Made available in DSpace on 2016-03-07T19:20:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-05. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:50Z : No. of bitstreams: 1 000859360.pdf: 1034814 bytes, checksum: c0a4def8be0c2f45d09cbd7c089d88da (MD5) Bitstreams deleted on 2016-03-28T13:37:51Z: 000859360.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-28T13:38:52Z : No. of bitstreams: 1 000859360.pdf: 1034815 bytes, checksum: 0e2a44e2cca5e564a6825b47d8322e41 (MD5) / O fipronil é um inseticida amplamente utilizado para controlar pragas nas plantações e em animais. Existem relatos de intoxicação devido à exposição de fipronil em mamíferos e o fígado é um alvo potencial. No presente estudo, foram avaliados os efeitos dos metabólitos do fipronil, fipronil dessulfinil e fipronil sulfona sobre a bioenergética, produção de espécies reativas de oxigênio e efluxo de cálcio em mitocôndrias isoladas de fígado de rato. O fipronil dessulfinil (5 a 25 μM) inibiu o estado 3 da respiração em mitocôndrias energizadas com glutamato mais malato, substratos do complexo I da cadeia respiratória, e diminuiu o potencial de membrana mitocondrial, resultando em inibição da síntese de adenosina trifosfato. O metabólito dessulfinil também causou desacoplamento nas mitocôndrias energizadas com succinato e estimulou o efluxo de cálcio. O metabólito sulfona também atuou como inibidor e desacoplador mitocondrial e estimulou o efluxo de cálcio, porém em menores concentrações (0,5 a 5 μM). Os efeitos dos metabólitos do fipronil na bioenergética mitocondrial e homeostase do cálcio podem estar relacionados com os efeitos tóxicos do inseticida no fígado / Fipronil is an insecticide extensively used to control pests in crops and animals. There are relates of poisoning due to exposure of fipronil in mammals and the liver is a potential target. In this study, we evaluated the effects of metabolites of fipronil, fipronildesulfinyl and fipronilsulfone on the bioenergetics, reactive oxygen species production and calcium efflux from mitochondria isolated from rat liver. Desulfinyl (5 to 25 μM) inhibited state-3 respiration in mitochondria energized with glutamate plus malate, substrates of complex I of the respiratory chain, and decreased the mitochondrial membrane potential resulting in inhibition of. Synthesis. Desulfinyl also caused uncoupling in succinate-energized mitochondria and calcium efflux. The metabolitesulfone also acted as mitochondrial inhibitors and uncouplers and caused calcium efflux, but inlower concentrations (0.5 to 5 μM). These effects of metabolites of fipronil on mitochondrial bioenergetics and calcium homeostasis may be related to toxic effects of the insecticide in the liver

Orientador: Fábio Erminio Mingatto / Banca: Daniel Nicodemo / Banca: Sérgio Diniz Garcia / Resumo: O fipronil é um inseticida amplamente utilizado para controlar pragas nas plantações e em animais. Existem relatos de intoxicação devido à exposição de fipronil em mamíferos e o fígado é um alvo potencial. No presente estudo, foram avaliados os efeitos dos metabólitos do fipronil, fipronil dessulfinil e fipronil sulfona sobre a bioenergética, produção de espécies reativas de oxigênio e efluxo de cálcio em mitocôndrias isoladas de fígado de rato. O fipronil dessulfinil (5 a 25 μM) inibiu o estado 3 da respiração em mitocôndrias energizadas com glutamato mais malato, substratos do complexo I da cadeia respiratória, e diminuiu o potencial de membrana mitocondrial, resultando em inibição da síntese de adenosina trifosfato. O metabólito dessulfinil também causou desacoplamento nas mitocôndrias energizadas com succinato e estimulou o efluxo de cálcio. O metabólito sulfona também atuou como inibidor e desacoplador mitocondrial e estimulou o efluxo de cálcio, porém em menores concentrações (0,5 a 5 μM). Os efeitos dos metabólitos do fipronil na bioenergética mitocondrial e homeostase do cálcio podem estar relacionados com os efeitos tóxicos do inseticida no fígado / Abstract: Fipronil is an insecticide extensively used to control pests in crops and animals. There are relates of poisoning due to exposure of fipronil in mammals and the liver is a potential target. In this study, we evaluated the effects of metabolites of fipronil, fipronildesulfinyl and fipronilsulfone on the bioenergetics, reactive oxygen species production and calcium efflux from mitochondria isolated from rat liver. Desulfinyl (5 to 25 μM) inhibited state-3 respiration in mitochondria energized with glutamate plus malate, substrates of complex I of the respiratory chain, and decreased the mitochondrial membrane potential resulting in inhibition of. Synthesis. Desulfinyl also caused uncoupling in succinate-energized mitochondria and calcium efflux. The metabolitesulfone also acted as mitochondrial inhibitors and uncouplers and caused calcium efflux, but inlower concentrations (0.5 to 5 μM). These effects of metabolites of fipronil on mitochondrial bioenergetics and calcium homeostasis may be related to toxic effects of the insecticide in the liver / Mestre

Resumo: O objetivo neste estudo foi analisar a utilização das proteínas de fase aguda (PFA) e perfil bioquímico-sérico como um método para realizar diagnóstico diferencial precoce de mucometra e piometra. Coletaram-se amostras do endométrio de fêmeas caninas hígidas na fase de diestro, sem qualquer alteração ou afecção no trato reprodutor ou em outros sistemas (Grupo diestro: Grupo 1, n=39) e amostras do endométrio de fêmeas caninas acometidas por mucometra (Grupo mucometra: Grupo 2, n=43), e fêmeas caninas acometidas por piometra (Grupo piometra, Grupo 3 ao 6, n=118), durante ovariohisterectomias (OH) eletivas ou terapêuticas. Os dados também foram comparados entre os grupos categorizados segundo a classificação ASA (American Society of Anesthesiologists). Realizou-se anamnese do histórico reprodutivo detalhado, exame físico, exame de macroscopia vulvar, citologia vaginal, exames hematológicos e bioquímicos, e dosagem sérica de progesterona e estradiol, exames de imagem (radiografia e ultrassonografia abdominal). A concentração de proteína total do soro sanguíneo foi determinada pelo método do biureto. As leituras das amostras foram realizadas em espectrofotômetro semi-automático (Labquest, Labtest, Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil), com comprimentos de onda específicos para o teste. Para o fracionamento proteico utilizou-se a técnica SDS-PAGE. Verificou-se que conforme a evolução do quadro inflamatório, os níveis séricos das proteínas de fase aguda, ceruloplasmina, transferrina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to analyze the use of acute phase proteins (PFA) and biochemical-serum profile as a method to perform early differential diagnosis of mucometra and pyometra. Samples of the endometrium of healthy canine females were obtained in the right-handed stage, without any alteration or affection in the reproductive tract or in other systems (Group 1, n = 39) and endometrial samples of canine females affected by mucometra (Group 2, n = 43), and canine females affected by pyometra (Pyometra Group, Group 3 to 6, n = 118) during elective or therapeutic ovariohysterectomies (OH). The data were also compared among the groups classified according to the ASA (American Society of Anesthesiologists) classification. Anamnesis of the detailed reproductive history, physical examination, vulvar macroscopy examination, vaginal cytology, hematological and biochemical exams, and serum progesterone and estradiol dosage, imaging (radiography and abdominal ultrasonography) were performed. The total protein concentration of the blood serum was determined by the biuret method. The sample readings were performed in semi-automatic spectrophotometer (Labquest, Labtest, Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil), with specific wavelengths for the test. SDS-PAGE was used for protein fractionation. Serum levels of the acute phase proteins, ceruloplasmin, transferrin, albumin (p <0.0001), IgGCP (p <0.0001), haptoglobin (p <0.0001), alpha glycoprotein acid (p <0.0001), IgGCL (p <0.0001) ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:30:18Z : No. of bitstreams: 1 girardi_am_me_jabo.pdf: 506565 bytes, checksum: c7550b1f51bf6015acfea2f558b52d3f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Sabendo-se que os valores laboratoriais de referência devem ser estabelecidos para cada espécie e em seus grupos, este estudo objetivou estabelecer valores hematológicos e bioquímicos séricos de referência para jumentos da raça Pêga; determinar diferenças entre as faixas etárias, sexos, fêmeas prenhes e não prenhes, além de acompanhar mudanças durante o primeiro ano de vida. Foram realizados hemogramas, análises bioquímicas séricas e fracionamento de proteínas por eletroforese em gel de acrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) de amostras de animais com zero a um, um a três e com mais de três anos de idade, machos e fêmeas. No primeiro ano de vida, apenas a porcentagem de monócitos (Mon), níveis de albumina (Alb), triglicérides (Trig), magnésio (Mg) e cloretos (Cl) não diferiram significativamente. Os animais até um ano tiveram as maiores médias para a contagem total de leucócitos (Leu), neutrófilos bastonetes (NB), fosfatase alcalina (FA), glicose (Glic), colesterol (Col), fósforo (P), imunoglobulina A (IgA) e ceruloplasmina (Cer) e as menores para a aspartato aminotransferase (AST), gama glutamiltransferase (GGT), creatinina (Crea), bilirrubina indireta (BI), cálcio (Ca), Cl, proteína de peso molecular (PPM) 138 kDa e albumina obtida por eletroforese (Albe). Além disso, possuem médias de volume globular (VG), concentração de hemoglobina (Hb) e 1-glicoproteína ácida (A1GA) superiores e porcentagem de eosinófilos (Eos), níveis de ureia (Ur) e Trig inferiores àquelas do grupo com mais de três anos. Os animais mais velhos tiveram a menor média para Mon e os maiores valores para bilirrubina total (BT) e transferrina (Trans). O grupo com um a três anos apresentou potássio (K) sérico mais elevado que os animais acima de três anos. O cálcio inorgânico (Cai) teve sua maior média nos animais... / The reference laboratory values must be determined for each specie and specific group. Therefore, the aim of this experiment were to determine the hematological and serum biochemical reference values for Pêga breed; to determine differences among age, sex, pregnant and non-pregnant females; and describe the changes during the first year of age. The complete blood count, serum biochemical analysis and the protein fractionation by means of sodium dodecyl sulphate - poliacrilamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) of blood samples collected from animals until one year, from one to three years, and over three year of age, males and females, were analysed. During the first year, just monocytes percentage (Mon), levels of albumin (Alb), triglycerides (Trig), magnesium (Mg) and chloride (Cl) did not differ significantly. The animals until one year of age had the highest means for leukocytes (Leu), band cells (BC), alkaline phosphatase (AP), glucose (Gluc), cholesterol (Chol), phosphorus (P), IgA and ceruloplasmin (Cer) and the lowest for aspartate aminotransferase (AST), gamma glutamyl transferase (GGT), creatinine (Crea), unconjugated bilirubin (UB), calcium (Ca), Cl, 138 kDa molecular weight protein (MWP) and albumin of electrophoresis (Albe). Moreover, they had means of packed cell volume (PCV), hemoglobin concentration (Hb) and 1-acid glycoprotein (A1AG) higher and means of eosinophils percentage (Eos), levels of urea (Ur) and Trig lower than animals over three years old. The oldest animals had the smallest mean for Mon and the biggest values for total bilirubin (TB) and transferrin (Trans). The group between ages of one and three years old showed serum potassium (K) higher than animals over three years old. The inorganic calcium (Cai) was higher for animals until one year old, followed by the oldest animals... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Luiz Carlos Marques / Banca: Fabiano Antonio Cadioli / Banca: Lúcia Helena Rodrigues / Resumo: Sabendo-se que os valores laboratoriais de referência devem ser estabelecidos para cada espécie e em seus grupos, este estudo objetivou estabelecer valores hematológicos e bioquímicos séricos de referência para jumentos da raça Pêga; determinar diferenças entre as faixas etárias, sexos, fêmeas prenhes e não prenhes, além de acompanhar mudanças durante o primeiro ano de vida. Foram realizados hemogramas, análises bioquímicas séricas e fracionamento de proteínas por eletroforese em gel de acrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) de amostras de animais com zero a um, um a três e com mais de três anos de idade, machos e fêmeas. No primeiro ano de vida, apenas a porcentagem de monócitos (Mon), níveis de albumina (Alb), triglicérides (Trig), magnésio (Mg) e cloretos (Cl) não diferiram significativamente. Os animais até um ano tiveram as maiores médias para a contagem total de leucócitos (Leu), neutrófilos bastonetes (NB), fosfatase alcalina (FA), glicose (Glic), colesterol (Col), fósforo (P), imunoglobulina A (IgA) e ceruloplasmina (Cer) e as menores para a aspartato aminotransferase (AST), gama glutamiltransferase (GGT), creatinina (Crea), bilirrubina indireta (BI), cálcio (Ca), Cl, proteína de peso molecular (PPM) 138 kDa e albumina obtida por eletroforese (Albe). Além disso, possuem médias de volume globular (VG), concentração de hemoglobina (Hb) e 1-glicoproteína ácida (A1GA) superiores e porcentagem de eosinófilos (Eos), níveis de ureia (Ur) e Trig inferiores àquelas do grupo com mais de três anos. Os animais mais velhos tiveram a menor média para Mon e os maiores valores para bilirrubina total (BT) e transferrina (Trans). O grupo com um a três anos apresentou potássio (K) sérico mais elevado que os animais acima de três anos. O cálcio inorgânico (Cai) teve sua maior média nos animais... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The reference laboratory values must be determined for each specie and specific group. Therefore, the aim of this experiment were to determine the hematological and serum biochemical reference values for Pêga breed; to determine differences among age, sex, pregnant and non-pregnant females; and describe the changes during the first year of age. The complete blood count, serum biochemical analysis and the protein fractionation by means of sodium dodecyl sulphate - poliacrilamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) of blood samples collected from animals until one year, from one to three years, and over three year of age, males and females, were analysed. During the first year, just monocytes percentage (Mon), levels of albumin (Alb), triglycerides (Trig), magnesium (Mg) and chloride (Cl) did not differ significantly. The animals until one year of age had the highest means for leukocytes (Leu), band cells (BC), alkaline phosphatase (AP), glucose (Gluc), cholesterol (Chol), phosphorus (P), IgA and ceruloplasmin (Cer) and the lowest for aspartate aminotransferase (AST), gamma glutamyl transferase (GGT), creatinine (Crea), unconjugated bilirubin (UB), calcium (Ca), Cl, 138 kDa molecular weight protein (MWP) and albumin of electrophoresis (Albe). Moreover, they had means of packed cell volume (PCV), hemoglobin concentration (Hb) and 1-acid glycoprotein (A1AG) higher and means of eosinophils percentage (Eos), levels of urea (Ur) and Trig lower than animals over three years old. The oldest animals had the smallest mean for Mon and the biggest values for total bilirubin (TB) and transferrin (Trans). The group between ages of one and three years old showed serum potassium (K) higher than animals over three years old. The inorganic calcium (Cai) was higher for animals until one year old, followed by the oldest animals... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-07Bitstream added on 2014-06-13T19:41:06Z : No. of bitstreams: 1 santana_am_dr_jabo.pdf: 5022570 bytes, checksum: 78a8db02bedcf20f4ca5d7f20fd9bcad (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo teve como objetivo avaliar as alterações clínicas e laboratoriais de bezerros bubalinos infectados experimentalmente com Salmonella Dublin e verificar efeito do tratamento com antibiótico florfenicol. Também teve como objetivo avaliar a eficiência da reação em cadeia da polimerase (PCR) comparativamente ao exame bacteriológico no diagnóstico da salmonelose. Para isso, foram utilizados três grupos experimentais (n=6): controle (grupo 1), que receberam, por via oral, 10 ml de caldo BHI; sem tratamento (grupo 2) e tratados com florfenicol (grupo 3), que receberam, por via oral, 108 UFC de S. Dublin suspensas em 10 ml de BHI. Os bezerros foram submetidos ao exame físico antes da inoculação e a cada 24 horas até o sétimo dia após infecção. Diariamente, foram colhidas amostras de sangue para a realização de hemograma e testes bioquímicos (inclusive proteinograma e hemogasometria) e colhidos suabes retais para identificação de S. Dublin por exame bacteriológico e PCR. A infecção experimental induziu hipertermia e diarreia. A inoculação também provocou leucopenia e neutropenia, hipofosfatemia, aumento das concentrações das proteínas fibrinogênio, ceruloplasmina e haptoglobina e diminuição das concentrações de ferro. Os bezerros tratados não apresentaram cura clínica e bacteriológica concluindo-se que o florfenicol não foi efetivo no combate à S. Dublin. A PCR mostrou-se superior ao isolamento bacteriológico na detecção de S. Dublin. Adicionalmente, a eliminação da bactéria nas fezes dos animais infectados após o período de sintomatologia confirma o estado de portador desses animais / The aim of the study was to evaluate clinical and laboratorial changes in experimentally Salmonella Dublin-infected buffalo calves and the effect of florfenicol antibiotic treatment. Also, the aim of the study was to compare the performance of standard microbiological techniques and polymerase chain reaction (PCR) for the diagnosis of S. Dublin. Three experimental groups, with six calves, were formed: control group (G1), that orraly received 10 ml of BHI broth; without any treatment group (G2) and treated with florfenicol group (G3), that orally received 108 CFU of S. Dublin suspended in 10 ml of BHI broth. All calves were submitted to physical examination before experimental inoculation and at every 24 hours up to the 7th day after infection. Daily blood samples were collected for hematological and biochemical analysis (including proteinogram and hemogasometry). Daily rectal swabs were collected for the isolation of S. Dublin by standard microbiological techniques and PCR. The experimental infection induced hyperthermia and diarrhea. The inoculation also caused leukopenia and neutropenia, hypophosphatemia, increase of the fibrinogen, ceruloplasmin and haptoglobin concentrations and decrease of the iron concentrations. Calves treated showed no clinical and bacteriological cure, concluding that florfenicol was not effective against S. Dublin. PCR had better performance in the isolation of S. Dublin when compared with standard microbiological techniques. Additionally, elimination of the bacteria in the feces of infected animals after a period of symptoms confirms the carrier status of buffalo calves

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-06Bitstream added on 2014-06-13T20:24:57Z : No. of bitstreams: 1 brito_fmm_dr_jabo.pdf: 318063 bytes, checksum: 38a3c9cca0e133d2726c5ec9e95231f8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os Potamotrygonidae são um grupo de raias endêmico da América do Sul e exclusivamente dulciaqüícolas. A família é representada por três gêneros: Potamotrygon, Paratrygon e Plesiotrygon e possui aproximadamente 20 espécies nominais, ocorrendo nas principais bacias hidrográficas do continente. São raros os estudos sobre à hematologia de peixes e os autores ainda adotam classificações diferentes entre eles. A variação morfológica dessas células em peixes é tão grande que é necessário um estudo aprofundado para diferenciá-las nas várias espécies. No sentido de contribuir para o preenchimento desta lacuna foram coletados 53 exemplares de quatro espécies de Potamotrygon e de cada animal foram colhidos 4 mL de sangue para realização da análise das variáveis hematológicas e bioquímicas séricas visando obter resultados que possam ser considerados representativos para as quatro espécies de Potramotrygon. Os valores foram próximos para as quatro espécies e os resultados com diferenças significativas entre Potamotrygon falkneri, P. motoro, P. orbigni e P. scobina ocorreram quanto ao número de eritrócitos, heterófilos, glicemia, triglicerídeos, colesterol, fósforo, albumina e potássio. Os exames parasitológicos mostraram a presença do crustáceo do gênero Dolops em 5,66% das raias coletadas e de hemogragarina em 33,96% do total. Não foram observados outros parasitos nos fragmentos de órgãos coletados para pesquisa. Os resultados mostram pouca interferência dos ambientes diferentes da bacia do rio Paraná, município de Porto Rico (PR) e do rio Piririm, município de Macapá (AP) nas variáveis avaliadas, apesar da diversidade geográfica / Potamotrygonidae are a group of stingrays endemic to South America and exclusively freshwater. The family is represented by three genera: Potamotrygon, Paratrygon and Plesiotrygon and has approximately 20 nominal species, occurring in major river basins of the continent. Few studies on the hematology of fish and the authors still adopt different classifications among them. The morphological variation of these cells in fish is so great that a detailed study is necessary to differentiate them in the various species. We collected 53 specimens of four species of Potamotrygon and each animal were harvested 4 mL of blood to perform the analysis of serum biochemical and hematological variables in order to obtain results that can be considered representative, determining the values of hematological and biochemical blood for four species of Potamotrygon. The values were similar in all four species and results in significant differences Potamotrygon falkneri, P. motoro, P. orbigni and P. scobina occurred in the number of erythrocytes, heterophils, plasma glucose, triglycerides, cholesterol, phosphorus, albumin, and potassium. The parasitological tests showed the presence of crayfish in the genus Dolops 5.66% of rays collected and Haemogragarina sp. in 33.96% of the total. No other parasites were observed in organ fragments collected for study. The results show little interference from different environments of the Paraná river basin, municipality of Porto Rico (PR) and Piririm river, municipality of Macapá (AP) in the variables studied, despite the geographical diversity

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:10:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-03. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:02Z : No. of bitstreams: 1 000843974.pdf: 2232932 bytes, checksum: d71102c081901322bd4ba52e2d8d373f (MD5) / O fipronil é um inseticida de amplo-espectro de ação utilizado extensivamente para o controle de pragas. Existem relatos descritos na literatura de intoxicação em animais e humanos provocada pelo composto, causando até a morte. Assim, torna-se bastante relevante elucidar os mecanismos de hepatotoxicidade do inseticida para o auxílio no tratamento em caso de intoxicação por parte dos mamíferos. O objetivo desse estudo foi caracterizar o mecanismo de toxicidade do fipronil em hepatócitos isolados de rato e o efeito da biotransformação sobre o seu potencial toxicológico. As concentração do fipronil utilizada foi de 5, 10, 15 e 25 μM em células permeabilizadas com digitonina e de 25, 50, 75 e 100 μM nas não permeabilizadas. A toxicidade do fipronil aos hepatócitos foi avaliada pelo consumo de oxigênio, potencial de membrana mitocondrial, concentração intracelular de ATP hepatócitos isolados de ratos normais ou previamente tratados com proadifen, homeostase intracelular do Ca 2+ e viabilidade celular. A viabilidade celular foi avaliada por meio da exclusão do azul de tripan em hepatócitos isolados de ratos normais e atividade das enzimas alanina transaminase (ALT) e aspartato transaminase (AST) em hepatócitos isolados de ratos normais ou previamente tratados com proadifen, um inibidor do citocromo P450. O fipronil reduziu a respiração mitocondrial em células energizadas com glutamato mais malato de maneira dose dependente, e diminuiu o potencial de membrana mitocondrial e esses efeitos foram acompanhados pela redução da concentração celular de ATP e pelo rompimento da homeostase intracelular do Ca 2+ . A viabilidade celular foi afetada pelo fipronil com maior potência nos hepatócitos isolados de ratos normais, indicando que os metabólitos do inseticida aumenta seu potencial toxicológico. Os resultados deste estudo indicam que a toxicidade do fipronil aos hepatócitos está... / Fipronil is an insecticide of broad-spectrum action used extensively for pest control. There are reports in the literature of animals and humans poisoning caused by the compound, ocacioning. Thus, it becomes quite important to elucidate the mechanisms of hepatotoxicity of the insecticide for treatment in case of intoxication by mammals. The aim of this study was to characterize the mechanism of toxicity of fipronil in isolated rat hepatocytes and the effect of biotransformation on its toxicological potential. The toxicity of fipronil was assessed by monitoring oxygen consumption and mitochondrial membrane potential, intracellular ATP concentration, Ca 2+ homeostasis and cell viability. The cell viability was evaluated by the tripan blue exclusion in hepatocytes isolated from normal rats and the activity of the enzyme alanine transaminase (ALT) and aspartate transaminase (AST) in hepatocytes isolated from normal rats or rats pretreated with proadifen, a cytochrome P450 inhibitor. Fipronil reduced mitochondrial respiration in cells energized with glutamate plus malate in a dose- dependent manner, and dissipated the mitochondrial membrane potential accompanied by reductions in ATP concentration and a disruption of intracellular Ca 2+ homeostasis. Cell viability was affected by fipronil with higher potency in hepatocytes isolated from normal rats, indicating that the metabolism of insecticide increases its toxicological potential. The results of this study indicate that the toxicity of fipronil to the hepatocytes is related to the inhibition of mitochondrial activity, leading to a decreased ATP synthesis and consequent alteration in intracellular Ca 2+ homeostasis, resulting in cell death

Orientador: Fábio Erminio Mingatto / Banca: Flavia Thomas Verechia Pereira / Banca: Ana Angélica Henrique Fernandes / Resumo: O fipronil é um inseticida de amplo-espectro de ação utilizado extensivamente para o controle de pragas. Existem relatos descritos na literatura de intoxicação em animais e humanos provocada pelo composto, causando até a morte. Assim, torna-se bastante relevante elucidar os mecanismos de hepatotoxicidade do inseticida para o auxílio no tratamento em caso de intoxicação por parte dos mamíferos. O objetivo desse estudo foi caracterizar o mecanismo de toxicidade do fipronil em hepatócitos isolados de rato e o efeito da biotransformação sobre o seu potencial toxicológico. As concentração do fipronil utilizada foi de 5, 10, 15 e 25 μM em células permeabilizadas com digitonina e de 25, 50, 75 e 100 μM nas não permeabilizadas. A toxicidade do fipronil aos hepatócitos foi avaliada pelo consumo de oxigênio, potencial de membrana mitocondrial, concentração intracelular de ATP hepatócitos isolados de ratos normais ou previamente tratados com proadifen, homeostase intracelular do Ca 2+ e viabilidade celular. A viabilidade celular foi avaliada por meio da exclusão do azul de tripan em hepatócitos isolados de ratos normais e atividade das enzimas alanina transaminase (ALT) e aspartato transaminase (AST) em hepatócitos isolados de ratos normais ou previamente tratados com proadifen, um inibidor do citocromo P450. O fipronil reduziu a respiração mitocondrial em células energizadas com glutamato mais malato de maneira dose dependente, e diminuiu o potencial de membrana mitocondrial e esses efeitos foram acompanhados pela redução da concentração celular de ATP e pelo rompimento da homeostase intracelular do Ca 2+ . A viabilidade celular foi afetada pelo fipronil com maior potência nos hepatócitos isolados de ratos normais, indicando que os metabólitos do inseticida aumenta seu potencial toxicológico. Os resultados deste estudo indicam que a toxicidade do fipronil aos hepatócitos está... / Abstract: Fipronil is an insecticide of broad-spectrum action used extensively for pest control. There are reports in the literature of animals and humans poisoning caused by the compound, ocacioning. Thus, it becomes quite important to elucidate the mechanisms of hepatotoxicity of the insecticide for treatment in case of intoxication by mammals. The aim of this study was to characterize the mechanism of toxicity of fipronil in isolated rat hepatocytes and the effect of biotransformation on its toxicological potential. The toxicity of fipronil was assessed by monitoring oxygen consumption and mitochondrial membrane potential, intracellular ATP concentration, Ca 2+ homeostasis and cell viability. The cell viability was evaluated by the tripan blue exclusion in hepatocytes isolated from normal rats and the activity of the enzyme alanine transaminase (ALT) and aspartate transaminase (AST) in hepatocytes isolated from normal rats or rats pretreated with proadifen, a cytochrome P450 inhibitor. Fipronil reduced mitochondrial respiration in cells energized with glutamate plus malate in a dose- dependent manner, and dissipated the mitochondrial membrane potential accompanied by reductions in ATP concentration and a disruption of intracellular Ca 2+ homeostasis. Cell viability was affected by fipronil with higher potency in hepatocytes isolated from normal rats, indicating that the metabolism of insecticide increases its toxicological potential. The results of this study indicate that the toxicity of fipronil to the hepatocytes is related to the inhibition of mitochondrial activity, leading to a decreased ATP synthesis and consequent alteration in intracellular Ca 2+ homeostasis, resulting in cell death / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-23Bitstream added on 2014-06-13T18:51:20Z : No. of bitstreams: 1 rosato_pn_me_jabo.pdf: 278204 bytes, checksum: 7e31f2ef6f6e0d1fcc37105f0b827ad6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os exames laboratoriais são reconhecidos como importantes meios de auxilio diagnóstico na prática médico-veterinária, especialmente no esclarecimento de diversas enfermidades que acometem animais de companhia, particularmente cães. Dentre tais exames, destacam-se os bioquímico-séricos, não só pela sua utilidade clínica, como também pela praticidade de realização e por estarem incorporados à rotina dos laboratórios de análises cHnicas veterinárias. Diante da importãncia e da grande demanda por provas bioquímico-séricas, na rotina da clínica de pequenos animais, além da falta de estudos em relação à viabilidade dos constituintes séricos, quando se faz imperiosa a necessidade de estoque do soro sangüíneo sob diferentes condições, planejou-se o presente projeto de pesquisa com o escopo de se verificar a estabilidade de alguns metabolitos séricos frente a diferentes temperaturas e períodos de estoque. Para tanto, foram analisadas amostras de soro sanguíneo de 10 cães sadios, as quais foram submetidas à análise de sódio, potássio, cálcio total, fósforo, colesterol, triglicérides, proteína total, albumina, creatinina, uréia e a atividade das enzimas aspartato aminotransferase, alanino aminotransferase, fosfatase alcalina, gamaglutamiltransferase e creatina quinase, estocadas em diferentes temperaturas (25°C, 4°C, -4°C, -20°C e -70°C) e analisadas em diferentes períodos (logo após a colheita, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 7 dias, 15 dias, 30dias, 60 dias e 90 dias após a colheita). Dentre os resultados obtidos, foi possível observar, principalmente, que a temperatura de congelamento de -20°C propiciou uma maior estabilidade dos parãmetros estudados sendo quinze destes, estáveis durante todo o protocolo experimental. / The laboratory tests are known as important diagnostic tools in veterinary medicine, regardering the diagnosis of many diseases, specially in dogs. Among ali these tests, the biochemical ones can be brought out, not only for their clinical importance, but also for their easy performance and because they are inserted as ordinary tests in the veterinary laboratories. Due to the lack of information as for the viability of blood components in dogs, and the need of blood storage under different conditions, the aim of this study was to check out the stability of some blood components under different temperatures and storage periods. Therefore, the blood samples of 10 healthy dogs were evaluated regardering sodium, potassium, calcium, phosphorus, colesterol, tryglicerides, total protein, albumine, creatinine, urea and enzyme activities of asparatate aminotransferase, alanine aminotransferase, alkaline phosphatase, gama glutamyl transferase and creatine quinasa stored under different temperature (25°C, 4°C, -4°C, -20°C e -70°C) and assessed in different intervals (just after collection, 12 hours, 24 hours, 36 hours, 7 days, 15 days, 30 days, 60 days and 90 days after collection). Among ali the results, it was inferred that the freezing temperature (-20°C) provided the best stability of the evaluated parameters, and 15 out of them showed to be stable during the whole protocol.