Orientador: Marcelo Brocchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-06T21:03:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gregoracci_GustavoBueno_M.pdf: 4620017 bytes, checksum: f7feaaf632175abbe340a9d82f379a0c (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Os bacteriófagos, vírus que infectam procariotos, são as entidades biológicas mais numerosas do globo. Sua abundância desencadeou revisões em diversos campos como genética, evolução e ecologia, e os fagos atualmente são reconhecidos como importantes vetores para o fluxo de matéria, energia e informação em ambientes naturais. Contudo, há uma enorme diferença entre a quantidade de bacteriófagos estimada no globo (mais de 1030 partículas virais) e a quantidade descrita na literatura (em torno de 5300 amostras). Esta amostragem restrita reflete complicações para estudos de diversidade viral e demonstra as limitações de nosso conhecimento sobre estes vírus. Além disso, a emergência de bactérias resistentes a múltiplos antibióticos implica em uma necessidade de novas práticas terapêuticas, e os fagos representam uma alternativa digna de estudos aprofundados. Assim sendo, este trabalho objetivou o isolamento, a partir de esgoto, e a caracterização biológica de bacteriófagos líticos contra patógenos humanos, visando ampliar a amostragem destes vírus e selecionar novos possíveis agentes terapêuticos. A caracterização envolveu análises morfológica, genética e de especificidade de hospedeiros. As metodologias adaptadas de isolamento e caracterização permitiram a análise de mais de 20 bacteriófagos, todos pertencentes à ordem Caudovirales, bem como de uma proposição para a classificação taxonômica dos isolados. Merece destaque especial o isolamento de três fagos contra Chromobacterium violaceum, feito inédito na literatura, bem como estudos sobre a suscetibilidade deste organismo a diversos bacteriófagos isolados. Por fim, ensaios biológicos sugerem estudos posteriores sobre a aplicação de um destes fagos, denominado Shfl1, para a terapia de Shigella flexneri em infecções humanas, mas são incertos quanto ao potencial do mesmo para contenção deste patógeno no processamento de esgoto comum / Abstract: Bacteriophages, viruses that infect prokaryotic hosts, are the most numerous biological entities of the world. Their abundance implied in reviews in several areas of knowledge, like genetics, evolution and ecology, and phages are now recognized as important vectors in the flux of matter, energy and information in natural environments. However, there is a huge difference between the estimated number of bacteriophages in the world (more than 1030 viral particles) and the quantity described in the literature (around 5300 samples). This restricted sampling reflects in complications to studies of viral diversity and demonstrates our limited knowledge regarding these viruses. Furthermore, the emergence of bacteria resistant to multiple antibiotics implies in a need for new therapeutical approaches, and phages represent an alternative worthy of additional studies. As being so, our purpose in this study was to isolate, from raw sewage, and to biologically characterize lytic bacteriophages, intending to extend these viruses¿ sampling and to select possible new therapeutic agents. Characterization involved morphological, genetic and host range analysis. The adapted protocols for isolation and characterization permitted the analysis of more than 20 bacteriophages, all belonging to the Caudovirales order, as well as a tentative taxonomic classification of the samples. Other distinctive results include the isolation of three bacteriophages against Chromobacterium violaceum, previously unknown in the literature, as well as the study about the susceptibility of this organism to several isolated phages. Moreover, biological assays suggested further studies about the application of one of these phages, named Shfl1, in the treatment of Shigella flexneri infections in humans, but were uncertain about the potential of the same virus to restrain this pathogen during sewage processing / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-17Bitstream added on 2014-06-13T20:37:44Z : No. of bitstreams: 1 doria_kmabvs_me_botfca.pdf: 1765521 bytes, checksum: 3c3876d40aef109f0fbe73859a7a9972 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A hortênsia é um arbusto semilenhoso muito apreciado como ornamental no Brasil. No Brasil podemos ressaltar a “Região das Hortênsias” no Sul do país, onde esta ornamental é utilizada em projetos de jardinagem em casas e rodovias. A cidade de Gramado têm a hortênsia como sua flor símbolo. No Estado de São Paulo, ela é comumente encontrada na Região de Campos do Jordão. Plantas de hortênsia apresentando anéis cloróticos e necróticos foram observadas por Yuki et al. (2005) em material proveniente de Arujá, estado de São Paulo. Transmissões por extrato vegetal permitiram a observação de lesões locais cloróticas em Chenopodium quinoa e Gomphrena globosa, indicando infecção causada por vírus. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo a identificação e caracterização da espécie viral presente nestas amostras. Inicialmente as amostras foram analisadas por microscopia eletrônica, onde puderam ser observadas partículas alongadas filamentosas, medindo cerca de 490 nm, indicando a provável presença de um potexvirus. Oligonucleotídeos específicos Hyd_senso e Hyd_anti_senso foram desenhados para o Hydrangea ringspot virus (HdRSV), um potexvirus encontrado comumente em países Europeus e nos Estados Unidos. O RNA total foi extraído pelo método de Bertheau et al. (1998), para posterior análise por RT-PCR utilizando-se estes oligonucleotídeos. Dois fragmentos, um em torno de 550 e outro de 250 nucleotídeos foram amplificados e purificados para realização do sequenciamento genético. Uma identidade de nucleotídeos de 96% e 88% para o fragmento maior e menor respectivamente foi observada para HdRSV (número de acesso AJ 707100.1), indicando tratar-se desta espécie viral. O HdRSV até então era uma praga exótica no Brasil, de forma que foi realizada comunicação ao Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, que emitiu parecer... / The hydrangea is an ornamental plant very appreciated in Brazil. In South of Brazil, this plant is used in projects for gardening in houses and highways. Hydrangea is the symbol of Gramado´s city. In State of São Paulo this ornamental plant is commonly found in Campos do Jordão. Hydrangea plants showing leaves with chlorotic and necrotic rings were observed by Yuki (2005) in material proceeding from Arujá, State of São Paulo. Chlorotic local lesions were observed on Chenopodium quinoa and Gomphrena globosa, after sap transmission, indicating infection caused by virus. On electron microscope analysis, virus particles with 490 nm could be 4 visualized indicating infectin by a potexvirus. In order to identify the species of virus infecting these plants, specifics primers (Hyd_senso and Hyd_anti_senso) were design for Hydrangea ringspot virus (HdRSV), a potexvirus commonly found infecting hydrangea in Europe and United States. Total RNA was extracted following Bertheau et al., 1998 protocol’s and the primers were used in RT-PCR. Two fragments, one around 550bp and another one of 250 nucleotides were amplified and sequenced. An identity of nucleotide of 96% and 88%, respectively, was observed for HdRSV (number of access AJ 707100.1), indicating that both fragments amplified were from the virus. As the HdRSV is an exotic pest in Brazil, the occurrence was notified to the Ministry of Agriculture (MAPA) that gave us the permission for publication this data (process 21052.015361/2007-08). To evaluate the dissemination of this virus in the matrices of hydrangea used in the commercial production in Brazil, 17 samples of the region of Arujá – SP were analysed for the presence of the virus. Eight of them were infected by virus, and the RT-PCR fragment from the varieties Azul Rendado, Azul LZR, Renat Blue, Rosa Japonesa, Rosita and Vermelho Comum were sequenced for analysis... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: A hortênsia é um arbusto semilenhoso muito apreciado como ornamental no Brasil. No Brasil podemos ressaltar a "Região das Hortênsias" no Sul do país, onde esta ornamental é utilizada em projetos de jardinagem em casas e rodovias. A cidade de Gramado têm a hortênsia como sua flor símbolo. No Estado de São Paulo, ela é comumente encontrada na Região de Campos do Jordão. Plantas de hortênsia apresentando anéis cloróticos e necróticos foram observadas por Yuki et al. (2005) em material proveniente de Arujá, estado de São Paulo. Transmissões por extrato vegetal permitiram a observação de lesões locais cloróticas em Chenopodium quinoa e Gomphrena globosa, indicando infecção causada por vírus. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo a identificação e caracterização da espécie viral presente nestas amostras. Inicialmente as amostras foram analisadas por microscopia eletrônica, onde puderam ser observadas partículas alongadas filamentosas, medindo cerca de 490 nm, indicando a provável presença de um potexvirus. Oligonucleotídeos específicos Hyd_senso e Hyd_anti_senso foram desenhados para o Hydrangea ringspot virus (HdRSV), um potexvirus encontrado comumente em países Europeus e nos Estados Unidos. O RNA total foi extraído pelo método de Bertheau et al. (1998), para posterior análise por RT-PCR utilizando-se estes oligonucleotídeos. Dois fragmentos, um em torno de 550 e outro de 250 nucleotídeos foram amplificados e purificados para realização do sequenciamento genético. Uma identidade de nucleotídeos de 96% e 88% para o fragmento maior e menor respectivamente foi observada para HdRSV (número de acesso AJ 707100.1), indicando tratar-se desta espécie viral. O HdRSV até então era uma praga exótica no Brasil, de forma que foi realizada comunicação ao Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, que emitiu parecer... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The hydrangea is an ornamental plant very appreciated in Brazil. In South of Brazil, this plant is used in projects for gardening in houses and highways. Hydrangea is the symbol of Gramado's city. In State of São Paulo this ornamental plant is commonly found in Campos do Jordão. Hydrangea plants showing leaves with chlorotic and necrotic rings were observed by Yuki (2005) in material proceeding from Arujá, State of São Paulo. Chlorotic local lesions were observed on Chenopodium quinoa and Gomphrena globosa, after sap transmission, indicating infection caused by virus. On electron microscope analysis, virus particles with 490 nm could be 4 visualized indicating infectin by a potexvirus. In order to identify the species of virus infecting these plants, specifics primers (Hyd_senso and Hyd_anti_senso) were design for Hydrangea ringspot virus (HdRSV), a potexvirus commonly found infecting hydrangea in Europe and United States. Total RNA was extracted following Bertheau et al., 1998 protocol's and the primers were used in RT-PCR. Two fragments, one around 550bp and another one of 250 nucleotides were amplified and sequenced. An identity of nucleotide of 96% and 88%, respectively, was observed for HdRSV (number of access AJ 707100.1), indicating that both fragments amplified were from the virus. As the HdRSV is an exotic pest in Brazil, the occurrence was notified to the Ministry of Agriculture (MAPA) that gave us the permission for publication this data (process 21052.015361/2007-08). To evaluate the dissemination of this virus in the matrices of hydrangea used in the commercial production in Brazil, 17 samples of the region of Arujá - SP were analysed for the presence of the virus. Eight of them were infected by virus, and the RT-PCR fragment from the varieties Azul Rendado, Azul LZR, Renat Blue, Rosa Japonesa, Rosita and Vermelho Comum were sequenced for analysis... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Renate Krause Sakate / Coorientador: Marcelo Agenor Pavan / Banca: Jorge Alberto Marques Rezende / Banca: Valdir Atsushi Yuki / Mestre

Orientador: Clarice Weis Arns, Renata Servan de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T01:41:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_HelenaLage_D.pdf: 2290087 bytes, checksum: 244512a14adbf81da5ab74893d3c12b2 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O metapneumovírus aviário (AMPV) é o agente primário da rinotraqueíte dos perus (TRT). O AMPV pertence à família Paramyxoviridae, subfamília Pneumovirinae, gênero Metapneumovirus. Também está associado à síndrome da cabeça inchada (SHS) em galinhas e é responsável por significativas perdas econômicas em sua produção. O presente estudo foi dividido em três partes. A primeira parte do trabalho consistiu em avaliar a beta-actina, gene utilizado como controle interno das técnicas moleculares de detecção viral, das células chicken embryo related (CER). Para isso, foi realizado o sequenciamento dos amplicons gerados pelo PCR do gene da beta-actina. A beta-actina das células BHK21 e CER foram detectadas utilizando oligonucleotídeos hamster-específicos. Além disso, pela análise filogenética as células CER e BHK21 apresentaram uma alta similaridade genética (p>0.996). Estes resultados sugerem que as células CER não deveriam ser mais consideradas como células aviárias. A segunda parte do estudo consistiu em comparar a especificidade e limite de detecção de duas novas técnicas de RT-PCR convencional (genes da nucleoproteína (N) e da proteína de fusão -F) e de duas novas técnicas de real time RT-PCR (RRT-PCR; genes F e N) com um RT-PCR (gene da glicoproteína -G) previamente estabelecido para a detecção do AMPV. Todos estes métodos foram capazes de detectar os isolados AMPV subtipo A (AMPV/A). As técnicas RRT-PCR (genes F e N) foram capazes de amplificar os maiores limites de detecção (diluições 10-5 e 10-5, respectivamente). Além disso, o RRT-PCR gera resultados rápidos e sensíveis, o que o torna uma ferramenta alternativa para o isolamento viral. Na terceira parte, foi realizado o silenciamento gênico de AMPV pela aplicação de seqüências curtas e específicas de RNA (siRNAs, do inglês short interfering RNA) para regiões alvo do genoma viral. Assim, foram desenhadas moléculas de siRNA contra os genes N e F do AMPV. Três dias após a infecção viral, o efeito do siRNA na replicação viral foi verificado por titulação viral, RRT-PCR e RT-PCR. Os títulos virais das células CER transfectadas com o siRNA/N apresentaram queda de até 99,9% em relação ao controle. A produção de mRNAs para os genes N, F e G do AMPV também apresentou uma redução de até 99,7%. Desta forma, a molécula de siRNA contra o gene N foi capaz de inibir a replicação do AMPV in vitro. Em estudos futuros, a associação de siRNAs tendo como alvo o complexo da RNA polimerase deve ser avaliada como uma eficiente ferramenta para evitar o escape viral na terapia antiviral / Abstract: Avian metapneumovirus (AMPV) is the primary causative agent of severe rhinotracheitis in turkeys. AMPV belongs to the Paramyxoviridae family, Pneumovirinae subfamily, within the genus Metapneumovirus. It is associated with swollen head syndrome in chickens and is the source of significant economic losses to animal food production. The present study is divided in three parts. In the first part, the chicken embryo related (CER) cells beta-actin was evaluated. The CER beta actin gene was amplified by RT-PCR, and the amplicon was sequenced. The BHK21 and CER beta-actins were detected using hamster-specific primers. The results showed that such cells are closely related to BHK21 (p > 0.966), having a p-distance of 0.7 from chicken embryo fibroblasts. This confirms that CER cells are phylogenetically closely related to BHK21 cells. The second part of the study, we compared the specificity and detection limits of two newly designed conventional RT-PCRs (F and N genes) and two newly defined real time RT-PCR (RRT-PCR; (F and N genes), with an established RT-PCR (G gene) for AMPV detection. All the RT-PCR tested assays were able to detect the six isolates. The higher detection limits were observed at 10-5- fold and 10-5-fold dilutions of the N- and F- based RRT-PCR, respectively. Important to note that RRT-PCR assays generate fast and sensitive results, becoming a feasible alternative for virus isolation. In the third part, the silencing of AMPV by targeting its viral regions was promoted. We designed specific short interfering RNA (siRNA) targeting the nucleoprotein (N) and fusion (F) genes. Three days after the virus infection, the effect of siRNA in the virus replication was verified by virus titration, real time RT-PCR, and RT-PCR assays. AMPV titers presented reduction by 99.9%, when compared to the siRNA/F and siRNA/GFP treated samples. Also, real time RT-PCR results presented reduction of AMPV N, F and G mRNAs by 99.7%, when transfected with siRNA/N. Therefore, an siRNA sequence targeting the N gene was able to inhibit the AMPV production in vitro. In future studies, a combination of siRNAs targeting the RNA-polymerase complex may be used as a tool to study AMPV-infected cells or as an antiviral therapy / Doutorado / Microbiologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Sound research and effective teaching are both essential to the progress of science. This thesis encompasses two studies to address the two needs: a multi-scale soil study designed to validate a novel soil biological characterization method; and a pilot pedagogical study designed to test the efficacy of authentic science inquiry into gas chromatography. The soil study relies on a comparison of six soils taken from the Bahamas and Michigan. The novel method, using soil-derived VOCs analyzed via gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS), proved effective for resolving soils, as hypothesized, and may prove useful for analyzing soil biology rapidly and non-destructively in future studies. The pilot pedagogical study compares traditional recipe-style instruction with authentic science inquiry in an undergraduate chemistry laboratory class. Pre- and post-assessments of students’ conceptual understanding, retention of terms, and attitude revealed the hypothesized superior efficacy of authentic science inquiry over traditional recipe-style instruction.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-01-31Bitstream added on 2014-06-13T20:58:38Z : No. of bitstreams: 1 sanches_mm_me_botfca.pdf: 690574 bytes, checksum: 4794d7c23f85fb7d5e54fb4b30c47365 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Empresa Privada / Recentemente sintomas da doença conhecida como engrossamento das nervuras, ou big-vein, foram observados no Estado de São Paulo, principalmente no período de inverno. A doença foi historicamente associada ao Lettuce big-vein associated virus (LBVaV), porém a presença dos sintomas característicos foi atribuída ao Mirafiori lettuce big-vein virus (MLBVV). Tradicionamente ambos vírus vem sendo diagnosticados pelo teste de ELISA, de modo que resultados discrepantes quanto ao agente causal dos sintomas da doença foram obtidos na Europa, possivelmente devido à falta de sensibilidade do teste. Deste modo, o presente trabalho teve como finalidade utilizar a técnica de RT-PCR na detecção segura e específica do MLBVV e LBVaV. Foram coletadas 366 plantas sintomáticas nas regiões produtoras de Bauru, Campinas e Mogi das Cruzes no Estado de São Paulo nos meses de junho e setembro de 2004 e abril e julho de 2005, e 18 plantas assintomáticas na região de Mogi das Cruzes no mês de dezembro de 2004. Os oligonucleotídeos específicos foram altamente eficientes na detecção de ambos os vírus, sendo que a banda viral foi clonada e sequenciada para alguns dos isolados, comprovando a identidade viral de cada um dos vírus. Foi observado que 76,2% das plantas sintomáticas apresentaram infecção mista do LBVaV e MLBVV, em 11,5% somente o MLBVV e em 6,6% somente o LBVaV. Nas plantas assintomáticas foi detectada a presença de infecção mista por MLBVV e LBVaV em quatro amostras, infecção apenas por MLBVV em cinco amostras e apenas por LBVaV em três amostras, indicando que o desenvolvimento de sintomas depende de fatores abióticos, além da presenca dos vírus. A análise das sequencias de aminoácidos da região codificadora da proteína capsidial, revelou que os isolados de LBVaV possuem baixa variabilidade genética e mesma origem evolutiva entre isolados de diferentes partes do mundo... / Lettuce plants with big-vein symptons have been observed in the São Paulo State during the winter. The disease has been historically associated to Lettuce big-vein associated virus (LBVaV), however recently the development of symptoms was atributted to Mirafiori lettuce big-vein virus (MLBVV). Tradicionally both viruses were routinely detected by ELISA, but discrepants results about the main disease agent were obtained in the Europe possible by the low sensibility of the assay. The objective of this study was to detect MLBVV and LBVaV by RT-PCR, using specifics primers. A total of 366 samples from symptomatic plants of Bauru, Campinas and Mogi das Cruzes regions, from São Paulo State, were collected during june and september of 2004 and april and july of 2005, and 18 symptomless plants from the Mogi das Cruzes region during December 2004. The primers were highly efficient in the 4 detection of both viruses, and the fragment of some isolates were cloned and sequenced to confirm the RT-PCR. Mixed infection of LBVaV and MLBVV was observed on 76,2% symptomatic plants. MLBVV on 11,5% and LBVaV on 6,6%. In a total of 18 symptomless plants, four were infected with both viruses, five only with MLBVV and three plants with LBVaV. These results indicates that not only the presence of the viruses, but also abiotic factors are necessary for the occurrence of big-vein symptoms. Amino acid sequence identities of part of the coat protein gene of LBVaV isolates was high indicating a possible same evolutive origin. Genetic diversity among MLBVV isolates was higher when compared to LBVaV isolates. MLBVV brazilian isolates belongs to subgroup A, with one RsaI restriction site on the coat protein sequence. One plant with MLBVV and LBVaV (mixed infection) was sap inoculated on a host range (temperature and luminosity controled), indicating that MLBVV can be transmitted to Nicotiana tabacum TNN, N. rustica... (Complete abstract, click electronic address below).

Orientador: Renate Krause Satake / Banca: Marcelo Agenor Pavan / Banca: Romulo Fujito Kobori / Resumo: Recentemente sintomas da doença conhecida como engrossamento das nervuras, ou big-vein, foram observados no Estado de São Paulo, principalmente no período de inverno. A doença foi historicamente associada ao Lettuce big-vein associated virus (LBVaV), porém a presença dos sintomas característicos foi atribuída ao Mirafiori lettuce big-vein virus (MLBVV). Tradicionamente ambos vírus vem sendo diagnosticados pelo teste de ELISA, de modo que resultados discrepantes quanto ao agente causal dos sintomas da doença foram obtidos na Europa, possivelmente devido à falta de sensibilidade do teste. Deste modo, o presente trabalho teve como finalidade utilizar a técnica de RT-PCR na detecção segura e específica do MLBVV e LBVaV. Foram coletadas 366 plantas sintomáticas nas regiões produtoras de Bauru, Campinas e Mogi das Cruzes no Estado de São Paulo nos meses de junho e setembro de 2004 e abril e julho de 2005, e 18 plantas assintomáticas na região de Mogi das Cruzes no mês de dezembro de 2004. Os oligonucleotídeos específicos foram altamente eficientes na detecção de ambos os vírus, sendo que a banda viral foi clonada e sequenciada para alguns dos isolados, comprovando a identidade viral de cada um dos vírus. Foi observado que 76,2% das plantas sintomáticas apresentaram infecção mista do LBVaV e MLBVV, em 11,5% somente o MLBVV e em 6,6% somente o LBVaV. Nas plantas assintomáticas foi detectada a presença de infecção mista por MLBVV e LBVaV em quatro amostras, infecção apenas por MLBVV em cinco amostras e apenas por LBVaV em três amostras, indicando que o desenvolvimento de sintomas depende de fatores abióticos, além da presenca dos vírus. A análise das sequencias de aminoácidos da região codificadora da proteína capsidial, revelou que os isolados de LBVaV possuem baixa variabilidade genética e mesma origem evolutiva entre isolados de diferentes partes do mundo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Lettuce plants with big-vein symptons have been observed in the São Paulo State during the winter. The disease has been historically associated to Lettuce big-vein associated virus (LBVaV), however recently the development of symptoms was atributted to Mirafiori lettuce big-vein virus (MLBVV). Tradicionally both viruses were routinely detected by ELISA, but discrepants results about the main disease agent were obtained in the Europe possible by the low sensibility of the assay. The objective of this study was to detect MLBVV and LBVaV by RT-PCR, using specifics primers. A total of 366 samples from symptomatic plants of Bauru, Campinas and Mogi das Cruzes regions, from São Paulo State, were collected during june and september of 2004 and april and july of 2005, and 18 symptomless plants from the Mogi das Cruzes region during December 2004. The primers were highly efficient in the 4 detection of both viruses, and the fragment of some isolates were cloned and sequenced to confirm the RT-PCR. Mixed infection of LBVaV and MLBVV was observed on 76,2% symptomatic plants. MLBVV on 11,5% and LBVaV on 6,6%. In a total of 18 symptomless plants, four were infected with both viruses, five only with MLBVV and three plants with LBVaV. These results indicates that not only the presence of the viruses, but also abiotic factors are necessary for the occurrence of big-vein symptoms. Amino acid sequence identities of part of the coat protein gene of LBVaV isolates was high indicating a possible same evolutive origin. Genetic diversity among MLBVV isolates was higher when compared to LBVaV isolates. MLBVV brazilian isolates belongs to subgroup A, with one RsaI restriction site on the coat protein sequence. One plant with MLBVV and LBVaV (mixed infection) was sap inoculated on a host range (temperature and luminosity controled), indicating that MLBVV can be transmitted to Nicotiana tabacum TNN, N. rustica... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre