Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2018-07-17T22:01:31Z No. of bitstreams: 1 Tatiane Garcia Stancker.pdf: 1297386 bytes, checksum: b71324f95aa95befc8016ee8adc416fd (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-17T22:01:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tatiane Garcia Stancker.pdf: 1297386 bytes, checksum: b71324f95aa95befc8016ee8adc416fd (MD5) Previous issue date: 2017-10-30 / Osteoarthritis (OA) is a chronic degenerative process characterized by progressive deterioration of the cartilagereaching subchondral bone. Current interventions have little or no effect on the repair of articular cartilage. Therefore, the therapy throughmesenchymal stem cells (MSC’s) has been a target of interest due to its multilineage potential, becoming an important tool in the attempt of tissue repair. The photobiomodulation (PBMT) has been shown to be favorable in the proliferation of various cell types, including MSC’s. The aim of this study is to determine whether PBMT can increase the retention of adipocyte-derived stem cells (ADSC's) injected into the knee of the rat submitted to the experimental model of osteoarthritis and to analyze the chondroprotective effects of these therapies. ADSC's were collected from 3 male Fischer-344 rats and validated by flow cytometry. The sample was composed of 50 Fischer-344 rats and distributed into five groups: Control group (healthy animals), OA group (animals with OA), OA PBMT group (OA animals treated with PBMT therapy), OA ADSCs group (OA treated with ADSC's injection), and OA ADSC's PBMT group (animals with OA treated with ADSC's injection and PBMT). OA was induced by intra-articular injection of 4% papain solution. OA ADSC's and OA ADSC's PBMT animals received intra-articular injection of ADSC's (1x10⁶) diluted in 100μ of culture medium. For the groups that received PBMT (parameters used: wavelength of 808nm, power of 50mW, energy of 2J, density of energy 71.2J/cm² and spot size 0,028cm²) the applications were performed in 4 points of the articular line of the knee on consecutive days. The euthanasia was performed on the 3rd and 7th days after the treatments,which the articular cartilage was extracted for the quantification of the gene expression by RT/ PCR of SRY, IL-1β, IL-6, TNF-α, IL- MMP-1, MMP's 1 and 2, TIMP's 1 and 2 and collagen type II.For the statistical analysis, One way ANOVA with Tukey's post-hoc test was used andall data are expressed as mean±standard deviation with P<0,05. The results showed that the PBMT and ADSC’s therapies decreased the expression of pro-inflammatory cytokines (IL-1β, IL-6 and TNF-α) and MMP’s 1 and 2 when compared to the OA group. In addition, they increased the gene expression of TIMP's 1 and 2, IL-10 and Collagen type II. And the effects are more effective when therapies are associated. PBMT stimulated the retention of these cells in the intra-articular space. We conclude that the intra-articular ADSC’s injection associated with PBMT has chondroprotective action, modulating the inflammatory process and decreasing the cytokines and MMP's. / A osteoartrite (OA) é um processo degenerativo crônico caracterizado pela degradação progressiva da cartilagem chegando a atingir o osso subcondral. As intervenções atuais para a OAexercem pouco ou quase nenhum efeito sobre a reparação da cartilagem articular.Sendo assim, a terapia através de células-tronco mesenquimais (CTM’s) têm sido alvo de interesse devido a seu potencial de multilinhagem, tornando-se uma importante ferramenta na tentativa de reparação tecidual. A fotobiomodulação (PBMT) tem demonstrado favorecer a proliferação de vários tipos celulares, inclusive as CTM’s.O objetivo deste estudo é determinar se a PBMT pode aumentar a retenção de células-tronco derivadas de adipócitos (ADSC’s) injetadas em joelho de ratos submetidos à modelo experimental de osteoartrite e analisar os efeitos condroprotetores destas terapias. As ADSC’s foram coletadas de 3 ratos Fischer-344 machos e validadas através da citometria de fluxo. A amostra foi composta de 50 ratas Fischer-344 e distribuídas em cinco grupos: grupo Controle (animais saudáveis), grupo OA (animais comOA), grupo OA PBMT (animais com OA tratados com terapia porPBMT), grupo OA ADSC’s (animais com OA tratados com injeção de ADSC’s), e grupo OA ADSC’s PBMT (animais com OA tratados com injeção de ADSC’s e PBMT). A OA foi induzida através da injeção intra-articular de solução de papaína a 4%. Os animais dos grupos OA ADSC’s e OA ADSC’s PBMT receberam injeção intra-articular de ADSC’s (1x10⁶)diluídas em 100μde meio de cultura. Para os grupos que receberam PBMT (parâmetros utilizados:comprimento de onda de 808nm; potência de 50mW; energia de 2J; densidade de energia 71,2J/cm² e área do feixe 0,028cm²) as aplicações foram realizadas em 4 pontos da linha articular do joelho em dias consecutivos. A eutanásia foi realizada no 3° e 7° dias após os tratamentos onde foram extraídas as cartilagens articulares para a quantificação da expressão gênica através de RT/PCR deSRY, IL-1β, IL-6, TNF-α, IL-10, MMP’s 1 e 2, TIMP’s 1 e 2 e colágeno tipo II. Para a análise estatística foi utilizado ANOVA One way com post hoc test o teste de Tukey e os dados foram expressos através da média±desvio padrão com valor de P<0,05. Os resultados mostraram que as terapias através de PBMT e ADSC’s diminuíram a expressão de citocinas pró inflamatórias (IL-1β, IL-6 e TNF-α) e das MMP’s 1 e 2 quando comparados ao grupo OA. Além disso, aumentaram a expressão gênica das TIMP’s 1 e 2, IL-10 e do Colágeno tipo II. E quando as terapias são associadas os efeitos são mais eficazes. A PBMT também mostrou estimular a retenção destas células no espaço intra-articular. Concluímos que a injeção intra-articular de ADSC’s associada a PBMT tem ação condroprotetora, modulando o processo inflamatório, diminuindo as citocinas e MMP’s.