Orientadores: Altair Antoninha Del Bel Cury, Wander José da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-16T00:32:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_AnaPaulaCoelho_M.pdf: 9359911 bytes, checksum: ce3ea88b4fe614a7aecf6b9d7b4454ed (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Os reembasadores para base de prótese, após a exposição à cavidade bucal, apresentam alterações de superfície facilitando a adesão e a colonização por micro-organismos. Para a limpeza de superfície desses materiais são indicados os limpadores químicos para evitar os danos mecânicos que podem ser provocados pelas cerdas das escovas dentais. Assim, o objetivo nesta pesquisa foi avaliar a eficácia de limpadores químicos na remoção de biofilme de Candida spp. desenvolvido sobre a superfície de um reembasador classificado como permanente à base de poli-metilmetacrilato e na prevenção da re-colonização dessa superfície, especialmente a Candida spp., comumente associada ao desenvolvimento da candidíase. Espécimes (10 mm diâmetro X 3 mm altura) de resina acrílica reembasada com um reembasador mais representativo disponível comercialmente teve sua rugosidade de superfície mensurada antes (baseline) e biofilme de C. albicans ATCC 90028 ou C. glabrata ATCC 2001 foi desenvolvido sobre os mesmos. Após a formação dos biofilmes os espécimes foram aleatorizados e submetidos aos tratamentos (n=16): AD - Água destilada (Controle), 15 min; POL - Polident 3 minutos, 3 min; EFF - Efferdent, 15 min; HPS - Hipoclorito de sódio a 0,5%, 10 minutos. Metade destes espécimes (n=8) foi utilizada para determinação da eficácia dos limpadores, utilizando contagem de células viáveis, enquanto os espécimes remanescentes (n=8), após os tratamentos, foram novamente colocados em meio de cultura estéril e incubados por mais 48 h a fim de determinar o efeito dos limpadores na prevenção da recolonização. Após os tratamentos os espécimes tiveram a rugosidade de superfície determinada, considerada pós-tratamento. Alguns espécimes de cada uma das espécies de Candida tiveram a superfície analisada após os tratamentos, por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os dados foram submetidos à análise de variância e teste de Tukey HSD em nível de significância de 5%. A rugosidade de superfície foi significantemente maior após os tratamentos (P<0,05). Quantos aos tratamentos, o HPS mostrou-se efetivo tanto para a desinfecção quanto na recolonização de ambas as espécies de Candida, pois houve ausência total de crescimento. Na avaliação da desinfecção, imediatamente após os tratamentos, quando C. albicans foi considerada, não houve diferença significativa entre os peróxidos alcalinos (p>0,05) e ambos diminuíram o número de células fúngicas (p<0,05) comparado ao tratamento com AD. Entretanto, para C. glabrata, os tratamentos com ADD e peróxidos alcalinos não se diferenciaram entre si (p>0,05). Na análise dos resultados para a recolonização foi observada que houve inversão no comportamento, pois enquanto, para C. albicans, os tratamentos com AD e peróxidos alcalinos não diferiram entre si (p>0,05), para C. glabrata os tratamentos com peróxidos alcalinos apresentaram valores similares e menores (p>0,05),quando comparados com o tratamento com AD (p<0,05). Na comparação entre as espécies de Candida observou-se que C. glabrata apresentou os maiores níveis de células viáveis quando os dados foram avaliados na situação de imediatamente após os tratamentos com os peróxidos alcalinos e foi diferente de C albicans (p<0,05). Entretanto não houve diferença para a recolonização (p>0,05). Os resultados sugerem que os limpadores a base de peróxidos alcalinos não foram efetivos na remoção total dos micro-organismos e também não impediram a recolonização por Candida spp / Abstract: The denture liners exhibits surface changes in oral environment by constant loss of its constituent elements, which facilitate microorganisms adherence that leads to biofilm formation. Denture liners surface can be cleaned by brushing or using denture cleaners, which are recommended, in order to avoid mechanic injuries to denture liners by brushing it. Therefore, the aim of this study was to evaluate the long term efficacy of denture cleansers on Candida spp. biofilm recolonization on liner surface. Specimens of poly (methylmethacrilate) were lined according to manufacturer instructions (10 mm diameter X 3.0 mm thickness). Surface roughness was measured at baseline and after the treatments. Next, biofilms of C. albicans ATCC 90028 and C. glabrata ATCC 2001 were allowed to develop on liner surface for 48 h. Subsequently, the specimens were randomly assigned for the cleaning treatments (n=16): distilled water (DW - control), 15 min; Polident 3 minutes (POL) - 3min; Efferdent (EFF)-15 min; sodium hypochlorite (HYP) - 10 min. After the treatments, specimens (n=8) were sonicated for biofilm disruption and the viable cells were counted (cell/mL). To determine the long term effectiveness of the cleaning process, a set of cleaned specimens (n=8) were submitted to new biofilm growth conditions. After 48 h, biofilm were disrupted by sonication and cell number estimated. Scanning electron microscopy was performed to analyze the specimen topography after denture cleanser treatment. Data were analyzed by ANOVA and Tukey's HSD test was used as post-ANOVA employing a significance level fixed at 5%. The liner surface was rougher after the treatments (P<0.05). Results showed significant differences in cleanliness among the treatments (p<0.05), however for Candida species (p<0.05) no significant difference was observed in the recolonization condition (p>0.05). Alkaline denture cleansers showed similar cleaning performance and both showed lower cells counts compared with the control (p<0.05). Hypochlorite was the only effective treatment as no viable cells were detected even after the recolonization test. Within the limits of this study, it can be concluded that alkaline denture cleansers were not effective on biofilm removal, once denture liner surface by Candida spp biofilm recolonization was not prevented / Mestrado / Protese Dental / Mestre em Clínica Odontológica

Orientador: Altair Antoninha Del Bel Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T17:01:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_MariaAureaFeitosa_D.pdf: 2857977 bytes, checksum: 7b67b3ca7a58610f31bdf75ed5e2f13b (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Candida albicans está associada com a etiologia da estomatite protética, patologia que acomete entre 11 a 67% dos usuários de próteses removíveis. Entretanto, mais recentemente, a Candida glabrata tem se destacado por apresentar hidrofobicidade e adesão à superfície de resina acrílica superior à da Candida albicans. Em acréscimo, características de superfície dos materiais como rugosidade (Ra) e energia livre de superfície (ELS) podem contribuir para a adesão de microrganismos. Desse modo, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a rugosidade e energia livre de superfície dos rembasadores de próteses à base de poli - metilmetacrilato (Coe Soft e Kooliner) e silicone (Ufi Gel P) antes da contaminação com C. albicans ATCC 90028 e C. glabrata ATCC 2001, bem como verificar a eficácia dos limpadores químicos à base de peróxidos (Polident 3 minutes e Efferdent) e Hipoclorito de sódio a 0,5% na remoção desses microrganismos.Assim, para cada material rembasador foram confeccionadas 64 bases de resina acrílica Onda CryI (25 x 12 x 1mm), preparadas conforme as instruções do fabricante e, reembasadas constituindo dessa forma os corj'i>osde prova. Estes tiveram a rugosidade e energia de superfície determinadas. A seguir, foram separadas aleatoriamente em 2 grupos constituídos de 32 amostras cada, conforme o tipo de Candida. Em seguida, estes foram subdivididos em 4 grupos de 8 de acordo com os tratamentos: G1 - Água destilada (Controle); G2 - Polident ; 3 minutes; G3 - Efferdent; G4 - Hipoclorito de sódio 0,5%. Todas as amostras foram imersas em saliva humana durante'30 minutos para a formação da película adquirida. Posteriormente, foram submetidas ao teste de adesão durante período de 2 horas com uma das candidas, e então submetidos aos tratamentos nos tempos de: G1 - 15 minutos; G2 - 3 minutos; G3 -15 minutos e G4 -10 minutos. A contagem das células remanesce.ntes após o tratamento foi realizada em microscópio de luz (400x). Os dados foram submetidos à análise de variância e teste de Tukey (rugosidade de superfície e aderência fúngica) e ANOVA on Ranks para ELS, com nível de significância de 5%. O rembasador à base de silicone (Ufi Gel P) apresentou os menores valores de rugosidade comparados aos rembasadores à base de poli-imetil metacrilato (Coe 50ft e Kooliner), p<0,05. Entretanto, todos os materiais diferiram entre si para a energia de superfície (p<0,05), sendo que o Coe 50ft e o Ufi Gel P apresentaram os maiores e menores valores, respectivamente. Candida glabrata apresentou o maior número de células remanescentes aderidas, independente do rembasador utilizado (p<0,01). Dentre os limpadores, apenas o hipoclorito de sódio 0,5% diferiu do controle (p=0.001), apresentando um menor número de células remanescentes aderidas. Condui-se que o hipoclorito de sódio a 0,5% foi eficaz na remoção das células aderidas dos rembasadores, independente da espécie de Candida / Abstract: Candida albicans is associated with denture stomatitis etiology, pathology which affect about 11 to 67% of removable prostheses users. However, more recently, the Candida glabrata has been highlighted for presenting superior hydrophobicity and resin acrylic surface adherence when compared to the C. albicans. In addition, surface characteristics' materiais such roughness (Ra) and surface free energy (EL8) may contribute to the microorganisms' adhesion. Thus, the purpose of this study was to evaluate the surface roughness and surface free energy of methyl methacylate liners materiais (Coe 80ft and Kooliner) and silicone (Ufi Gel P) before contamination with C. albicans (ATCC 90028) and C. glabrata (ATCC2001), as well to verify the peroxide chemical denture cleansers efficacy (Polident 3 minutos and Efferdent) and 0.5% sodium hypochlorite - NaOCl, in the miaoorganisms' removing. Thus, 64 rectangular bases measuring 25 x 12 x 1 mm using microwave-polymerized acryli~ resins, following manufacturers' recommendations, to each material were made, then were relined and after surface roughness and surface free energy were measured. Next, the samples were randomly separated by lottery into two groups of 32 each, according to the fungus and these were subdivided into four groups of eight as the treatments: G1 - Distilled water (Control); G2 - Polident 3 min. utes; G3 - Efferdent; G4 - 0,5% NaOCI. Ali the samples rested in human whole saliva for 30 minutes to form an acquired pellicle. After, they were submitted to the adherence assay with one of the fungus for two hours, and then, treated, following these times: G1 - Distilled water (15 minutes); 2 - Polident 3 minutes (3 minutes); 3 - Efferdent (15 minutes); 4 - 0,5% sodium hypochlorite (10 minutes). The adhered cells were counted using a light microscope (Axiostar 2 Plus, Carl Zeiss, Jena, Germany) at 400 x magnification. The data were submitted to the analysis of variance and Tukey test (roughness and fungus adherence) and ANOVA on Ranks for EL8, with significance levei of 5%. The silicone-based liner (Ufi Gel P) showed lower values of roughness compared to the methyl methacrilate-based liners (Coe 80ft and Kooliner), (p<0.05). However, ali these materiais were different among them for surface free energy (p<0.05), where the Coe 80ft and Ufi Gel P showed the highest and lowest values, respectively. Candida glabrata showed the highest number of adhered cells for ali materiais (p<0.01). Among evaluated cleansers, only 0.5% sodium hypochlorite differed from the control (p=0.001), showing the lowest number of remaining cells adhered. The conclusion is that the 0.5% sodium hypochlorite was the only one chemical cleanser efficient in the adhered cells removing in ali denture liners independent of the Candida specie / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

Introducción. El estudio de hongos depende cada vez más de técnicas moleculares modernas como Polimerase Chain Reaction (PCR). Muchos cultivos microbianos son sometidos directamente a PCR, sin embargo, en levaduras, las técnicas para extracción de ADN son combinadas con procedimientos laboriosos y extensos para romper la pared celular. Recientemente, se ha descrito la técnica FTA ® (Flinders Technology Associated de Whatman), mediante la cual se colecta, transporta, almacena y purifica ADN en forma simultánea. El objetivo de este trabajo fue realizar un estudio comparativo de dos métodos de purificación de ADN genómico de levaduras del género Cándida, y su aplicabilidad para el análisis por la técnica de Random Amplified Polymorphic ADN mediante PCR (RAPD-PCR). Material y Método. Se comparó un método convencional basado en la ruptura de las paredes de levaduras con perlas de vidrio, combinado con extracción fenólica y el método de purificación con cartas FTA ® . Se purificó ADN genómico de 10 cepas de C. albicans, el cual fue posteriormente sometido a la técnica de RAPD-PCR, usando dos partidores diferentes. Para evaluar los resultados se analizó el conjunto de amplicones, el índice de error de amplificación (IEA), el número total de genotipos y la variabilidad genética se representó mediante un dendograma. Resultados. Para todas las cepas analizadas, con el método convencional y el partidor OPBA13 se obtuvo un único genotipo, un IEA = 0 y con el partidor CaBUO1 2 genotipos y un IEA = 0,13. En cambio, con el método FTA, usando el partidor OPBA13 se obtuvo 7 genotipos distintos, con un IEA = 0,55 y con el partidor CaBUO1 las cepas mostraron 12 genotipos y un IEA = 0,9. Conclusiones. Se observó que existen diferencias en el análisis de la variabilidad genética de levaduras del género Candida, determinada por la técnica de RAPDPCR, utilizando ADN genómico obtenido por el método convencional y por la técnica que usa las cartas FTA. Se requieren análisis adicionales para optimizar las condiciones de PCR con los filtros FTA. / Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista

The yeast Candida is an opportunistic human pathogen often associated with nosocomial infections. Understanding of the fungal virulence factor is limited. Adhesion and biofilm formation on prosthetic devices is likely to be one such factor for Candida infection. Biofilms form a structured community embedded by exopolymeric substances. Catheter associated Candidiasis is problematic since biofilm is hard to eradicate by antifungal therapy alone. / C. parapsilosis is a normal human commensal commonly isolated from human skin. C. parapsilosis is considered to be an emerging fungal pathogen and particularly associated with infections in neonates and catheterized intensive care unit (ICU) patients. Thus investigating the characteristics of biofilm formation helps to understand the biology of C. parapsilosis biofilm and assess the prognosis of the infection. / Also, we still only know a little about the mechanisms of biofilm formation in C. parapsilosis. Genetic studies about C. parapsilosis biofilm, especially in clinical samples are rare. Agglutinnin-like sequence (ALS) genes are commonly studied and well known in C. albicans but not in C. parapsilosis. Recently, some bioinformatics studies had revealed the presence of five ALS genes in C. parapsilosis. Some differentially expressed genes in C. parapsilosis biofilm were also identified in other studies. In this study, our aim is to investigate the characteristics of the clinical isolates of C. parapsilosis and the expressions of the selected genes in the biofilm. / In this study, the demographic characteristics of 61 patients with C. parapsilosis fungemia were studied. Among the patients, 60.6% aged higher than 65 years old. The risk factors of previous antibiotic treatment and venous catheterization were both towered in 72.13% of the patients. No resistant C. parapsilosis against amphotericin B and fluconazole was isolated in the studied samples. A static biofilm formation model was designed to investigate the biofilm formation of the samples using 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetra zolium hydroxide (XTT) assay. Quantitative real-time PCR was carried out to evaluate the temporal expression five ALS gene and one ERG11 gene in the biofilm of the clinical samples. The differential expression of the five ALS genes and ERG11 gene of the high biofilm forming group and low biofilm forming group of the clinical samples were compared. Our result shows that CPAG_05056 and CPAG_00369 were relatively more expressed in the high biofilm forming group and was upregulated at 24 h. CPAG_05314 was relatively more expressed in the high biofilm forming group and was more upregulated at 1.5h. The expression of CPAG_05054 was relatively higher in high biofilm forming group but showed similar expression level at 1.5 h and 24 h for both groups of samples. CPAG_00368 and ERG11 expression was relatively higher in low biofilm forming group and downregulated at 1.5 h and 24 h for both groups of samples. / In conclusion, C. parapsilosis bloodstream infection was prevalence in the elderly. Patients with prolonged hospital stay, being in the ICU, received antibiotic treatments and venous catheter are at a very high risk of infection. The ability to form biofilm in C. parapsilosis showed great variations among the clinical samples tested in our static biofilm formation model. The expression of CPAG_05056, and CPAG_00369 may be involved in the late stage of biofilm formation by C. parapsilosis. Expression of CPAG_05314 is believed to be involved in the early stage of biofilm formation. The expression of CPAG_05054 may be involved in both early and late stage of biofilm formation. CPAG_00368 and ERG11 were downregulated and seemed to show no relation to biofilm formation to both groups in our tested model. The result indicated that these genes may only be partly responsible for biofilm formation. The mechanisms of biofilm formation in C. parapsilosis is far more complicated. / 念珠菌是一種機會性人類病原體，並經常與院內感染有關。現時對於真菌致病因子的了解是有限的。而粘附在人工物質上的和形成生物膜的特性可能是一個念珠菌感染的因素。生物膜形成一個被外在聚合體包圍的結構化的群落。而導管相關性念珠菌引發血流感染是有其存在的問題，因為單靠抗真菌治療是很難根除生物膜。 / 近平滑念珠菌是一種正常的人類定植真菌並分佈於人體皮膚表面。近平滑念珠菌被認為是一個新興的病原真菌，特別是感染嬰兒和有插管的深切治療病房病人。因此，調查生物膜形成的特點能有助於理解近平滑念珠菌生物膜的生物學和有效預防感染。 / 此外，研究人員仍然對近平滑念珠菌生物膜形成的機制了解甚少。而關於近平滑念珠菌生物膜的基因研究，尤其是對其臨床標本研究的是很罕見的。類凝集素基因(ALS)基因的研究目前集中在於白色念珠菌，但不是在近平滑念珠菌。最近，在一些生物信息學研究中揭示了ALS基因亦存在於近平滑念珠菌。而其他在近平滑念珠菌生物膜中差異表達的基因在其他研究中也被確定。本研究的目的是調查近平滑念珠菌的臨床標本的特性和所選擇的基因在臨床標本所形成的生物膜中的表達。 / 在這項研究中，對61個近平滑念珠菌血液感染患者的人口學特徵進行了研究。而其中60.6％的病人年齡高於65歲。原有的抗生素治療，靜脈置管的危險因素則有72.13％的患者伴有。在所研究的臨床樣品中無發現對兩性黴素B和氟康唑有抗性的近平滑念珠菌。利用靜態生物膜形成模型和使用XTT法來檢測臨床標本的生物膜形成。進行了定量實時聚合酶鏈反應來評測五個ALS基因和ERG11基因在臨床樣品的生物膜形成中的時間性表達。五個ALS基因和ERG11基因在高生物膜形成組和低生物膜的形成組的臨床樣本中的差異表達進行了比較。我們的結果表明，CPAG_05056基因和CPAG_00369基因相對更表現在高生物膜成形組，並在二十四小時的時間點上調。CPAG_05314基因相對在高生物膜形成組表達並在一小時半的時間點上調。高生物膜形成組的CPAG_05054基因表達較高，但在一小時半和二十四小時都表現出相似的表達水平。CPAG_00368基因和ERG11基因表達相對在低生物膜形成組較高，而兩組樣品的表達都一小時半和二十四小時下調。 / 本次研究得出的結論是，近平滑念珠菌血流感染在中老年人的患病率較高。長期住院的患者，在深切治療病房，接受抗生素治療和有靜脈插管都會提高感染風險。在測試所用的靜態生物膜形成模型中，近平滑念珠菌臨床樣本之間的生物膜形表現出不同的變化。而的CPAG_05056基因和CPAG_00369基因的表達可能和近平滑念珠菌生物膜形成的後期有關。CPAG_05314基因表達被認為是涉及生物膜形成的早期階段。CPAG_05054基因表達可能涉及生物膜形成的早期和後級。在本次測試模型中，CPAG_00368和ERG11的基因表達在兩個組別下調，可能與生物膜形成沒有直接關係。以上證明所研究的基因可能只涉及生物膜形成過程的一部份而近平滑念珠菌的生物膜形成應更為複雜。 / Man, Wing Chung. / Thesis M.Phil. Chinese University of Hong Kong 2014. / Includes bibliographical references (leaves 91-102). / Abstracts also in Chinese. / Title from PDF title page (viewed on 24, October, 2016). / Detailed summary in vernacular field only. / Detailed summary in vernacular field only. / Detailed summary in vernacular field only. / Detailed summary in vernacular field only. / Detailed summary in vernacular field only.

Zugl.: Braunschweig, Techn. Univ., Diss., 2009

BANDEIRA, S. P. Combinação de técnicas fenotípicas para distinguir Candida albicans de Candida dubliniensis e uma investigação dos mecanismos de resistência a derivados azólicos em isolados de Candida albicans de origem animal. 2017. 77 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Carolinda Oliveira (ppgmm@ufc.br) on 2017-09-12T15:37:04Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_spbandeira.pdf: 2847339 bytes, checksum: ae9b71544be3f23ed530b1dc4802f6ad (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-09-12T15:50:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_spbandeira.pdf: 2847339 bytes, checksum: ae9b71544be3f23ed530b1dc4802f6ad (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-12T15:50:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_spbandeira.pdf: 2847339 bytes, checksum: ae9b71544be3f23ed530b1dc4802f6ad (MD5) Previous issue date: 2017-07-11 / Azole-resistant Candida albicans have been described in human clinical practice and in strains of veterinary origin. The objective of this study was to reevaluate laboratory identification of azole-resistantC. albicansfrom veterinary isolates, proposing a combination of phenotypic methods for the reliable identification of the species. In addition, this studyaimed to investigate the resistance mechanisms of the strains. Thirty-seven veterinary strains of azole-resistant C. albicansand three human strains of C. dubliniensis were submitted to phenotypic identification by germ tube test, micromorphological analysis oncornmeal agar, growth on chromogenic agar, growth on sunflower seed agar, opacification test onTween 80™ agar and PCR. For study of resistance mechanisms, C. albicansstrains were evaluated for efflux of6G rhodamine (n=11), determination of ergosterol content (n=6) and expression of CDR1, CDR2, MDR1 and ERG11 genes (n=30). All studied strains presented positive germ tube test and production of chlamydoconidia on cornmeal agar. Thirty five strains (35/37) showed green colonies on chromogenic agar. On sunflower seed agar, 36 strains (36/37) presented a smooth colony pattern, and on Tween 80™ agar, 34 (34/37) had opacification in less than 5 days. All strains tested showed specific product on PCR, which confirmed their identity as C. albicans.C. dubliniensis strains showed green colonies on ChromoAgar Candida™, a rough appearance on sunflower agar, did not form opacification zone on Tween80™agar, after up to 12 days, and did not present specific products in PCR.In resistance studies, azole resistant strains showed higher relative fluorescence unit difference values than sensitive isolates in efflux of6G rhodamine tests, thus demonstrating increased activity of efflux pumps. There was no significant difference in ergosterol content. It was verified that 73.3% (22/30) of the isolates presented overexpression of one or more genes, of which 40.9%, 18.2%, 59.1% and 54.5% strains overexpressedCDR1, CDR2, MDR1 and ERG11, respectively. No isolate overexpressed simultaneously the four genes. Finally, we conclude that the combination of phenotypic techniques leads to reliable differentiation of C. albicansandC. dubliniensis, reserving molecular techniques for more specific contexts. Resistance mechanisms to azole derivatives ofthe studied strains is multifactorial, including, at a minimum, the enhanced activity of efflux pump activity and the gene overexpression. / Candida albicans resistentes a derivados azólicos tem sido descritos na prática clínica humana e em cepas de origem veterinária. O presente estudo teve como objetivo reabordar a identificação laboratorial deisolados veterinários de C. albicans resistentes a derivados azólicos, propondo combinação de métodos fenotípicos para distinguir as espécies crípticas C. albicans e Candida dubliniensis.Ademais, almejou-se investigar os mecanismos de resistência das cepas estudadas. Para tanto, trinta e sete cepas veterinárias de C. albicans resistentes a derivados azólicos e três cepas humanas deC. dubliniensis foram submetidas à identificação fenotípica por prova do tubo germinativo, microcultivo em ágar cornmeal, semeadura em ágar cromogênico, semeadura em ágar semente de girassol, prova de opacificação em ágar Tween80™e reação em cadeia da polimerase (PCR). Para estudos de resistência, cepas de C. albicans foram estudadas com testes de efluxo de rodamina 6G (n=11), determinação do conteúdo de ergosterol (n=6) e testes de expressão dos genes CDR1, CDR2, MDR1 e ERG11(n=30). As cepas estudadas apresentaram prova do tubo germinativo positiva e produção de clamidoconídios em ágar cornmeal. Trinta e cinco cepas (35/37) apresentaram coloração verde em ágar cromogênico. Em ágar semente de girassol,36 cepas (36/37) apresentaram padrão de colônia lisa, e no ágarTween 80™, 34 (34/37) apresentaram opacificação em menos de 5 dias. Todas as cepas testadas apresentaram produto específico na PCR, sendo confirmadas como C. albicans.As cepas de C. dubliniensisa presentaram colônias de coloração verde no ChromoAgar Candida™, aspecto rugoso no ágar girassol, não opacificaram o meio em ágar Tween80™ em até 12 dias e não apresentaram produto específico na PCR. Nos estudos de resistência, as cepas resistentes aos azólicos apresentaram valores de diferença de UFR maiores que os isolados sensíveis nos estudos com rodamina 6G, demonstrando

Orientador: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Sílvia Maria Rodrigues Querido / Resumo: Este estudo teve como objetivo padronizar a identificação das amostras de espécies de Candida albicans e não-albicans por meio da técnica molecular da reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex Os isolados foram obtidos de um estudo prévio, no qual foram realizados os procedimentos de coleta, isolamento e identificação das espécies de Candida de indivíduos HIV positivos e controle. Foram realizadas provas fenotípicas como a produção de clamidoconídeos e formação de tubo germinativo e pelo sistema de identificação API 20 C AUX. Para a identificação molecular de cada espécie foram utilizadas cepas ATCC e controle positivo. Os isolados foram semeados em caldo Sabouraud dextrose e incubados à 37 ºC por 24 h. Foi realizada a extração, quantificação e purificação do DNA. A amplificação do DNA foi realizada por iniciadores específicos para a identificação de C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. krusei e C. guilliermondii. A presença e o comprimento dos fragmentos amplificados foram analisados em gel de agarose com brometo de etídio e visualizadas em luz ultra-violeta. Um total de 104 amostras previamente identificadas pelo API foram identificadas pela PCR multiplex e os resultados mostraram que apenas 14,4% estavam em discordância com o método fenotípico, dentre elas, dez amostras de C. albicans, duas de C. glabrata, uma de C. parapsilosis e duas de C. tropicalis. As amostras em discordância foram semeadas em meio cromogênico para Candida para confirmação da PCR multiplex. Os procedimentos de identificação fenotípicas geraram um custo aproximado de R$82,00 por amostra. PCR multiplex teve um gasto de aproximadamente R$8,00 por amostra e o tempo gasto na técnica molecular levou aproximadamente 8 h, já a identificação por métodos clássicos e bioquímicos podem exigir até 72 h. Concluimos que a PCR multiplex é um método preciso, fácil, econômico e rápido... / Abstract: Este estudo teve como objetivo padronizar a identificação das amostras de espécies de Candida albicans e não-albicans por meio da técnica molecular da reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex Os isolados foram obtidos de um estudo prévio, no qual foram realizados os procedimentos de coleta, isolamento e identificação das espécies de Candida de indivíduos HIV positivos e controle. Foram realizadas provas fenotípicas como a produção de clamidoconídeos e formação de tubo germinativo e pelo sistema de identificação API 20 C AUX. Para a identificação molecular de cada espécie foram utilizadas cepas ATCC e controle positivo. Os isolados foram semeados em caldo Sabouraud dextrose e incubados à 37 ºC por 24 h. Foi realizada a extração, quantificação e purificação do DNA. A amplificação do DNA foi realizada por iniciadores específicos para a identificação de C. albicans, C. parapsilosis, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis, C. krusei e C. guilliermondii. A presença e o comprimento dos fragmentos amplificados foram analisados em gel de agarose com brometo de etídio e visualizadas em luz ultra-violeta. Um total de 104 amostras previamente identificadas pelo API foram identificadas pela PCR multiplex e os resultados mostraram que apenas 14,4% estavam em discordância com o método fenotípico, dentre elas, dez amostras de C. albicans, duas de C. glabrata, uma de C. parapsilosis e duas de C. tropicalis. As amostras em discordância foram semeadas em meio cromogênico para Candida para confirmação da PCR multiplex. Os procedimentos de identificação fenotípicas geraram um custo aproximado de R$82,00 por amostra. PCR multiplex teve um gasto de aproximadamente R$8,00 por amostra e o tempo gasto na técnica molecular levou aproximadamente 8 h, já a identificação por métodos clássicos e bioquímicos podem exigir até 72 h. Concluimos que a PCR methods is an accurate, easy, economical and quick to.... / Mestre

Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Cristiane Duque / Banca: Janaina de Cássia Orlandi Sardi / Resumo: O gênero Candida pode ser encontrado em até 50% dos indivíduos saudáveis não causando danos aparentes, porém, sob condições predisponentes como doenças sistêmicas ou condições fisiológicas, pode tornar-se patogênico causando inflamação e destruição tecidual. Candida spp. na forma de biofilmes são importantes no desenvolvimento de infecções, pois estão associados a altos níveis de resistência a agentes antimicrobianos. Terapias alternativas com extratos naturais abrem novas perspectivas para prevenção e controle das doenças bucais na busca de efeitos terapêuticos favoráveis. O Terpinen-4-ol é um monoterpeno que atua na indução da perda da membrana e apresenta amplo espectro de atividade antimicrobiana e atividade anti-inflamatória. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito antifúngico, sinérgico/aditivo, inibição da adesão em células orais e alteração dos fatores de virulência do Terpinen-4-ol sobre Candida albicans e Candida tropicalis. Assim, foi realizada a identificação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM) do Terpinen-4-ol sobre cepas padrão de C. albicans (ATCC 90028) e C. tropicalis (ATCC4563), empregando-se o método de microdiluição em caldo. Biofilmes mono e dual-espécies foram preparados usando o modelo de placa de microtitulação estática e quantificados por unidades formadoras de colônias (UFC/mL). O efeito do Terpinen-4-ol na adesão de C.albicans e C. tropicalis foi realizado em co-cultura com células orais NOK Si como tam... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The genus Candida can be found in up to 50% of healthy individuals without causing apparent damage, however, under predisposing conditions such as systemic diseases or physiological conditions, can become pathogenic causing inflammation and tissue destruction. Candida spp. in the form of biofilms are important in the development of infections because they are associated with high levels of resistance to antimicrobial agents. Alternative therapies with natural extracts open new perspectives for prevention and control of oral diseases in search of favorable therapeutic effects. The Terpinen-4-ol is a monoterpene engaged in membrane loss of induction and presents broad spectrum of antimicrobial and anti-inflammatory activity. The aim of this study was to evaluate the antifungal effect, synergistic / additive inhibition of adhesion on oral cells and modification of virulence factors of Terpinen-4-ol of Candida albicans and Candida tropicalis. Thus, the identification of Minimum Inhibitory Concentration was performed (MIC) and Minimum Fungicidal Concentration (MFC) of Terpinen-4-ol on standard strains C. albicans (ATCC 90028) and C. tropicalis (ATCC4563), using the method microdilution broth. Biofilms mono and dual-species were prepared using the microtiter plate static model and quantitated by colony forming units (CFU / mL). The effect of Terpinen-4-ol in the adhesion on C. tropicalis and C. albicans was carried out in co-culture with oral cells NOK Si as well as virulence facto... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientadores: Altair Antoninha Del Bel Cury, Renata Cunha Matheus Rodrigues-Garcia / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-06T13:46:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira-Cenci_Tatiana_M.pdf: 1048789 bytes, checksum: e19520a3c91fdd0a8f929e43936e3dcc (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A candidose é a infecção oral fúngica mais comum diagnosticada em humanos, com prevalência de até 67% em usuários de prótese. Embora tenha sido inicialmente associada apenas a Candida albicans, outras espécies podem ser responsáveis por mais de 50% dos casos de infecção. Ainda, fatores como presença de saliva e bactérias parecem desempenhar importante papel na colonização por Candida. Assim, este estudo objetivou verificar a influência destes fatores na a:fesão de duas espécies de Candida (Candida albicans e Candida glabrata) sobre a superfície de resinas acrílicas e reembasadores. Corpos de prova (2,5x1 ,2xO,2 cm) confeccionados com duas resinas acrílicas (convencional e de microondas) e dois reembasadores (temporário e permanente) tiveram sua rugosidade (Ra) e energia livre de superfície (ELS) mensuradas, sendo aleatoriamente divididos de acordo com a exposição aos fatores: presença ou ausência de saliva, presença ou ausência de bactérias e espécie de Candida. Os espécimes foram levados a uma câmara de fluxo utilizando-se uma bomba peristáltica para perfusão de cultura de bactérias seguida por uma das espécies de Candida, ou apenas a cultura de uma das espécies de Candida. A contagem das células de Candida aderidas foi realizada em microscópio óptico (400x). Os dados foram submetidos à análise de variância para Ra e adesão, e ao teste de Kruskal-Wallis para ELS (a=0,05). O reembasador temporário apresentou a maior Ra, seguido do permanente, enquanto as resinas acrílicas exibiram as menores rugosidades (p<0,0001). Os valores de ELS foram similares para os materiais, mas diferentes do reembasador temporário (p<0,0001). A adesão de C. albicans e C. glabrata variou de 3,2 a 564,4 e 3,2 a 1400,4 cel/mm2 respectivamente, com diferenças estatísticas (p<0,05) em alguns grupos. O reembasador temporário mostrou maiores níveis de adesão. A colonização foi diminuída pela saliva, enquanto na presença de bactérias e saliva houve aumento da adesão (p<0,05). Estes resultados sugerem que a adesão inicial das duas espécies de Candida foi fortemente afetada pela rugosidade, presença de saliva e bactérias, mas não pela energia livre de superfície / Abstract: Candida-associated stomatitis is reported in up to 67% of a population wearing dentures. Recently, disease-associated Candida species have shifted from C. albicans to norralbicans species. Since factors such as presence of saliva and oral bacteria appear to play a major role in the initial phases of yeasts adhesion, this study aimed to determine whether these factors produced differences in acrylic resins and denture liners C. albicans and C. glabrata adherence. Samples (2.5x1.2xO.2 em) of two acrylic resins (heat and microwavecured) and two denture liners (soft and hard) were prepared and had their surface free energy (SFE) and surface roughness (Ra) measured and were randomly divided according to their exposure to the following factors: saliva coating or uncoating, presence or absence of bacteria and Candida species. Specimens were assayed in a flow chamber connected to a peristaltic pump for perfusion of bacteria culture plus one of the Candida species culture or only the Candida culture (control). Adhesion was determined by count on a light microscope (400 x). Statistical analyses was performed by ANOVA (Ra and Candida species adhesion) and Kruskal-Wallis (SFE) (a=.05). Soft liner presented the roughest surface, followed by the hard liner, whereas acrylic resins exhibited the smoothest surfaces (p<.0001). The SFE values of ali materiais were similar but different from the soft liner (p<.0001). C. albicans and C. glabrata adhesion on the materiais ranged fr0m 3.2 to 564.4, and 3.2 to 1400.4 cells mm-2 respectively, with statistically signific,ant differences (p<.05) in some cases. The soft liner exhibited the highest levels of adhesion. The overall colonization was significantly decreased by saliva (p<.Oq), while bacteria increased the adhesion in the presence of saliva. These results taken together suggest that initial adhesion of Candida species was strongly affected by the surface roughness, presence of saliva and bacteria, but not by surface free energy / Mestrado / Protese Dental / Mestre em Clínica Odontológica

Thesis (MSc)--Stellenbosch University, 2011. / ENGLISH ABSTRACT: The ascomycetous yeast, Candida albicans, has been almost exclusively studied in a clinical context, due to the medical risk and costs associated with the yeast. Most environmental research into the external survival of this opportunistic pathogen has been concerned with short-term, severe pollution challenges. However, a study of literature indicates that the habitat characteristics of the oxygenlimited zones in wetlands and riverbanks are comparable to those of the gastrointestinal source of sewage-borne C. albicans. Interestingly, these are the external, environmental regions to which sewage-borne C. albicans is often exposed. In addition, oxygen-limitation is the predominant parameter in stimulating conjugation of C. albicans. Based on these observations, this study aimed to assess polluted river bank and wetland environments in the Western Cape of South Africa as potential habitats to accommodate a niche for C. albicans, particularly comparing the presence of this yeast in oxygen-limited, plant debris-rich zones and aerobic, clear, flowing zones. The second objective was to employ in vitro microcosm studies to investigate the survival and growth of C. albicans in various microhabitats similar to those comprising the oxygen-limited zones of wetlands. These included the rhizosphere of wetland flora, various soil and mud types and decomposing plant debris. The final objective was to establish the presence of sufficient nutrient and energy sources within this environment for the growth of C. albicans. In particular, cellulosic substrates and mono- and disaccharides released by the natural degradation of wetland plant debris were investigated as potential energy sources for this human commensal in the wetland environment. These study objectives combined to demonstrate the potential of such an oxygen-limited, plant debris-rich environment as a niche for C. albicans external to its human host. Both semi-quantitative culturing techniques and quantitative Real-Time PCR demonstrated the improved survival of C. albicans in oxygen-limited, plant debris-rich zones in wetland and river bank environments, in comparison to aerobic, clear subsurface water zones in the same environments. These zones were compared in the Plankenburg and Diep Rivers, situated in the Western Cape of South Africa. Correlations between coliform concentrations and total yeast concentrations were demonstrated in each of the different river zones, with higher pollution levels characteristic of the dry season. Candida albicans numbers in flowing water (zone W), rock-filtered (zone R) and plant-filtered water (zone P) were compared during the progress of the rainy and dry seasons. No C. albicans was observed in clear, flowing water throughout the analysis. Early in the rainy season, both rock-filtered (aerobic, poor in plant debris) and plant-filtered (oxygen-limited, rich in plant debris) water demonstrated C. albicans numbers at approximately equivalent levels of 10²-10³ cells/100 mL. However, as the rainy season progressed and total yeast and coliform numbers in all zones of the rivers dropped to negligible levels, C. albicans could no longer be detected in aerobic, rock-filtered zones; but its numbers remained at constant levels in oxygen-limited, plant-filtered zones. This suggests that oxygen-limited wetland and river bank zones rich in plant matter, analogous to the human gastrointestinal tract, may provide an ideal habitat in which C. albicans could establish a niche external to its host. The survival of this yeast in the various microhabitats that comprise this anaerobic, reducing wetland environment was evaluated with in vitro microcosms. The rhizosphere of wetland plants had no influence on C. albicans growth and survival in comparison to bulk soil away from the plant, and wetland mud microbiota was demonstrated to be inhibitory to its survival. However, decaying plant debris was shown to increase the survival of the yeast in this inhibitory mud environment. Candida albicans was shown to compete well saprophytically in anaerobic plant debris microcosms. In addition, the tendency of C. albicans to associate with plant matter in an aquatic environment was demonstrated by inoculating the yeast in water containing Hydrilla, a submerged macrophyte found in South African aquatic environments. Plate and liquid analyses, as well as an ANKOM NDF analysis, indicated unequivocally that the C. albicans strains evaluated in this work were unable to utilise the complex carbohydrates of the wetland habitat, including cellulose and fibre. However, HPLC, along with GCMS, demonstrated the anaerobic assimilation by C. albicans of monosaccharides released by natural lignocellulose degradation of wetland plant matter. An analysis of total nitrogen by digestion in a nitrogen analyser, as well as evaluation of ammonium, nitrate and nitrite in a KCL extract, also showed that C. albicans assimilates nitrogenous compounds released by the decomposition of wetland plant matter. This decay process occurs constantly in wetland and river bank habitats. It may therefore provide energy and nutrients for C. albicans, particularly in the anaerobic zones where conjugation may possibly occur and a niche may be established, as indicated by the results obtained for the Plankenburg and Diep Rivers. / AFRIKAANSE OPSOMMING: Die askomisete gis Candida albicans is feitlik eksklusief in ‘n kliniese konteks bestudeer weens die mediese risiko en koste daaraan verbonde. Die meeste omgewingsnavorsing op die eksterne oorlewing van hierdie opportunistiese patogeen was toegespits op die uitdagings van ernstige korttermyn besoedeling. ‘n Literatuurstudie toon egter dat die habitat-eienskappe van die suurstof-beperkte sones in vleilande en rivieroewers vergelykbaar is met dié van die gastroïntestinale bron van C. albicans wat in riool gevind word. Interessant genoeg is dit juis hierdie eksterne omgewingsgebiede waaraan C. albicans vanuit riool dikwels blootgestel word. Hierby is suurstof-beperking die vernaamste parameter in die stimulering van konjugasie in C. albicans. Op grond van hierdie waarnemings poog dié studie om besoedelde vleilande en rivieroewers in die Wes-Kaap Provinsie van Suid-Afrika te evalueer as potensiële habitatte wat ‘n nis van C. albicans kan akkommodeer, en veral om die teenwoordigheid van hierdie gis in suurstof-beperkte sones ryk aan plantafval te vergelyk met aerobe, helder, vloeiende sones. Die tweede doelwit was om in vitro mikrokosmos studies te gebruik om die oorlewing en groei van C. albicans in verskillende mikrohabitatte soortgelyk aan suurstof-beperkte sones in vleilande te ondersoek. Dit sluit die risosfeer van vleilandflora in, asook verskillende grond- en moddertipes en ontbindende plantafval. Die laaste doelwit was om die teenwoordigheid van genoegsame voedings- en energiebronne in dié omgewing te bepaal vir die groei van C. albicans. In besonder is sellulose substrate, asook die mono- en di-sakkariede, wat deur die natuurlike afbraak van vleiland plantafval vrygestel word, as potensiële energiebronne van hierdie mens-kommensaal in die vleiland-omgewing ondersoek. Hierdie studiedoelwitte het gesamentlik die potensiaal van so ‘n suurstofbeperkte, plantafvalryke omgewing as ‘n nis vir C. albicans buite die menslike gasheer aangetoon. Beide semi-kwantitatiewe kweektegnieke en kwantitatiewe in-tyd PKR het die verbeterde oorlewing van C. albicans in suurstofbeperkte, plantafvalryke sones in vleiland en rivieroeweromgewings gedemonstreer, in teenstelling met aerobe, helder oppervlakwatersones in dieselfde omgewings. Hierdie sones in die Plankenburg- and Dieprivier in die Wes-Kaap Provinsie, Suid-Afrika, is met mekaar vergelyk. Korrelasies tussen coliform konsentrasies en totale giskonsentrasies is in elk van die verskillende sones in dié riviere gedemonstreer, met hoër vlakke van besoedeling kenmerkend aan die droër seisoen. Candida albicans getalle in vloeiende water (sone W), rots-gefiltreerde (sone R) en plant-gefiltreerde water (sone P) is deur die verloop van die reën- en droë seisoene met mekaar vergelyk. Geen C. albicans is deur die loop van die analises in helder, vloeiende water bespeur nie. Vroeg in die reënseisoen het beide rots-gefiltreerde (aerobe, min plantafval) en plant-gefiltreerde (suurstofbeperk, ryk in plantafval) water vergelykbare vlakke van C. albicans getoon, naamlik 10²-10³ selle/100 mL. Soos die reënseisoen egter verloop het en die totale gis- en coliforme getalle in al die sones van die riviere tot weglaatbare vlakke gedaal het, kon C. albicans egter nie meer in die aerobe, rots-gefiltreerde sones bespeur word nie, hoewel die getalle in suurstofbeperkte, plant-gefiltreerde sones konstant gebly het. Dit dui daarop dat suurstof-beperkte vleiland en rivieroewer sones ryk in plantmateriaal, analoog tot die menslike gastroïntestinale kanaal, die idealke habitat mag bied waarin C. albicans ‘n nis mag vind buite sy gasheer. Die oorlewing van hierdie gis in die verskillende mikrohabitatte wat uit hierdie anaerobe, reduserende vleilandomgewing bestaan, is met in vitro mikrokosmosse geëvalueer. Die risosfeer van vleilandplante het in vergelyking met die grond weg van die plant geen effek op die groei en oorlewing van C. albicans gehad nie, en vleiland modder-mikrobiota is gevind om die oorlewing daarvan te inhibeer. Verrottende plantafval het egter die oorlewingsvlakke van giste in hierdie inhiberende modderomgewing verbeter. Candida albicans kan egter saprofities goed kompeteer in anaerobe plantafval mikrokosmosse. Hierby is die geneigdheid van C. albicans om met plantmateriaal in waterige omgewings te assosieer gedemonstreer deur die gis te innokuleer in water wat Hydrilla, ‘n onderwater makrofiet wat in Suid-Afrikaanse akwatiese omgewings aangetref word, bevat. Plaat en vloeibare analises, asook ‘n ANKOM NDF data-analise, het onteenseglik getoon dat die C. albicans stamme wat in dié werk gebruik is, nie in staat was om die komplekse koolhidrate, insluitende sellulose en vesel, van die vleiland habitat te benut nie. HPLC, saam met GC-MS, toon egter C. albicans se anaerobe assimilasie van monosakkariede wat deur natuurlike lignosellulose afbraak van vleiland plantmateriaal vrygestel is. ’n Totale stikstof analise deur vertering in ’n stikstof analiseerder, en ’n evalueering van ammonium, nitraat en nitriet in ‘n KCl ekstrak, het ook getoon dat C. albicans stikstofverbindings assimileer wat deur die afbraak van vleiland plantmatriaal vrygestel word. Hierdie afbraakproses kom deurlopend in vleiland en rivieroewer habitatte voor en verskaf potensieel energie en voedingstowwe aan C. albicans, spesifiek in die anaerobe sones waar konjugasie moontlik kan plaasvind, en ‘n nis gevestig kan word, soos aangedui deur die Plankenburg- and Dieprivier.