L’ARN hélicase à boite DEAD de la levure S.cerevisiae Ded1 est une protéine essentielle dont la fonction a été conservée au cours de l’évolution. Ses homologues fonctionnels sont impliqués dans le développement et le cycle cellulaire. Ded1 a longtemps été associée à l’étape de scanning de la région 5’UTR des ARNm au niveau de l’initiation de la traduction. Nous avons utilisé différentes approches comme les co-immunoprécipitations, des analyses de spectrométrie de masse, des tests de complémentation génétique, de séparation des complexes sur gradients de saccharose, des expériences de localisation in situ et d’enzymologie pour montrer que Ded1 interagissait physiquement avec des complexes cytoplasmique et nucléaire de liaison à la coiffe des ARNm. Nous avons également montré que Ded1 peut passer du noyau vers le cytoplasme par différentes voies d’export nucléaire. De façon intéressante, ses partenaires protéines sont capables de stimuler son activité ATPase. De plus, nous avons montré qu’il existait un lien génétique entre Ded1 et ses partenaires. Nous avons également montré que Ded1 colocalise partiellement avec ses partenaires dans des gradients de saccharose, suggérant que Ded1 pourrait être associée à certains mRNPs. Nos résultats encore préliminaires indiquent que Ded1 pourrait s’associer à d’autre ARNs coiffés. Ainsi, Ded1 pourrait remodeler les complexes associés à différentes étapes de la vie des ARN coiffés. / The budding yeast DEAD-box RNA helicase Ded1 is an essential yeast protein that is closely related to a subfamily of DEAD-box proteins that are involved in developmental and cell-cycle regulation. Ded1 is generally considered to be a translation-initiation factor that helps the 40S ribosome scan the mRNA from the 5' 7-methylguanosine cap to the AUG start codon. We have used IgG pulldown experiments, mass spectroscopy analyses, genetic experiments, saccharose gradients, in situ localizations, and enzymatic assays to show that Ded1 is a cap-associated factor that actively shuttles between the cytoplasm and the nucleus. We show that Ded1 physically interacts with various cap-associated factors and that its enzymatic activity is stimulated by these factors. By using various mutated proteins, we show that Ded1 is genetically linked to these factors. Ded1 comigrates with these factors on saccharose gradients, but the peak of Ded1 sediments slightly heavier than for the other factors, which suggests that Ded1 is predominately associated with a subset of the mRNPs. Finally, purification of the protein complexes associated with Ded1 and subsequent analysis by nanoLC-MS/MS indicates that Ded1 is associated with both nuclear and cytoplasmic mRNPs. Preliminary experiements showed that Ded1 can associate with other capped RNA. We conclude that Ded1 may function as a remodeling factor that is needed to form the different complexes associated with the different processing steps of the capped RNA.

Les ARN 5'-triphosphates (TP) et 5'-coiffés sont des molécules très convoitées des biologistes pour des études structurales par cristallographie ou comme outils thérapeutiques. Actuellement, ces oligonucléotides sont produits dans de faibles quantités via des procédés enzymatiques dépendants de la nature du nucléoside situé à l'extrémité 5'. Ces travaux se sont donc inscrits dans l'enjeu majeur de mettre au point une méthode chimique sur support solide qui permette l'accès à ces ARN 5'-fonctionnalisés en quantités importantes et sans restriction de séquences.Ce manuscrit rapporte une nouvelle méthode efficace de synthèse sur support solide d'ARN 5'-TP à grande échelle indépendante du nucléotide situé à l'extrémité 5' ou de la longueur de la séquence ARN. De plus, cette stratégie a été étendue avec quelques modifications à la synthèse d'analogues enzymatiquement plus stables de type: ARN 5'-β,γ-méthylène-TP, -(α-P-thio)-TP et -(α-P-thio)-(β,γ-méthylène)-TP.Une deuxième partie présente la synthèse supportée et l'évaluation antivirale de courts adénylates 2-5A 5'-TP portant des groupements enzymolabiles de type acétalesters en position 3' du ribose. Une dernière partie est consacrée à l'élaboration de nouvelles stratégies pour la synthèse d'ARN 5-coiffés. La première approche est un procédé en deux étapes où la structure coiffe (Gppp) est ajoutée sur support solide suivie d'une N7- méthylation enzymatique en solution, alors que la seconde est une méthode plus directe entièrement chimique. Par ailleurs, le couplage chimique de la coiffe sur les ARN supportés nécessite l'emploi d'un acide de Lewis. Ainsi l'utilisation de chlorures métalliques « verts » produits à partir de métaux de transition extraits de la biomasse a été évaluée dans la réaction du couplage de la coiffe sur les ARN. / 5'-triphosphates RNAand 5'-capped RNA are high valuable molecules which serve as important substrates for structural and mechanistic studies or drugs. To date, these oligonucléotides are produced by enzymatic process in low yields with a weak variability of the 5'-end. To overcome this bottleneck we aimed to develop a chemical access on solid-support of these 5'-functionalized RNA in great amount without any limitations in the RNA sequence.Here, a robust, reproducible, and scalable method for the solid-phase synthesis of 5′-triphosphate RNA is presented. Furthermore, this strategy was extended to produce enzymatic resistant analogs of the triphosphate counterpart like: 5'-β,γ-methylene-TP, -(α-P-thio)-TP et -(α-P-thio)-(β,γ-methylene)-TP RNA.In a second part, the solid-phase synthesis of short adenylates 2-5A 5'-TP bearing biolabile acetalester groups on nucleosides 3'-hydroxyls and their antiviral activities are described.Finally, we focused on developing two approaches for the production of 5'-capped RNA. One is a two-steps process which consists in the coupling of the cap structure on solid-support followed by an enzymatic N7-methylation in solution while the other one is a straightforward chemical strategy. Beside, the chemical coupling of the cap moiety on solid-supported RNA requires the use of Lewis acids. Then, the ability of « green » metal chlorides prepared from phytoextracted heavy metals to promote this reaction was studied.