Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2012-10-16T07:13:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0

Orientador: Nelson Eduardo Duran Caballero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-27T06:44:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bromberg_Natalia_M.pdf: 3622328 bytes, checksum: 9b72c2330df993f4a2f0dfe082c29828 (MD5) Previous issue date: 2000 / Mestrado

Orientador : Nelson E. Duran Caballero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-14T03:49:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RiverosGonzales_RaulAlberto_D.pdf: 2661099 bytes, checksum: 084b29ad42d1ea64e79daa6daca580ed (MD5) Previous issue date: 1989 / Doutorado

Orientador : Nelson E. Duran Caballero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-17T22:22:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RiverosGonzalez_RaulAlberto_M.pdf: 2735291 bytes, checksum: 31a08518aeaf853ca860dce74296c416 (MD5) Previous issue date: 1986 / Mestrado

Chromobacterium violaceum é uma bactéria de vida livre, móvel, que habita fontes de água e solos pobres de regiões tropicais e subtropicais. Nestes habitats, em que a concentração de fosfato é baixa, o regulon PHO encontra-se ativado. No laboratório, esta bactéria é capaz de crescer razoavelmente bem, apesar da limitação de fosfato, atingindo um rendimento celular similar ao observado na abundância deste nutriente. Mutações nos genes pstS, phoU, phoA1 e phoA2 foram construídas. As mutações pstS e phoU não causaram qualquer alteração no padrão de expressão da fosfatase alcalina, sugerindo que estes genes não participam da repressão dos genes de PHO. Porém, o mutante pstS mostrou-se deficiente na captação de Pi. Os mutantes phoA1 e phoA2 apresentaram, cada um, severa redução na atividade da fosfatase alcalina. Foi investigada a possibilidade de PhoA1 e PhoA2 formarem uma proteína heterodimérica. Fusões transcricionais entre phoU e phoB ao gene lacZ, revelaram que estes genes respondem à carência de Pi. Surpreendentemente, C. violaceum se mostrou pouco resistente a estresses ambientais. / Chromobacterium violaceum is a free-living, mobile bacterium that inhabits water sources and soils of tropical and subtropical regions, where the phosphate concentration is low. The PHO regulon is activated in response to low phosphate concentration in the environment. Surprisingly, the growth yield of C. violaceum under phosphate excess or under phosphate limitation is very similar. Mutations in pstS, phoU, phoA1 and phoA2 genes were constructed. The expression of alklaine phosphatase was not affected by the phoU and pstS mutations, suggesting that these genes do not participate in the repression of the PHO regulon. However, the pstS mutant was deficient in the uptake of Pi. The phoA1 and phoA2 mutants presented each one a severe reduction in alkaline phosphatase activity. The hypothesis that PhoA1 and PhoA2 form a heterodimeric protein was investigated. Transcriptional fusions between the promoters of phoB and phoU to lacZ showed that these genes respond to Pi starvation. Stress resistance assays showed that C. violaceum is generally sensitive to environmental stresses.

As proteínas fosfatases desempenham um papel fundamental na modificação pós-traducional reversível de proteínas por fosforilação, ao atuarem na remoção do grupo fosforil estável de resíduos de serina, treonina e tirosina. Embora predominem em eucariotos, as serina/treonina fosfatases (STPs) também existem em bactérias, nas quais atuam controlando diversos aspectos fisiológicos e de virulência. Neste trabalho investigamos o papel das STPs na virulência e fisiologia de Chromobacterium violaceum, uma ?-proteobactéria que atua como um patógeno ocasional de humanos e é amplamente encontrada em água e solos de regiões tropicais e subtropicais. Análises in silico revelaram a presença de quatro STPs no genoma de C. violaceum, sendo que duas possuem apenas o domínio de fosfatase (CV_0881 e CV_3848) e duas possuem um domínio adicional de regulador de resposta (CV_2644 e CV_3505). Mutantes nulos foram construídos para as quatro STPs e todas estas linhagens apresentaram crescimento semelhante ao da linhagem selvagem em meio rico e meio mínimo. As linhagens mutantes ?0881, ?2644 e ?3505 não apresentaram alteração de virulência em camundongos. Os mutantes ?2644 e ?3505 apresentaram menor formação de biofilme, o que sugere papel dessas fosfatases neste processo. Uma caracterização mais aprofundada da linhagem ?3848 por diferentes técnicas de microscopia revelou que este mutante apresenta células de tamanho diminuído, irregularidades no envelope celular e problemas na distribuição do DNA. Estes dados sugerem que CV_3848 tem papel em divisão celular, condensação do material genético e manutenção da parede celular. Nos ensaios de virulência o mutante ?3848 mostrou menor capacidade de causar morte e manter-se no fígado de camundongos, indicando que a STP CV_3848 é importante na patogenicidade de C. violaceum. / Protein phosphatases play a key role in reversible post-translational modification of proteins through phosphorylation since they act removing the stable phosphoryl group of serine, threonine and tyrosine residues. Although dominant in eukaryotes, the serine/threonine phosphatases (STPs) also exist in bacteria, in which they act by controlling various physiological and virulence traits. In this work we investigated the role of STPs on the virulence and physiology of Chromobacterium violaceum, a ?-proteobacterium that occasionally acts as a pathogen of humans and it is widely found in water and soil of tropical and subtropical regions. In silico analyzes revealed the presence of four STPs in the genome of C. violaceum, two of which have only the phosphatase domain (CV_0881 and CV_3848) and two that possess an additional domain of response regulator (CV_2644 and CV_3505). Null mutants were constructed for the four STPs and all of them showed similar growth to the wild type strain on rich and minimal medium. The mutant strains ?0881, ?2644 and ?3505 did not show any change in virulence in mice. The ?2644 and ?3505 mutants had lower biofilm formation, suggesting the role of these phosphatases in this process. Further characterization of ?3848 by different microscopy techniques revealed that this mutant presents cells of diminished size, irregularities in the cellular envelope and problem on the DNA distribution. These data suggest that CV_3848 has role in cell division, condensation of the genetic material and cell wall maintenance. In virulence assays the ?3848 mutant showed a lower ability to cause death and to remain in the liver of mice, indicating that the STP CV_3848 is important for the pathogenicity of C. violaceum.

As proteínas fosfatases desempenham um papel fundamental na modificação pós-traducional reversível de proteínas por fosforilação, ao atuarem na remoção do grupo fosforil estável de resíduos de serina, treonina e tirosina. Embora predominem em eucariotos, as serina/treonina fosfatases (STPs) também existem em bactérias, nas quais atuam controlando diversos aspectos fisiológicos e de virulência. Neste trabalho investigamos o papel das STPs na virulência e fisiologia de Chromobacterium violaceum, uma ?-proteobactéria que atua como um patógeno ocasional de humanos e é amplamente encontrada em água e solos de regiões tropicais e subtropicais. Análises in silico revelaram a presença de quatro STPs no genoma de C. violaceum, sendo que duas possuem apenas o domínio de fosfatase (CV_0881 e CV_3848) e duas possuem um domínio adicional de regulador de resposta (CV_2644 e CV_3505). Mutantes nulos foram construídos para as quatro STPs e todas estas linhagens apresentaram crescimento semelhante ao da linhagem selvagem em meio rico e meio mínimo. As linhagens mutantes ?0881, ?2644 e ?3505 não apresentaram alteração de virulência em camundongos. Os mutantes ?2644 e ?3505 apresentaram menor formação de biofilme, o que sugere papel dessas fosfatases neste processo. Uma caracterização mais aprofundada da linhagem ?3848 por diferentes técnicas de microscopia revelou que este mutante apresenta células de tamanho diminuído, irregularidades no envelope celular e problemas na distribuição do DNA. Estes dados sugerem que CV_3848 tem papel em divisão celular, condensação do material genético e manutenção da parede celular. Nos ensaios de virulência o mutante ?3848 mostrou menor capacidade de causar morte e manter-se no fígado de camundongos, indicando que a STP CV_3848 é importante na patogenicidade de C. violaceum. / Protein phosphatases play a key role in reversible post-translational modification of proteins through phosphorylation since they act removing the stable phosphoryl group of serine, threonine and tyrosine residues. Although dominant in eukaryotes, the serine/threonine phosphatases (STPs) also exist in bacteria, in which they act by controlling various physiological and virulence traits. In this work we investigated the role of STPs on the virulence and physiology of Chromobacterium violaceum, a ?-proteobacterium that occasionally acts as a pathogen of humans and it is widely found in water and soil of tropical and subtropical regions. In silico analyzes revealed the presence of four STPs in the genome of C. violaceum, two of which have only the phosphatase domain (CV_0881 and CV_3848) and two that possess an additional domain of response regulator (CV_2644 and CV_3505). Null mutants were constructed for the four STPs and all of them showed similar growth to the wild type strain on rich and minimal medium. The mutant strains ?0881, ?2644 and ?3505 did not show any change in virulence in mice. The ?2644 and ?3505 mutants had lower biofilm formation, suggesting the role of these phosphatases in this process. Further characterization of ?3848 by different microscopy techniques revealed that this mutant presents cells of diminished size, irregularities in the cellular envelope and problem on the DNA distribution. These data suggest that CV_3848 has role in cell division, condensation of the genetic material and cell wall maintenance. In virulence assays the ?3848 mutant showed a lower ability to cause death and to remain in the liver of mice, indicating that the STP CV_3848 is important for the pathogenicity of C. violaceum.

Chromobacterium violaceum é uma bactéria de vida livre, móvel, que habita fontes de água e solos pobres de regiões tropicais e subtropicais. Nestes habitats, em que a concentração de fosfato é baixa, o regulon PHO encontra-se ativado. No laboratório, esta bactéria é capaz de crescer razoavelmente bem, apesar da limitação de fosfato, atingindo um rendimento celular similar ao observado na abundância deste nutriente. Mutações nos genes pstS, phoU, phoA1 e phoA2 foram construídas. As mutações pstS e phoU não causaram qualquer alteração no padrão de expressão da fosfatase alcalina, sugerindo que estes genes não participam da repressão dos genes de PHO. Porém, o mutante pstS mostrou-se deficiente na captação de Pi. Os mutantes phoA1 e phoA2 apresentaram, cada um, severa redução na atividade da fosfatase alcalina. Foi investigada a possibilidade de PhoA1 e PhoA2 formarem uma proteína heterodimérica. Fusões transcricionais entre phoU e phoB ao gene lacZ, revelaram que estes genes respondem à carência de Pi. Surpreendentemente, C. violaceum se mostrou pouco resistente a estresses ambientais. / Chromobacterium violaceum is a free-living, mobile bacterium that inhabits water sources and soils of tropical and subtropical regions, where the phosphate concentration is low. The PHO regulon is activated in response to low phosphate concentration in the environment. Surprisingly, the growth yield of C. violaceum under phosphate excess or under phosphate limitation is very similar. Mutations in pstS, phoU, phoA1 and phoA2 genes were constructed. The expression of alklaine phosphatase was not affected by the phoU and pstS mutations, suggesting that these genes do not participate in the repression of the PHO regulon. However, the pstS mutant was deficient in the uptake of Pi. The phoA1 and phoA2 mutants presented each one a severe reduction in alkaline phosphatase activity. The hypothesis that PhoA1 and PhoA2 form a heterodimeric protein was investigated. Transcriptional fusions between the promoters of phoB and phoU to lacZ showed that these genes respond to Pi starvation. Stress resistance assays showed that C. violaceum is generally sensitive to environmental stresses.

Orientador: Nelson Eduardo Duran Caballero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-21T11:03:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rettori_Daniel_M.pdf: 1599329 bytes, checksum: aed98aebab06459e3c12b58b794e9dae (MD5) Previous issue date: 1996 / Mestrado

Orientador: Nora Marcela Haun Quiros / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T15:49:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antonio_ReginaVasconcellos_D.pdf: 4164743 bytes, checksum: 1165bdb91953c41821709ee656da6cb9 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Neste trabalho foram estudadas algumas condições de cultivo da Chromobacterium violaceum (cepa BB-78) com o objetivo de aumentar a produção da violaceína, um pigmento produzido pela bactéria, que apresenta atividades tripanocida e antibiótica. Verificou-se que glicose e frutose são fontes de carbono que inibem a produção de violaceína embora favoreçam a produção de massa celular. Baixas concentrações de glicose e a utilização de fontes de carbono de difícil metabolismo, tais como amido, lactose, manitol e sacarose, favoreceram a produção de violaceína, porém o crescimento celular foi bastante reduzido sob tais condições. Observou-se que a produção de violaceína chega a ser até 36 vezes maior na presença de meios sólidos, quando comparada aos meios líquidos correspondentes, sendo marcadamente maior na presença de grãos de arroz cozido. Metabólitos indólicos, tais como: triptofano, ácido 3-indol acético e 5-hidroxitriptamina, produzidos pela bactéria, aumentaram a eficiência da produção de violaceína., expressa como a razão entre a concentração de violaceína e o peso seco da massa celular, em até 40%, como foi o caso do triptofano. A isatina, também produzida pela bactéria, não teve efeito estimulatório sobre a eficiência da biossíntese de violaceína embora tenha apresentado um efeito indutor sobre esta via na ausência de outros compostos indólicos no meio de cultura, aumentando a eficiência de produção de violaceína 20 vezes em relação ao controle. Ensaios de incorporação do ácido 3-indol acético (IAA) à molécula de violaceína., mostraram que este é integralmente incorporada ao pigmento. Foram sintetizadas duas carboxiamidas, CBX-l e CBX-2, sendo a primeira a partir da condensação do IAA à 5-hidroxitriptamina e a segunda a partir da condensação do IAA à triptamina. Enquanto a primeira foi capaz de aumentar a eficiência da biossíntese de violaceína em 42%, indicando que esta seja um importante intermediário desta via, a CBX-2 não teve efeito algum sobre a biossíntese de violaceína. Devido às semelhança estruturais das carboxiamidas com a violaceína., ambas foram testadas quanto à atividade tripanocida. A CBX-2, além de se apresentar bastante efetiva contra formas amastigotas e tripomastigotas de Trypanosoma cruzi (cepa Y), foi também menos tóxica sobre células V79 de hamster chinês que nifurtimox e metilol violaceína., se constituindo num composto promissor a ser melhor testado como quimioterápico. Por outro lado, a CBX-1 foi pouco efetiva contra T. cruzi / Abstract: Violacein is a pigment produced by Chromobacterium violaceum that has shown trypanocide and antibiotic activity. To improve the violacein biosynthesis, the bacteria growth conditions were studied. Glucose and fructose were shown to inhibit the pigment production although they have stimulated the cellular mass production. Low concentrations of these sugars and other carbon sources slowly metabolized by this bacterium have shown to increase violacein production although cellular mass was reduced in such conditions. Violacein production increased until thirty six fold when C. violaceum was grown in solid medium, being much higher in cooked rice grains. Violacein production efficiency (expressed as the ratio of violacein production and cellular mass, dry weight) was increased by indolic compounds such as tryptophan, indole acetic acid and 5-hydroxytriptamine until forty percent, as did tryptophan. Isatin had no stimuli on violacein biosynthesis, but it increased twenty fold its efficiency when no other indole sources were present in the medium. From experiments with labelled 2_14C and 1_14C-indole acetic acid (14C-IAA), it was concluded that these compounds were incorporated into violacein molecule. Two carboxamides were synthesized, N-ethyl-(5hydroxy-indol-3-yl)-2-indolylethyl amide (CBX1) and N-ethyl-(indol-3-yl)-2-indoliethylamide (CBX-2). CBX-1 increased the violacein efficiency production in forty two percent, this is indicative that this is an important intermediate in violacein biosynthesis. CBX-2 had no effect on violacein efficiency production. Due the structural's similarities between the CBX-1, CBX-2 and violacein, the carboxiamides were assayed to trypanocide activities. Only CBX-2 has shown significant activity on amastigotes and trypomastigote forms of Trypanosoma cruzi (Y strain). It exhibited lower toxicity than nifurtimox and metilol violacein, on V79 chinese hamster cells being a promissory compound to Chagas desease chemotherapy / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Ciências Biológicas