BARBOSA, André Luiz dos Reis. Modificação da resposta inflamatória sistêmica em ratos inoculados com carcinossarcoma 256 de Walker : papel da degranulação mastocitária. 2007. 135 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2007. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-05T16:34:11Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_alrbarbosa.pdf: 1315775 bytes, checksum: a521b830535e3317c03833bdd0c1667c (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-07T11:38:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_alrbarbosa.pdf: 1315775 bytes, checksum: a521b830535e3317c03833bdd0c1667c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-07T11:38:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_alrbarbosa.pdf: 1315775 bytes, checksum: a521b830535e3317c03833bdd0c1667c (MD5) Previous issue date: 2007 / Our objective was to evaluate the effect of the 256 Walker carcinossarcoma inoculation, as well as the time course of tumoral development, upon the acute inflammatory response in rats. Wistar rats, 180-220g, received intramuscular 106 tumor cells injections. At the end of 4, 7 or 10 days, wistar rats were separated into 4 groups, with 6 animals per group. The control group, were not inoculated with tumoral cells. Several parameters were evaluated: paw edema induced by carrageenan (Cg; 300μg/hind) or dextran (Dxt, 500μg/hind paw), myeloperoxidase activity (MPO), neutrophil migration to peritoneal cavity induced by carrageenan, cutaneous vascular permeability induced by bradykinin (2μg/site), serotonin (1μg/site), histamine (30μg/site), substance P (250ng/site), capsaicin (50μg/site) or 48/80 compound (1 μg/site) and mast cell degranulation induced by 48/80 compound. Paw edema was evaluated in the contra lateral hind paw of the tumor and measured at 0, 1, 2, 3 and 4h for Cg, and 0, 30’, 1, 2, 3 and 4h.for Dxt by plethysmometry. Neutrophil migration was induced by Cg injection in the contralateral hind paw or in the peritoneal cavity. After 4h, rats were sacrificed and the skin of the hind paw was harvested to measure neutrophil infiltration by MPO assay. Neutrophil migration induced by Cg was also evaluated in the peritoneal cavity, with the total e differential leucocytes counted. In order to measure cutaneous vascular permeability, immediately after intradermic stimulus injections (bradykinin, histamine, serotonin, substance P, capsaicin or 48/80 compound) Evans Blue dye was administrated (0,1mL/100g of per animal) by endovenous route. After 30 min rats were sacrificed and the skin was harvested to evaluate Evans Blue extravasations by spectrofotometry. Mast cells degranulation was evaluated in the in mesentery incubated with 48/80 compound and colored with toluidine blue. Our results shows that, in animals inoculated with the carcinossarcoma, there was a significant inhibition in the Cg and Dxt- induced paw edema, with maximal effect at the 7th and 10th days. There were no differences in MPO activity and neither in the peritoneal neutrophil infiltration induced by Cg in rats inoculated with the carcinossarcoma when compares to normal animals. After 4 and 7 days of the tumor inoculation, we observed a significant inhibition of the vascular permeability induced only by bradikinin, serotonin and 48/80 compound.. In the 10th day after the carcinossarcoma inoculation, there was a significant inhibition of the vascular permeability induced by all inflammatory stimulus tested, when we compared animals not inoculated. Mast cell degranulation was decreased in the 4th, 7th and 10th days after carcinossarcoma inoculation. These results suggested that the tumor microenvironment decreased the acute inflammatory response probably due to a inhibition of the mast cell degranulation. / No presente estudo avaliou-se os efeitos da inoculação do carcinosarcoma 256 de Walker, bem como o curso de seu desenvolvimento, sobre a reação inflamatória sistêmica. Ratos Wistar machos, pesando entre 180 a 220g, foram inoculados, por via intramuscular, com 106 células tumorais na coxa direita. Os experimentos foram realizados após o 4º, 7º e 10º dias (4D, 7D e 10D) da inoculação do carcinossarcoma 256 de Walker. O grupo controle não foi inoculado as células tumorais. Os ratos foram divididos em grupos experimentais com n = 6, nos quais foram avaliados os seguintes parâmetros: edema de pata por carragenina (Cg; 300μg/pata direita) ou dextrana (Dxt; 500μg/pata direita), atividade da enzima mieloperoxidase (MPO), migração de neutrófilos para cavidade peritoneal induzidas por carragenina (Cg; 300μg/pata direita), permeabilidade vascular cutânea induzidas por bradicinina (2μg/sítio), histamina (30μg/sítio), serotonina (1μg/sítio), substância P (250ng/sítio), capsaicina (50μg/sítio) ou composto 48/80 (1μg/sítio) e degranulação mastocitária induzida por composto 48/80. A intensidade do edema foi avaliada na pata contralateral ao tumor 1, 2, 3 e 4 hs (Cg) e 30’ ,1 2, 3, ,4 hs (Dxt) por pletismometria. A migração de neutrófilos foi induzida pela administração de Cg (300μg/pata) na pata contralateral ao tumor ou na cavidade peritoneal. Após 4 horas, os ratos foram sacrificados e as peles das patas foram retiradas para medir indiretamente a infiltração de neutrófilos, pela técnica da dosagem da atividade da MPO, e a migração de neutrófilos para cavidade peritoneal foi avaliada através da contagem total e diferencial de leucócitos. Em relação a permeabilidade vascular cutânea, imediatamente após as injeções intradérmicas dos estímulos (bradicinina, histamina, serotonina, substância P, capsaicina ou composto 48/80), foi administrado azul de Evans (0,1mL/100g do animal), na veia do plexo peniano. Após 30 min, os ratos foram sacrificados e a pele do dorso retirada, para avaliar o extravasamento do azul de Evans por espectrometria. A degranulação de mastócitos do mesentério foi avaliada após coloração com azul de toluidina, sendo contados os mastócitos degranulados num total de 100 células. Os animais com tumor apresentaram uma inibição significativa do edema de pata, com efeito máximo observado nos 7 º e 10 º dias, tanto com a Cg, quanto com Dxt, quando comparados com o controle sem tumor. Em nenhum dos dias estudados, foram observadas diferenças na atividade da MPO na pata e nem na avaliação da migração de neutrófilos para a cavidade péritoneal induzidas por Cg. Após 4 e 7 dias da inoculação do tumor, o animais apresentaram uma significativa diminuição na permeabilidade vascular cutânea induzida por bradicinina, serotonina, e composto 48/80. No entanto, o aumento da permeabilidade vascular induzida por histamina, substância P e capsaicina não foi alterada nesses dois dias. No 10 º dia, observou-se uma diminuição da permeabilidade vascular induzida por todos os estímulos quando comparado com o grupo sem tumor. A degranulação mastócitária foi inibida em animais com tumor nos 4º, 7º e 10º dias em comparação com o grupo controle. Tais dados sugerem que o microambiente do tumor de Walker diminui o curso da resposta inflamatória através da inibição da degranulação dos mastocitos.

OLIVEIRA, Cecília Carvalho de. Estudos toxicológicos pré-clínicos e antitumorais do extrato acetônico das folhas de Annona muricata L. 2012. 174 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-08-21T12:49:59Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_ccoliveira.pdf: 3134891 bytes, checksum: 3f41e7826048e965c13c6010512da2ff (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-08-21T13:17:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_ccoliveira.pdf: 3134891 bytes, checksum: 3f41e7826048e965c13c6010512da2ff (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-21T13:17:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_ccoliveira.pdf: 3134891 bytes, checksum: 3f41e7826048e965c13c6010512da2ff (MD5) Previous issue date: 2012 / Annona muricata, popularly known as soursop in Brazil, is a plant widely used in vernacular medicine as teas and infusions for the treatment of various diseases, including cancer. This study aimed to evaluate the toxicological, genotoxicological and antitumor profile of the acetone extract from the leaves of Annona muricata and test it using short-and long-term in vivo and in vitro assays. We initially assessed in vitro cytotoxicity against several human tumor cell lines. There was a toxic response to many of them, especially K-562, HCT-8, HCT-116 and SF-295 with average inhibitory concentration (IC50) of 0.1452 µg/mL, 0.2457 µg/mL, 0.2956 µg/ml and 0.2191 µg/mL respectively. Acute toxicity studies were performed in vivo and the average lethal dose (LD50) was 310.2 mg/kg. Chronic toxicity studies were performed using doses of 12.5 mg/kg, 25 mg/kg and 50 mg/kg of acetone extract. Results showed little change in animals’ physical, biochemical and hematological parameters, showing that the extract is well tolerated and not very toxic. Genotoxicity studies were performed in vivo. Animals were given three oral doses of the acetone extract (12.5 mg/kg, 25 mg/kg and 50 mg/kg). After 24 and 48 hours peripheral blood and bone marrow were collected. In the comet assay no high grade comet was detected and tested doses were statistically similar to the negative control. In the micronucleus test, none of the tested acetone extract doses induced the formation of micronuclei. They were statistically similar to the negative control, unlike what was observed in the positive control. Antitumor testing showed that the extract has tumor growth inhibitory activity, both in rats, in the Walker 256 carcinosarcoma model, and in mice, in the Sarcoma 180 model. All such results indicate that the acetone extract from the leaves of Annona muricata has little toxic action and significant activity inhibiting tumor growth in the models we tested. / Annona muricata, conhecida popularmente como gravioleira no Brasil, é uma planta usada amplamente na medicina popular na forma de chás e infusões para o tratamento de diversas doenças, incluindo o câncer. O trabalho teve como objetivo avaliar o perfil toxicológico, genotoxicológico e antitumoral do extrato acetônico das folhas de Annona muricata e foi realizado utilizando ensaios de curta e longa duração in vivo e in vitro. Inicialmente foi avaliada a citotoxicidade in vitro contra várias linhagens tumorais humanas, havendo resposta tóxica a muitas delas, principalmente K-562, HCT-8, HCT-116 e SF-295 com concentração inibitória média (CI50) de 0,1452 µg/mL, 0,2457 µg/mL, 0,2956 µg/mL e 0,2191 µg/mL respectivamente. Os estudos de toxicidade aguda foram realizados in vivo e a dose letal média (DL50) foi de 310,2 mg/Kg. Os estudos de toxicidade crônica foram realizados utilizando-se as doses 12,5 mg/Kg, 25 mg/Kg e 50 mg/Kg do extrato acetônico. Os resultados mostraram poucas alterações nos animais nos parâmetros fisiológicos, bioquímicos e hematológicos, mostrando que o extrato é bem tolerado e pouco tóxico. Os estudos de genotoxicidade foram realizados in vivo. Os animais foram tratados, por via oral, com três doses do extrato acetônico (12,5 mg/Kg, 25 mg/Kg e 50 mg/Kg). Após 24 h e 48 h, o sangue periférico e a medula óssea foram coletados. No ensaio do cometa não houve detecção de nenhum cometa de grau elevado, sendo as doses testadas estatisticamente semelhantes ao controle negativo. No ensaio do micronúcleo, todas as doses testadas do extrato acetônico não induziram a formação de micronúcleos, sendo semelhantes estatisticamente em relação ao controle negativo, ao contrário do observado no controle positivo. Os ensaios antitumorais mostraram que o extrato apresenta atividade inibidora do crescimento tumoral, tanto em ratos, no modelo do carcinossarcoma de Walker 256, como em camundongos, no modelo Sarcoma 180. Todos esses resultados indicam que o extrato acetônico das folhas de Annona muricata apresenta poucas ações tóxicas e significante atividade inibidora do crescimento tumoral nos modelos testados.

Submitted by Eliene Nascimento (elienegvn@hotmail.com) on 2011-06-16T14:36:11Z No. of bitstreams: 1 2005_tese_apnnalves.pdf: 5662138 bytes, checksum: 34bb534a2fa0d743f56c13c0a5460dd3 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2011-06-16T14:37:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_tese_apnnalves.pdf: 5662138 bytes, checksum: 34bb534a2fa0d743f56c13c0a5460dd3 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-16T14:37:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_tese_apnnalves.pdf: 5662138 bytes, checksum: 34bb534a2fa0d743f56c13c0a5460dd3 (MD5) Previous issue date: 2005 / The pathologic resorption of alveolar bone seen in a wide variety of malignant neoplasms is often severe and fatal, leading to early microfractures. Bone invasion occurs as a consequence of subcortical progression of tumor through dental alveoli. We investigated the effect of the Metotrexate (MTX) and the Bisphosphosnate Alendronate (ALD) on experimental model of Walker 256 carcinossarcoma developed in the oral cavity of rats. Walker 256 carcinossarcoma cell suspension containing 106 cell/mL was implanted in the alveoli of first and second molars. The animals were divided and treated with saline, MTX, ALD, and MTX plus ALD. The animals were observed during all the treatment to determine the body weigth and life survival. Later, the animals were sacrificed, the tumors were measured and their mandibles removed to radiographic and histologic analysis. In the control group, the radiographic image demonstrated radioluscencie with poorly defined borders, and the microscopic examination revealed tumor infiltration into the peripheral and central regions of bone. Areas of necrosis were commonly seen. In the treaties groups with ALD, associated or not with MTX, the radiographic analysis revealed tumor-induced osteolyse circumscribed and variety degrees of radiotransparence; histologically, bony trabeculae were preserved and producing osteoid among malignant cells. The metotrexate induced significant antitumoral activity and the treaties animals showed a survival increase. Thus, the combination of metotrexate with alendronate is more successful, than single agents, in the control of the growth of neplastics cells, and its stimulation of reactive new bone. Therefore, it constitutes a new treatment to malignant lesions of maxillares with osteolysis. / As reabsorções patológicas do osso alveolar vistas numa variedade de neoplasias malignas são severas e graves, levando precocemente a microfraturas. A invasão tumoral óssea pode acontecer em conseqüência da progressão subcortical do tumor através dos alvéolos dentários. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do Metotrexato (MTX) e do Bisfosfonato Alendronato (ALD) em modelo do Carcinossarcoma 256 de Walker na mandíbula de ratos. Uma suspensão de células tumorais do Carcinossarcoma de Walker 256, na concentração de 106 células/mL, foi implantada nos alvéolos de ratos, previamente abertos por exodontia. Os animais foram divididos em grupos e tratados com salina, MTX, ALD e associação do MTX com ALD. Foram observados durante todo o tratamento a sobrevivência e o peso corpóreo dos animais. Após o sacrifício, os tumores foram medidos e as mandíbulas removidas para exames radiográfico e histológico. No exame radiográfico do grupo controle foi verificado área lítica, sem evidência de reparo, na região dos alvéolos, e na microscopia, infiltração óssea periférica e central, de pequenas células tumorais com diversas áreas de necrose. Nos grupos tratados com ALD, associado ou não ao MTX, a análise radiográfica mostrou redução da osteólise tumor-induzida com graus variados de radiotransparência na estrutura óssea; enquanto que, na análise histopatológica, trechos de tecido ósseo preservado, com formação de osteóide em meio a células tumorais foram observados. O MTX apresentou significativa atividade anti-tumoral e os animais tratados com este quimioterápico apresentaram aumento de sobrevida. A associação do tratamento com MTX e ALD mostrou-se eficaz no controle do crescimento e proliferação das células neoplásicas, como também na indução de neoformação óssea. Portanto, constitui-se uma alternativa de tratamento das neoplasias malignas dos maxilares com invasão e comprometimento ósseo.

ALVES, Ana Paula Negreiros Nunes. Efeito do metotrexato e do bisfosfonato alendronato em modelo do carcinossarcoma 256 de Walker na mandíbula de ratos. 2005. 102 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-05-24T12:49:00Z No. of bitstreams: 1 2005_tese_apnnalves.pdf: 5662138 bytes, checksum: 34bb534a2fa0d743f56c13c0a5460dd3 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-05-30T14:17:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_tese_apnnalves.pdf: 5662138 bytes, checksum: 34bb534a2fa0d743f56c13c0a5460dd3 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-30T14:17:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_tese_apnnalves.pdf: 5662138 bytes, checksum: 34bb534a2fa0d743f56c13c0a5460dd3 (MD5) Previous issue date: 2005 / The pathologic resorption of alveolar bone seen in a wide variety of malignant neoplasms is often severe and fatal, leading to early microfractures. Bone invasion occurs as a consequence of subcortical progression of tumor through dental alveoli. We investigated the effect of the Metotrexate (MTX) and the Bisphosphosnate Alendronate (ALD) on experimental model of Walker 256 carcinossarcoma developed in the oral cavity of rats. Walker 256 carcinossarcoma cell suspension containing 106 cell/mL was implanted in the alveoli of first and second molars. The animals were divided and treated with saline, MTX, ALD, and MTX plus ALD. The animals were observed during all the treatment to determine the body weigth and life survival. Later, the animals were sacrificed, the tumors were measured and their mandibles removed to radiographic and histologic analysis. In the control group, the radiographic image demonstrated radioluscencie with poorly defined borders, and the microscopic examination revealed tumor infiltration into the peripheral and central regions of bone. Areas of necrosis were commonly seen. In the treaties groups with ALD, associated or not with MTX, the radiographic analysis revealed tumor-induced osteolyse circumscribed and variety degrees of radiotransparence; histologically, bony trabeculae were preserved and producing osteoid among malignant cells. The metotrexate induced significant antitumoral activity and the treaties animals showed a survival increase. Thus, the combination of metotrexate with alendronate is more successful, than single agents, in the control of the growth of neplastics cells, and its stimulation of reactive new bone. Therefore, it constitutes a new treatment to malignant lesions of maxillares with osteolysis. / As reabsorções patológicas do osso alveolar vistas numa variedade de neoplasias malignas são severas e graves, levando precocemente a microfraturas. A invasão tumoral óssea pode acontecer em conseqüência da progressão subcortical do tumor através dos alvéolos dentários. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do Metotrexato (MTX) e do Bisfosfonato Alendronato (ALD) em modelo do Carcinossarcoma 256 de Walker na mandíbula de ratos. Uma suspensão de células tumorais do Carcinossarcoma de Walker 256, na concentração de 106 células/mL, foi implantada nos alvéolos de ratos, previamente abertos por exodontia. Os animais foram divididos em grupos e tratados com salina, MTX, ALD e associação do MTX com ALD. Foram observados durante todo o tratamento a sobrevivência e o peso corpóreo dos animais. Após o sacrifício, os tumores foram medidos e as mandíbulas removidas para exames radiográfico e histológico. No exame radiográfico do grupo controle foi verificado área lítica, sem evidência de reparo, na região dos alvéolos, e na microscopia, infiltração óssea periférica e central, de pequenas células tumorais com diversas áreas de necrose. Nos grupos tratados com ALD, associado ou não ao MTX, a análise radiográfica mostrou redução da osteólise tumor-induzida com graus variados de radiotransparência na estrutura óssea; enquanto que, na análise histopatológica, trechos de tecido ósseo preservado, com formação de osteóide em meio a células tumorais foram observados. O MTX apresentou significativa atividade anti-tumoral e os animais tratados com este quimioterápico apresentaram aumento de sobrevida. A associação do tratamento com MTX e ALD mostrou-se eficaz no controle do crescimento e proliferação das células neoplásicas, como também na indução de neoformação óssea. Portanto, constitui-se uma alternativa de tratamento das neoplasias malignas dos maxilares com invasão e comprometimento ósseo.

Orientador : Profª. Drª. Alexandra Acco / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 26/09/2016 / Inclui referências : f. 60-67 / Resumo: Este estudo teve como objetivo avaliar a atividade antitumoral in vivo da fração solúvel de polissacarídeos extraídos de vinho tinto (SFP) contra o carcinossarcoma Walker-256. Para isso foram utilizados ratos Wistar machos, que receberam 30 ou 60 mg/kg de SFP ou veículo por via oral durante 14 dias, ou metotrexato (MTX, controle positivo) na dose de 5 mg/kg, via intraperitoneal, a cada 5 dias, após a inoculação subcutânea de 107 células tumorais no membro pélvico direito. Grupos de ratos sem tumor receberam as mesmas doses da SFP, para avaliar seus efeitos adversos. O desenvolvimento do tumor foi acompanhado e, posteriormente, foram realizados hemograma e bioquímica plasmática, avaliação no tecido tumoral de parâmetros inflamatórios e expressão gênica. A SFP nas doses de 30 e 60 mg/kg reduziu de modo significativo tanto o peso quanto o volume tumoral. O tratamento interferiu de modo direto nos parâmetros leucocitários e inflamatórios, sendo possível observar uma imunomodulação importante, com redução da contagem relativa de monócitos e neutrófilos no sangue, e redução da atividade tumoral de NAG e MPO, provenientes destas células, respectivamente, associada à diminuição dos níveis de NO tumoral. Contudo, a contagem relativa de linfócitos sanguíneos e a dosagem de TNF-? tumoral apresentaram-se aumentadas. A expressão de genes relacionados à via apoptótica (Bax, Bcl-2, caspase-3 e p53) e à angiogênese (Vegf) no tecido tumoral não apresentou diferenças pelo tratamento, enquanto a expressão de genes da via de necroptose, como Rip1 e Rip3, elevou-se nos animais tratados com a SFP. Não foram observados efeitos adversos durante o tratamento com SFP. Sendo assim, a SFP demonstrou atividade antitumoral contra o carcinossarcoma Walker-256, com atuação direta sobre o sistema imunológico, controlando o microambiente inflamatório do tumor e estimulando a produção de TNF-?, ativando assim a via de necroptose, que induz à morte celular. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the in vivo antitumor activity of the soluble fraction of polysaccharides (SFP) from red wine against the Walker-256 carcinosarcoma. After the subcutaneous inoculation of 107 tumor cells in the right hind limb of male Wistar rats, the animals daily received 30 or 60 mg/kg SFP or vehicle, by gavage, or 5 mg/kg methotrexate (MTX, positive control) intraperitoneally, every 3 days, during 14 days. Other group of rats, without tumor, received the same doses of SFP for evaluating its adverse effects. The tumor development was accompanied and further analysis of hematology, plasma biochemistry, and tumor inflammation, histology and gene expression was performed. SFP in both doses reduced significantly the tumor volume and weight. The treatment directly interfered in blood leucocytes and inflammatory parameters. Thus a possible SFP immunomodulation was observed, evidenced by reduction in relative count of blood monocytes and neutrophils, and reduction of tumor activity of NAG and MPO, enzymes prevenient of these cells, respectively, associated with a decreased tumor NO levels. However, the blood count of relative lymphocytes and the tumor TNF-á level were increased. The expression of genes related with apoptosis (Bax, Bcl-2, caspase-3 e p53) and angiogenesis (Vegf) in tumor tissue was not different among the groups. However, the expression of Rip1 and Rip3, both genes related with necroptosis, was increased by the SFP treatment. Thus, the SFP demonstrate antitumor activity against the Walker-256 carcinosarcoma and act directly in the immune system, controlling the inflammation and stimulating the TNF-á production in the tumor microenvironment, inducing necroptosis, which cause tumor cell death.

Os sarcomas uterinos são tumores mesodérmicos raros que compreendem cerca de 3% de todos os cânceres nesse órgão. Apresentam diversidade histológica, comportamento agressivo, disseminação precoce e altas taxas mortalidade. Recentemente, os carcinossarcomas (CS) foram reclassificados histologicamente como carcinomas. Neste trabalho, os CS foram incluídos na casuística tanto para fins de comparação de seu componente mesenquimal, como por ainda fazerem parte da maioria dos estudos sobre sarcomas de corpo uterino e também da última classificação da WHO (Word Health Organization). Devido à sua diversidade e raridade, não há consenso relacionado aos fatores de risco para pior prognóstico e tratamento adequados para esses tumores. Informações sobre seus perfis gênicos e proteicos poderiam contribuir na caracterização de marcadores moleculares que auxiliassem no diagnóstico e prognóstico desses tumores, bem como no entendimento de sua biologia e comportamento clínico. Assim, nos propusemos a avaliar a presença de alterações gênicas nesses tumores, utilizando um painel de 409 genes, oncogenes e supressores de tumor, frequentemente mutados em tumores sólidos. Para isso, foram selecionadas 66 amostras, das quais 14 foram sequenciadas, incluindo, 5 carcinossarcomas (CCS), 4 leiomiossarcomas (LMS), 4 sarcomas de estroma endometrial (SEE) e 1 adenossarcoma (ADS). As reações foram realizadas utilizando a plataforma Ion Proton System (ThermoFisher) de Sequenciamento de Nova Geração. Nas 14 amostras encontramos 27 LoF e 40 mutações missenses, numa média de 39 inserções e 52 deleções por amostra, totalizando 70 mutações. Dessas, 25 encontram-se no banco de dados COSMIC. Os genes mais comumente mutados em nossa amostragem foram: TP53 (50%), KMT2D (36%), ATM (29%), DICER1 (21%), PIK3CA (21%), TRRAP (21%). Nosso objetivo principal era encontrar mutações específicas para cada subtipo histológico, porém apenas os SEEs (PDE4DIP) e os CCS (ERBB4 e PIK3CA) tiveram mutações especificas. Em outra análise, observamos que todos os subtipos histológicos compartilham o gene KMT2D. Embora não tenha sido possível estabelecer um perfil mutacional para cada subtipo histológico avaliado, nossos resultados abrem perspectivas para uma nova linha de pesquisa nos sarcomas de corpo do útero e certamente contribuem para um melhor entendimento dessas neoplasias / Uterine sarcomas are rare mesodermal tumors that comprise about 3% of all cancers in this organ. They present histological diversity, aggressive behavior, early dissemination and high mortality rates. Recently, carcinosarcomas (CCS) were histological reclassified as carcinomas. Here, we have included them in our series for purposes of comparison of the mesenchymal component and also because these tumors still form part of both the majority of studies and the WHO\'s latest classification for uterine sarcomas (Word Health Organization). Because of their diversity and rarity, there is no consensus regarding the risk factors for poor prognosis and appropriate treatment for these tumors. Thus, information about their gene and protein profiles can help in the diagnosis and prognosis of these tumors, as well as in the understanding of their biology and clinical behavior. We performed the New Generation Sequencing of 14 samples of uterine sarcomas (5 CCS, 4 LMS, 4 SEE and 1 ADS, using the Ion Proton System platform (ThermoFisher).) Among the 14 samples, we found 27 LoF (loss of gene function) and 40 missense mutations, with a mean of 39 insertions and 52 deletions per sample, totaling 70 mutations, 25 described in the COSMIC database. The most commonly mutated genes in our sample were TP53 (50%), KMT2D (36%), ATM (29%), DICER1 (21%), PIK3CA (21%), TRRAP (21%).Our main objective was to find specific mutations for each histological subtype, but only SEEs (PDE4DIP) and CCS (ERBB4 and PIK3CA) had specific mutations. In another analysis, we observed that all the histological subtypes share the KMT2D gene, which will be studied in future analyzes. Others analyzes, using a custom panel, are necessary to understand these mutations and its biological implication in uterine carcinosarcoma and sarcomas

Os sarcomas uterinos são tumores mesodérmicos raros que compreendem cerca de 3% de todos os cânceres nesse órgão. Apresentam diversidade histológica, comportamento agressivo, disseminação precoce e altas taxas mortalidade. Recentemente, os carcinossarcomas (CS) foram reclassificados histologicamente como carcinomas. Neste trabalho, os CS foram incluídos na casuística tanto para fins de comparação de seu componente mesenquimal, como por ainda fazerem parte da maioria dos estudos sobre sarcomas de corpo uterino e também da última classificação da WHO (Word Health Organization). Devido à sua diversidade e raridade, não há consenso relacionado aos fatores de risco para pior prognóstico e tratamento adequados para esses tumores. Informações sobre seus perfis gênicos e proteicos poderiam contribuir na caracterização de marcadores moleculares que auxiliassem no diagnóstico e prognóstico desses tumores, bem como no entendimento de sua biologia e comportamento clínico. Assim, nos propusemos a avaliar a presença de alterações gênicas nesses tumores, utilizando um painel de 409 genes, oncogenes e supressores de tumor, frequentemente mutados em tumores sólidos. Para isso, foram selecionadas 66 amostras, das quais 14 foram sequenciadas, incluindo, 5 carcinossarcomas (CCS), 4 leiomiossarcomas (LMS), 4 sarcomas de estroma endometrial (SEE) e 1 adenossarcoma (ADS). As reações foram realizadas utilizando a plataforma Ion Proton System (ThermoFisher) de Sequenciamento de Nova Geração. Nas 14 amostras encontramos 27 LoF e 40 mutações missenses, numa média de 39 inserções e 52 deleções por amostra, totalizando 70 mutações. Dessas, 25 encontram-se no banco de dados COSMIC. Os genes mais comumente mutados em nossa amostragem foram: TP53 (50%), KMT2D (36%), ATM (29%), DICER1 (21%), PIK3CA (21%), TRRAP (21%). Nosso objetivo principal era encontrar mutações específicas para cada subtipo histológico, porém apenas os SEEs (PDE4DIP) e os CCS (ERBB4 e PIK3CA) tiveram mutações especificas. Em outra análise, observamos que todos os subtipos histológicos compartilham o gene KMT2D. Embora não tenha sido possível estabelecer um perfil mutacional para cada subtipo histológico avaliado, nossos resultados abrem perspectivas para uma nova linha de pesquisa nos sarcomas de corpo do útero e certamente contribuem para um melhor entendimento dessas neoplasias / Uterine sarcomas are rare mesodermal tumors that comprise about 3% of all cancers in this organ. They present histological diversity, aggressive behavior, early dissemination and high mortality rates. Recently, carcinosarcomas (CCS) were histological reclassified as carcinomas. Here, we have included them in our series for purposes of comparison of the mesenchymal component and also because these tumors still form part of both the majority of studies and the WHO\'s latest classification for uterine sarcomas (Word Health Organization). Because of their diversity and rarity, there is no consensus regarding the risk factors for poor prognosis and appropriate treatment for these tumors. Thus, information about their gene and protein profiles can help in the diagnosis and prognosis of these tumors, as well as in the understanding of their biology and clinical behavior. We performed the New Generation Sequencing of 14 samples of uterine sarcomas (5 CCS, 4 LMS, 4 SEE and 1 ADS, using the Ion Proton System platform (ThermoFisher).) Among the 14 samples, we found 27 LoF (loss of gene function) and 40 missense mutations, with a mean of 39 insertions and 52 deletions per sample, totaling 70 mutations, 25 described in the COSMIC database. The most commonly mutated genes in our sample were TP53 (50%), KMT2D (36%), ATM (29%), DICER1 (21%), PIK3CA (21%), TRRAP (21%).Our main objective was to find specific mutations for each histological subtype, but only SEEs (PDE4DIP) and CCS (ERBB4 and PIK3CA) had specific mutations. In another analysis, we observed that all the histological subtypes share the KMT2D gene, which will be studied in future analyzes. Others analyzes, using a custom panel, are necessary to understand these mutations and its biological implication in uterine carcinosarcoma and sarcomas

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As reabsorÃÃes patolÃgicas do osso alveolar vistas numa variedade de neoplasias malignas sÃo severas e graves, levando precocemente a microfraturas. A invasÃo tumoral Ãssea pode acontecer em conseqÃÃncia da progressÃo subcortical do tumor atravÃs dos alvÃolos dentÃrios. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do Metotrexato (MTX) e do Bisfosfonato Alendronato (ALD) em modelo do Carcinossarcoma 256 de Walker na mandÃbula de ratos. Uma suspensÃo de cÃlulas tumorais do Carcinossarcoma de Walker 256, na concentraÃÃo de 106 cÃlulas/mL, foi implantada nos alvÃolos de ratos, previamente abertos por exodontia. Os animais foram divididos em grupos e tratados com salina, MTX, ALD e associaÃÃo do MTX com ALD. Foram observados durante todo o tratamento a sobrevivÃncia e o peso corpÃreo dos animais. ApÃs o sacrifÃcio, os tumores foram medidos e as mandÃbulas removidas para exames radiogrÃfico e histolÃgico. No exame radiogrÃfico do grupo controle foi verificado Ãrea lÃtica, sem evidÃncia de reparo, na regiÃo dos alvÃolos, e na microscopia, infiltraÃÃo Ãssea perifÃrica e central, de pequenas cÃlulas tumorais com diversas Ãreas de necrose. Nos grupos tratados com ALD, associado ou nÃo ao MTX, a anÃlise radiogrÃfica mostrou reduÃÃo da osteÃlise tumor-induzida com graus variados de radiotransparÃncia na estrutura Ãssea; enquanto que, na anÃlise histopatolÃgica, trechos de tecido Ãsseo preservado, com formaÃÃo de osteÃide em meio a cÃlulas tumorais foram observados. O MTX apresentou significativa atividade anti-tumoral e os animais tratados com este quimioterÃpico apresentaram aumento de sobrevida. A associaÃÃo do tratamento com MTX e ALD mostrou-se eficaz no controle do crescimento e proliferaÃÃo das cÃlulas neoplÃsicas, como tambÃm na induÃÃo de neoformaÃÃo Ãssea. Portanto, constitui-se uma alternativa de tratamento das neoplasias malignas dos maxilares com invasÃo e comprometimento Ãsseo. / The pathologic resorption of alveolar bone seen in a wide variety of malignant neoplasms is often severe and fatal, leading to early microfractures. Bone invasion occurs as a consequence of subcortical progression of tumor through dental alveoli. We investigated the effect of the Metotrexate (MTX) and the Bisphosphosnate Alendronate (ALD) on experimental model of Walker 256 carcinossarcoma developed in the oral cavity of rats. Walker 256 carcinossarcoma cell suspension containing 106 cell/mL was implanted in the alveoli of first and second molars. The animals were divided and treated with saline, MTX, ALD, and MTX plus ALD. The animals were observed during all the treatment to determine the body weigth and life survival. Later, the animals were sacrificed, the tumors were measured and their mandibles removed to radiographic and histologic analysis. In the control group, the radiographic image demonstrated radioluscencie with poorly defined borders, and the microscopic examination revealed tumor infiltration into the peripheral and central regions of bone. Areas of necrosis were commonly seen. In the treaties groups with ALD, associated or not with MTX, the radiographic analysis revealed tumor-induced osteolyse circumscribed and variety degrees of radiotransparence; histologically, bony trabeculae were preserved and producing osteoid among malignant cells. The metotrexate induced significant antitumoral activity and the treaties animals showed a survival increase. Thus, the combination of metotrexate with alendronate is more successful, than single agents, in the control of the growth of neplastics cells, and its stimulation of reactive new bone. Therefore, it constitutes a new treatment to malignant lesions of maxillares with osteolysis.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / OBJETIVO: Estabelecer um modelo de tumor no fÃgado de ratos para estudo do comportamento tumoral e avaliar o uso da quimiembolizaÃÃo transarterial. MÃTODOS: Utilizou-se oitenta e oito ratos Wistar, fÃmeas, adultos, pesando entre 175- 284 g . Realizado incisÃo abdominal de 3 cm e implantou-se o carcinossarcoma de Walker 256 no lÃbulo esquerdo do fÃgado. Dividiu-se em trÃs grupos que receberam respectivamente 100x 103 , 200x 103 e 300x 103 cÃlulas tumorais, avaliado a pega do tumor e a sobrevida. Em outro grupo de experimento com 39 animais inoculados com tumor de Walker foi avaliado a sobrevida dos animais apÃs infusÃo do 5-Flourouracil (5-FU) por via intra-peritoneal e intra-arterial. RESULTADOS: O implante do carcinossarcoma de Walker no fÃgado de ratos apresentou desenvolvimento de 100 %, teve um crescimento rÃpido e desenvolvimento de metÃstases tardiamente, levando os animais ao Ãbito entre o sÃtimo e dÃcimo quinto dia. A quimiembolizaÃÃo transarterial à possÃvel de ser realizada experimentalmente. O uso do 5-FU aumentou a sobrevida em comparaÃÃo ao grupo controle. CONCLUSÃO: O modelo de implante do tumor de Walker no fÃgado de ratos à eficiente, de fÃcil reprodutibilidade, e sobrevida mÃdia de 9,96Â0.3 dias. A quimioterapia transarterial hepÃtica pode ser realizada experimentalmente para avaliar diversas drogas. / PURPOSE: An animal model to study the behaviour of liver tumor in rat and its response after use of transarterial chemoembolization. METHODS: We use 88 Wistar rats, all of them were females, adult, weight 175-284 g. Abdominal incison of three cm and implanted the Walker carcinossarcoma 256 at left lobule of the liver. The animals were divided into three grups, that received 100x103 , 200x103, and 300x103 cells. Followed up the animas to avaliate life standing and tumoral development. In another experiment was used 39 animals which already had Walker 256 tumor and we study the survival of the animals after treatment with 5-FU IP or 5-FU IA. RESULTS: The orevall tumor development rate were 100%. Tumor growth was fast, and devolopment metastases on old fase. The animals dead between 7 and 15 day. Its possible to do chemoembolization experimentaly, after the use of 5-FU the rate survival increased. CONCLUSION: The model with Walker 256 tumor developed here is easy to repoduce, efficient, with high tumor development rate observed, the life standing is about 9,96  0,3 days. The chemoembolization experiment allows to assess several drugs.

Introdução: Os sarcomas uterinos constituem uma forma rara de neoplasia maligna que compreende cerca de 3% de todos os canceres uterinos. Os fatores de risco são pouco conhecidos e as formas de tratamento escassas, sendo o papel da quimioterapia e radioterapia limitado. Nesse contexto, torna-se importante a compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos no processo de carcinogênese, tanto para diagnóstico e prognóstico mais precisos, quanto para ampliar os avanços terapêuticos. Um dos mecanismos moleculares envolvidos no desenvolvimento de canceres é a regulação da expressão gênica por microRNAs (miRNAs), que são pequenas moléculas de RNAs não-codificantes que desempenham papéis importantes em várias vias biológicas. Alterações na expressão de miRNAs podem acarretar em diversas doenças incluindo o câncer. Poucos trabalhos foram realizados, até o momento, no sentido de esclarecer a regulação ou expressão de miRNAs nos sarcomas uterinos. Objetivo: Avaliar a expressão de miRNAs relacionados ao desenvolvimento de tumores em amostras de carcinossarcomas e sarcomas do útero. Métodos: Foram selecionadas 100 amostras incluindo: 56 leiomiossarcomas (LMS), 24 carcinossarcomas (CS), 18 sarcomas do estroma endometrial (SEE) e 2 adenossarcomas (AS). O RNA total de amostras incluídas em parafina foi obtido e utilizado para realização da síntese de cDNA. As reações de PCR em Tempo Real foram realizadas utilizando o Kit miScript SYBR Green PCR (Qiagen) para análise a partir de 84 sequências de miRNAs já descritos na literatura para outros tipos de cânceres. Foram analisados dados clínicos como idade, sintomas principais, uso de contraceptivo oral, estado menopausal, terapia de reposição hormonal, tabagismo, tratamento cirúrgico, tratamento adjuvante, metástase, grau histológico, recorrência, óbito e estadiamento. Os resultados foram tabulados nos softwares SPSS e GraphPad Prism 5.01. Resultados: Observamos miRNAs que apresentaram diferentes perfis de expressão nos tumores, em comparação com o tecido referência (miométrio). Dentre 42 miRNAs que apresentaram diferenças de expressão nos sarcomas e carcinossarcomas uterinos, 6 destacaram-se por apresentar diferenças significativas entre os tipos histológicos: miR-96-5p (p < 0,001; LMSxCS), miR-205-5p (p=0,016; CSxSEE), miR-181a-5p (p=0,010; CSxLMS), miR-135b-5p (p=0,018; CSxLMS), miR-183-5p (p=0,012; CSxLMS) e miR-193b-3p (p=0,008; CSxLMS). Diversas associações entre a hiper ou hipoexpressão dos miRNAs com as variáveis clínicas coletadas foram constatadas. A expressão de 12 miRNAs foram associadas com sobrevida global e 3 com sobrevida câncer específica. Maior expressão de miR-335-5p, miR-301a-3p e miR-210-3p foi encontrada em amostras de pacientes que realizaram tratamento adjuvante e desenvolveram metástase ou recidiva, para as quais observamos a expressão de miR-138-5p, miR-146b-5p e miR-218-5p associada com maior sobrevida livre de doença. Conclusão: Em conjunto, os resultados sugerem que a caracterização dos miRNAs possui papel promissor para fins diagnóstico, prognóstico e até terapêuticos nos sarcomas e carcinossarcomas uterinos / Introduction: The uterine sarcomas are a rare form of malignancy comprising about 3% of all uterine cancers. Risk factors are not well known and the treatment forms are scarce, being the role of chemotherapy and radiotherapy limited. In this context, it becomes important the comprehension of the molecular mechanisms involved in the carcinogenesis process, as for more accurate diagnosis and prognosis, as to broaden the therapeutic advances. One of the molecular mechanisms involved in cancer development is the regulation of gene expression by microRNAs (miRNAs), which are small molecules of non-coding RNAs that play important roles in some biological pathways. Alterations in miRNA expression could result in some diseases, including cancer. Few studies were performed until present time, to clarify the miRNAs regulation or expression in uterine sarcomas. Objective: To evaluate the expression of miRNAs related to development of tumors in carcinosarcoma and uterine sarcomas samples. Methods: 100 samples were evaluated including: 56 leiomyosarcomas (LMS), 24 carcinosarcomas (CS), 18 endometrial stromal sarcomas (ESS) and 2 adenosarcomas (AS). The total RNA from paraffin-embedded samples were obtained and used to cDNA synthesis. The real time PCR reactions, was performed using the miScript SYBR Green PCR Kit (Qiagen) for analysis of 84 sequences already described in literature in other types of cancer. Were analyzed clinical data such as age, main symptoms, oral contraceptive use, menopausal status, hormone replacement therapy, smoking, underlying pathology, surgical treatment, adjuvant treatment, metastasis, histological grade, recurrence, death and staging. The results were tabulated in the SPPS and Graphpad Prism 5.01. Results: We observed miRNAs that showed different expression profiles in tumors compared to the reference tissue (myometrium). Among 42 miRNAs that showed different expression in uterine sarcomas and carcinosarcomas, 6 stood out for showing significant differences among the histological types: miR-96-5p (p < 0,001; LMSxCS), miR-205-5p (p=0,016; CSxSEE), miR-181a-5p (p=0,010; CSxLMS), miR-135b-5p (p=0,018; CSxLMS), miR-183-5p (p=0,012; CSxLMS) e miR-193b-3p (p=0,008; CSxLMS). Many associations between overexpression or hypoexpression of miRNAs with the clinical variables collected were found. The expression of 12 miRNAs were associated with cancer-specific survival and 3 with disease-free survival. It were also found, increased expression of miR-335-5p, miR-301a-3p and miR-210-3p in samples of patients who underwent adjuvant treatment and developed metastasis or recurrence, and correlation analysis showed that the expression of miR-138-5p, miR-146b-5p and miR-218- 5p are associated with higher disease-free survival of treated patients. Conclusion: The results suggest that the characterization of miRNAs have a promising role for purposes of diagnosis, prognosis and therapeutic for the uterine sarcomas and carcinosarcomas