A clorose variegada dos citros (CVC) é uma das principais doenças que afeta a citricultura brasileira, causada pela bactéria Xylella fastidiosa (Wells), que coloniza o xilema de culturas de interesse econômico, além de plantas ornamentais e daninhas, sendo transmitida por cigarrinhas (Hemiptera: Cicadellidae: Cicadellinae). A compreensão do patossistema CVC é fundamental para planejar táticas eficazes de controle da doença. Entretanto, as pesquisas sobre interações patógeno-planta-vetores são escassas, devido à falta de plantas hospedeiras adequadas para ensaios de transmissão da bactéria, visto que citros não é um bom hospedeiro experimental. Assim, nesta pesquisa objetivou-se identificar espécies herbáceas que permitam a colonização sistêmica da estirpe de X. fastidiosa de citros, e avaliar seu uso como plantas-fonte e plantas-teste (indicadoras) em testes de transmissão por Bucephalogonia xanthophis (Berg). Para tal foram escolhidas as plantas Bidens pilosa L., Catharanthus roseus L., Citrus sinensis (L.) Osbeck, Medicago sativa L., Nicotiana tabacum L., Ocimum basilicum L., Parthenium hysterophorus L., Phaseolus vulgaris L., Sida rhombifolia L. e Solanum americanum Mill, que foram inoculadas mecanicamente com isolados de X. fastidiosa de citros e posteriormente avaliadas quanto à infecção por isolamento primário e reação de cadeia da polimerase (PCR). As espécies que permitiram colonização bacteriana foram posteriormente avaliadas em experimentos de transmissão por B. xanthophis, sendo divididos em duas etapas. Na primeira delas, variaram-se as espécies de plantas-fonte para aquisição da bactéria e fixou-se C. roseus como planta-teste para inoculação. Na segunda etapa, fixou-se C. roseus como planta-fonte e variaram-se as espécies de planta-teste. Durante os experimentos de transmissão, foram avaliados dois parâmetros biológicos de B. xanthophis: mortalidade (%) e volume de honeydew excretado (medida indireta de ingestão). Entre 30 a 90 dias após a inoculação, as plantas-testes foram analisadas quanto à infecção bacteriana por meio de PCR e isolamento. As inoculações mecânicas mostraram colonização sistêmica e multiplicação de X. fastidiosa em sete espécies vegetais (B. pilosa, C. roseus, C. sinensis, M. sativa, N. tabacum, O. basilicum e S. americanum), com maiores taxas de infecção e populações bacterianas em C. roseus e N. tabacum. As espécies C. roseus, M. sativa e O. basilicum, quando usadas como plantas-fonte de X. fastidiosa, propiciaram maiores volumes de excreção e menores taxas de mortalidade (15, 20 e 20%) da cigarrinha após 48 h de acesso à aquisição da bactéria. No experimento de transmissão com variação de espécies de plantas-teste, detectou-se a inoculação pelo vetor em C. roseus, M. sativa, O. basilicum e S. americanum, com maior proporção de plantas positivas (cerca de 20%) para as duas primeiras. Dentre essas espécies, C. roseus e M. sativa são as indicadoras mais adequadas para ensaios de transmissão de X. fastidiosa por B. xanthophis, sendo a primeira também adequada como planta-fonte. / Citrus variegated chlorosis (CVC) is a major disease that affects the Brazilian citrus industry, caused by the xylem-limited bacterium Xylella fastidiosa (Wells), which colonizes several crop plants, ornamentals and weeds, and is transmitted by sharpshooter leafhoppers (Hemiptera: Cicadellidae: Cicadellinae). A better understanding of the CVC pathossystem is critical for developing effective tactics to control the disease. However, research on the relationships among pathogen strains, host plants and insect vectors associated with CVC is scarce, partly because of the lack of adequate host plants for transmission assays, since citrus is not a suitable experimental host for this purpose. Thus, the present study aimed to identify herbaceous plants that allow systemic colonization of citrus strains of X. fastidiosa, and evaluate them as source and test (indicator) plants in transmission assays by the sharpshooter Bucephalogonia xanthophis (Berg). Ten plant species, Bidens pilosa L., Catharanthus roseus L., Citrus sinensis (L.) Osbeck, Medicago sativa L., Nicotiana tabacum L., Ocimum basilicum L., Parthenium hysterophorus L., Phaseolus vulgaris L., Sida rhombifolia L. and Solanum americanum Mill were mechanically inoculated with citrus isolates of X. fastidiosa and then evaluated for bacterial infection by primary isolation in culture medium and polymerase chain reaction (PCR). Those plant species that allowed bacterial colonization were later evaluated in two transmission experiments by B. xanthophis, In the first experiment, different plant species were tested as source plants for bacterial acquisition and transmission to C. roseus (test plant). In the second one, C. roseus was used as a source plant and different plant species were evaluated as test (indicator) plants for bacterial inoculation. During the transmission experiments, two biological parameters of B. xanthophis were evaluated: mortality rate (%) and honeydew excretion (as an indirect measure of ingestion). Between 30 and 90 days after inoculation, the test plants were analyzed for X. fastidiosa infection by PCR and culturing. The mechanical inoculation experiments showed systemic colonization and multiplication of X. fastidiosa in seven plant species (B. pilosa, C. roseus, C. sinensis, M. sativa, N. tabacum, O. basilicum and S. americanum), with higher rates of infection and bacterial populations of C. roseus and N. tabacum. The species C. roseus, M. sativa and O. basilicum, when used as source plants of X. fastidiosa, allowed higher ingestion (honeydew excretion) rates and lower mortality (15, 20 and 20%) of B. xanthophis during the 48-h acquisition access period. In the transmission experiment with different species of test plants, X. fastidiosa inoculation by the vector was detected in C. roseus, M. sativa, O. basilicum and S. americanum, with a higher rate of infected plants (about 20%) in the former two species. Among the herbaceous plant species evaluated in this research, C. roseus and M. sativa are the most appropriate indicator hosts of X. fastidiosa infection for transmission assays by B. xanthophis, whereas the former species is also suitable as a source plant.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a distribuição espacial de adultos e ninfas da cigarrinha-das-raízes da cana-de-açúcar, Mahanarva fimbriolata (Stål., 1854) (Hemiptera: Cercopidae), a eficiência do sistema de amostragem atualmente empregado em escala comercial, a possibilidade de estimar a população de ninfas por meio da contagem de espumas e, a partir desses resultados, estabelecer um plano de amostragem confiável, prático e de baixo custo para utilização em programas de manejo integrado desta praga. A determinação da distribuição espacial foi feita em Ourinhos e Guariba-SP, demarcando-se três parcelas de 1,1 ha, em talhão colhido mecanicamente sem a queima da palha e com histórico de ataque da cigarrinha-dasraízes. As avaliações foram feitas em três épocas diferentes, contando-se o número de adultos e ninfas na base das touceiras, em 50% da área da parcela. Os adultos e ninfas de M. fimbriolata distribuem-se de forma agregada ou contagiosa na cultura da cana-de-açúcar e este padrão de distribuição não se altera ao longo das gerações, nem é influenciado pelo nível de infestação ou variedade cultivada. Utilizando-se os dados obtidos nestes experimentos calculou-se, para cada local e época de amostragem, o índice de dispersão k e o número de amostras necessárias para estimar a população de ninfas, considerando-se diferentes níveis de precisão, e realizaram-se simulações para diferentes tamanhos de amostra e esquemas de caminhamento. O plano de amostragem mais adequado para avaliação da população da cigarrinha-das-raízes em cana-de-açúcar foi determinado por meio do intervalo de confiança da média (P ≤ 0,05) para a Variação Relativa (VR) e Precisão Relativa (PR). Os melhores resultados foram obtidos com 18 amostras de 1 metro linear por hectare, distribuídas na área de forma sistemática. Para a avaliação do método de amostragem comercial, instalaram-se dois experimentos em Ourinhos, demarcando-se duas parcelas de 1,1 ha, nas mesmas condições anteriores. Quinzenalmente, quantificou-se o número de formas biológicas em 300 pontos de 1m linear na parcela (amostragem experimental) e no restante da área do talhão (amostragem comercial), em 4 pontos de dois sulcos de 2m lineares/ha. Comparando-se os dados por meio de uma análise de regressão linear verificou-se que o método de amostragem comercial apresentou boa precisão na estimativa da população de ninfas, porém foi pouco preciso para adultos. Sua acurácia foi baixa para ninfas e adultos, subestimando as populações reais. A relação entre as contagens de espumas e ninfas nas amostragens comercial e experimental foi avaliada por meio de uma análise de regressão linear, observando-se alta correlação entre estes parâmetros, com coeficientes de determinação superiores a 0,96. Os resultados obtidos indicam que, independentemente da época de avaliação e do nível de infestação, é possível estimar a população de ninfas da cigarrinha-dasraízes em cana-de-açúcar por meio da contagem de espumas, com elevado grau de confiabilidade. / The objective of this research was to evaluate the spatial distribution of adults and nymphs of the sugarcane root froghopper, Mahanarva fimbriolata (Stal, 1854) (Hemiptera: Cercopidae), to evaluate the efficiency of the sampling system presently used to monitor the populations in commercial fields, and to estimate nymph populations by counting foam spots. The results obtained in this work were used to establish a low cost and reliable sampling method in order to improve the integrated pest management program for the sugarcane root froghopper. The determination of the spatial distribution was conducted at Ourinhos and Guariba cities, São Paulo State, in three plots of 1.1 ha that had been mechanically harvested without burning and with a history of infestation with sugarcane root froghopper. The evaluations were made in three different periods, counting the number of both adults and nymphs at the base of the stools in 50% of the plot. The adults and the nymphs of M. fimbriolata were distributed in aggregated or contagious form and this pattern did not change during subsequent generations nor was influenced by either the level of infestation or cultivated variety. The data obtained in these experiments was used to estimate, for each site and sampling period, the dispersion index k and the number of samples needed to estimate nymph populations, considering different levels of precision. The data was also used to simulate results with different sample sizes and sampling patterns. The most adequate sampling plan to evaluate sugarcane root froghopper populations was determined using the confidence interval of the mean at P ≤ 0.05 for the Relative Variation (RV) and Relative Precision (RP). The best results were obtained with 18 samples of 1 linear meter per hectare, distributed in the area in a systematic manner. For the evaluation of the commercial sampling method, two experiments were established at Ourinhos, using two 1.1 hectare plots. The number of biological forms in 300 spots of 1 linear meter in the plot (experimental sampling) were checked bi-weekly. Similarly, in the rest of the area, biological forms were counted in 4 spots of 2 linear meters per hectare (commercial sampling). Linear regression analysis presented that the commercial sampling method presented good efficiency for estimating nymphs populations but was not efficient in estimating adult populations. The sampling accuracy was low for both nymphs and adults, underestimating the true populations. The linear correlation between foam counts and nymph in both commercial and experimental sampling was high, with determination coefficient greater than 96%. The results indicate that, independent of the period and level of infestation, it is possible to estimate the population of sugarcane root froghopper nymphs by counting foam spots.

O objetivo da pesquisa foi selecionar isolados de Metarhizium anisopliae patogênicos para cigarrinha-da-raiz, Mahanarva fimbriolata, e caracterizá-los morfológica e geneticamente, por meio de técnicas de análise de DNA (RAPD). A seleção foi feita em laboratório, utilizando ninfas coletadas a campo que foram pulverizadas com o fungo e mantidas nas raízes de mudas de cana-de-açúcar. A mortalidade corrigida, ao quinto dia após a inoculação, variou de 10,5 a 60%. Verificou-se que todos os isolados apresentaram coloração das colônias variando de verde acinzentado ao verde escuro, com crescimento de 28mm para o isolado IBCB-353 à 38mm para o isolado IBCB-348. O comprimento dos conídios não teve influência na patogenicidade e variou de 5,465µm para o isolado IBCB-345 a 7,970µm para o isolado ESALQ 1301 sendo que todos pertencem à subespécie anisopliae. Constatou-se a presença de RNA de fita dupla em onze dos vinte isolados, mas não houve relação entre a presença desta banda e sua patogenicidade para M. fimbriolata. Foi possível separar os isolados em dois grupos (A e B) com 72,5% de similaridade, sendo observada a composição de dois subgrupos (B1 e B2), com 77,5% de similaridade, dentro do grupo B. A alta similaridade entre os dois grupos e dentro de cada um deles, indicou que os isolados pertencem à mesma subespécie, reforçando o que foi concluído com a caracterização morfológica. O método utilizado confirma a grande diversidade genética da espécie M. anisopliae, porém, não reflete sua similaridade de patogenicidade a ninfas de M. fimbriolata, pois os dois isolados mais patogênicos (IBCB-384 e ICBC-348) foram dispostos em grupos diferentes. Não se observou um padrão específico de agrupamento entre isolados oriundos da mesma região ou hospedeiro, ou seja, a diversidade genética parece ser independente do local de origem do fungo, como seria esperado com um patógeno que, em geral, tem revelado alto grau de especialização ao hospedeiro. / This research was carried out to evaluate the pathogenicity of isolates of the entomopatogenic fungus Metarhizium anisopliae against the spittlebug, Mahanarva fimbriolata, and to characterize them morphologically and genetically through RAPD method. The selection was made under laboratory condition, using nymphs collected at field. The fungus was sprayed on the nymphs by a Potter tower (15 pounds/pol2) and then, they were maintained in roots of sugar-cane seedlings. The mortality was evaluated 5 days after the inoculation, ranging from 10.5 to 60%. The colonies’ color varied from grayish green to dark green and the colonies diameter ranged from 28mm (isolate IBCB-353) to 38mm (isolate IBCB-348). The conidia length ranged from 5.465µm for the isolate IBCB-345 to 7.970µm for the isolate ESALQ 1301. With those results it could be concluded that all the studied strains belong to the subspecies anisopliae. The size did not have influence in the pathogenicity of the isolate. It was evidenced presence of double-stranded RNA (virus) in eleven out of the twenty isolates tested, but it did not have relation between the presence of the virus and its pathogenicity for M. fimbriolata. It was possible to separate isolates in two groups (A and B) with 72.5% of similarity, being observed the composition of two sub-groups (B1 and B2), with 77.5% of similarity, inside of group B. The high similarity between the two groups and inside of each one indicated that the isolates belong to the same subspecies, confirming what it was concluded with the morphologic characterization. The used method confirms the great genetic diversity of species M. anisopliae, however, does not reflect its similarity of pathogenicity the nymphs of M. fimbriolata, therefore the two isolated most pathogenic (IBCB-384 and ICBC-348) were located in different fenetic groups. In the present study a specific standard of grouping between isolated deriving of the same region or host was not observed, or either, the genetic diversity seems to be independent on the fungus origin, as it would be expected from a pathogen that, in general, shows high degree of specialization to the host.

O enfezamento vermelho, causado por um fitoplasma, foi registrado no Brasil no início da década de setenta, sendo relatado como de pequena importância para a cultura do milho. A partir de meados dos anos oitenta, com a introdução dos plantios de safrinha e dos cultivos irrigados, a doença passou a ser considerada de relevância econômica. Atualmente, o enfezamento se constitui em uma das mais importantes doenças do milho, sendo, inclusive, fator limitante para produção em função da região, do híbrido escolhido e da época de plantio.Um ponto crítico no manejo da doença se refere ao escasso conhecimento sobre a sobrevivência do patógeno e do inseto vetor (Dalbulus maidis) durante a ausência da cultura do milho no campo. Este tipo de informação pode ser útil principalmente na redução do inóculo inicial do patógeno, visando um controle mais eficiente da doença. Assim sendo, o presente trabalho teve por objetivo avaliar algumas gramíneas, usadas na formação de pastagens, e espécies daninhas, que ocorrem na cultura do milho, como potenciais hospedeiros alternativos do fitoplasma e do seu vetor . Treze espécies de capins e ervas daninhas foram experimentalmente inoculadas com o fitoplasma do enfezamento vermelho do milho, através de cigarrinhas infectivas. Avaliações foram feitas com base na observação de sintomas, na detecção molecular do fitoplasma nos tecidos das plantas inoculadas e na contagem de insetos sobreviventes nestas plantas inoculadas. A detecção foi feita por duplo PCR e a identificação do fitoplasma foi realizada pela análise de RFLP, com as enzimas de restrição AluI, RsaI, KpnI e MboI. Das treze espécies testadas, o fitoplasma foi encontrado nos capins colonião (Panicum maximum), marmelada (Brachiaria plantaginea) e braquiária (Brachiaria decumbens), através da amplificação do 16S rDNA, visualizado em gel de agarose na forma de bandas. Os insetos sobreviveram nos três capins até o final do período de experimentação, revelando que os capins foram capazes de abrigar a cigarrinha. Estes resultados demonstraram a possibilidade destas espécies atuarem como potenciais hospedeiros alternativos para o patógeno e o seu vetor, em condições naturais. Estas informações poderão contribuir para novas investigações, na busca de melhor conhecimento sobre a epidemiologia da doença, principalmente quanto à sobrevivência do fitoplasma e da cigarrinha vetora. / Maize bushy stunt, caused by a phytoplasma, was reported in Brazil in the beginning of the seventies, and it was considered as not important for corn. Since the middle of the eighties decade, when the later planting practice and irrigation were adopted, the disease became relevant. Currently, maize bushy stunt represents one of the most important diseases and has caused significant losses. In some conditions the disease can limit the production, especially in relation to the region, used hybrids and crop season. A critical point to disease control is the lack of about survival of pathogen and vector, during the absence of corn crop on the field. This kind of information can be useful to promote the reduction of the initial inoculum, aiming a more efficient disease control. Thus, the objective of the present study was to evaluate some grasses and weeds species as potential alternative hosts of the maize bushy stunt phytoplasma and its vector Dalbulus maidis. Thirteen botanical species were experimentally inoculated with the phytoplasma by using infective leafhoppers. Evaluations were based upon symptom observation, molecular detection of the phytoplasma in tissue of inoculated plants and the of number of insects present in the plants. Detection was conducted by nested PCR and phytoplasma identification by RFLP analyses, using AluI, RsaI, KpnI and MboI as restriction enzymes. Phytoplasma was detected in three species, Panicum maximum, Brachiaria plantaginea and Brachiaria decumbens based on amplification of 16S rDNA, visualized as specific band in agarose gel. Insects remain on alive on the plants belonging to those three species up to the end of the assays. Thus, the present study showed the possibility of those species as potential alternative hosts to the pathogen and its vector, under natural conditions. The results can contribute for new investigations, in order to understanding the epidemiology of the disease, especially in relation to phytoplasma and vector survival.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:24:07Z : No. of bitstreams: 1 loureiro_es_dr_botfca.pdf: 393758 bytes, checksum: fae8a4e1b680f21d3d03858c5c8608bf (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Com o objetivo de determinar a patogenicidade de diferentes isolados do fungo Metarhizium anisopliae sobre ninfas de Mahanarva fimbriolata foi testada, em laboratório, a patogenicidade de 79 isolados, provenientes de diferentes hospedeiros e regiões do país. Inicialmente, foi realizado um bioensaio para estabelecimento da concentração a ser utilizada nos experimentos de seleção, adotando-se, como padrão, o isolado IBCB 348 de M. anisopliae. Através da Análise de Probit, foi calculada a CL50 obtendo uma concentração de 1,2 x 108 conídios/mL, decorridos 4 dias da pulverização. As avaliações foram realizadas diariamente, observando-se os níveis de mortalidade acumulada (total, confirmada e corrigida) de cada tratamento. Os melhores isolados testados foram IBCB 348; IBCB 351; IBCB 363; IBCB 408; IBCB 410; IBCB 418; IBCB 425 e IBCB 482, os quais apresentaram uma eficiência igual ou superior a 70% de mortalidade confirmada, aos seis dias da pulverização. Os isolados IBCB 348; IBCB 408; IBCB 410 e IBCB 425 foram os que mais produziram conídios em arroz com 2,08 x 108, 1,75 x 108, 2,22 x 108 e 2,30 x 108 conídios/g de arroz pré-cozido, respectivamente, pelo método de bandeja. Foi pulverizado 2kg/ha de arroz+fungo, contendo 1,5 x 1012 conídios/ha, destacando-se os isolados IBCB 348 e IBCB 408 que causaram mortalidade, para ninfas de 100%, respectivamente, aos 15 dias da pulverização. Decorridos 30 dias da pulverização, os isolados IBCB 408 e IBCB 425 apresentaram eficiência de controle de 63 e 62%, respectivamente, para as ninfas e para os adultos foi de 100%, respectivamente. Aos 60 dias da aplicação, o isolado IBCB 425 foi o mais eficiente para controlar as ninfas (48,4%) e para os adultos de M. fimbriolata, os isolados não foram eficientes. Nas avaliações realizadas aos 90 e 120 dias, a população de cigarrinha manteve-se acima do nível de dano econômico... . / This work was carried out evaluate the pathogenicity of different isolates of the fungus Metarhizium anisopliae against nymphs of Mahanarva fimbriolata. The pathogenicity of 79 isolates, provenients from differents hosts and regions of the country, were tested in the laboratory. First, it was performed a bioassay to determine the concentration to be used in the selection experiments, the IBCB 348 isolate of M. anisopliae was used as standard. Evaluations were done daily, observing the levels of mortality (total, confirmed and corrected) of each treatment. The best isolates were IBCB 348; IBCB 351; IBCB 363; IBCB 408; IBCB 410; IBCB 418; IBCB 425 and IBCB 482, which showed an efficiency equal or higher than 70% six days after the pulverization. The isolates IBCB 348; IBCB 408; IBCB 410 and IBCB 425 produced the largest number of conidia with 2,08 x 108; 1,75 x 108; 2,22 x 108 and 2,30 x 108 conidia/g of rice, respectively by the tray method. Was pulverized 2kg/ha de rice+fungus, with 1,5 x 1012 conidia/ha, showing off the isolates IBCB 348 and IBCB 408 that caused a mortality for nymphs of 100%, respectively, 15 days after the pulverization. After 30 days of the pulverization, the isolates IBCB 408 and IBCB 425 showed control efficiency of 63 and 62%, respectively, for the nymphs and for adults the efficiency was 100%, respectively. Sixty day after the application, the isolate IBCB 425 were the most efficients for control nymphs (48%) and for adults of M. fimbriolata the isolates weren't efficients. In the evaluation realized at 90 and 120 days, the speatlebug population was kept above the economic threshold level. The efficiency of the isolates was null for adults and for nymphs, the isolate IBCB 408 showed efficiency of 31%, after ninety days of the pulverization. At 120 days, the efficiency of the isolates was null for nymphs and for adults the maxim efficiency (63%) was... (Complete abstract, click electronic address below).