Made available in DSpace on 2017-07-21T14:13:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbara Justus.pdf: 5067495 bytes, checksum: d064324000b906135c0fa596e41d5911 (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Lavandula dentata L. presents as a small shrub, is native of the Mediterranean, with great pharmacological potential. The objective of this paper was study the morphoanatomy of the leaf, determine its chemical composition, antioxidant activity, antimicrobial activity and evaluate the cytotoxic potential of the volatile oil of L. dentata. Botanical material was collected in the Medicinal Garden of Pharmacy course at the State University of Ponta Grossa (Paraná). Diacytic stomata images obtained by optical microscopy and scanning electron microscopy, were evidenced only on the abaxial surface of the leaf blade, non-glandular branched trichomes, glandular capitate and peltate, dorsiventral mesophyll and concave-convex truncated midrib on the abaxial surface. The yield of volatile oil obtained by hydrodestilation of the aerial parts was 0.85%, and showed 1-8 cineole as main component identified by GC/MS. Volatile oil of L. dentata showed an antioxidant activity similar to rutin and gallic acid when analyzed by phosphomolibdenium method. However, by the free radical DPPH and ABTS method, it showed a slight potential antioxidant. The volatile oil showed antimicrobial activity against gram-positive, gram-negative bacteria strains and Candida albicans, by broth microdilution. This study, for the first time, shows the cytotoxic effect of the vapor phase of the volatile oil from L. dentata on lung tumor cell line Calu-3. The IC50 calculated for liquid phase of volatile oil was 388.84 μg.mL-1.The fraction of oil vapor in a concentration of 750 μg.mL-1 reduced the cell viability of Calu-3 significantly, based on three different techniques, the MTT reduction assays, SRB and DNA-PI. The results of morphological evaluations by Rosenfeld dyes, acridine orange/ethidium bromide and Hoescht, as well as the lactate dehydrogenase release assay gave an indication that the oil is cytotoxic to induce the cells death by necrosis, which was confirmed by the fact that the oil does not generate phosphatidylserine externalization. However, due to reports in literature, the expression of P-glycoprotein, which confers drug resistance in tumors and block apoptosis, in Calu-3 cells can not confirm the absence of this mechanism as well. The oil vapor promoted cell cycle arrest in G0/G1 when the DNA content was evaluated by flow cytometry. Considering these results, additional studies may be recommended, in order to use the volatile oil L. dentata as material for the pharmaceutical industry, with particular emphasis on the use of oil vapor in the lung cancer treatment therapy via inhalation. / Lavandula dentata L. é um pequeno arbusto nativo do Mediterrâneo. É conhecida popularmente como lavanda e alfazema e é utilizada na medicina popular como antidiabético, anti-hipertensivo e antiprotozoário. O objetivo do presente trabalho foi realizar o estudo da morfoanatomia foliar e caulinar, bem como determinar a composição química, avaliar a atividade antioxidante, o efeito antimicrobiano e o potencial citotóxico do óleo volátil de L. dentata. As partes vegetativas aéreas foram coletadas no Horto Medicinal do Curso de Farmácia da Universidade Estadual de Ponta Grossa (Paraná). A partir dos métodos usuais de microscopia óptica e de microscopia eletrônica de varredura, foram evidenciados estômatos diacíticos apenas na face abaxial do limbo foliar, tricomas tectores ramificados e glandulares capitados e peltados, mesofilo dorsiventral e nervura central côncava-convexa truncada na face abaxial. Além disso, um caule com formato quadrangular, sistema vascular típico e calotas esclerenquimáticas bem desenvolvidas nas quatro arestas.A partir das folhas e caules, por hidrodestilação, obteve-se um teor de 0,85% de óleo volátil. O principal componente do óleo volátil identificado por CG/MS foi o 1-8 cineol. Pelo método fosfomolibdênico, o óleo volátil de L. dentata revelou uma capacidade antioxidante semelhante à rutina e ao ácido gálico. Entretanto, pelo método do radical livre DPPH e do ABTS, foi observado um leve potencial antioxidante. O óleo volátil de L. dentata apresentou um efeito antimicrobiano frente às cepas de bactérias grampositivas, gram-negativas e de Candida albicans, por meio da microdiluição em caldo. Neste trabalho foi evidenciado o efeito citotóxico tanto da fase líquida quanto da fase vapor do óleo volátil de L. dentata sobre a linhagem tumoral pulmonar Calu-3. O IC50 calculado para fase líquida do óleo volátil de L. dentata foi de 388,84 μg.mL-1. A fração da fase vapor do óleo na concentração de 750 μg.mL-1 reduziu a viabilidade celular da linhagem Calu-3 significativamente, efeito que foi corroborado por três diferentes técnicas, redução do MTT, SRB e DNA-PI. Os resultados das avaliações morfológicas empregando os corantes de Rosenfeld, alaranjado de acridina/brometo de etídio e Hoescht, bem como pelo ensaio de liberação de lactato desidrogenase são sugestivos de que a citotoxicidade da fase de vapor óleo está relacionada a indução de morte celular por necrose, o que foi confirmado pelo fato do vapor do óleo não gerar externalização de fosfatidilserina. Todavia, devido a relatos na literatura de que as células Calu-3 expressam a proteína glicoproteína-P, a qual confere em tumores resistência a fármacos e bloqueio da apoptose, não se pode excluir a indução de morte celular por esse mecanismo também. O vapor do óleo de lavanda promoveu parada do ciclo celular em G0/G1 quando o conteúdo de DNA foi avaliado por citometria de fluxo. Considerando esses resultados, estudos adicionais podem ser recomendados, visando à utilização do óleo volátil de L. dentata como matéria prima pela indústria farmacêutica, com especial destaque para o emprego da fase vapor do óleo volátil na terapia de tratamento de câncer de pulmão por via inalatória.

Made available in DSpace on 2015-04-17T15:03:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1319855 bytes, checksum: c9da3a0b2d2daa085371bfaec1a3a590 (MD5) Previous issue date: 2014-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The demand for fresh foods, with lower calories, high nutritional values and easily prepared has been increased the consumption of minimally processed vegetables. However, because the intense handling these products has been considered a potential problem to the microbiological safety, related mainly to the presence of psychrotrophic pathogenic and spoilage bacteria. The sanitization is considered a critical processing step for minimally processed vegetables, although some of the synthetic sanitizers allowed for the use in vegetables are cited as responsible for undesirable effects to consumers. In this context, as alternative to the synthetic sanitizers arise the essential oils, whose antimicrobial action mechanism is attributed, many times, to their majority compounds. Regarding these aspects, this study aimed to evaluate the potential application of carvacrol and 1,8-cineole against some strains of minimally processed vegetables contaminant bacteria (Listeria monocytogenes ATCC 7644, Aeromonas hydrophila INCQS 7966 and Pseudomonas fluorescens ATCC 11253), in mixed culture, by determining the values of Minimum Inhibitory Concentration (MIC), the index of Fractional Inhibitory Concentration (FIC), as well as by assessing the efficacy of the application of these compounds in inhibiting the growth and survival of the mixed bacterial inoculum in vegetable broth and in leafy vegetables. Moreover, it was performed the assessment of possible damage caused by the tested compounds in the morphology of the bacterial cells by the analysis of confocal microscopy and scanning electronic microscopy. MIC values of carvacrol and 1,8-cineole ranged from 1.25 e 40μL/mL, respectively. The FIC index against the mixed bacterial inoculum was 0.25, suggesting a synergic interaction between the tested compounds. The application of the compounds alone or combined in sub-inhibitory concentrations in vegetable broth caused a significant decrease (p <0.05) in counts (CFU/mL) of the tested bacteria over 24 h. The exposure of vegetables to the compounds for only 5 min also caused a significant reduction (p < 0.05) in counts of the tested bacteria. The observations of bacterial cell morphology suggest that the compounds carvacrol and 1,8-cineole alone or combined in sub-inhibitory concentrations, cause damage to the cell viability, and change the permeability of the cytoplasmic membrane and the cell surface, with the appearance of roughness appearance and like-vesicles structures. These results show that carvacrol and 1,8-cineole possess strong inhibitory effect of the growth and survival of bacteria associated with minimally processed vegetables when tested in mixed culture. Still, these data confirm that constituents of essential oils, with different molecular structures, when applied in combination can replace traditional synthetic sanitizing used in minimally processed vegetables allowing reaching the balance between the demand for microbiological safety and sensory acceptability of these products. / A demanda por alimentos frescos, de baixo teor calórico, elevados valores nutricionais e de fácil preparo, tem elevado o consumo de hortaliças minimamente processadas. Entretanto, devido a sua intensa manipulação estes produtos têm sido considerados um potencial problema de segurança microbiológica, envolvendo principalmente bactérias psicrotróficas patogênicas e deteriorantes. A sanitização é considerada uma etapa crítica do processamento deste de hortaliças minimamente processadas, embora alguns dos sanitizantes sintéticos permitidos para uso em vegetais sejam citados como responsáveis por efeitos indesejáveis para o consumidor. Neste sentido, como alternativa aos sanitizantes sintéticos, surgem os óleos essenciais, cujo potencial antimicrobiano é atribuído, muitas vezes, aos seus compostos majoritários. Diante deste contexto, este estudo objetivou avaliar o potencial da aplicação dos constituintes carvacrol e 1,8-cineol na inibição de cepas de bactérias contaminantes de vegetais minimamente processados (Listeria monocytogenes ATCC 7644, Aeromonas hydrophila ATCC 7966 e Pseudomonas fluorescens ATCC 11253), em inóculo misto, através da determinação dos valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM), do índice de Concentração Inibitória Fracionada (CIF), bem como da influência da aplicação desses compostos na inibição do crescimento e sobrevivência do inóculo misto bacteriano em caldo vegetal e em vegetais folhosos. Além disso, foi realizada a avaliação dos possíveis danos causados pelos compostos testados à morfologia das células bacterianas através de análises de microscopia confocal e microscopia eletrônica de varredura. Os valores de CIM do carvacrol e do 1,8-cineol foram 1,25 e 40 μL/mL, respectivamente. O índice de CIF frente ao inóculo bacteriano misto foi 0,25, sugerindo uma interação sinérgica entre os compostos testados. A aplicação dos compostos isolados ou combinados em concentrações sub-inibitórias em caldo vegetal causou uma diminuição significativa (p < 0,05) na contagem das bactérias ensaiadas (UFC/mL) ao longo de 24 h. A exposição das hortaliças aos constituintes por apenas 5 min também causou uma redução significativa (p < 0,05) nas contagens dos micro-organismos testados. As observações morfológicas das células bacterianas sugerem ainda que os compostos carvacrol e 1,8-cineol, isolados ou combinados em concentrações sub-inibitórias, ocasionam danos à viabilidade celular, bem como alteração da permeabilidade da membrana citoplasmática e da superfície celular, com o aparecimento de rugosidades e estruturas semelhantes a vesículas. Estes resultados mostram que carvacrol e 1,8-cineol possuem considerável poder de inibição do crescimento e sobrevivência de bactérias contaminantes de hortaliças minimamente processadas, quando ensaiadas em inóculo misto. Ainda, confirmam que constituintes de óleos essenciais, com diferentes estruturas moleculares, quando aplicados em combinação podem substituir sanitizantes sintéticos clássicos utilizados em vegetais, possibilitando o alcance do equilíbrio entre a demanda pela segurança microbiológica e a aceitabilidade sensorial destes produtos.

A Mata Atlântica é considerada uma das grandes prioridades para a conservação de biodiversidade em todo o continente americano. Este bioma é um dos oito hotspots do planeta e caracteriza-se pelo alto grau de endemismo e pela alta diversidade de espécies que encerra. As abelhas Euglossini estão restritas à região Neotropical, com uma faixa de distribuição que se estende desde o Norte do México até a província de Córdoba, na Argentina. As espécies dessa tribo são abundantes em florestas tropicais úmidas/chuvosas e florestas subtropicais da América Central e América do Sul onde ocorrem em maior diversidade. Em virtude do alto impacto causado pelas ações humanas em áreas de Mata Atlântica e o pouco que se conhece sobre sua diversidade, este trabalho propõe um estudo geral sobre a estrutura das comunidades de espécies de Euglossini presentes em uma área de planície litorânea continental, Parque Estadual da Serra do Mar - Núcleo Picinguaba (PESM), e uma área insular, Parque Estadual da Ilha Anchieta (PEIA), no município de Ubatuba, norte de São Paulo, Brasil. O PESM abrange uma área de aproximadamente 47.500 hectares e quase todos os ecossitemas da Mata Atlântica são encontrados em seus domínios. O PEIA cobre toda a extensão da Ilha Anchieta (828 hectares), distante cerca de 600 m do continente. As coletas foram realizadas mensalmente, de Agosto/2007 a Julho/2009, com o uso de 14 compostos aromáticos utilizados como iscas artificiais para a atração de machos, além de indivíduos coletados em flores. Mil quinhentos e setenta e seis espécimes (73 fêmeas e 1503 machos), pertencentes a 24 espécies, foram registrados no presente trabalho. A espécie mais abundante foi Euglossa cordata (36,4%), seguida por Euglossa iopoecila (13,9%) e Euglossa sapphirina (13,3%). Dezoito espécies foram amostradas na Ilha Anchieta, sendo que quatro delas foram exclusivas desta área, ao passo que 20 espécies foram amostradas no PESM e seis delas foram registradas apenas neste local. Na Ilha Anchieta, Eg. cordata representou 63,2%, quase dois terços do total de espécies coletadas. Já em Picinguaba, Eg. iopoecila (23,0%) e Eg. sapphirina (21,0%) foram as duas espécies dominantes. A espécie Eg. iopoecila, a mais abundante na área continental, não foi registrada na llha e Eg. sapphirina, a segunda espécie mais frequente no PESM, foi representada apenas por nove indivíduos na Ilha Anchieta e por 200 em Picinguaba. Estes dados sugerem que essas duas espécies podem atuar como bioindicadores de ambientes preservados, como sugerido para outras espécies de Euglossini. Por outro lado, alguns autores evidenciaram que Eg. cordata é uma espécie favorecida por ambientes perturbados, o que pode estar associado à sua alta abundância na Ilha Anchieta. Dados de literatura mostram que há um sinal evidente de perturbação ambiental, além da perda de espécies, é a dominância de algumas espécies. A Ilha Anchieta apresenta um longo histórico de ocupação humana e diversas espécies de plantas e animais foram introduzidos em seus domínios. / The Atlantic Forest is considered as one of the highest priorities for the conservation of biodiversity in the American continent. This biome is one of the eight biodiversity hotspots in the world and is characterized by high species diversity and endemism. Euglossini bees are restricted to the Neotropics, with a geographic range that extends from northern Mexico to the Córdoba Province in Argentine. Species from this tribe are abundant in humid and rainy tropical forests and in sub-tropical forests of Central and South America, where their diversity is high. Due to the high impact caused by human activities in the Atlantic Forest and the poor knowledge on its biodiversity, in the present study we assessed the community structure of the Euglossini in a coastal lowland area: Parque Estadual da Serra do Mar - Núcleo Picinguaba (PESM); and in an insular area: Parque Estadual da Ilha Anchieta (PEIA), Ubatuba, both located in northern São Paulo State, Brazil. PESM has an area of approximately 47.500 ha and almost all ecosystems of the Atlantic Forest are found within its domains. PEIA covers all the extension of the Anchieta Island (828 ha), about 600 m away from the continent. Sampling was carried out monthly, from August 2007 to July 2009, using artificial baits with 14 aromatic compounds to attract males, as well as by collecting individuals on flowers. One thousand five hundred and seventy-six specimens (73 females and 1,503 males), represented by 24 species were recorded. The most abundant species was Euglossa cordata (36.4%), followed by Euglossa iopoecila (13.9%) and Euglossa sapphirina (13.3%). Eighteen species were sampled on Anchieta Island and four of them were exclusive to this area; whereas 20 species were sampled in PESM and six of them were only recorded there. On Anchieta Island, E. cordata represented almost two thirds of the total species collected (63.2%). In Picinguaba, E. iopoecila (23.0%) and E. sapphirina (21.0%) were the dominant species. E. iopoecila, the most abundant species in the continental area, was not recorded on the island, and E. sapphirina, the second most frequent species in PESM, was represented only by nine individuals on Anchieta Island and by 200 in Picinguaba. Results suggest that these two species may act as bioindicators of preserved environments, as suggested for other Euglossini species. However, some authors evidenced that E. cordata is favored by disturbed environments, which may be associated with its high abundance on Anchieta Island. Other studies show that an evident sign of environmental perturbation, besides species loss, is the dominance of some species. Anchieta Island exhibits a long history of human occupation and several plant and animal species were introduced there.

A Mata Atlântica é considerada uma das grandes prioridades para a conservação de biodiversidade em todo o continente americano. Este bioma é um dos oito hotspots do planeta e caracteriza-se pelo alto grau de endemismo e pela alta diversidade de espécies que encerra. As abelhas Euglossini estão restritas à região Neotropical, com uma faixa de distribuição que se estende desde o Norte do México até a província de Córdoba, na Argentina. As espécies dessa tribo são abundantes em florestas tropicais úmidas/chuvosas e florestas subtropicais da América Central e América do Sul onde ocorrem em maior diversidade. Em virtude do alto impacto causado pelas ações humanas em áreas de Mata Atlântica e o pouco que se conhece sobre sua diversidade, este trabalho propõe um estudo geral sobre a estrutura das comunidades de espécies de Euglossini presentes em uma área de planície litorânea continental, Parque Estadual da Serra do Mar - Núcleo Picinguaba (PESM), e uma área insular, Parque Estadual da Ilha Anchieta (PEIA), no município de Ubatuba, norte de São Paulo, Brasil. O PESM abrange uma área de aproximadamente 47.500 hectares e quase todos os ecossitemas da Mata Atlântica são encontrados em seus domínios. O PEIA cobre toda a extensão da Ilha Anchieta (828 hectares), distante cerca de 600 m do continente. As coletas foram realizadas mensalmente, de Agosto/2007 a Julho/2009, com o uso de 14 compostos aromáticos utilizados como iscas artificiais para a atração de machos, além de indivíduos coletados em flores. Mil quinhentos e setenta e seis espécimes (73 fêmeas e 1503 machos), pertencentes a 24 espécies, foram registrados no presente trabalho. A espécie mais abundante foi Euglossa cordata (36,4%), seguida por Euglossa iopoecila (13,9%) e Euglossa sapphirina (13,3%). Dezoito espécies foram amostradas na Ilha Anchieta, sendo que quatro delas foram exclusivas desta área, ao passo que 20 espécies foram amostradas no PESM e seis delas foram registradas apenas neste local. Na Ilha Anchieta, Eg. cordata representou 63,2%, quase dois terços do total de espécies coletadas. Já em Picinguaba, Eg. iopoecila (23,0%) e Eg. sapphirina (21,0%) foram as duas espécies dominantes. A espécie Eg. iopoecila, a mais abundante na área continental, não foi registrada na llha e Eg. sapphirina, a segunda espécie mais frequente no PESM, foi representada apenas por nove indivíduos na Ilha Anchieta e por 200 em Picinguaba. Estes dados sugerem que essas duas espécies podem atuar como bioindicadores de ambientes preservados, como sugerido para outras espécies de Euglossini. Por outro lado, alguns autores evidenciaram que Eg. cordata é uma espécie favorecida por ambientes perturbados, o que pode estar associado à sua alta abundância na Ilha Anchieta. Dados de literatura mostram que há um sinal evidente de perturbação ambiental, além da perda de espécies, é a dominância de algumas espécies. A Ilha Anchieta apresenta um longo histórico de ocupação humana e diversas espécies de plantas e animais foram introduzidos em seus domínios. / The Atlantic Forest is considered as one of the highest priorities for the conservation of biodiversity in the American continent. This biome is one of the eight biodiversity hotspots in the world and is characterized by high species diversity and endemism. Euglossini bees are restricted to the Neotropics, with a geographic range that extends from northern Mexico to the Córdoba Province in Argentine. Species from this tribe are abundant in humid and rainy tropical forests and in sub-tropical forests of Central and South America, where their diversity is high. Due to the high impact caused by human activities in the Atlantic Forest and the poor knowledge on its biodiversity, in the present study we assessed the community structure of the Euglossini in a coastal lowland area: Parque Estadual da Serra do Mar - Núcleo Picinguaba (PESM); and in an insular area: Parque Estadual da Ilha Anchieta (PEIA), Ubatuba, both located in northern São Paulo State, Brazil. PESM has an area of approximately 47.500 ha and almost all ecosystems of the Atlantic Forest are found within its domains. PEIA covers all the extension of the Anchieta Island (828 ha), about 600 m away from the continent. Sampling was carried out monthly, from August 2007 to July 2009, using artificial baits with 14 aromatic compounds to attract males, as well as by collecting individuals on flowers. One thousand five hundred and seventy-six specimens (73 females and 1,503 males), represented by 24 species were recorded. The most abundant species was Euglossa cordata (36.4%), followed by Euglossa iopoecila (13.9%) and Euglossa sapphirina (13.3%). Eighteen species were sampled on Anchieta Island and four of them were exclusive to this area; whereas 20 species were sampled in PESM and six of them were only recorded there. On Anchieta Island, E. cordata represented almost two thirds of the total species collected (63.2%). In Picinguaba, E. iopoecila (23.0%) and E. sapphirina (21.0%) were the dominant species. E. iopoecila, the most abundant species in the continental area, was not recorded on the island, and E. sapphirina, the second most frequent species in PESM, was represented only by nine individuals on Anchieta Island and by 200 in Picinguaba. Results suggest that these two species may act as bioindicators of preserved environments, as suggested for other Euglossini species. However, some authors evidenced that E. cordata is favored by disturbed environments, which may be associated with its high abundance on Anchieta Island. Other studies show that an evident sign of environmental perturbation, besides species loss, is the dominance of some species. Anchieta Island exhibits a long history of human occupation and several plant and animal species were introduced there.