Orientador: Reinaldo Marchetto / Banca: Wilson Rogerio Lustri / Banca: Antonio de Miranda / Resumo: CcdB é uma proteína de 11,7 kDa, com 101 resíduos de aminoácidos, produzida pelo plasmídeo F, como parte de um sistema de morte programada, de dois componentes, para a manutenção do número de cópias do plasmídeo. Neste sistema, CcdB age como uma toxina e o CcdA como um antídoto. Na ausência do CcdA, devido à perda do plasmídeo durante a replicação celular, CcdB pode matar bactéria pela inibição das enzimas DNA-girase e topoisomerase IV (topo IV). Girase e a topo IV são topoisomerases, ATP dependentes, responsáveis pelos processos de replicação e transcrição do DNA bacteriano, de modo que exercem papel fundamental na viabilidade dos microrganismos procariotos. Peptídeos derivados do CcdB têm demonstrado grande capacidade de inibição enzimática in vitro, porém a baixa permeabilidade da membrana celular bacteriana a estes derivados tem prejudicado a atividade in vivo. No intuito de criar um meio para facilitar a inserção de derivados sintéticos do CcdB em células bacterianas, uma série de peptídeos, constituídos de quatros seqüências carreadoras fundidas ao derivado peptídico CcdB1, foi sintetizada pela metodologia da fase sólida. Estes peptídeos foram testados quanto à inibição da girase e topo IV em solução. Dois peptídeos apresentaram inibição, com valores de IC100 abaixo de 100 μM, para ambas as enzimas. Estudos de dicroísmo circular associado aos ensaios de inibição evidenciaram forte dependência da atividade com a presença da hélice C-terminal. O derivado CPP1-CcdB1 apresentou atividade antimicrobiana contra Bacillus subtilis, a uma concentração de 50 μM, mostrando que a inserção de uma seqüência carreadora, pode facilitar o transporte de derivados do CcdB através da membrana celular. Além disso, a molécula de CcdB1 pode servir como um bom modelo para o desenvolvimento de novos CPPs. / Abstract: CcdB is an 11.7 kDa protein with 101 amino acid residues, produced by the F plasmid as part of a two-component system of programmed cell death for maintaining plasmid copy number. In this system, CcdB acts as a toxin and CcdA as an antidote. In the absence of the CcdA, due to loss of plasmid during cell replication, CcdB can kill bacteria by inhibition of the DNA gyrase and topoisomerase IV (topo IV) enzymes. Gyrase and topo IV are ATP dependent topoisomerases, responsible for the transcription and replication processes in bacterial DNA, so that carries key role in the viability of prokaryotes microorganisms. Peptides derived from CcdB have shown great capacity for in vitro enzyme inhibition, but the low permeability of the bacterial cell membrane to these derivatives has damaged the activity in vivo. In order to create a form to facilitate the insertion of synthetic derivatives of CcdB in bacterial cells, a series of peptides, consisting of four carrier peptide sequences fused to the derived CcdB1, was synthesized by the solid phase methodology. These peptides were tested about inhibition of Gyrase and topo IV activities, in solution. Two peptides showed inhibition, with values of IC100 below 100 mM for both enzymes. Circular dicroism studies associated with inhibition tests showed strong dependence of activity with the presence of the C-terminal helix. The CPP1-CcdB1 derivative showed antimicrobial activity against Bacillus subtilis at a concentration of 50 mM, showing that the insertion of a carrier sequence can facilitate the transport of derivatives of CcdB through the cell membrane. In addition, the CcdB1 molecule is a good model to develop new CPPs. / Mestre

Resumo: O provável fator de início de tradução 5A (eIF5A) é altamente conservado de arqueas a mamíferos e sofre uma modificação pós-traducional única e essencial, em que uma lisina específica é convertida em um resíduo de hipusina. Este fator já foi relacionado a início de tradução, transporte nucleocitoplasmático, decaimento de mRNA e proliferação celular, mas a função crítica de eIF5A na célula ainda não foi totalmente esclarecida. Ainda que o papel de eIF5A na tradução geral tenha sido questionado, dados recentes de nosso laboratório, incluindo os resultados deste trabalho, restabelecem uma função para eIF5A na tradução e evidenciam a sua atuação na etapa de elongação ao invés de início. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi ampliar os estudos do papel de eIF5A na síntese proteica. Para isso, foram realizadas análises de interação genética e de perfil polissomal de linhagens que combinam o alelo mutante de eIF5A, tif51A-3, e de fatores envolvidos na etapa de início (eIF4E, eIF3 e eIF5B) ou elongação (eEF2) da tradução. As análises de perfil polissomal utilizando mutantes duplos de eIF5A e de fatores de início de tradução mostram uma diminuição do efeito de perda de polissomos característico de mutantes de início de tradução. Além disso, o perfil polissomal de mutantes de eIF5A é bastante semelhante ao do mutante de elongação. Foi também observado que a depleção de eIF5A provoca uma diminuição significativa na síntese proteica total e um aumento no tempo de trânsito ribossomal, confirmando os resultados obtidos nas análises de perfil polissomal. Também foi avaliada a influência de eIF5A no processo de elongação da tradução utilizando-se repórteres contendo a IRES do vírus CrPV, a qual é independente de todos os fatores de início de tradução conhecidos. Foi observada uma diminuição... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The putative eukaryotic translation initiation factor 5A (eIF5A) is highly conserved from archaea to mammals, essential for cell viability and it is the only cellular protein known to contain the essential amino acid hypusine. eIF5A has also been involved with nucleocitoplasmatic transport, mRNA decay and cell proliferation, however its critical function in the cell is not completely understood. Although a role for eIF5A in general translation has been questioned, our recent findings, including those described in this study, showed that eIF5A has a function in protein synthesis and it is related with the elongation step of translation instead of initiation. Therefore, the aim of this study was to investigate the role of eIF5A in protein synthesis. For this purpose, we tested genetic interactions and performed polysomal profile analysis of yeast strains that combine the eIF5A mutant tif51A-3 with translation initiation (eIF4E, eIF3 and eIF5B) or elongation (eEF2) mutants. The polysome profile analysis of the double mutants of eIF5A and canonical initiation mutants showed a decrease in polysome run-off. In addition, the polysome profile of eIF5A mutant is quite similar to that of the eEF2 mutant. Also, we observed that the depletion of eIF5A causes a significant decrease in total protein synthesis and an increase of the average ribosomal transit time. These results are in agreement with the polysome profile data. The influence of eIF5A in translation elongation was also evaluated using reporters containing the CrPV IRES, which is independent of all factors known to be involved in translation initiation. We observed a decrease in IRES activity in the eIF5A and eEF2 mutants, when compared to the wild type. In addition, two other conditional eIF5A mutants (tif51AK56A and tif51AQ22H/L93F) which produce stable eIF5A at the restrictive temperature were also analyzed... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Sandro Roberto Valentini / Coorientador: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Carla Columbano de Oliveira / Banca: Nilson Ivo Tonin Zanchin / Banca: Flávio Henrique da Silva / Banca: Mário Henrique de Barros / Doutor

Orientador: Lucia Maria Xavier Lopes / Banca: Ângela Regina Araujo / Banca: Edson Rodrigues Filho / Banca: Massuo Jorge Kato / Banca: Juceni Pereira de Lima David / Resumo: O presente trabalho descreve o isolamento, a identificação e a elucidação estrutural dos constituintes químicos de Aristolochia ridicula H.B.K., bem como a avaliação das potenciais atividades inseticidas, antiplasmódicas e antimicobacterianas dos extratos e das substâncias isoladas dessa espécie. Os extratos acetônico de folhas e etanólico de caules foram fracionados por partição, lavagem e métodos cromatográficos, resultando em seis e quatorze substâncias, respectivamente. Dentre essas substâncias estão uma nova biflavona (ridiculuflavona D), uma nova chalcona-flavona (ridiculuflavonilchalcona B) e um tetraflavonóide com esqueleto carbônico inédito (ridiculuflavonilchalcona C), juntamente com a ridiculuflavona C e o proto-quercitol, os quais foram previamente isolados dessa espécie. Além desses compostos, isolou-se um flavonóide (luteolina), três alcalóides [()-coclaurina, (−)-cloreto de N-steponina e (−)-metilwarifteina], uma alcamida (N-trans-feruloi-tiramina), duas ribonolactonas [(+)-2-desoxi-D-ribono-1,4-lactona e seu derivado 3,5-bis(tripolifosfato)], um derivado glucosídico (etil--D-glucopiranosídio) e o ácido 2-butinodióico. Além disso, identificou-se os íons 3-hidroxipropanoato, acetato e formiato por RMN 1D e 2D, sugerindo que esses compostos são derivados do ácido 2-butinodióico, o qual não foi detectado por RMN de 1H. As estruturas de todos os compostos isolados foram determinadas por métodos espectrométricos (RMN 1D e 2D, EMAR, IV, UV e DC). Transformações químicas (metilações e/ou acetilações) dos flavonóides ridiculuflavona C e ridiculuflavonilchalcona B, bem como dos alcalóides cloreto de N-steponina e metilwarifteina e da alcamida N-trans-feruloil-tiramina também auxiliaram na elucidação estrutural dessas substâncias. A susceptibilidade do inseto Anticarsia gemmatalis às soluções de extratos e de flavonóides... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work describes the isolation, identification, and structural elucidation of the chemical constituents of Aristolochia ridicula H.B.K., as well as the evaluation of insecticidal, antiplasmodial, and antimycobacterial activities of extracts and the chemical constituents from this species. The acetone extract of the leaves and ethanol extract of the stems were fractionated by partitions and washing, followed by chromatographic column, PTLC, and/or HPLC methods to give, respectively, six and fourteen compounds. These included a new biflavone (ridiculuflavone D), a new chalcone-flavone (ridiculuflavonylchalcone B), and a tetraflavonoid with a new carbon skeleton (ridiculuflavonylchalcone C), together with a biflavone (ridiculuflavone C) and a cyclitol (proto-quercitol), which were previously isolated from this species. In addition, a flavonoid (luteolin), three alkaloids [()-coclaurine, (−)-N-steponine chloride, and (−)-methylwarifteine], an alkylamide (N-trans-feruloyl tiramine), two ribonolactones [(+)-2-deoxy-D-ribono-1,4-lactone and its derivative 3,5-bis(tripolyphosphate)], a glucose derivative (ethyl -D-glucopyranoside), and 2-butynedioic acid were isolated. Moreover, 3-hydroxypropanoate, acetate, and formate were detected by NMR techniques, which suggests that they are derivatives from 2-butynedioic acid, which is not detected by 1H NMR. The structures of all isolated compounds were determined by spectrometric method (1D and 2D NMR, HRMS, IR, UV, and CD). Chemical transformations (methylations and/or acetylations) of ridiculuflavone C, ridiculuflavonylchalcone B, N-steponine chloride, methylwarifteine, and N-trans-feruloyl tiramine, also provide further evidences in the structural elucidations of these compounds. The susceptibility of Anticarsia gemmatalis to solutions of extracts and several flavonoids from A. ridicula were evaluated by topical... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Oswaldo Garcia Junior / Banca: Hideko Yamanaka / Banca: Luiz Gonzaga Santos Sobral / Resumo: Neste trabalho, o efeito dos íons Cl- e da espécie Acidichiobacillus ferrooxidans, linhagem LR, na dissolução da calcopirita foi investigado por técnicas eletroquímicas e ensaios de biolixiviação em frascos. Os agentes estudados (íons Cl- e células bacterianas) foram adicionados às células eletroquímicas ou aos frascos de lixiviação no decorrer dos experimentos em duas séries que se dintinguem quanto à ordem de adição. Na primeira série de as células bacterianas foram adicionadas anteriormente aos íons Cl- enquanto na segunda série os íons Cl- foram adicionados previamente. As técnicas de medidas simultâneas dos ruídos eletroquímicos de potencial e de corrente (ENA - Electrochemical Noice Analisy) e espectroscopia de impedância eletroquímica (EIS - Electrochemical Impedance Spectroscopy) aplicadas ao eletrodo de pasta de carbono (CPE - Carbon Paste Electrode) modificado com o mineral de calcopirita foram utlizadas no monitoramento dos ensaios eletroquímicos. Em geral observou-se um comportamento de estado passivo durante os estágios iniciais de imerssão e após as adições de bactéria, caracterizado por baixos valores de corrente passiva e pouca dispersão de pontos nos gráficos de admitância. As células bacterianas adicionadas na ausência de íons Cl- provavelmente aderiram na superfície do CPE-calcopirita. As maiores dispersões nos gráficos de admitância além dos menores valores de resistência do ruído eletroquímico (Rn) e resistência de polarização (Rp) ocorreram após as adições de íons Cl- provavelmente como consequência do aumento da dissolução da calcopirita presente na pasta de carbono. Entretanto observou-se que o sitema apresenta uma tendência em alcançar um estado estacionário após as adições de íons Cl- e de células bacterianas. Os ensaios de biolixiviação em frascos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this work, the effects of Cl- ions and Acidithiobacillus ferrooxidans-LR in the oxidative dissolution of the chalcopyrite were evaluated utilizing electrochemical techniques and shaking flasks bioleaching experiments. These agents (Cl- ions or bacterial cells) were added to the electrochemical cells or to the leaching flasks in two experiments series changing the addition order. In the first serie, the bacterial cells were added previously to the Cl- ions while in the second serie the Cl- ions were added before. Electrochemical noise analysis (ENA) and electrochemical impedance spectroscopy (EIS) applied to the carbon paste electrode modified with chalcopyrite were utilized to monitor the electrochemical experiments. Some parameters were calculated from electrochemical analysis, such as admittance plots, noise resistance data (ENA) and polarization resistance (EIS). In general, it was observed a stable passive behavior, mainly during the initial stages of immersion, characterized by low passive current and low dispersion in the admittance plots, mainly after bacteria addition. This can be explained by the adhesion of bacterial cells on chalcopyrite electrodes, acting as a physical barrier. The higher dispersions in the admittance plots occurred when Cl- ions additions took place, when the current fluctuations became greater in number and amplitude, characterizing an active state behavior, probably as a consequence of the dissolution of passive layers spontaneously formed on electrode surface. However, there was a tendency of the system to reach the stationary state probably due to repassivation of the electrode some hours after Claddition. This result was also demonstrated by noise and polarization resistances. The shake flasks bioleaching were carried out over with periodic sample of the liquid phase. The supernatant was... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Vadim Viviani / Banca: Márcia Regina Brochetto Braga / Banca: Jonas Contiero / Banca: Dulce Helena Ferreira de Souza / Banca: Leonardo Fernandes Fraceto / Resumo: Neste trabalho foi feita a expressão e purificação das luciferases recombinantes do elaterídeo Pyrearinus termitilluminans e dos fengodídeos Phrixotrix hirtus e Phrixotrix viviani, e a determinação e comparação de suas propriedades físico-químicas. Estimamos os Kms para luciferina e ATP, as constantes catalíticas, pH ótimo e outros dados cinéticos nas três luciferases. Através do uso de sondas fluorescentes, fizemos uma inspeção da polaridade dos sítios de ligação da luciferina. Além disso, foi feita a modelagem molecular para complementar os estudos experimentais e identificar os resíduos do sítio-ativo que afetam a polaridade e os espectros de bioluminescência nestas luciferases. Os dados sugerem que a luciferase de Pyrearinus termitilluminans tem o sítio ativo mais hidrofóbico entre as luciferases estudadas e a luciferase de Phrixotrix hirtus o mais polar. Estes dados suportam a importância da polaridade e polarizabilidade orientada na determinação dos espectros de bioluminescência. Além disto, os resultados de termoestabilidade e cinética de luminescência da luciferase de Pyrearinus termitilluminans sugerem que esta enzima seja particularmente apropriada para aplicações de bioimageamento. / Abstract: In this work, purification and comparative physical-chemical characterization of the recombinant luciferases from the elaterid Pyrearinus termitilluminans and from the phengodids Phrixotrix hirtus and Phrixotrix viviani was performed. The Kms for luciferin and ATP, the Kcat, optimum pH and other kinetics data were estimated in the three luciferases. Through fluorescent probes, we assessed the active-site polarity. Furthermore, molecular modeling was performed in order to support the experimental studies and suggest putative active site residues that could be responsible for changes of polarity. These data suggest that the luciferin binding site is more hydrophobic for Pyrearinus luciferase than in the other luciferases studied and support the polarity hypothesis as a mechanism for modulation of bioluminescence colors. / Doutor

Resumo: Este projeto é parte do projeto temático "Conservation and Sustainable Use of the Plant Diversity from Cerrado and Atlantic Forest: Chemical Diversity and Prospecting for Potencial Drugs" - Biota/FAPESP e descreve o isolamento, purificação e caracterização de peptídeos cíclicos presentes em Jatropha curcas L. Este tema foi proposto para o projeto temático por tratar-se de um assunto atual e inédito no Brasil, sendo importante no que diz respeito da descoberta de novas classes de produtos naturais. A obtenção dos peptídeos foi realizada através da partição do látex com acetato de etila e da aplicação de técnicas cromatográficas para sua purificação. Este procedimento permitiu a obtenção de dois peptídeos cíclicos, posteriormente caracterizados por análise de aminoácidos e espectrometria de massas. O seqüenciamento dessas substâncias foi realizado por Ressonância Magnética Nuclear, e permitiu identificar o peptídeo cíclico Polianina A [c(Pro-Leu- Gly-Val-Leu-Leu-Tyr)], já descrito na literatura, e um peptídeo de estrutura inédita, denominado Jatrofidina I [c(Leu-Leu-Asn-Leu-Trp-Cly-Pro-Gly)]. Análogos lineares e cíclicos desses peptídeos foram obtidos pela metodologia da síntese peptídica em fase sólida, empregando a estratégia Fmoc/tBu. Os análogos obtidos bem como os peptídeos naturais foram submetidos a diversos ensaios biológicos. Por fim, foi feita uma avaliação mensal qualitativa e/ou quantitativa do perfil ciclopeptídico de espécimes cultivadas de Jatropha curcas L.(Euphorbiaceae), gossypifolia, para verificar se ocorrem alterações na produção destas moléculas em função da época do ano. Os resultados mostraram que as 2 espécies produzem os peptídeos cíclicos durante o ano todo. É interessante notar que as descrições de peptídeos cíclicos na literatura foram obtidas de espécies de Jatropha... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This project is part of the thematic project "Conservation and Sustainable Use of the Plant Diversity from Cerrado and Atlantic Forest: Chemical Diversity and Prospecting for Potencial Drugs" - Biota/FAPESP, and deals with the isolation, purification and characterization of cyclic peptides from Jatropha curcas L. This is a quite new natural product subject in Brazil, which is also important for discovery from our biodiversity. These compounds were obtained through partition of the latex with ethyl acetate, followed of HPLC chromatography for separation and purification. This procedure resulted in two cyclic peptides, which were characterized by amino acid analysis and mass spectrometry. The structures of these compounds were elucidated by 2D Nuclear Magnetic Resonance. One compound was identified as Pohlianin A [c(Pro-Leu-Gly-Val-Leu-Leu-Tyr)], a known cyclic peptide already isolated from XXX, and one novel which was named jatrophidin I [c(Leu-Leu-Asn- Leu-Trp-Cly-Pro-Gly)]. Linear and cyclic analogues of these peptides were obtained through solid phase synthesis methodology by using of Fmoc/tBu reagents. The linear peptides as well as synthetic cyclic peptides were submitted to several biological assays. Finally, the cyclopeptidic profile of Jatropha curcas and gossypifolia was evaluated. The results showed a continuing production of these compounds in both species all over the year. These results can be relevant for further chemotaxonomy and phylogeny studies of Jatropha species that occur in Latin America, and in special Brazil. Previously, all cyclic peptide in the literature search were isolated from African and Asian Jatropha species, and our results can be useful to map the chemical composition of other Brazilian Jatropha species. / Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Coorientador: Eduardo Maffud Cilli / Banca: Mário Sérgio Palma / Banca: Adriano Defini Andricopulo / Mestre

Orientador: Denise Bevilaqua / Banca: Miguel Ruiz / Banca: Monica Cristina Teixeira / Resumo: A diminuição gradativa, porem constante das reservas mundiais de metais no mundo, tem forçado o desenvolvimento de novas tecnologias para extração e aproveitamento destes bens minerais. A redução de custos e as novas diretrizes ambientais são o maior impulso para a busca destas novas tecnologias.A biohidrometalurgia, mais especificamente, a biolixiviação dentro deste contexto assume uma importância significativa. Os custos de operação deste processo são muito inferiores aos processos convencionais, além de ser ambientalmente mais aceito, uma vez que não gera gases tóxicos. As próprias bactérias, presentes nestas ocorrências minerais, produzem os insumos necessários para a lixiviação, ácido e íons férricos. A principal bactéria envolvida neste processo e também a mais estudada é o Acidithiobacillus ferrooxidans. Esta é a única bactéria descrita capaz de utilizar íons ferrosos e compostos reduzidos de enxofre como fonte energética. A calcopirita, mineral de cobre mais abundante na face da Terra, apresenta grande refratariedade ao ataque químico e bacteriano, e ainda não há nenhum processo industrial operando em escala comercial.Neste trabalho foram investigados o efeito da adição de diferentes quantidade de pirita, sulfeto de ferro (FeS2) no aumento da solubilização de cobre deste sulfeto. A metodologia foi estabelecida baseandose no mecanismo galvânico de dissolução dos minerais. Os estudos foram realizados através de ensaios respirométricos e de lixiviação em frascos agitados. A presença de bactéria e a adição de ionscloretos também foram avaliadas. Os ensaios respirométricos apresentaram curvas iniciais de consumo de oxigênio sem diferenças significativas para todas as condições analisadas. Os valores finais de consumo de oxigênio variaram. As condições que continham calcopirita/pirita nas ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The gradually depletion of world reserves, however, constant has forced the development of new technologies for extraction and exploitation of these minerals. Cost reduction and new environmental guidelines are the biggest impulse to the search for these new technologies. The biohydrometallurgy, specifically, the bioleaching in this context is of significant importance. The operating cost of this process is much lower than conventional process, in addition to being more environmentally friendly, since it does not generate toxic gases. The bacteria themselves, present in these mineral occurrences produce the inputs needed for leaching acid and ferric ions.The main bacterium involved on this process and also the most studied is the Acidithiobacillus ferrooxidans. This is the only bacterium described able to use ferrous ions and reduced sulfur compounds an energy source. The chalcopyrite, the most abundant copper mineral in the earth, is refractory to the chemical and bacterial attack, and there is no industrial process operating on a commercial scale yet.In this work were investigated the effect of adding different amounts of pyrite, ion sulfide (FeS2) to increase the solubility of copper sulfide. The methodology was established based on galvanic mechanism of dissolution of minerals. The studies were conducted through respirometric tests and bioleaching experiments in shake flasks. The presence of bacteria and the addition of chloride ions were also evaluated.The respirometric tests showed initial curves of oxygen consumption with no significant differences for all conditions examined. The final values of oxygen consumption diverse. The conditions contained chalcopyrite/pyrite in rations 1:3 and 1:1 had values greater than 400 μL of O2 consumed, while other conditions inoculated, these values... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luiz Carlos Marques / Banca: Fabiano Antonio Cadioli / Banca: Lúcia Helena Rodrigues / Resumo: Sabendo-se que os valores laboratoriais de referência devem ser estabelecidos para cada espécie e em seus grupos, este estudo objetivou estabelecer valores hematológicos e bioquímicos séricos de referência para jumentos da raça Pêga; determinar diferenças entre as faixas etárias, sexos, fêmeas prenhes e não prenhes, além de acompanhar mudanças durante o primeiro ano de vida. Foram realizados hemogramas, análises bioquímicas séricas e fracionamento de proteínas por eletroforese em gel de acrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) de amostras de animais com zero a um, um a três e com mais de três anos de idade, machos e fêmeas. No primeiro ano de vida, apenas a porcentagem de monócitos (Mon), níveis de albumina (Alb), triglicérides (Trig), magnésio (Mg) e cloretos (Cl) não diferiram significativamente. Os animais até um ano tiveram as maiores médias para a contagem total de leucócitos (Leu), neutrófilos bastonetes (NB), fosfatase alcalina (FA), glicose (Glic), colesterol (Col), fósforo (P), imunoglobulina A (IgA) e ceruloplasmina (Cer) e as menores para a aspartato aminotransferase (AST), gama glutamiltransferase (GGT), creatinina (Crea), bilirrubina indireta (BI), cálcio (Ca), Cl, proteína de peso molecular (PPM) 138 kDa e albumina obtida por eletroforese (Albe). Além disso, possuem médias de volume globular (VG), concentração de hemoglobina (Hb) e 1-glicoproteína ácida (A1GA) superiores e porcentagem de eosinófilos (Eos), níveis de ureia (Ur) e Trig inferiores àquelas do grupo com mais de três anos. Os animais mais velhos tiveram a menor média para Mon e os maiores valores para bilirrubina total (BT) e transferrina (Trans). O grupo com um a três anos apresentou potássio (K) sérico mais elevado que os animais acima de três anos. O cálcio inorgânico (Cai) teve sua maior média nos animais... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The reference laboratory values must be determined for each specie and specific group. Therefore, the aim of this experiment were to determine the hematological and serum biochemical reference values for Pêga breed; to determine differences among age, sex, pregnant and non-pregnant females; and describe the changes during the first year of age. The complete blood count, serum biochemical analysis and the protein fractionation by means of sodium dodecyl sulphate - poliacrilamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) of blood samples collected from animals until one year, from one to three years, and over three year of age, males and females, were analysed. During the first year, just monocytes percentage (Mon), levels of albumin (Alb), triglycerides (Trig), magnesium (Mg) and chloride (Cl) did not differ significantly. The animals until one year of age had the highest means for leukocytes (Leu), band cells (BC), alkaline phosphatase (AP), glucose (Gluc), cholesterol (Chol), phosphorus (P), IgA and ceruloplasmin (Cer) and the lowest for aspartate aminotransferase (AST), gamma glutamyl transferase (GGT), creatinine (Crea), unconjugated bilirubin (UB), calcium (Ca), Cl, 138 kDa molecular weight protein (MWP) and albumin of electrophoresis (Albe). Moreover, they had means of packed cell volume (PCV), hemoglobin concentration (Hb) and 1-acid glycoprotein (A1AG) higher and means of eosinophils percentage (Eos), levels of urea (Ur) and Trig lower than animals over three years old. The oldest animals had the smallest mean for Mon and the biggest values for total bilirubin (TB) and transferrin (Trans). The group between ages of one and three years old showed serum potassium (K) higher than animals over three years old. The inorganic calcium (Cai) was higher for animals until one year old, followed by the oldest animals... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Sandro Roberto Valentini / Banca: Flávio Henrique da Silva / Banca: Nilson Ivo Tonin Zanchin / Banca: Carla Columbano de Oliveira / Banca: Beatriz Amaral de Castilho / Resumo: O Poli ácido glutâmico (PAG) é um poliaminoácido sintético formado por unidades repetitivas de glutamato, que apresentam grupos carboxilas ao longo de sua cadeia principal. A preparação de eletrodos de carbono vítreo modificados com filmes de PAG foi investigada utilizando-se três diferentes procedimentos: eletropolimerização do ácido glutâmico (MONO); deposição direta de poli ácido glutâmico (PAG) e poli ácido glutâmico:glutaraldeído (PAG:GLU) seguida de secagem a temperatura ambiente. Após secagem, o eletrodo modificado foi submetido a ciclos sucessivos entre -0,8 a +2,0 V sob velocidade de varredura de 100 mV s-1. O ácido ascórbico foi usado como composto modelo para os eletrodos modificados, os quais apresentaram um efeito eletrocatalítico na oxidação do mesmo. Os eletrodos modificados foram caracterizados por microscopia de força atômica (AFM) e espectroscopia de impedância eletroquímica (EIS). O recobrimento sobre a superfície pela adição de PAG apresentou a melhor performance exibindo filmes nanoestruturados e uniformes com baixa resistência à transferência de carga. Os eletrodos modificados por filmes PAG foram usados para estudar a oxidação do flavonóide rutina. Os resultados mostraram um par de picos redox em +0,46/+0,43 V, usado para a pré-concentração da rutina. Uma curva analítica foi obtida no intervalo de 0,9 a 9,0 μmol L-1 e o método proposto foi aplicado para análise do antioxidante em formulação farmacêutica. Os eletrodos modificados por filmes PAG foram também usados para determinação de ácido cafêico. Um par de pico redox reversível em +0,42/+0,45 V foi obtido para o ácido cafêico em tampão B-R pH 3,5. O método foi aplicado para a determinação de ácido cafêico em amostra de vinho tinto, detectando nível de concentração de 34,8μg mL-1 sem tratamento prévio da amostra. Os filmes de PAG:GLU foram...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The poly glutamic acid (PAG) is a syntetic poliamonacid composed by repetitive glutamate units that shows carboxylic groups in the long of the principal chain. Films of PAG on the glassy carbon electrode was investigated by three diferents procedures: glutamic acid eletropomelimerization (MONO), direct deposition of the poly glutamic acid (PAG) and poly glutamic acid:glutaraldehyde (PAG:GLU), followed by drying at room temperature. After solvent evaporation, the modified electrode was submitted by cycles sucessives from -0.8 to +2.0 V at scan rate of 100 mV s-1. The ascorbic acid was used as a model compound in the modified electrodes, which presented an electrocatitic effect in the oxidation of the ascorbic acid. The modified electrodes were characterized by atomic force microscopy (AFM) and electrochemistry impedance spectroscopy (EIS). Coantings by poly glutamic acid onto the surface presented best performance by addition of PAG films that exhibits films nanostructured and uniforms with lower resistance to charge transfer. The modified electrode by PAG films were investigated to oxidation of rutin flavonoid. The results showed a redox pair of peaks at +0.46/+0.43 V, and linear analytical curve at 0.9 to 9.0 x 10-6 mol L-1. The method proposed was successful applied for rutin determination in pharmaceutical formulation. The modified electrode by PAG films was also used to determine cafeic acid. A reversible redox peak pair at +0.42/+0.45 V was obtained for cafeic acid at B-R buffer pH 3,5. The method was applied for cafeic acid determination in the red wine, where the concentration of the 34,8 μg mL-1 was obtained, without any pre-treatment of the sample. The PAG:GLU films onto the glass carbon electrode were also efficient to pre-concetrate and to determine amoxycilin (AMX) and doxorubicin (DXR) in human urine sample. Linear calibration graphs were obtained from 2,0 a 25,0 x 10-6 mol L-1...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Célio Raimundo Machado / Banca: Áureo Evangelista Santana / Banca: Glenda Ramalho Barbudo / Resumo: As aves, especialmente as sedentárias, têm sido utilizadas para a avaliação da qualidade do meio ambiente onde estão fixadas, mostrando-se valiosos bioindicadores. A pomba amargosa, Zenaida auriculata, pode ter uma promissora utilidade por espoliar lavouras onde sabidamente são utilizados diversos defensivos agrícolas, dentre eles os organofosforados. No entanto, dados a respeito do dano ocasionado na referida espécie de ave com organofosforados não se encontram disponíveis na literatura. Este estudo objetivou verificar a viabilidade do uso da pomba amargosa, Zenaida auriculata, como bioindicador de qualidade ambiental pela análise dos dados de eritroleucometria, bioquímica sérica e histopatologia. Para tanto, comparou-se dois grupos, um com 16 animais, intoxicado com metamidofós na dose de 8 mg/kg por via oral, e outro controle, com 8 animais, que recebeu apenas o veículo (salina). Todos os animais eram de vida livre e foram capturados no perímetro urbano da cidade de Jaboticabal, São Paulo. Os animais controle foram sacrificados todos no mesmo dia, e seus dados foram utilizados como padrão de normalidade. Os intoxicados foram acompanhados durante 21 dias, e divididos em 8 grupos com duas aves cada, o primeiro sendo sacrificado 12 horas após a intoxicação e os demais a cada 3 dias. Os dados constatados ou a relação entre estes mostraram que a Zenaida auriculata não é um modelo biológico válido para indicar a presença de organofosforados no ambiente. / Abstract: Birds, especially the sedentary ones, have been used to evaluate the quality of the environment where they belong, proving to be valuable bioindicators. The Eared Dove, Zenaida auriculata, can have a promising utility since it spoils farmings where several agriculture defensives are used, such as the organophosphate compounds. However, there are no data available in the literature about the damage caused by this sort of chemical product. The goal of this study was to examine the feasibility of using the Eared Dove, Zenaida auriculata, as a bioindicator of environmental quality by the analysis of the data on erythroleucometry, seric biochemistry and histopathology. Therefore, two groups were compared, one having 16 animals, and orally intoxicated with methamidophos in 8mg/kg. Another group, with 8 animals, received only the vehicle (saline). All the animals were free and were captured in the city of Jaboticabal, in Sao Paulo State. All the control animals were sacrificed in the same date and their data were used as a normality pattern. The intoxicated ones were observed for 21 days and spread in 8 groups of two birds each. The first one was sacrificed 12 hours after the intoxication and the rest of them every 3 days. The data obtained and the relations between them showed that Zenaida auriculata is not a valid biological model for indicating the presence of organophosphate compounds in the environment. / Mestre