Orientador: Rui Seabra Ferreira / Resumo: O lobo-guará (Chrysocyon brachyurus) é encontrado em grande parte do território da América do Sul, mas 90% de seus exemplares se distribui principalmente no cerrado brasileiro, sendo o maior canídeo sul americano, e como tal, demanda grandes áreas em suas atividades. Consequentemente, ele sofre severamente os efeitos da perda de habitat pelas ações antrópicas. Isto o faz estar na lista vermelha pela União Internacional de Conservação da Natureza, como espécie ameaçada de extinção da fauna brasileira. Tendo em vista a necessidade de desenvolver estratégias para a conservação do lobo-guará, o objetivo deste projeto foi caracterizar e padronizar o isolamento, o cultivo e a criopreservação de células tronco mesenquimais derivado da medula óssea do lobo-guará, além de utilizar o selante heterólogo de fibrina derivado de veneno de serpente como arcabouço tridimensional possibilitando procedimentos de terapia celular para a espécie. Também foi realizada uma revisão bibliográfica sobre a espécie, terapia celular e selantes de fibrina. Para tanto, realizou-se a coleta de medula óssea de animais provenientes de CETAS e zoológicos; o cultivo das células tronco mesenquimais (CTMs); a caracterização a partir do uso de marcadores de superfície (CDs) por citometria de fluxo; o potencial de diferenciação das CTMs em linhagens celulares osteogênica, adipogênica e condrogênica; a análise da viabilidade celular pré e após a criopreservação; e por fim a observação e avaliação do selante de fibri... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Submitted by ANDRÉA SEBELIM SESSO null (sessoandrea@hotmail.com) on 2017-09-05T18:54:27Z No. of bitstreams: 1 Mestrado-Andréa Sesso-homologação.pdf: 37681624 bytes, checksum: f7073a1b3ee92b81750c17a746355135 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-09-05T19:39:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sesso_as_me_bot.pdf: 37681624 bytes, checksum: f7073a1b3ee92b81750c17a746355135 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-05T19:39:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sesso_as_me_bot.pdf: 37681624 bytes, checksum: f7073a1b3ee92b81750c17a746355135 (MD5) Previous issue date: 2017-08-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O lobo-guará (Chrysocyon brachyurus) é encontrado em grande parte do território da América do Sul, mas 90% de seus exemplares se distribui principalmente no cerrado brasileiro, sendo o maior canídeo sul americano, e como tal, demanda grandes áreas em suas atividades. Consequentemente, ele sofre severamente os efeitos da perda de habitat pelas ações antrópicas. Isto o faz estar na lista vermelha pela União Internacional de Conservação da Natureza, como espécie ameaçada de extinção da fauna brasileira. Tendo em vista a necessidade de desenvolver estratégias para a conservação do lobo-guará, o objetivo deste projeto foi caracterizar e padronizar o isolamento, o cultivo e a criopreservação de células tronco mesenquimais derivado da medula óssea do lobo-guará, além de utilizar o selante heterólogo de fibrina derivado de veneno de serpente como arcabouço tridimensional possibilitando procedimentos de terapia celular para a espécie. Também foi realizada uma revisão bibliográfica sobre a espécie, terapia celular e selantes de fibrina. Para tanto, realizou-se a coleta de medula óssea de animais provenientes de CETAS e zoológicos; o cultivo das células tronco mesenquimais (CTMs); a caracterização a partir do uso de marcadores de superfície (CDs) por citometria de fluxo; o potencial de diferenciação das CTMs em linhagens celulares osteogênica, adipogênica e condrogênica; a análise da viabilidade celular pré e após a criopreservação; e por fim a observação e avaliação do selante de fibrina como arcabouço celular mostrando sua interação com as CTMs pela microscopia de varredura e viabilidade por microscopia confocal. A técnica empregada para coleta de medula óssea e posterior cultivo foi eficiente, sendo possível sua expansão até a sexta passagem. Os marcadores de superfície celular utilizados foram capazes de reconhecer as células possibilitando a sua caracterização por citometria de fluxo. As CTMs apresentaram potencial de diferenciação em linhagens osteogênica, adipogênica e condrogênica. O processo de criopreservação foi eficaz pois manteve alta a viabilidade celular após o seu descongelamento. A interação com o selante de fibrina foi adequada e manteve as células viáveis como verificado por microscopia confocal, demonstrando a estrutura tridimensional do selante por microscopia eletrônica de varredura. A terapia celular pode proporcionar para a espécie, um tratamento alternativo e eficaz na agilidade de processos regenerativos, minimizando o estresse em tratamentos convencionais de longa duração. O sucesso na criopreservação das CTMs torna possível a criação de um banco de células tronco que certamente ajudará na conservação da espécie. / Maned wolf (Chrysocyon brachyurus) is found in South America, but 90% of its specimens are distributed mainly in the Brazilian Cerrado, being the largest South American canid, and as such, it demands large areas. Consequently, maned wolf severely undergoes the effects of habitat loss by human actions. This makes it on the red list by the International Union for Conservation of Nature, as a threatened species of extinction of Brazilian fauna. Objective of this project was to characterize and standardize the isolation, cultivation and cryopreservation of mesenchymal stem cells derived from the bone marrow of maned wolf. In addition to using the fibrin sealant derived from snake venom as a three-dimensional scaffold enabling cellular therapy procedures for the species. A literature review on the species, cell therapy and fibrin sealants were also carried out. For that, the bone marrow was collected from CETAS and zoological animals; culture of mesenchymal stem cells (MSCs); characterization by surface markers (CDs) using flow cytometry; differentiation potential of MSCs into osteogenic, adipogenic and chondrogenic cell lines; analysis of cell viability before and after cryopreservation; and finally, observation and evaluation of the fibrin sealant as cellular scaffold showing its interaction with the MSCs by scanning microscopy and viability by confocal microscopy. The technique used for collection of bone marrow and subsequent culture was efficient, being possible to expand until the sixth passage. Cell surface markers used were able to recognize the cells allowing their characterization by flow cytometry. CTMs presented differentiation potential in osteogenic, adipogenic and chondrogenic linages. Cryopreservation process was effective because it maintained high cell viability after thawing. The interaction with the fibrin sealant was adequate and kept the cells viable as verified by confocal microscopy, demonstrating their three-dimensional structure of the sealant by scanning electron microscopy. Cell therapy may provide for the species an alternative and effective treatment in the agility of regenerative processes, minimizing stress in conventional long-term treatments. Success in cryopreservation of MSCs makes it possible to create a stem cell bank that will certainly help in its conservation.

Mesmo sendo uma das zoonoses mais antigas descritas pelo homem, a raiva ainda é um grande desafio em todo o mundo. O ciclo da enfermidade em espécies silvestres apresenta importância emergente no Brasil e a região Nordeste apresenta uma epidemiologia única em comparação ao restante do país, por ser endêmica para o vírus da raiva em silvestres terrestres. Nesta região, foram identificadas as duas variantes do vírus da raiva responsáveis pelo acometimento da doença em seres humanos, que são mantidas e transmitidas por animais silvestres terrestres. Registros de casos nas espécies descritas como reservatórios, em outras espécies silvestres, domésticas e em humanos ocorrem anualmente. Estas variantes virais foram identificadas primeiramente no Estado do Ceará, uma em saguis do tufo branco (Callithrix jacchus) e a outra em canídeos silvestres, estando restritas à região Nordeste do Brasil até o momento. O objetivo do presente estudo foi identificar geneticamente, utilizando DNA mitocondrial, as espécies de canídeos silvestres de ocorrência no Estado do Ceará, que atuam como reservatório e fonte de infecção do vírus da raiva, e a correlação entre esses reservatórios e o vírus. Para que fosse possível, utilizamos as técnicas de amplificação do gene Citocromo C Oxidase I (COI), bem como a amplificação da nucleoproteína do vírus da raiva pela Transcriptase Reversa e a Reação em Cadeia da Polimerase (RT - PCR). Todas as amostras que apresentaram banda representativa em gel de agarose, para ambos os casos, foram submetidas ao sequenciamento genético das regiões amplificadas. De um total de 101 amostras recebidas, 89 obtiveram sequências satisfatórias para a identificação da espécie de canídeo silvestre, sugerindo que a principal espécie de canídeo silvestre presente no Estado do Ceará é o Cerdocyon thous e, 50 amostras obtiveram banda representativa para o vírus da raiva. Dessas, 48 apresentaram sequência satisfatória para a caracterização do vírus. Os resultados obtidos indicam alta positividade para o vírus da raiva em canídeos silvestres nessa região do Brasil, e sugerem que C. thous é a principal espécie de canídeo silvestre atuando como reservatório e transmissor do vírus da raiva no Estado do Ceará. Esses dados fornecem informações valiosas sobre as espécies de canídeos envolvidas nos casos de raiva ocorridos no Estado do Ceará, possibilitando a adoção de estratégias efetivas de prevenção e controle da raiva, além de resultados inéditos em relação às espécies de canídeos silvestres de ocorrência no Estado e sua importância na epidemiologia da enfermidade. / Although it is one of the most ancient diseases related in human history, rabies still presents a great challenge throughout the world. Wild animals have emergent importance in Brazil and the Northeast region, an endemic region, presents a unique epidemiology compared to the rest of the country. In this region, two variants of the rabies virus responsible for the disease in humans, were identified which are maintained and transmitted by terrestrial wild animals. These variants were initially identified in the State of Ceara, one maintained by populations of marmosets (Callithrix jacchus) and other by wild canids, both being restricted to time to the Northeast. The aim of this study was to identify genetically, using the mitochondrial DNA, the species of wild canids in Ceara that act as reservoir and transmitters of the rabies virus. We used the Polymerase Chain Reaction by Reverse Transcriptase (RT - PCR) tecnique for amplification of Citocrhome C Oxidase I (COI) gene to species characterization and the viral nucleoprotein to detect the rabies virus. All the samples that presented representative band on agarose gel, in both cases, were submitted to the genetic sequencing. Of a total of 101 samples received, 89 obtained satisfactory sequences to identify the wild canid species, suggesting that the main wild canid species occurring in Ceara state is Cerdocyon thous. Out of 50 samples with representative band to rabies virus, 48 presented satisfactory sequences to the viral characterization. The results indicate high positivity for rabies virus in wild canids in this region of Brazil, and suggest that C. thous is the main terrestrial wild reservoir e transmitter of rabies virus in Ceara State. These data provide valuable information about canids species involved in rabies cases in Ceara state, implying in the adoption of effective strategies for prevention and control of rabies, and also unpublished results regarding the occurrence of species of wild canids in the State and its importance in the disease epidemiology.

A expansão desordenada do processo de urbanização e da malha rodoviária sem a construção de corredores ecológicos que permitam a transposição segura de várias espécies de animais silvestres contribui para os elevados índices de mortalidade observados na atualidade e constitui uma ameaça para o declínio populacional de espécies, como o cachorro-do-mato (Cerdocyon thous). Estima-se que o número de animais vitimados por atropelamentos chegue a aproximadamente 450 milhões de animais/ano nas diversas espécies, sendo: 400 milhões de pequenos vertebrados, 3 milhões de grandes vertebrados e aproximadamente 47 milhões de vertebrados de médio porte, a partir do estabelecimento de uma taxa média de 1,7 milhões de quilômetros à malha rodoviária do território brasileiro, levando-se em consideração a ampla diferença entre rodovias e estradas de asfalto e terra, pertencentes às esferas federal, estadual, e municipal. Uma estratégia para a conservação ex situ é o estudo da biologia da reprodução da espécie Cerdocyon thous é a criopreservação de seu patrimônio genético através da formação de um Banco de Germoplasma Animal, onde se contemplou o estudo do sistema reprodutor feminino de cinco espécimes por descrição morfológica e ultraestrutural, cultivo e criopreservação celular (fibroblastos). Foram utilizadas 7 (sete) fêmeas de Cerdocyon thous, (n=7), das quais 2 (duas) eram vítimas de atropelamento (Km 215 da Rodovia Anhanguera, Pirassununga - SP), tendo seus sistemas reprodutores dissecados e analisados macroscopicamente. Os respectivos animais foram encontrados em datas distintas em período que compreende os meses de janeiro a julho do ano de 2015 com sinais de evisceração e um destes apresentava avançado estágio de decomposição. Foi realizado o estudo biométrico dos animais, onde se constatou que as fêmeas encontradas eram adultas. Os achados foram compilados por meio de técnicas histológicas (Hematoxilina-Eosina, Tricrômico de Massom, Reativo de Schiff ou \"PAS\" e Alcian Blue) e microscopia eletrônica de varredura. A partir da observação macroscópica do sistema reprodutor feminino da espécie em questão, constatou-se que o formato dos ovários apresenta forma similar a um grão de feijão e tubas uterinas com comprimentos variáveis entre 5 a 8 cm para os espécimes analisados. Constatou-se também, a presença de um útero bicornuado com aproximadamente 3 cm de comprimento e cornos uterinos compridos e estreitos (9 a 11 cm de comprimento); Como já observado em estudos realizados em outras espécies (domésticas e silvestres), a cérvix dos espécimes de Cerdocyon thous analisados faz comunicação entre o útero e a vagina. A vagina apresenta musculatura alongada e circular e a vulva uma conformação anatômica densa com clitóris bastante pronunciado. Microscopicamente, foram observados que os ovários apresentavam folículos primordiais formados por um ovócito e por células foliculares achatadas, bem como a presença de folículos primários unilaminares, este último constituído por um ovócito envolvido por uma camada de células da granulosa. A análise por microscopia eletrônica de varredura evidenciou a superfície ovariana, com característica irregular. As tubas uterinas apresentaram-se com epitélio de revestimento constituído de células ciliadas e células secretoras não ciliadas. Através de análise por microscopia eletrônica de varredura, foi possível verificar que parte da parede da tuba uterina apresentou uma mucosa intensamente \"pregueada\". Microscopicamente, o útero apresentou uma parede relativamente espessa e, externamente uma camada serosa, constituída de mesotélio e tecido conjuntivo e, dependendo da porção do órgão (adventícia), constituída de tecido conjuntivo sem revestimento de mesotélio e microscopia eletrônica de varredura que evidenciou a superfície luminal, ilustrando a disposição dobrada do endométrio e a presença de fibras de músculo liso. A cérvix se apresentou com epitélio colunar simples, secretor de muco e por análise de microscopia eletrônica de varredura, foram observadas poucas fibras de músculo liso. Quanto à vagina, foi observado epitélio pavimentoso estratificado sobre um tecido conjuntivo denso, onde se constatou por microscopia eletrônica de varredura, a região de transição entre a cérvix e a vagina, onde se evidenciou a lâmina própria da mucosa vaginal, constituída por um tecido conjuntivo frouxo e, mais externamente, uma parede densa, constituída por uma camada muscular composta de fibras musculares lisas. A vulva e o clitóris foram observados recobertos por um epitélio pavimentoso estratificado com uma delgada camada de células queratinizadas na superfície. No que diz respeito à criação de uma linhagem celular (fibroblastos) para o enriquecimento de banco de germoplasma, os resultados demonstraram que as células de Cerdocyon thous apresentaram uma baixa capacidade clonogênica, especialmente quando comparadas ao cão doméstico. Por serem espécimes silvestres de histórico desconhecido (idade, hábitos alimentares), tais fatores poderiam implicar no tamanho dos telômeros das células (fibroblastos) e, consequentemente, ser um impedimento para uma satisfatória proliferação celular. Assim, o presente estudo teve caráter preservacionista, visando à conservação em longo prazo dos recursos genéticos desta espécie pertencente aos biomas brasileiros, sendo de grande relevância e os achados aqui contidos, um ponto de partida para a realização e continuidade de novas pesquisas com abordagem sobre a espécie em questão. / The disorderly expansion of the urbanization process and the road network without building ecological corridors that allow for the safe implementation of various species of wild animals contributes to the high mortality rates observed today and is a threat to the population decline of species such as the Creb-eating fox (Cerdocyon thous). It is estimated that the number of animals victims of road kill reach approximately 450 million animals / year in different species, of which: 400 million small vertebrates, 3 million of large vertebrates and approximately 47 million medium-sized vertebrates, from establishment of an average rate of 1.7 million kilometers of road network of Brazil, taking into account the wide difference between highways and asphalt roads and land belonging to the federal, state, and municipal. A strategy for ex situ conservation is the study of Cerdocyon thous species reproductive biology is cryopreservation of their genetic heritage through the formation of an Animal Germplasm Bank, where he contemplated the study of the female reproductive system of five specimens for morphological description and ultrastructural, cell culture and cryopreservation (fibroblasts). They used seven (7) female Cerdocyon thous (n = 7), of which two (2) were victims of running over (Km 215 of Anhanguera Highway, Pirassununga - SP) and their reproductive systems dissected and analyzed macroscopically. Their animals were found on different dates in a period comprising the months of January to July 2015 with evisceration signals and one of these had advanced stage of decomposition. biometric study of animals, which demonstrated that adult females were found, was performed. The findings were compiled by histological techniques (hematoxylin-eosin, Masson\'s Trichrome, Schiff Reactive or \"PAS\" and Alcian Blue) and scanning electron microscopy. From macroscopic observation of the female reproductive system of the species concerned, it was found that the shape of the ovaries features similar to a grain of beans and uterine tubes with lengths ranging from 5-8 cm for the analyzed specimens. It was also found the presence of a bicorn uterus approximately 3 cm and narrow uterine horns (9-11 cm); as noted in studies in other species (domestic and wild), the cervix of Cerdocyon thous specimens analyzed is communication between the uterus and vagina. The vagina has lengthened and circular muscle and the vulva a dense anatomical conformation quite pronounced clitoris. Microscopically, it was observed that the ovaries had primordial follicles formed by a flattened oocyte and follicular cells, as well as the presence of unilaminares primary follicles, the latter consisting of an oocyte surrounded by a layer of granulosa cells. Analysis by scanning electron microscopy revealed the ovarian surface with irregular feature. The oviducts presented with epithelium composed of ciliated and non-ciliated secretory cells. Through analysis by scanning electron microscopy, we found that part of the oviduct wall showed a mucosa intensely \"pleated\". Microscopically, the uterus showed a relatively thick wall and externally a serous layer consisting of mesothelium and connective tissue and, depending on the body portion (adventitious), composed of connective tissue without mesothelium coating and scanning electron microscopy which showed the surface luminal illustrating the folded disposition of the endometrium and the presence of smooth muscle fibers. The cervix is presented with simple columnar epithelium, mucus secreting and analytical scanning electron microscopy; a few smooth muscle fibers were observed. As the vagina was observed stratified squamous epithelium on a dense connective tissue, where it was found by scanning electron microscopy, the transition region between the cervix and the vagina, where it showed the lamina propria of the vaginal mucosa, consisting of a connective tissue loose and more externally a thick wall consisting of a muscular layer composed of smooth muscle fibers. The vulva and clitoris were observed covered by a stratified epithelium with a thin layer of keratinized cells on the surface. As regards the establishment of a cell line (fibroblasts) to the genebank enrichment, the results showed that cells had a lower Cerdocyon thous clonogenic capacity, especially when compared to the domestic dog. Being wild specimens of unknown history (age, diet), such factors could lead to the size of the telomeres of cells (fibroblasts) and thus be a hindrance to a satisfactory cell proliferation. Thus, the present study was preservationist character, aiming at long-term conservation of genetic resources of the species belonging to the Brazilian biomes, being of great importance and the findings contained herein, the starting point for the implementation and continuity of new research approach the species in question.

Este estudo teve como objetivo pesquisar a presença de Rickettsia sp. e Ehrlichia sp. em canídeos e felídeos selvagens de vida livre e cães domésticos da região do Parque Nacional das Emas (PNE), Goiás. Os anticorpos detectados através da Reação de Imunofluorescência Indireta utilizando 6 espécies de riquétsias. Amostras de soros de canídeos (140) e felídeos (38) selvagens de vida livre, incluindo lobos-guarás (76), cachorros-do-mato (57), gatos-palheiros (19), jaguatiricas (10), raposinhas-do-campo (7), onças-pintadas (4), onças-pardas (4), gato-mourisco (1), e cães domésticos (134) das propriedades rurais do entorno do PNE. Para a detecção de Ehrlichia sp. foi realizada a técnica de PCR, utilizando amostras de sangues totais de canídeos selvagens (44), sendo cachorros-do-mato (26), lobos-guarás (16) e raposinhas-o-campo (2) e cães domésticos (17). Amostras de lobos-guarás (29), cachorros-do-mato (12), onças-pardas (2), gatos-palheiros (2), raposinha-do-campo (1) e cachorro doméstico (1) apresentaram títulos para uma ou mais riquétsias testadas. Para Ehrlichia sp., 6 cães domésticos apresentaram resultados positivos, com Ehrlichia canis com semelhança de 100% com a cepa Uberlândia, pelo sequenciamento do gene dsb. Este é o primeiro relato de detecção de anticorpos, sugerindo provável exposição a R. amblyommii, R. rickettsii e R. parkeri em lobos-guarás, cachorros-do-mato e onças-pardas; R. parkeri em raposinhas-do-campo; R. amblyommii e R. parkeri em gatos-palheiros; R. amblyommii, R. rickettsii e R. rhipicephali em jaguatiricas. Não houve evidências que comprovassem ou mesmo sugerissem a transmissão desses patógenos entre animais silvestres e domésticos. / This study aimed to investigate the presence of Rickettsia sp. and Ehrlichia sp. in free-ranging wild canids and felids, and domestic dogs in the region of Emas National Park (ENP), Goiás. The antibodies were detected through Immunofluorescence Assay using 6 rickettsiae species. Serum samples of free-ranging wild canids (140) and felids (38), including maned wolves (76), crab-eating foxes (57), pampas cats (19), ocelots (10), hoary foxes (7), jaguars (4), pumas (4) and jaguarondi (1), and domestic dogs (134) from surrounding farms were tested. For detection of Ehrlichia sp., PCR was performed on whole blood samples of canids (44), among crab-eating foxes (26), maned wolves (16) and hoary foxes (2), and domestic dogs (17). Samples of maned wolves (29), crab-eating foxes (12), pumas (2), pampas cats (2), hoary fox (1) and domestic dog (1) presented one or more antibody titers for rickettsiae testing. For Ehrlichia spp. detection, 6 domestic dogs showed positive results for Ehrlichia canis with 100% similarity to the Uberlândia strain, by sequencing of dsb gene. This is the first report of antibodies detection, suggesting probable exposure to R. amblyommii, R. rickettsii, R. parkeri in maned wolves, crab-eating foxes and pumas; R. parkeri in hoary foxes; R. amblyommii and R. parkeri pampas cats; R. amblyommii, R. rickettsii, R. rhipicephali in ocelots. There was no evidence to conclusively prove or even suggest the transmission of pathogens between wild and domestic animals.

Este estudo teve como objetivo pesquisar a presença de Rickettsia sp. e Ehrlichia sp. em canídeos e felídeos selvagens de vida livre e cães domésticos da região do Parque Nacional das Emas (PNE), Goiás. Os anticorpos detectados através da Reação de Imunofluorescência Indireta utilizando 6 espécies de riquétsias. Amostras de soros de canídeos (140) e felídeos (38) selvagens de vida livre, incluindo lobos-guarás (76), cachorros-do-mato (57), gatos-palheiros (19), jaguatiricas (10), raposinhas-do-campo (7), onças-pintadas (4), onças-pardas (4), gato-mourisco (1), e cães domésticos (134) das propriedades rurais do entorno do PNE. Para a detecção de Ehrlichia sp. foi realizada a técnica de PCR, utilizando amostras de sangues totais de canídeos selvagens (44), sendo cachorros-do-mato (26), lobos-guarás (16) e raposinhas-o-campo (2) e cães domésticos (17). Amostras de lobos-guarás (29), cachorros-do-mato (12), onças-pardas (2), gatos-palheiros (2), raposinha-do-campo (1) e cachorro doméstico (1) apresentaram títulos para uma ou mais riquétsias testadas. Para Ehrlichia sp., 6 cães domésticos apresentaram resultados positivos, com Ehrlichia canis com semelhança de 100% com a cepa Uberlândia, pelo sequenciamento do gene dsb. Este é o primeiro relato de detecção de anticorpos, sugerindo provável exposição a R. amblyommii, R. rickettsii e R. parkeri em lobos-guarás, cachorros-do-mato e onças-pardas; R. parkeri em raposinhas-do-campo; R. amblyommii e R. parkeri em gatos-palheiros; R. amblyommii, R. rickettsii e R. rhipicephali em jaguatiricas. Não houve evidências que comprovassem ou mesmo sugerissem a transmissão desses patógenos entre animais silvestres e domésticos. / This study aimed to investigate the presence of Rickettsia sp. and Ehrlichia sp. in free-ranging wild canids and felids, and domestic dogs in the region of Emas National Park (ENP), Goiás. The antibodies were detected through Immunofluorescence Assay using 6 rickettsiae species. Serum samples of free-ranging wild canids (140) and felids (38), including maned wolves (76), crab-eating foxes (57), pampas cats (19), ocelots (10), hoary foxes (7), jaguars (4), pumas (4) and jaguarondi (1), and domestic dogs (134) from surrounding farms were tested. For detection of Ehrlichia sp., PCR was performed on whole blood samples of canids (44), among crab-eating foxes (26), maned wolves (16) and hoary foxes (2), and domestic dogs (17). Samples of maned wolves (29), crab-eating foxes (12), pumas (2), pampas cats (2), hoary fox (1) and domestic dog (1) presented one or more antibody titers for rickettsiae testing. For Ehrlichia spp. detection, 6 domestic dogs showed positive results for Ehrlichia canis with 100% similarity to the Uberlândia strain, by sequencing of dsb gene. This is the first report of antibodies detection, suggesting probable exposure to R. amblyommii, R. rickettsii, R. parkeri in maned wolves, crab-eating foxes and pumas; R. parkeri in hoary foxes; R. amblyommii and R. parkeri pampas cats; R. amblyommii, R. rickettsii, R. rhipicephali in ocelots. There was no evidence to conclusively prove or even suggest the transmission of pathogens between wild and domestic animals.

A expansão desordenada do processo de urbanização e da malha rodoviária sem a construção de corredores ecológicos que permitam a transposição segura de várias espécies de animais silvestres contribui para os elevados índices de mortalidade observados na atualidade e constitui uma ameaça para o declínio populacional de espécies, como o cachorro-do-mato (Cerdocyon thous). Estima-se que o número de animais vitimados por atropelamentos chegue a aproximadamente 450 milhões de animais/ano nas diversas espécies, sendo: 400 milhões de pequenos vertebrados, 3 milhões de grandes vertebrados e aproximadamente 47 milhões de vertebrados de médio porte, a partir do estabelecimento de uma taxa média de 1,7 milhões de quilômetros à malha rodoviária do território brasileiro, levando-se em consideração a ampla diferença entre rodovias e estradas de asfalto e terra, pertencentes às esferas federal, estadual, e municipal. Uma estratégia para a conservação ex situ é o estudo da biologia da reprodução da espécie Cerdocyon thous é a criopreservação de seu patrimônio genético através da formação de um Banco de Germoplasma Animal, onde se contemplou o estudo do sistema reprodutor feminino de cinco espécimes por descrição morfológica e ultraestrutural, cultivo e criopreservação celular (fibroblastos). Foram utilizadas 7 (sete) fêmeas de Cerdocyon thous, (n=7), das quais 2 (duas) eram vítimas de atropelamento (Km 215 da Rodovia Anhanguera, Pirassununga - SP), tendo seus sistemas reprodutores dissecados e analisados macroscopicamente. Os respectivos animais foram encontrados em datas distintas em período que compreende os meses de janeiro a julho do ano de 2015 com sinais de evisceração e um destes apresentava avançado estágio de decomposição. Foi realizado o estudo biométrico dos animais, onde se constatou que as fêmeas encontradas eram adultas. Os achados foram compilados por meio de técnicas histológicas (Hematoxilina-Eosina, Tricrômico de Massom, Reativo de Schiff ou \"PAS\" e Alcian Blue) e microscopia eletrônica de varredura. A partir da observação macroscópica do sistema reprodutor feminino da espécie em questão, constatou-se que o formato dos ovários apresenta forma similar a um grão de feijão e tubas uterinas com comprimentos variáveis entre 5 a 8 cm para os espécimes analisados. Constatou-se também, a presença de um útero bicornuado com aproximadamente 3 cm de comprimento e cornos uterinos compridos e estreitos (9 a 11 cm de comprimento); Como já observado em estudos realizados em outras espécies (domésticas e silvestres), a cérvix dos espécimes de Cerdocyon thous analisados faz comunicação entre o útero e a vagina. A vagina apresenta musculatura alongada e circular e a vulva uma conformação anatômica densa com clitóris bastante pronunciado. Microscopicamente, foram observados que os ovários apresentavam folículos primordiais formados por um ovócito e por células foliculares achatadas, bem como a presença de folículos primários unilaminares, este último constituído por um ovócito envolvido por uma camada de células da granulosa. A análise por microscopia eletrônica de varredura evidenciou a superfície ovariana, com característica irregular. As tubas uterinas apresentaram-se com epitélio de revestimento constituído de células ciliadas e células secretoras não ciliadas. Através de análise por microscopia eletrônica de varredura, foi possível verificar que parte da parede da tuba uterina apresentou uma mucosa intensamente \"pregueada\". Microscopicamente, o útero apresentou uma parede relativamente espessa e, externamente uma camada serosa, constituída de mesotélio e tecido conjuntivo e, dependendo da porção do órgão (adventícia), constituída de tecido conjuntivo sem revestimento de mesotélio e microscopia eletrônica de varredura que evidenciou a superfície luminal, ilustrando a disposição dobrada do endométrio e a presença de fibras de músculo liso. A cérvix se apresentou com epitélio colunar simples, secretor de muco e por análise de microscopia eletrônica de varredura, foram observadas poucas fibras de músculo liso. Quanto à vagina, foi observado epitélio pavimentoso estratificado sobre um tecido conjuntivo denso, onde se constatou por microscopia eletrônica de varredura, a região de transição entre a cérvix e a vagina, onde se evidenciou a lâmina própria da mucosa vaginal, constituída por um tecido conjuntivo frouxo e, mais externamente, uma parede densa, constituída por uma camada muscular composta de fibras musculares lisas. A vulva e o clitóris foram observados recobertos por um epitélio pavimentoso estratificado com uma delgada camada de células queratinizadas na superfície. No que diz respeito à criação de uma linhagem celular (fibroblastos) para o enriquecimento de banco de germoplasma, os resultados demonstraram que as células de Cerdocyon thous apresentaram uma baixa capacidade clonogênica, especialmente quando comparadas ao cão doméstico. Por serem espécimes silvestres de histórico desconhecido (idade, hábitos alimentares), tais fatores poderiam implicar no tamanho dos telômeros das células (fibroblastos) e, consequentemente, ser um impedimento para uma satisfatória proliferação celular. Assim, o presente estudo teve caráter preservacionista, visando à conservação em longo prazo dos recursos genéticos desta espécie pertencente aos biomas brasileiros, sendo de grande relevância e os achados aqui contidos, um ponto de partida para a realização e continuidade de novas pesquisas com abordagem sobre a espécie em questão. / The disorderly expansion of the urbanization process and the road network without building ecological corridors that allow for the safe implementation of various species of wild animals contributes to the high mortality rates observed today and is a threat to the population decline of species such as the Creb-eating fox (Cerdocyon thous). It is estimated that the number of animals victims of road kill reach approximately 450 million animals / year in different species, of which: 400 million small vertebrates, 3 million of large vertebrates and approximately 47 million medium-sized vertebrates, from establishment of an average rate of 1.7 million kilometers of road network of Brazil, taking into account the wide difference between highways and asphalt roads and land belonging to the federal, state, and municipal. A strategy for ex situ conservation is the study of Cerdocyon thous species reproductive biology is cryopreservation of their genetic heritage through the formation of an Animal Germplasm Bank, where he contemplated the study of the female reproductive system of five specimens for morphological description and ultrastructural, cell culture and cryopreservation (fibroblasts). They used seven (7) female Cerdocyon thous (n = 7), of which two (2) were victims of running over (Km 215 of Anhanguera Highway, Pirassununga - SP) and their reproductive systems dissected and analyzed macroscopically. Their animals were found on different dates in a period comprising the months of January to July 2015 with evisceration signals and one of these had advanced stage of decomposition. biometric study of animals, which demonstrated that adult females were found, was performed. The findings were compiled by histological techniques (hematoxylin-eosin, Masson\'s Trichrome, Schiff Reactive or \"PAS\" and Alcian Blue) and scanning electron microscopy. From macroscopic observation of the female reproductive system of the species concerned, it was found that the shape of the ovaries features similar to a grain of beans and uterine tubes with lengths ranging from 5-8 cm for the analyzed specimens. It was also found the presence of a bicorn uterus approximately 3 cm and narrow uterine horns (9-11 cm); as noted in studies in other species (domestic and wild), the cervix of Cerdocyon thous specimens analyzed is communication between the uterus and vagina. The vagina has lengthened and circular muscle and the vulva a dense anatomical conformation quite pronounced clitoris. Microscopically, it was observed that the ovaries had primordial follicles formed by a flattened oocyte and follicular cells, as well as the presence of unilaminares primary follicles, the latter consisting of an oocyte surrounded by a layer of granulosa cells. Analysis by scanning electron microscopy revealed the ovarian surface with irregular feature. The oviducts presented with epithelium composed of ciliated and non-ciliated secretory cells. Through analysis by scanning electron microscopy, we found that part of the oviduct wall showed a mucosa intensely \"pleated\". Microscopically, the uterus showed a relatively thick wall and externally a serous layer consisting of mesothelium and connective tissue and, depending on the body portion (adventitious), composed of connective tissue without mesothelium coating and scanning electron microscopy which showed the surface luminal illustrating the folded disposition of the endometrium and the presence of smooth muscle fibers. The cervix is presented with simple columnar epithelium, mucus secreting and analytical scanning electron microscopy; a few smooth muscle fibers were observed. As the vagina was observed stratified squamous epithelium on a dense connective tissue, where it was found by scanning electron microscopy, the transition region between the cervix and the vagina, where it showed the lamina propria of the vaginal mucosa, consisting of a connective tissue loose and more externally a thick wall consisting of a muscular layer composed of smooth muscle fibers. The vulva and clitoris were observed covered by a stratified epithelium with a thin layer of keratinized cells on the surface. As regards the establishment of a cell line (fibroblasts) to the genebank enrichment, the results showed that cells had a lower Cerdocyon thous clonogenic capacity, especially when compared to the domestic dog. Being wild specimens of unknown history (age, diet), such factors could lead to the size of the telomeres of cells (fibroblasts) and thus be a hindrance to a satisfactory cell proliferation. Thus, the present study was preservationist character, aiming at long-term conservation of genetic resources of the species belonging to the Brazilian biomes, being of great importance and the findings contained herein, the starting point for the implementation and continuity of new research approach the species in question.

Orientador: Carlos Roberto Teixeira / Resumo: A doença periodontal ocorre pelo acúmulo de placa bacteriana sobre os dentes e estruturas adjacentes e esta é uma das principais afecções que acomete o cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) em cativeiro. Na odontontologia veterinária, o probiótico é uma alternativa para animais selvagens de cativeiro, pois ele diminui o risco do tratamento cirúrgico, resistência a cepas bacterianas e efeitos colaterais da doença periodontal. O objetivo deste estudo foi avaliar a ação dos probióticos das espécies Lactobacillus reuterire, Lactobacillus salivarius Lactobacillus brevis e Bifidobacterium bifidium. Foram avaliados 132 dentes de 6 cachorros-do-mato (Cerdocyon thous), provenientes do Centro de Medicina e Pesquisa em Animais Selvagens (CEMPAS) da UNESP, com doença periodontal grau I e II. Os animais foram separados aleatoriamente após 60 dias de tratamento periodontal entre o grupo positivo e grupo negativo (sem aditivo de probiótico na comida). A medição da área bacteriana e do cálculo dentário ocorreu através da análise das imagens digitais que foram comparadas entre o grupo positivo e o grupo negativo após 60 dias do tratamento periodontal. Os probióticos dos gêneros Lactobacillus e Bifidobacterium, não apresentaram diferença estatisticamente significativa entre os grupos de estudo, mas foi possível observar forte tendência de aderência e atuação do probiótico no terceiro incisivo, canino e quarto pré-molar superior. Vale a pena ressaltar que esse estudo é o primeiro relato de caso de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Periodontal disease occurs by the accumulation of plaque on the teeth and adjacent structures and this is one of the main conditions that affect the captive crab-eating fox (Cerdocyon thous). In veterinary dentistry, the probiotic is an alternative for captive wildlife, asit decreases the risk of surgical treatment, resistance to bacterial strains and side effects of periodontal disease. The aim of this study was to evaluate the action of probiotics of Lactobacillus reuterire, Lactobacillus salivarius Lactobacillus brevis and Bifidobacterium bifidium species. A total of 132 teeth of six crab-eating fox (Cerdocyon thous) from the UNESP Center for Medicine and Wildlife Research (CEMPAS) with grade I and II periodontal disease were evaluated. The animals were randomly separated after 60 days of periodontal treatment between the positive and negative group (no probiotic additive in the food). Measurement of bacterial area and dental calculus occurred through the analysis of digital images that were compared between the positive and negative groups after 60 days of periodontal treatment. The probiotics of the genera Lactobacillus and Bifidobacterium showed no statistically significant difference between the study groups, but it was possible to observe a strong tendency of adherence and performance of the probiotic in the third incisor, canine and fourth premolar. It is noteworthy that this study is the first case report of this nature in which it uses probiotics to prevent periodo... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Studies focusing syntopic species help to understand how they partition resources and coexist. The objective of this work was to describe the social system, habitat use and diet of the hoary fox (Pseudalopex vetulus) and the crab-eating fox (Cerdocyon thous), in an area of cattle farms in Central Brazil. It is also reported a confrontation between the two species, observed during a study on the behavioral repertory of the hoary fox. Social system and habitat use were studied by direct observation of foxes in the field and diet, through scat analysis. Crab-eating foxes were found in pairs in 34 (59%) of 58 encounters and hoary foxes were solitary in 58 (84.0%) of 69 encounters, with no seasonal variation in the group size of both species. During one encounter of a crab-eating fox couple, the male vocalized to call the female that had remained behind. Hoary foxes were sighted in grazed pasture in a higher proportion (84%) than crab-eating foxes (67%) and they were never found in forest neither in swamp. Besides, both species were rarely seen together, and the only encounter registered ended in a conflict, with the crab-eating fox driving the hoary fox out. Twenty-seven taxa were identified in the diet of the two canids, with the crab-eating fox (n = 32 scats) consumed fruits, insects (mainly Orthoptera and Coleoptera) and vertebrates (most Cricetidae and Squamata) and the hoary fox (n = 23 scats) ate primarily termites (Isoptera). Results indicate that crab-eating fox couples keep more tight bonds than hoary fox couples. The coexistence of both species may be related to the detected differences in habitat use and diet. / Estudos enfocando espécies sintópicas ajudam a entender como elas partilham os recursos e coexistem. O objetivo deste trabalho foi descrever o sistema social, o uso do habitat e a dieta da raposa-do-campo (Pseudalopex vetulus) e do cachorro-do-mato (Cerdocyon thous), em uma área de fazendas de gado no Brasil Central. Também é relatado um confronto entre as duas espécies observado durante um estudo sobre o repertório comportamental da raposa-do-campo. O sistema social e o uso de habitat foram estudados a partir da observação direta dos animais no campo e a dieta, através da análise de fezes. Os cachorros-do-mato foram encontrados em duplas em 34 (59%) de 58 encontros e as raposas-do-campo estavam solitárias em 58 (84%) de 69 encontros, não havendo variação sazonal no tamanho de grupo das duas espécies. Durante um dos encontros de uma dupla de cachorro-do-mato, o macho vocalizou para chamar a fêmea que havia ficado para trás. As raposas-do-campo foram avistadas em pastagens em uma proporção maior (84%) que os cachorros-do-mato (67%) e nunca foram encontradas em florestas ou brejos. Além disso, as duas espécies raramente foram vistas juntas, sendo que o único encontro registrado terminou em conflito, com o cachorro-do-mato expulsando a raposa-do-campo. Vinte e sete táxons foram identificados na dieta dos dois canídeos. O cachorro-do-mato (n = 32 fezes) consumiu frutos, insetos (principalmente Orthoptera e Coleoptera) e vertebrados (a maioria Cricetidae e Squamata) e a raposa-do-campo (n = 23 fezes) se alimentou principalmente de cupins (Isoptera). Os resultados indicam que casais de cachorros-do-mato mantêm laços mais estreitos que casais de raposa-do-campo. A coexistência de ambas as espécies pode estar relacionada às diferenças detectadas no uso do habitat e na dieta. / Mestre em Ecologia e Conservação de Recursos Naturais