Reproduction de : Thèse d'exercice : Pharmacie : Nantes : 2009. / Bibliogr.

Includes bibliographical references (leaves 43-46; leaves 52-55). / v, 55, leaves

Zugl.: Berlin, Freie University, Diss., 2008.

PINHEIRO, Sergimar Kennedy de Paiva. Ontogênese e mecanismo de secreção em coléteres de Morinda citrifolia L. (Rubiaceae). 2017. 46 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia de Recursos Naturais)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Coordenação PPGBiotec (ppgbiotec@ufc.br) on 2017-08-24T13:03:44Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_skppinheiro.pdf: 3301586 bytes, checksum: 11ae687ec67a0797b479bbd747ec3506 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-09-05T21:25:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_skppinheiro.pdf: 3301586 bytes, checksum: 11ae687ec67a0797b479bbd747ec3506 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-05T21:25:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_skppinheiro.pdf: 3301586 bytes, checksum: 11ae687ec67a0797b479bbd747ec3506 (MD5) Previous issue date: 2017 / Colleters are structures secretory present in more than 60 families of angiosperms, whose function is protect the leaf primordium against physical and chemical damages. The colleters develop from cells of the fundamental meristem and of the protoderm, for differentiation and cellular reorganization for the development of the mature structure. After cell differentiation the secretory process begins. The Secretion is a complex phenomenon of synthesis, separation and isolation substances, as well as release or extracellular elimination. In this context, the external periclinal wall plays a fundamental role in the passage of secretion into the external environment. The colleters have mixed origin, developing from the protoderm and the fundamental meristem. These structures are present on the adaxial side of the stipules and have a morphology of the standard type. During development, the colleters of Morinda citrifolia L. (Rubiaceae) go through four stages of development defined by structural and anatomical changes: Undifferentiated, pre-secretory, secretory and senescent. At the undifferentiated stage, the secretory structures studied are characterized by small protuberances at the base of the adaxial surface of the stipules. In the pre-secretory stage, the epidermis begins its differentiation. In the following stages, the colleters present axis central parenchymatic covered by epidermal cells in palisade. The secretion is abundant at the vegetative apex impregnating the leaf primordium and stipules. Thus, the objective of this work is describe the ontogenesis of the coléteres of Morinda citrifolia, as well as the secretion mechanism using scanning electron microscopy techniques, light field microscopy (including histochemical tests) and laser confocal microscopy for a better understanding of the secretory process. Samples were prepared according to usual techniques for microscopy. The histochemical tests evidenced the presence of mucilage and proteins in the secretion. Lipids were observed in the cuticle and cuticular extracts, however, neither starch nor phenol was evident. Were observed two mechanisms of secretion: Rupture of cuticle and passage of secretion through the cuticle. With the end of the secretory process, the coléter enters a senescent stage, being characterized by the wrinkling of the cuticle and color change. / Coléteres são estruturas secretoras presentes em mais de 60 famílias de angiospermas, cuja função é proteger o primórdio foliar contra danos físicos e químicos. Os coléteres tem origem mista e se desenvolvem a partir de células do meristema fundamental e da protoderme, pela diferenciação e reorganização celular para o desenvolvimento da estrutura madura. Após a diferenciação celular o processo secretor se inicia. A secreção é um fenômeno complexo de síntese, separação e isolamento substâncias, assim como liberação ou eliminação extracelular. Nesse contexto, a parede periclinal externa possui papel fundamental na passagem de secreção para o meio externo. Tais estruturas estão presentes na face adaxial das estípulas e possuem morfologia do tipo padrão. Durante o desenvolvimento, os coléteres de Morinda citrifolia L. (Rubiaceae) passam por quatro estágios de desenvolvimento definidos por mudanças estruturais e anatômicas: indiferenciado, pré-secretor, secretor e senescente. No estágio indiferenciado, as estruturas secretoras estudadas são caracterizadas por pequenas protuberâncias na base da superfície adaxial das estípulas. No estágio pré-secretor a epiderme inicia sua diferenciação. Nos estágios seguintes, os coléteres apresentam eixo central parenquimático revestido por células epidérmicas em paliçada. A secreção é abundante no ápice vegetativo impregnando o primórdio foliar e estípulas. Assim, o objetivo deste trabalho foi descrever a ontogênese dos coléteres de Morinda citrifolia, bem como o mecanismo de secreção utilizando técnicas de microscopia eletrônica de varredura, microscopia óptica de campo claro (incluindo testes histoquímicos) e microscopia confocal a laser visando um maior entendimento em relação ao processo secretor. As amostras foram preparadas de acordo com técnicas usuais para microscopia. Os testes histoquímicos evidenciaram a presença de mucilagem e proteínas na secreção. Lipídeos foram observados na cutícula e extratos cuticulares, contudo, não foi evidenciado amido nem fenol. Foram observados dois mecanismos de secreção: rompimento de cutícula e passagem da secreção através da cutícula. Com o fim do processo secretor, o coléter entra em estágio senescente, sendo caracterizado pelo enrugamento da cutícula e mudança de cor.

Evalúa la actividad tóxica, genotóxica y citotóxica del fruto de Morinda citrifolia (NONI) cultivada en el Perú. Se realizó en el Laboratorio de Farmacología y Bioterio de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Se usaron 21 ratas albinas cepa Holtzman hembras, 48 ratones hembras cepa Balb/c y erizos de mar del género Tetrapygus niger. La toxicidad a dosis repetidas se realizó en ratas distribuidas al azar en 3 grupos, el primer grupo recibió solución salina fisiológica 5mL/kg, el segundo grupo recibió extracto etanólico a 1000mg/kg y el tercer grupo recibió extracto acuoso a 1000mg/kg, asimismo se evaluó posibles cambios hematológicos, bioquímicos, histopatológicos y variaciones en el peso corporal. La genotoxicidad se realizó en 8 grupos de 6 ratones, buscándose la presencia de micronúcleos en células rojas lo que fue expresado en porcentaje. La citotoxicidad se llevó a cabo en huevos fertilizados de erizos de mar observándose variación e inhibición en los estadíos de desarrollo. En ratas se observó disminución del peso corporal en 6% y 7% correspondiente al grupo acuoso y etanólico, y ausencia de variación en los parámetros hematológicos, bioquímicos e histopatológicos. Se observó la presencia de micronúcleos entre 10% y 23%, para el grupo tratado con el extracto acuoso y etanólico respectivamente, con respecto al control positivo quien afectó un 100% a los animales que recibieron tratamiento (p < 0,05). Los dos extractos evaluados inhibieron el desarrollo de los huevos fertilizados de erizos de mar. Se concluye que los extractos del fruto de Morinda citrifolia no poseen actividad tóxica, ni genotóxica pero si poseen actividad citotóxica en huevos de erizo de mar. / Tesis

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-06-17T12:45:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO JOELICIA LIMA.pdf: 2042481 bytes, checksum: d52fa674c9df8397d7ced282b6d5d17c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-17T12:45:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO JOELICIA LIMA.pdf: 2042481 bytes, checksum: d52fa674c9df8397d7ced282b6d5d17c (MD5) Previous issue date: 2015-05-29 / CAPEs / Morinda citrifolia L. (Noni) é uma planta associada a diversas propriedades biológicas relevantes, tais como atividade anticancerígena, imunomoduladora, antioxidante, anti-inflamatória, dentre outras. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antibacteriana de extratos orgânicos de M. citrifolia frente à Staphylococcus aureus e Escherichia coli, na perspectiva de que os mesmos possam ser aplicados na conservação de alimentos. Diferentes partes de Morinda citrifolia (casca, folha, semente e raiz) foram coletadas no município de Chã Grande, Pernambuco, Brasil. Os extratos orgânicos foram obtidos pelo método de esgotamento a frio com extrações sucessivas seguindo a série eluotrópica dos solventes (ciclohexano, clorofórmio, acetato de etila, etanol e metanol), na proporção 1:10 p/v. O teste de atividade antibacteriana com os extratos foi realizado pelo método de difusão em disco de papel utilizando Staphylococcus aureus ATTC 6538 e Escherichia coli ATTC 8739 como micro-organismos teste, e em seguida determinou-se a CMI e CMB . Nenhum dos extratos inibiu o crescimento de E. coli e apenas os extratos da raiz foram ativos para S. aureus. O grau de turvação e a intensidade da cor proporcionados pelos extratos durante a determinação da CMI não permitiram obtenção de resultados neste teste. Quanto a concentração mínima bactericida (CMB), frente a S. aureus, os extratos da raiz em acetato de etila e ciclohexano apresentaram valores de 15 mg/mL, enquanto em clorofórmio e etanol foram de 30 mg/mL. A composição de metabólitos secundários dos extratos ativos foi avaliada por cromatografia em camada delgada (CCD) e líquida de alta eficiência (CLAE). Em CCD foram identificados padrões de bandas distintos para os extratos, sendo verificadas bandas sugestivas para flavonóides e cumarinas. Nos ensaios em CLAE foram visualizados picos correspondentes aos padrões de quercetina e cafeína. Conclui-se que entre as partes da planta nas condições estudadas, apenas a raiz apresentou atividade antibacteriana na inibição de S. aureus, sendo os extratos da raiz em acetato de etila e ciclohexano os mais eficazes. Esta é a primeira descrição dos compostos identificados em CLAE para a raiz da noni. Estudos posteriores podem aumentar o conhecimento a respeito da composição fitoquímica desta planta. / Morinda citrifolia L. (Noni) is one plant associated with different biological properties relevant, such as anticancer activity, immunomodulator, antioxidant, anti-inflammatory, among others. This study aimed to evaluate the antibacterial activity of organic extracts of M. citrifolia against Staphylococcus aureus and Escherichia coli, on the perspective that they can be applied in food preservation. Different parts of Morinda citrifolia (bark, leaves, seeds and roots) were collected near the town of Chã Grande, Pernambuco, Brazil. The organic extracts were obtained by cold exhaustion method with successive extractions following eluotropic series of solvents (cyclohexane, chloroform, ethyl acetate, ethanol and methanol), 1:10 w / v. The test of antibacterial activity was conducted by the method of diffusion in paper disc using Staphylococcus aureus ATCC 6538 and Escherichia coli ATCC 8739 as test microorganisms and then determined the MIC and MBC. None of the extracts inhibited the growth of E. coli and only the root extracts were active against S. aureus. The degree of turbidity and the color intensity provided by extracts during the determination of the MIC did not permit obtaining the test result. With respect to minimum bactericidal concentration (MBC), against S. aureus, the root extracts of ethyl acetate and cyclohexane had 15 mg/ml values, while in chloroform and ethanol were 30 mg/ml. The composition of secondary metabolites of active extracts was evaluated by thin layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC). In TLC were identified different band standards for the extracts and analysis bands suggestive for flavonoids and coumarins. In tests HPLC were displayed peaks corresponding to the standards of quercetin and caffeine. It is concluded that between the parts of the plant under the conditions tested, only the root showed antibacterial activity in the inhibition of S. aureus, and the root extracts in ethyl acetate and cyclohexane are the most effective. This is the first description of these identified compounds by HPLC for the root of noni. Further studies can increase knowledge about the phytochemical composition of this plant.

COSTA, Andrea Santos. Avaliação da estabilidade e da toxicidade pré-clínica de uma proteína isolada de sementes de noni (Morinda citrifolia L.), como etapas preliminares para seu uso terapêutico em humanos. 2016. 98 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-03-24T15:54:58Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_ascosta.pdf: 3430301 bytes, checksum: edcecea042eff0227ceefe3ae415e773 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-03-24T22:21:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_ascosta.pdf: 3430301 bytes, checksum: edcecea042eff0227ceefe3ae415e773 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T22:21:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_ascosta.pdf: 3430301 bytes, checksum: edcecea042eff0227ceefe3ae415e773 (MD5) Previous issue date: 2016 / Morinda citrifolia L. (noni) is a medicinal plant that has been reported to have a broad range of health benefits for cancer, infection, hypertension and inflammation. Previous reports have demonstrated that a lipid transfer protein isolated from Morinda citrifolia L. seeds, named McLTP1, displays anti-inflammatory activity in mice when administered by oral route, suggesting that this protein has potential to act as a new active principle for the development of an anti-inflammatory drug. McLTP1 was isolated from the noni seed meal through trichloroacetic acid (2.5%) precipitation and ultrafiltration. In this work, we carried out a storage stability and toxicity study of the McLTP1 and investigated its capacity to reach the systemic circulation, as well as its duration of the antinociceptive effect after oral administration. The McLTP1 storage for 1, 3 and 6 months at -20, 4 and 25 ° C, protected from light incidence, did not change its appearance, suspension, secondary structure and antinociceptive activity. McLTP1 prove to be capable of reaching a systemic circulation being detected up to 12 hours after the administration and maintaining its antinociceptive effect at the same time. There was neither significant change in mice’s gross behavior and toxicity signs throughout the experimental period (single and repeated dose). Mice body weight as well as haematological, biochemical and histopathological parameters were not affected by daily administration of McLTP1 (8mg/kg). It was not found any sign of cytotoxicity using cell line of human hepatocarcinoma (HepG2/C3a). In conclusion, these results contribute to the safety assessment of McLTP1 for human use in treatment of inflammation and pain. / Morinda citrifolia L. (Noni) é uma espécie vastamente utilizada como agente terapêutico em diversas partes do mundo, incluindo o Brasil. Recentemente nosso grupo de pesquisa isolou a partir das sementes dessa espécie uma proteína transferidora de lipídeos, denominada McLTP1, com ações terapêuticas promissoras em modelos de nocicepção e inflamação. As atividades de McLTP1 foram também observadas após o tratamento de camundongos com a proteína pela via oral. Este trabalho objetivou avaliar a estabilidade de McLTP1 em diferentes condições de armazenamento, seu período de ação antinociceptiva, além de avaliar a sua toxicidade pré-clínica utilizando guidelines sugeridos pela OECD (Organisation for Economic Co-operation and Development). McLTP1 foi isolada a partir de sementes de noni seguindo um protocolo previamente estabelecido. O armazenamento de McLTP1 por 1, 3 e 6 meses a -20, 4 e 25 °C, protegida da incidência de luz, não foi capaz de promover alterações em sua aparência, suspendabilidade, estrutura secundária e atividade antinociceptiva, cuja potência de efeito foi estatisticamente igual àquela obtida no grupo controle tratado com a proteína não-armazenada. No armazenamento de McLTP1 sem proteção da luz foram observadas alterações na cor, mudanças significativas na suspendabilidade já no primeiro mês, visto que o teor de proteínas foi significativamente reduzido em relação à proteína não armazenada, bem como na potência de efeito farmacológico. McLTP1 apresentou efeito biológico mesmo após 12 horas de administração, no qual ainda foi verificada redução significativa do número de contorções abdominais em camundongos e proteína disponível na circulação sistêmica nos animais tratados, comprovada por imunodetecção. Nos testes de toxicidade em dose única (doses de 8 e 80 mg/kg) e repetidas (8 mg/kg), não foram observadas alterações no ganho de peso, consumo de ração, parâmetros hematológicos e bioquímicos dos camundongos. A análise histológica também mostrou que a arquitetura de diversos órgãos também foi preservada. Também não foram observadas alterações na viabilidade celular em cultura de células HepG2/C3a no teste de citotoxicidade. Os dados obtidos estabeleceram condições ideais para o armazenamento de McLTP1 e forneceram bases relevantes para o seu uso como princípio ativo para o tratamento da inflamação e da dor.

SOUZA, Adson Ávila de. McLTP1 (Morinda citrifolia LIPID TRANSFER PROTEIN 1): efeito antimicrobiano in vitro e atividade protetora sobre a sepse induzida em camundongos. 2016. 117 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-23T21:39:38Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_aasouza.pdf: 2447488 bytes, checksum: 29d7cdd8e4951ca5cb0f7bf3bbe1e1f4 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-26T18:13:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_aasouza.pdf: 2447488 bytes, checksum: 29d7cdd8e4951ca5cb0f7bf3bbe1e1f4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-26T18:13:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_aasouza.pdf: 2447488 bytes, checksum: 29d7cdd8e4951ca5cb0f7bf3bbe1e1f4 (MD5) Previous issue date: 2016 / Microbial resistance is a major public health problem of this century, that has led to increased concern of severe sepsis cases in intensive care units. Due to the nonspecific therapy and the absence of drugs approved for sepsis treatment, new therapeutic approaches has been demanded. Among these approaches, plant antimicrobial peptides have emerged as promising molecules with a potential therapeutic intervention in human health. Recently, our research group isolated a lipid transfer protein type 1 (McLTP1 - UniProt Accession Number: C0HJH5) from Morinda citrifolia L. seeds (noni). This study aimed to evaluate the antibacterial and antifungal potential of McLTP1 against species of clinical concern and investigate its protective effect in mice subjected to sepsis. McLTP1 was isolated from noni seeds crude extract by protein fractionation with trichloroacetic acid 2.5% and ultrafiltration in 30 kDa membrane. McLTP1 antimicrobial properties were evaluated in vitro against planktonic cells and biofilm of Candida spp., gram-positive and gram-negative bacteria species in 96-well plates. In addition, it was evaluated the effect of McLTP1 on bacterial virulence factors and its modulatory properties on clinical antimicrobial drugs. Sepsis in mice was induced by cecal ligation and puncture model, being evaluated the survival rate, body weight and fresh organ weights, haematological parameters and antipyretic effect in animals treated intraperitoneally and orally with McLTP1 (8 mg/kg). Although McLTP1 was not able to inhibit Candida spp. biofilm formation, McLTP1 antifungal activity was observed through growth inhibition of Candida parapsilosis planktonic cells at 25 μg/mL (52.72%; p < 0.05), and through the potentiation effect of amphotericin B (0.06 μg/mL; 28.6% inhibition C. parapsilosis growth) when in the cotreatment with McLTP1 (50 μg/mL; 88.1 % inhibition). Regarding to the antibacterial activity, McLTP1 did not inhibit gram-negative bacteria planktonic cells growth, exhibiting effect only against gram-positive bacteria of Staphylococcus genus, being observed inhibitions on planktonic cells ranging from 18.7% (0.78 μg/mL, p < 0.05) to 98.8% (800 μg/mL; p <0.05) and against biofilms from 34.5% (12.5 μg/mL; p < 0.05) to 73.6% (400 μg/mL). McLTP1 reduced the activity of bacterial virulence factors such as catalase and coagulase, and acted in synergism with the antibiotic oxacillin. In prophylactic and therapeutic treatments at a dose of 8 mg/kg by intraperitoneal and oral route, McLTP1 increased the survival of animals with sepsis, showing antipyretic effect within the first hours after sepsis induction. Moreover, McLTP1 significantly reduced leukocytosis condition observed to the animals of vehicle group with sepsis. In conclusion, McLTP1 showed promising antimicrobial properties and protective effects on animals with sepsis, a new activity for this class of proteins, configured as a therapeutic potential candidate to this syndrome. / A resistência microbiana é um dos principais problemas de saúde pública deste século, e que tem levado ao aumento da preocupação dos quadros graves de sepse em unidades de tratamento intensivo. Diante da inespecificidade da terapia e inexistência de drogas aprovadas no tratamento da sepse, tem-se demandado novas abordagens terapêuticas. Dentre essas abordagens, peptídeos antimicrobianos vegetais têm se destacado como moléculas promissoras com possibilidade de intervenção terapêutica na saúde humana. Recentemente, nosso grupo de pesquisa isolou uma proteína transferidora de lipídeos do tipo 1 (McLTP1 - UniProt Accession Number: C0HJH5) das sementes de Morinda citrifolia L (noni). Este trabalho objetivou avaliar o potencial antibacteriano e antifúngico de McLTP1 sobre espécies de interesse clínico e investigar seu efeito protetor em camundongos submetidos à sepse. McLTP1 foi isolada através do fracionamento de proteínas do extrato total das sementes de noni com ácido tricloroacético 2,5% e ultrafiltração em membrana de 30 kDa. Propriedades antimicrobianas de McLTP1 foram avaliadas in vitro sobre crescimento planctônico e biofilmes de espécies de Candida spp. e de bactérias gram-positivas e gram-negativas em placas de 96 poços. Em adição, foi avaliado o efeito de McLTP1 sobre fatores de virulência bacterianos, e sua atividade moduladora sobre antimicrobianos da prática clínica. A sepse em camundongos foi induzida através do modelo de ligadura e perfuração do ceco, sendo avaliados a taxa de sobrevida, peso corpóreo e peso fresco relativo dos órgãos, parâmetros hematológicos e efeito antipirético em animais tratados por via intraperitoneal e oral com McLTP1 (8 mg/kg). Embora McLTP1 não tenha sido capaz de inibir a formação de biofilmes de Candida spp., a natureza antifúngica de McLTP1 foi observada por meio da inibição do crescimento planctônico de C. parapsilosis na concentração de 25 µg/mL (52,72%; p<0,05), e através da potencialização significativa do efeito de anfotericina B (0,06 μg/mL; 28,6% de inibição do crescimento de C. parapsilosis) quando no cotratamento com McLTP1 (50 μg/mL; 88,1% de inibição). Quanto à atividade antibacteriana, McLTP1 não inibiu o crescimento planctônico de bactérias gram-negativas, exibindo efeito contra bactérias gram-positivas do gênero Staphylococcus, sendo observadas inibições sobre células planctônicas variando entre 18,7% (0,78 μg/mL; p<0,05) e 98,8% (800 μg/mL; p<0,05), e sobre biofilmes em 34,5%, (12,5 μg/mL; p<0,05) a 73,6% (400 μg/mL). McLTP1 reduziu a atividade dos fatores de virulência bacterianos catalase e coagulase, e atuou em sinergismo com o antibiótico oxacilina. Em tratamentos profiláticos e terapêuticos na dose de 8 mg/kg pelas vias intraperitoneal e oral, McLTP1 aumentou a sobrevida de animais com sepse, apresentando efeito antipirético já nas primeiras horas após a indução da sepse. Além disso, McLTP1 reduziu significativamente o quadro de leucocitose observado nos animais com sepse do grupo controle. Portanto, McLTP1 possui propriedades antimicrobianas e efeito protetor sobre animais com sepse promissores, fato este inédito para essa classe de proteínas, configurando-se como candidato terapêutico potencial desta síndrome.

FARIAS, Vilmara Albuquerque de. Peptidases cisteínicas do fruto de noni (Morinda citrifolia L.) como agentes coagulantes de leite. 2016. 103 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-07-04T22:32:48Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_vafarias.pdf: 3744946 bytes, checksum: 498727253a7b625743f5ee4f1eb84bae (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-07-04T22:33:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_vafarias.pdf: 3744946 bytes, checksum: 498727253a7b625743f5ee4f1eb84bae (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-04T22:33:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_vafarias.pdf: 3744946 bytes, checksum: 498727253a7b625743f5ee4f1eb84bae (MD5) Previous issue date: 2016 / Milk-clotting is a basic step in the production of the whole cheese. The calf rennet, which has as the main constituent chymosin has been widely used for this purpose since it has high specificity for hydrolysis of the κ-casein. As a result of increased global cheese demand, along with a reduced supply of calf rennet, it has intensified the search for alternative sources. Chymosin produced by genetically modified microorganisms have proven to be an efficient substituent, however, attention has been focused on natural sources of peptidases which may promote different characteristics to the final product. Therefore this study aimed to characterize biochemically the peptidases of the pulp of the fruits of noni, and evaluate their technological potential and possible application in the hydrolysis of milk proteins and the production of cheese. For this, PPN obtained in sodium phosphate buffer 50 mM pH 7.0 was subjected: (i) proteolytic activity assays and (ii) milk-clotting by varying assay conditions and pretreatments PPN; (Iii) Hydrolysis of the total casein and κ-casein, over time analyzed by SDS-PAGE in gels of 15% polyacrylamide; (IV) Cheese production type "rennet". PPN peptidases have optimum pH activity around 6.0 and temperature 50 °C, inhibited by iodoacetamide and E-64. They showed low stability at alkaline pHs and temperatures above 40 °C after incubation for 30 min. Under the effect of divalent ions, proteolytic activity was inhibited by Mn, Co, Cu and Zn, however, it was not affected by Fe, Mg and Ca, either in the presence of NaCl, where there was even a significant increase in activity in all concentrations tested. The clotting activity, a reduction in the MCA (Milk-Clotting Activity) values when that activity occurred at concentrations above 60 mM CaCl2 and 0.1 M NaCl. PPN was able of to hydrolyse the three types of casein (α, β and κ). β- and κ- casein showed greater susceptibility to degradation. The products obtained from the hydrolysis of the κ-casein performed either by PPN as the commercial rennet (Coalhopar) had a mass of approximately 16 kDa, probably corresponding to the peptide para-κ-casein. The cheeses produced by PPN and commercial rennet have similar characteristics as the moisture values, fresh and dry mass, differing in clotting time. Coalhopar coagulated milk in about 3 min, while PPN extended to 8 min. PEN showed a yield (w:w) to about 79.02 g of noni pulp for the production a kilogram of cheese, which is equivalent to a mass of less than whole fruit. / A coagulação do leite é uma etapa básica na produção de todo queijo. O coalho de vitelo, que possui como principal constituinte a quimosina tem sido amplamente utilizado para esta finalidade, por apresentar alta especificidade de hidrólise pela κ-caseína. Em decorrência do aumento da demanda mundial de queijo e a escassez de coalho animal, tem se intensificado a busca por fontes alternativas. Quimosina produzida através de microrganismos geneticamente modificados provaram ser um substituinte eficiente, no entanto, a atenção tem sido voltada para fontes naturais de peptidases que possam conferir características diferenciadas ao produto final. Diante disso este trabalho objetivou caracterizar bioquimicamente as peptidases da polpa de noni (PPN), bem como avaliar seu potencial tecnológico e possível aplicação na hidrólise das proteínas do leite e na produção de queijos. Para isso, PPN extraídas em tampão fosfato de sódio 50 mM pH 7,0, foi submetido à: (I) Ensaios de atividade proteolítica e de (II) coagulação do leite variando-se as condições do ensaio e os pré-tratamentos de PPN; (III) Hidrólise da caseína total e κ-caseína, analisadas ao longo do tempo através de SDS-PAGE, em géis de 15% de poliacrilamida; (IV) Produção de queijo tipo “coalho”. Peptidases da polpa de noni apresentaram um pH ótimo de atividade em torno de 6,0 e temperatura ótima de 50 °C, sendo inibida por iodoacetamida e E-64. Apresentaram baixa estabilidade em pHs alcalinos e em temperaturas acima de 40 °C, após incubação por 30 min. Sob o efeito de íons divalentes, a atividade proteolítica foi inibida por Mn, Co, Cu e Zn, no entanto, não foi afetada por Fe, Mg e Ca, tampouco na presença de NaCl, onde houve, inclusive, um aumento significativo na atividade em todas as concentrações testadas. Quanto à atividade de coagulação do leite, houve uma redução nos valores de MCA (inglês, Milk-Clotting Activity) quando essa atividade ocorreu na presença de concentrações acima de 60 mM de CaCl2 e 0,1 M de NaCl. PPN foram capazes de hidrolisar os três tipos de caseínas (α, β e κ), com β e κ-caseína apresentando maior susceptibilidade à degradação. Os produtos obtidos a partir da hidrólise da κ-caseína, realizados tanto com PPN quanto pelo coalho comercial (Coalhopar) apresentaram massa de aproximadamente 16 kDa, provavelmente correspondendo ao peptídeo para-κ-caseína. Os queijos produzidos com PPN e coalho comercial apresentam características semelhantes quanto aos valores de umidade, massa fresca e seca, diferindo no tempo de coagulação. Coalhopar coagulou o leite em cerca de 3 min, enquanto que PPN estendeu-se até 8 min. PPN apresentou um rendimento (m:m) cerca de 79,02 g de polpa de noni para a produção de cada quilo de queijo, o que equivale à massa inferior a de um fruto inteiro.

Submitted by Haroudo Xavier Filho (haroudo.xavierfo@ufpe.br) on 2016-04-14T19:07:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Gabriela Dissertação de Mestrado 2015.pdf: 2369379 bytes, checksum: 60202a9729a4a62daf765526ee8273b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-14T19:07:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Gabriela Dissertação de Mestrado 2015.pdf: 2369379 bytes, checksum: 60202a9729a4a62daf765526ee8273b5 (MD5) Previous issue date: 2015-05-28 / Morinda citrifolia Linn. é um arbusto de pequeno porte, que embora originado do sudoeste da Ásia e Austrália detêm poder de adaptação nas mais diversas condições geográficas e climáticas, o suco do fruto é utilizada para diversos fins terapêuticos. Considerando a preocupação com a frequente resistência microbiana principalmente em pacientes imunocomprometidos, além da alta incidência de neoplasias e baixa especificidade dos antineoplásicos disponíveis objetivou-se a triagem fitoquímica, investigação da toxicidade; propriedades antimicrobianas e antitumorais do extrato etanólico de Morinda citrifolia L. A avaliação da toxicidade seguiu a metodologia da Organização para Cooperação Econômica e Desenvolvimento (OECD 423), a triagem fitoquímica foi realizada em cromatografia de camada delgada, a microdiluição em placa de 96 poços, com posterior revelação com resaruzina foi utilizada para os ensaios antimicrobianos e a atividade antitumoral foi investigada in vivo frente ao Carcinoma de Ehrlich e ao Sarcoma 180. Os alcalóides, importante classe de metabólitos secundários, não foram detectados no extrato, por outro lado flavonóides, triterpenos, cumarinas e taninos foram detectados. Apesar da observação de reações de excitabilidade do SNC no screaming hipocrático, o estudo histopatológico dos fígados e rins dos animais só apresentaram leves sinais de toxicidade na dose de 5000 mg/kg, nesta mesma dose o animais apresentaram redução de peso. A mensuração de marcadores bioquímicos e hematológicos não apresentaram variação significativa entre os grupos teste e controle. Não houve óbito em nenhuma das doses nas vias de administração testadas, assim o extrato apresentou DL50 > 5000 mg/kg, tanto pela via oral quanto pela intraperitoneal sendo considerado como não tóxico e pertencente a classe 5, segundo a GHS: Globally Harmonized Classification Systen. No teste antimicrobiano em relação às bactérias, as cepas Gram positivas foram mais sensíveis que as Gram negativas, cepas de Staphylococcus aureus foram inibidas na dose de 512μg/mL, já as de Pseudomonas aeruginosa foram inibidas na dose de 1024 μg/mL. A maioria das cepas de leveduras foram sensíveis; o fungo filamentoso Aspergillus niger não apresentou sensibilidade nas doses testadas. A inibição do crescimento tumoral frente ao Carcinoma de Ehrlich foi mais proeminente na dose 200mg/kg/ip com percentual de inibição de 83,91%, por outro lado frente ao Sarcoma 180 o maior potencial de inibição foi detectado na dose de 100 mg/kg/ip com percentual de 85,86%. Assim conclui-se que o extrato etanólico de Morinda citrifolia possui baixa toxicidade, e resultados promissores como antimicrobiano e agente antitumoral, representando fonte promissora para isolamento de protótipos de novos fármacos para tais finalidades. / Morinda citrifolia Linn. is a small shrub, which though originated from Southeast Asia and Australia hold power of adaptation in diverse geographic and climatic conditions, the fruit juice is used for various therapeutic purposes. Given the concern about the frequent microbial resistance especially in immunocompromised patients, in addition to the high incidence of cancer and low specificity of available antineoplasic drugs aimed to phytochemical screening, investigation of toxicity; antimicrobial and antitumor properties of ethanol extract of Morinda citrifolia L. The evaluation of the toxicity followed the methodology of the Organization for Economic Cooperation and Development (OECD 423), the phytochemical screening was carried out in thin layer chromatography, in 96 well microdilution plate with subsequent development with resaruzina was used for antimicrobial testing and antitumor activity was investigated in vivo against Ehrlich carcinoma and sarcoma 180. Alkaloids, important class of secondary metabolites were not detected in the extract, moreover flavonoids, triterpenes, coumarins and tannins were detected. Despite the observation of excitability of reactions on the Nervous systen in the Hippocratic screening, histopathological study of animal livers and kidneys showed only slight signs of toxicity at the dose of 5000 mg / kg, in the same dose the animals showed weight reduction. The measurement of biochemical and hematological markers not showed significant variation between test and control groups. No deaths occurred in any of the doses tested routes of administration, thus the extract showed LD50> 5000 mg / kg, both orally and by intraperitoneal being considered not toxic and belonging to class 5, according to the GHS: Globally Harmonized Classification Systen . The antimicrobial testing against bacteria, Gram-positive strains were more sensitive than Gram-negative, Staphylococcus aureus were inhibited at a dose of 512μg/mL, the Pseudomonas aeruginosa have been inhibited in a dose of 1024 ug/mL. Most yeast strains were sensitive; the filamentous fungus Aspergillus niger showed no sensitivity in the tested doses. The inhibition of tumor growth compared to Ehrlich carcinoma was more prominent in the dose 200 mg/kg/ip with inhibition percentage of 83.91%, on the other hand against Sarcoma 180 the greatest potential inhibition was detected at the dose of 100 mg/kg/ip with a percentage of 85.86%. Thereforee it is concluded that the ethanol extract Morinda citrifolia has low toxicity, and promising results as an antimicrobial and antitumor agent and promising source for isolation of new drugs prototypes for such purposes.