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Universiẗat, Diss., 2006--Giessen.

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FERREIRA, Emerson Ramalho. A revacinação com a BCG modula a produção de citocinas frente a antígenos do Mycobacterium leprae, em contatos menores de 15 anos de pacientes com hanseníase. 2010. 104 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-04-29T13:37:28Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_erferreira.pdf: 2370142 bytes, checksum: 0b5a10a59056f54a2a9027b3e71e0163 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-04-29T16:29:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_erferreira.pdf: 2370142 bytes, checksum: 0b5a10a59056f54a2a9027b3e71e0163 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-29T16:29:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_erferreira.pdf: 2370142 bytes, checksum: 0b5a10a59056f54a2a9027b3e71e0163 (MD5) Previous issue date: 2010 / Studies in different populations have shown that vaccination with BCG provides partial protection against leprosy. However, need of boost BCG vaccination and your impact in response immune against antigens of Mycobacterium leprae is poorly understood, mainly in children who are contacts of these patients with leprosy, and constitute population of risk for illness. This study, we investigated the paper a second dose of BCG given to contacts of leprosy patients under the age of fifteen years in modulate the response imune. Blood samples of twenty five children, who received a first dose of BCG at birth, were collected immediately before and two months after BCG revaccination. Your peripheral blood mononuclear cells (PBMC) stimulated by proteins and peptides of M. leprae, were measured IFN-γ and IL-10 by an ELISA assay. Before revaccination the serum anti-PGL1 IgG and IgM isotypes were measured by ELISA assays performed with native PGL1- coated microplates, and PPD-skin reaction was measured 2 to 3 months after revaccination. The study was approved by the local Ethic Committee, number 006-08, May 7th, 2008. BCG revaccination can induces IFN-gamma and/or IL-10 production related to antigen and age, but did not correlated with PPD-skin reaction or anti-PGL1 levels. The PBMC’s production of IFN-gamma against MLT (total M. leprae antigen) after BCG was higher on children under 4 years old (N= 8, 4203,0 ± 539,2 pg/mL before BCG x 9141,0 ± 860,9 pg/mL after BCG, p=0,015, Mann-Whitney’s test). Children between 5 and 9 years old showed an increase either of IFN-gama levels (N=11, 4912 ± 1065 pg/mL x 9249,0 ± 1171 pg/mL, p=0,024, Mann-Whitney’s test) or IL-10 levels (N=11, 210,6 ± 39,4 pg/mL x 680,3 ± 76,74 pg/mL, p=0, 0,001, Mann-Whitney’s test). However children between 10 and 15 years old failed to increase the cytokines levels after BCG booster. Contacts of multibacillary patients produced higher IFN-gamma levels (N= 13, 4536,0 ± 543,1 pg/mL x 9263,0 ± 989,0 pg/mL, p=0,0012, Mann-Whitney’s test) and IL-10 levels (N= 13, 235,9 ± 46,5 pg/mL x 743,5 ± 87,8, p=0,0012, Mann-Whitney’s test) against MLT after BCG, but only IFN-gamma levels (N=12, 4975,0 ± 995,8 pg/mL x 8126,0 ± 788,6, p=0,0342, Mann-Whitney’s test) increased after BCG on contacts of paucibacillary patients. The production of IFN-gamma and IL-10 against two synthetic peptides (p38 and p67), before and after BCG vaccine, were similar as seen with MLT antigen, but the absence of cytokine production against p69 help to identify this peptide as a effective diagnostic marker. / Estudos em diferentes populações têm mostrado que a vacinação com a BCG concede proteção parcial contra a hanseníase. Entretanto, a necessidade da revacinação e seu impacto na resposta imune contra antígenos do Mycobacterium leprae é pouco compreendida, principalmente nas crianças que são contatos destes pacientes com hanseníase, e constituem uma população de risco para o adoecimento. Neste estudo, investigamos o papel da revacinação com a BCG na modulação da resposta imune em contatos menores de quinze anos de pacientes com hanseníase. Amostras de sangue periférico de vinte e cinco crianças, vacinadas com a BCG ao nascer, foram coletas antes e dois meses após a revacinação com a BCG. Suas células mononucleares (PBMC) foram estimuladas com proteínas e peptídeos do M. leprae, dosando-se as quantidades de IFN-γ e IL-10 por ELISA. Anteriormente a revacinação, foram coletas amostras para dosagem de IgM e IgG anti-PGL-1 e realizado o teste tuberculínico (PPD) para avaliação da eficácia vacinal após a revacinação. Identificamos o potencial papel da BCG em estimular a produção de IFN-γ e/ou IL-10 dependendo do antígeno e da idade do contato, sem relação com o PPD e sorologia anti-PGL-1. Estes resultados sugerem que a BCG modula a resposta imune dos contatos frente aos antígenos do M. leprae, com o frequente aumento nos níveis de IFN-γ, frente ao MLT, nas crianças com idade entre 1 a 4 anos (4.203 + 539,2 pg/mL pré-BCG x 9.141 + 860,9 pg/mL pós-BCG, p=0,001). Já os contatos entre 5 a 9 anos mostram aumento na produção de IL-10 (210 +39,4 pg/mL pré-BCG x 680 + 76,74 pg/mL pós-BCG, p=0,001) e IFN-γ (4.912 + 1.065 pg/mL x 9.249 + 1.171 pg/mL, p=0,024). Estes achados são acompanhados com o aumento dos casos de hanseníase em crianças entre 5 a 9 anos na comunidade. Entretanto, nos contatos entre 10 a 15 anos a revacinação falha em induzir o aumento de IFN-γ e IL-10. Os contatos de MB produziram, simultaneamente, altos níveis de IFN-γ e IL-10 em resposta ao MLT, enquanto que os contatos de PB somente produziram altos níveis de IFN-γ após a revacinação. A produção de IFN-γ e IL-10 frente aos peptídeos sintéticos p38 e p69 indica que estes antígenos podem ser possíveis marcadores de infecção. Assim, a BCG pode ser protetora, sendo eficiente em induzir o aumento da resposta por IFN-γ nestes contatos, frente aos antígenos do M. leprae.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7420_FERNANDA MARIA DOS SANTOS20140319-135643.pdf: 764670 bytes, checksum: 5dd3f009b2c4493807fc9cfb35be8cd4 (MD5) Previous issue date: 2014-01-22 / A cisticercose bovina é uma das zoonoses mais encontradas na inspeção post mortem dos bovinos abatidos no Brasil, transmitida ao homem pela ingestão de carne crua ou mal cozida contendo cistos viáveis. O objetivo do presente trabalho foi realizar análise de registros de cisticercose bovina nos matadouros frigoríficos do Estado do Espírito Santo no período de 2009 a 2012. Os dados referentes às condenações de carcaça e órgãos foram obtidos a partir dos registros do órgão de serviço de inspeção federal (SIF) e estadual (SIE) do estado do ES. Foram abatidos um total de 1.340.751 bovinos no período estudado e uma prevalência média de 0,84%. Nos dados registrados no SIF a prevalência média foi de 0,87% e as regiões anatômicas acometidas foram coração, língua, cabeça e fígado, respectivamente. Nos dados do SIE, a prevalência foi de 0,83% e os órgãos mais acometidos foram coração, cabeça, fígado e língua, respectivamente. Em todos os anos o número total de cistos vivos foi maior do que o número de cistos calcificados. As perdas por cisticercose no período foram de R$ 9.092.834,97, para 1.518.256,8 Kg de carne condenada. Os casos de cisticercose aumentaram entre os anos de 2010, 2011 e 2012 (p<0,001), mostrando uma tendência crescente da enfermidade e houve diferença significativa entre as estações do ano (p=0,01), com a estação chuvosa apresentando um número maior de casos de cisticercose. Um questionário sobre diagnóstico para cisticercose foi oferecido aos executores de inspeção, em um dos matadouros no sul do estado, e constatou incapacidade de diferenciar cisticercose da hidatidose.

O Mycobacterium bovis é o agente causador da tuberculose em bovinos, zoonose que produz prejuízos para a produção de carne e leite em muitos países. Para apoiar estudos epidemiológicos no âmbito dos programas de controle, recentemente surgiram vários métodos de discriminação molecular de isolados de M. bovis. Os mais utilizados são o Spoligotyping, Mycobacterial Interspersed Repetitive Units (MIRU) e Exact Tandem Repeat (ETR), que apresentam diferentes poderes de discriminação. No presente estudo calculou-se a diversidade alélica para cada locus de MIRU e de ETR e o índice discriminatório de Hunter-Gaston (HGI) para o Spoligotyping, 10 MIRU e 3 ETR em 116 amostras de M. bovis isoladas de bovinos. Além disso, verificou-se se a capacidade de detectar agrupamentos espaciais de focos aumenta na medida em que é aumentado o poder discriminatório das análises moleculares. Comparou-se a utilização dessas três técnicas moleculares em análises espaciais para verificação de agrupamentos de focos da doença. A análise da diversidade alélica indicou que os MIRU 16, 26 e 27 e os ETR A, B e C foram os que apresentaram maior diversidade dentre os ensaiados. O HGI para cada uma das técnicas foi de: Spoligotyping = 0,738381; MIRU = 0,829835 e ETR = 0,825337. A associação desses métodos aumentou o poder discriminatório: Spoligotyping + MIRU = 0,930585; Spoligotyping + ETR = 0,931034; MIRU + ETR = 0,953373. O maior poder discriminatório foi alcançado quando as três técnicas foram associadas (HGI = 0,98051). Considerando as análises realizadas no presente estudo, o método inicial deveria ser o Spoligotyping, por diferenciar o M. bovis dos outros integrantes do complexo Mycobacterium tuberculosis. Como as associações do MIRU e do ETR com o Spoligotyping resultaram em HGI praticamente idênticos, depois do Spoligotyping, o método ETR parece ser a melhor escolha, pois é mais rápido e econômico do que o MIRU. Finalmente, o MIRU deve ser o último método a ser realizado. Assim, a escolha do método depende do poder discriminatório necessário para o objetivo em questão. Embora a capacidade de detectar agrupamentos espaciais de focos não tenha sido aumentada na medida em que cresceu o poder discriminatório das análises moleculares, a premissa continua válida. / Mycobacterium bovis is the causative organism of bovine tuberculosis, has zoonotic character and leads economic losses in livestock production in a lot of countries. To support the epidemiological researches on the disease control programs several molecular methods has been used to detect M. bovis strains. Among them, Spoligotyping, Mycobacterial Interspersed Repetitive Units (MIRU) and Exact Tandem Repeat (ETR) are the molecular analyses that present different powers of Mycobacterium bovis discrimination. In this study, allelic diversity of MIRU and ETR locus and Hunter-Gaston discriminatory index (HGI) were calculated for Spoligotyping, 10 MIRU and 3 ETR of 116 isolates of M. bovis from Brazilian bovines. The use of those three molecular techniques was compared in space analyses for verification of groupings of focuses of the disease. Besides, it was verified if the capacity to cluster of focuses increases in the measure in that the discriminatory power of the molecular analyses is increased. The analysis of the allelic diversity indicated that MIRU 16, 26, 27 and ETR A, B, C presented larger diversity among the rehearsed. The HGI for each individual technique was: Spoligotyping = 0.738381; ETR = 0.825337 and MIRU = 0.829835. The associations of these methods increased the discriminatory power: Spoligotyping + MIRU = 0.930585; Spoligotyping + ETR = 0.931034; MIRU + ETR = 0.953373. The greater discriminatory power was verified when the three techniques were associated (HGI = 0,98051). Considering the analyses performed, the initial method for differentiating M. bovis from the other species of the M. tuberculosis complex should be Spoligotyping. The association of MIRU and ETR with Spoligotyping resulted in HGI almost identical, after Spoligotyping, the ETR technique showed to be the best choice, due the shorter time to process and economic benefits when compared to MIRU. Finally, MIRU is the last method to be performed. Thus, the choice among the techniques depends on the discriminatory power necessary for the task. Although the capacity to detect clusters of focuses has not been increased in the measure in that it increased the discriminatory power of the molecular analyses, the premise continues valid.

A tuberculose continua sendo uma importante doença infecciosa, tanto nos humanos quanto nos animais, com índices de morbidade e mortalidade significativos e perdas econômicas em todo o mundo. A tuberculose bovina é uma doença infecciosa causada pela bactéria Mycobacterium bovis, que gera perdas na produção nos rebanhos infectados, sendo também considerada uma importante zoonose. Os métodos de diagnóstico direto têm fundamental importância para um sistema de vigilância para a tuberculose bovina e a agregação de métodos moleculares, notadamente aqueles que têm aplicação em epidemiologia, traz maior precisão diagnóstica para esses sistemas. Dentre as técnicas moleculares, destacam-se o TB Multiplex PCR, o RD Multiplex PCR e o Multispacer Sequence Typing, para a identificação dos isolados e o Variable Number Tandem Repeat (VNTR) e o Spoligotyping, como técnicas de fingerpint de M. bovis. Assim, o presente estudo teve como objetivo a identificação molecular de amostras oriundas de várias regiões do Brasil utilizando estes padrões de técnicas moleculares. Os espoligotipos identificados em maior abundância foram o SB0121, o qual apresentou-se amplamente distribuído entre as amostras, seguido pelo SB0295, SB1380, SB0140 e SB1050. Além disso, foram detectados quatro perfis nunca antes descritos na literatura, sendo que um deles foi o terceiro mais frequente entra as amostras pesquisadas. Os resultados observados neste trabalho demonstraram ainda que a tipagem pelo MIRU-VNTR revelou-se superior ao Spoligotyping para discriminar os isolados. Nesta perspectiva, acredita-se que as pesquisas moleculares voltadas a identificação de micobactérias, aliadas as técnicas epidemiológicas tradicionais, possam melhorar sensivelmente a performance dos sistemas de vigilância para tuberculose bovina no Brasil. / Tuberculosis remains a major infectious disease in both humans and animals, with morbidity and mortality and significant economic losses. Bovine tuberculosis is an infectious disease caused by Mycobacterium bovis, with yield losses in infected herds and is also considered an important zoonosis. The methods of direct diagnosis are important for a surveillance system for bovine tuberculosis and aggregation of molecular methods brings greater diagnostic accuracy for these systems, especially those that have application in epidemiology. Among them, TB Multiplex PCR, RD Multiplex PCR, and Multispacer Sequence Typing for the identification of strains, and Variable Number Tandem Repeat (VNTR) and Spoligotyping, for fingerprint of M. bovis. Thus, the present study aimed to identify molecular samples from different regions of Brazil using these molecular techniques. The most abundant were the spoligotype SB0121, which has become widely distributed among the samples, followed by SB0295, SB1380, SB0140, and SB1050. In addition, four profiles never before described in the literature were detected, one of which was the third most frequent. The results of this study also showed that the MIRU-VNTR typing has proved superior to Spoligotyping to discriminate the isolates. In this perspective, it is believed that the research focused on molecular identification of mycobacteria, combined traditional epidemiological techniques, can significantly improve the performance of surveillance systems for bovine tuberculosis in Brazil.

A tuberculose continua sendo uma importante doença infecciosa, tanto nos humanos quanto nos animais, com índices de morbidade e mortalidade significativos e perdas econômicas em todo o mundo. A tuberculose bovina é uma doença infecciosa causada pela bactéria Mycobacterium bovis, que gera perdas na produção nos rebanhos infectados, sendo também considerada uma importante zoonose. Os métodos de diagnóstico direto têm fundamental importância para um sistema de vigilância para a tuberculose bovina e a agregação de métodos moleculares, notadamente aqueles que têm aplicação em epidemiologia, traz maior precisão diagnóstica para esses sistemas. Dentre as técnicas moleculares, destacam-se o TB Multiplex PCR, o RD Multiplex PCR e o Multispacer Sequence Typing, para a identificação dos isolados e o Variable Number Tandem Repeat (VNTR) e o Spoligotyping, como técnicas de fingerpint de M. bovis. Assim, o presente estudo teve como objetivo a identificação molecular de amostras oriundas de várias regiões do Brasil utilizando estes padrões de técnicas moleculares. Os espoligotipos identificados em maior abundância foram o SB0121, o qual apresentou-se amplamente distribuído entre as amostras, seguido pelo SB0295, SB1380, SB0140 e SB1050. Além disso, foram detectados quatro perfis nunca antes descritos na literatura, sendo que um deles foi o terceiro mais frequente entra as amostras pesquisadas. Os resultados observados neste trabalho demonstraram ainda que a tipagem pelo MIRU-VNTR revelou-se superior ao Spoligotyping para discriminar os isolados. Nesta perspectiva, acredita-se que as pesquisas moleculares voltadas a identificação de micobactérias, aliadas as técnicas epidemiológicas tradicionais, possam melhorar sensivelmente a performance dos sistemas de vigilância para tuberculose bovina no Brasil. / Tuberculosis remains a major infectious disease in both humans and animals, with morbidity and mortality and significant economic losses. Bovine tuberculosis is an infectious disease caused by Mycobacterium bovis, with yield losses in infected herds and is also considered an important zoonosis. The methods of direct diagnosis are important for a surveillance system for bovine tuberculosis and aggregation of molecular methods brings greater diagnostic accuracy for these systems, especially those that have application in epidemiology. Among them, TB Multiplex PCR, RD Multiplex PCR, and Multispacer Sequence Typing for the identification of strains, and Variable Number Tandem Repeat (VNTR) and Spoligotyping, for fingerprint of M. bovis. Thus, the present study aimed to identify molecular samples from different regions of Brazil using these molecular techniques. The most abundant were the spoligotype SB0121, which has become widely distributed among the samples, followed by SB0295, SB1380, SB0140, and SB1050. In addition, four profiles never before described in the literature were detected, one of which was the third most frequent. The results of this study also showed that the MIRU-VNTR typing has proved superior to Spoligotyping to discriminate the isolates. In this perspective, it is believed that the research focused on molecular identification of mycobacteria, combined traditional epidemiological techniques, can significantly improve the performance of surveillance systems for bovine tuberculosis in Brazil.

O Mycobacterium bovis é o agente causador da tuberculose em bovinos, zoonose que produz prejuízos para a produção de carne e leite em muitos países. Para apoiar estudos epidemiológicos no âmbito dos programas de controle, recentemente surgiram vários métodos de discriminação molecular de isolados de M. bovis. Os mais utilizados são o Spoligotyping, Mycobacterial Interspersed Repetitive Units (MIRU) e Exact Tandem Repeat (ETR), que apresentam diferentes poderes de discriminação. No presente estudo calculou-se a diversidade alélica para cada locus de MIRU e de ETR e o índice discriminatório de Hunter-Gaston (HGI) para o Spoligotyping, 10 MIRU e 3 ETR em 116 amostras de M. bovis isoladas de bovinos. Além disso, verificou-se se a capacidade de detectar agrupamentos espaciais de focos aumenta na medida em que é aumentado o poder discriminatório das análises moleculares. Comparou-se a utilização dessas três técnicas moleculares em análises espaciais para verificação de agrupamentos de focos da doença. A análise da diversidade alélica indicou que os MIRU 16, 26 e 27 e os ETR A, B e C foram os que apresentaram maior diversidade dentre os ensaiados. O HGI para cada uma das técnicas foi de: Spoligotyping = 0,738381; MIRU = 0,829835 e ETR = 0,825337. A associação desses métodos aumentou o poder discriminatório: Spoligotyping + MIRU = 0,930585; Spoligotyping + ETR = 0,931034; MIRU + ETR = 0,953373. O maior poder discriminatório foi alcançado quando as três técnicas foram associadas (HGI = 0,98051). Considerando as análises realizadas no presente estudo, o método inicial deveria ser o Spoligotyping, por diferenciar o M. bovis dos outros integrantes do complexo Mycobacterium tuberculosis. Como as associações do MIRU e do ETR com o Spoligotyping resultaram em HGI praticamente idênticos, depois do Spoligotyping, o método ETR parece ser a melhor escolha, pois é mais rápido e econômico do que o MIRU. Finalmente, o MIRU deve ser o último método a ser realizado. Assim, a escolha do método depende do poder discriminatório necessário para o objetivo em questão. Embora a capacidade de detectar agrupamentos espaciais de focos não tenha sido aumentada na medida em que cresceu o poder discriminatório das análises moleculares, a premissa continua válida. / Mycobacterium bovis is the causative organism of bovine tuberculosis, has zoonotic character and leads economic losses in livestock production in a lot of countries. To support the epidemiological researches on the disease control programs several molecular methods has been used to detect M. bovis strains. Among them, Spoligotyping, Mycobacterial Interspersed Repetitive Units (MIRU) and Exact Tandem Repeat (ETR) are the molecular analyses that present different powers of Mycobacterium bovis discrimination. In this study, allelic diversity of MIRU and ETR locus and Hunter-Gaston discriminatory index (HGI) were calculated for Spoligotyping, 10 MIRU and 3 ETR of 116 isolates of M. bovis from Brazilian bovines. The use of those three molecular techniques was compared in space analyses for verification of groupings of focuses of the disease. Besides, it was verified if the capacity to cluster of focuses increases in the measure in that the discriminatory power of the molecular analyses is increased. The analysis of the allelic diversity indicated that MIRU 16, 26, 27 and ETR A, B, C presented larger diversity among the rehearsed. The HGI for each individual technique was: Spoligotyping = 0.738381; ETR = 0.825337 and MIRU = 0.829835. The associations of these methods increased the discriminatory power: Spoligotyping + MIRU = 0.930585; Spoligotyping + ETR = 0.931034; MIRU + ETR = 0.953373. The greater discriminatory power was verified when the three techniques were associated (HGI = 0,98051). Considering the analyses performed, the initial method for differentiating M. bovis from the other species of the M. tuberculosis complex should be Spoligotyping. The association of MIRU and ETR with Spoligotyping resulted in HGI almost identical, after Spoligotyping, the ETR technique showed to be the best choice, due the shorter time to process and economic benefits when compared to MIRU. Finally, MIRU is the last method to be performed. Thus, the choice among the techniques depends on the discriminatory power necessary for the task. Although the capacity to detect clusters of focuses has not been increased in the measure in that it increased the discriminatory power of the molecular analyses, the premise continues valid.

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