyrA gene at codons 83 and 87 and in the parC gene at codon 80 in three strains and at codon 84 on a single strain. Mutations only at gyrA gene appeared for a sample resistant just to nalidixic acid. These facts are according to the theory of mutations accumulation causing increased resistance to quinolones. Plasmidial genes qnr and aac(6´)-Ib-cr were not found in these strains. / As infecções do trato urinário mostram uma elevada ocorrência na população, especialmente em mulheres, gestantes e idosos. O principal agente etiológico é a E. coli, principalmente nas infecções de origem comunitária. A terapia com antimicrobianos é realizada extensivamente com Quinolonas e o aparecimento de resistência é marcante e ascendente. Os principais mecanismos de resistência conhecidos em E. coli estão relacionados a mutações nas QRDR (Região Determinante de Resistênbcia a Quinolonas) dos genes gyrA e parC, codificadores de subunidades das enzimas DNA Girase e Topoisomerase IV, respectivamente. Essas enzimas, que são os alvos de ação das Quinolonas, são responsáveis pelo superespiralamento e decatenação do DNA. Os genes plasmidiais que também estão envolvidos nos mecanismos de resistência são os qnr que codificam proteínas protetoras das enzimas alvo e o aac(6´)-Ib-cr, que codifica uma enzima aminoglicosídio acetiltransferase capaz de inativar a ciprofloxacina e norfloxacina. Neste trabalho foram analisadas 58 amostras de E. coli lactose negativas provenientes de urina, a fim de se traçar um perfil de resistência nessa população da região de Ponta Grossa e analisar os mecanismos de resistência envolvidos. Observou-se uma elevada taxa de resistência de 48%, dentre as quais 79% foram resistentes a todas as quinolonas testadas: ácido nalidíxico, ciprofloxacina, norfloxacina e ofloxacina. Pode-se observar também uma relação direta entre os biótipos 971 e uma maior resistência e o biótipo 981 e uma maior sensibilidade, motivo pelo qual não seria recomendável o uso de Quinolonas para o tratamento de infecções causadas por E. coli biótipo 971. Pela análise molecular, para as amostras multirresistentes, foram encontradas mutações com substituição de aminoácido nos genes gyrA nos códons 83 e 87 e no gene parC uma única mutação, sendo essa no códon 80 para três cepas e no códon 84 para uma cepa. Mutações apenas no gene gyrA apareceram para amostras resistentes somente ao ácido nalidíxico. Esses dados estão de acordo com a teoria de que o acúmulo de mutações leva a um aumento da resistência às quinolonas. Os genes plasmidiais qnr e aac(6´)-Ib-cr não foram encontrados.

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:24:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcos F Oliveira.pdf: 565936 bytes, checksum: 18bd41ea7085a64e38785d2f152d4eab (MD5) Previous issue date: 2008-02-26 / Bemisia tabaci biotype B presently constitutes a great threat not only for the tomato crop but to several other cultures. The objective of this research was to evaluate the influence of the nutrition of tomato in the resistance induction for shelter, feeding and oviposition of B. tabaci biotype B. The experiments were driven in Escola de Agronomia e Engenharia de Alimentos (EA/UFG), Goiânia, Goiás, Brasil. Three experiments were accomplished outdoors in temperature conditions, humidity and natural photoperiod. In the first different sources of nitrogen were tested, in the second different ratios nitrogen/potassium and in the third party different associations between corrected soil and earthworm manure. Each experiment was subdivided in: with choice chance and without chance of choice of the insect, the first one was carried out on randomized blocks design and the second one completely randomized design. Each treatment had four replications, with one plant per pot. In the first experiment the treatments used were: corrected soil (without addition of fertilizers); potassium saltpeter; urea; phosphate monoamonic; nitrate of calcium; sulfate of ammonium; chicken manure; bone flour; castor oil plant pie; composed organic; and earthworm manure. In the second experiment the ratios were compared N/K: 1/1; 2/1; 4/1; 8/1; 1/2; 1/4; and 1/8. In the third experiment the associations corrected soil were compared + earthworm manure: 100% + 0%; 80% + 20%; 60% + 40%; 40% + 60%; 20% + 80%; 0% + 100%. Five evaluations on the observation of the behavior of B. tabaci biotype B in relation to the feeding preference and shelter were accomplished: 3, 27, 51, 75 and 99 hours after the insect infestation. Leaves were collected at four days after the insect infestation, and appraised in laboratory for oviposition analysis. The different sources of nitrogen, ratios nitrogen/potassium, and associations between corrected soil and earthworm manure used in the tomato fertilization did not induce any effect at the feeding or oviposition of B. tabaci biotype B behavior. / A Bemisia tabaci biótipo B constitui-se atualmente uma grande ameaça não só a cultura do tomateiro mais a diversas outras culturas. O objetivo dessa pesquisa foi avaliar a influência da nutrição do tomateiro na indução de resistência para abrigo, alimentação e oviposição de B. tabaci biótipo B. Os experimentos foram conduzidos na Escola de Agronomia e Engenharia de Alimentos (EA/UFG), Goiânia, Goiás, Brasil. Foram realizados três experimentos ao ar livre em condições de temperatura, umidade e fotoperíodo naturais. No primeiro foram testadas diferentes fontes de nitrogênio, no segundo diferentes relações nitrogênio (N)/potássio (K) e no terceiro diferentes associações entre solo corrigido e esterco de minhoca. Cada experimento foi subdividido em: com chance de escolha e sem chance de escolha do inseto, para o primeiro foi utilizado o delineamento de blocos casualizados e para o segundo o delineamento inteiramente casualizado. Cada tratamento foi composto por quatro repetições, com uma planta por vaso. No primeiro experimento os tratamentos utilizadas foram: solo corrigido (sem adição de adubos); salitre de potássio; uréia; fosfato monoamônico; nitrato de cálcio; sulfato de amônio; esterco de galinha; farinha de osso; torta de mamona; composto orgânico; e esterco de minhoca. No segundo experimento foram comparadas as relações nitrogênio/potássio: 1/1; 2/1; 4/1; 8/1; 1/2; 1/4; e 1/8. No terceiro experimento foram comparadas as associações solo corrigido + esterco de minhoca: 100% + 0%; 80% + 20%; 60% + 40%; 40% + 60%; 20% + 80%; 0% + 100%. Para observação do comportamento de B. tabaci biótipo B em relação à preferência alimentar e abrigo foram realizadas cinco avaliações às 3, 27, 51, 75 e 99 horas após a infestação dos insetos. Para a análise da oviposição, foram coletadas folhas quatro dias após a infestação dos insetos, e avaliadas em laboratório. As diferentes fontes de nitrogênio, relações nitrogênio/potássio e associações entre solo corrigido e esterco de minhoca, utilizadas na adubação de plantas de tomateiro, não foram capazes de induzir a expressão de nenhum efeito inibidor de alimentação, abrigo ou oviposição de B. tabaci biótipo B.