Em Cestódeos, o processo de estrobilização é aquele que leva ao desenvolvimento da fase adulta a partir da larva, conferindo uma grande vantagem adaptativa a esses organismos através do aumento da fecundidade e dispersão. Mesocestoides corti vem sendo utilizado como modelo de estudos de diversos aspectos envolvidos na estrobilização. Neste trabalho, empregaram-se abordagens proteômicas no estudo de tetratirídeos que foram expostos ou não a tratamento de indução de segmentação (IN e TT, respectivamente): eletroforese bidimensional (2DE) seguida de MALDI-TOF MS ou MS/MS e a análise de extratos por LC- ESI-Q-TOF MS/MS. Através da 2DE-MALDITOF MS ou MS/MS, foram definidos os padrões 2DE de TT e IN nas faixas de pH 3-10 e 4-7. Foi possível identificar sete proteínas e obter dados de massa para mais 106 spots em tetratirídeos, e uma proteína e 66 spots em tetratirídeos após indução de estrobilização. Quando o perfil eletroforético das amostras foi analisado, foram evidenciados 102 spots diferencialmente expressos. Através de LC-ESI-Q-TOF MS/MS, foram identificadas 80 proteínas entre as duas fases, sendo 17 exclusivas de TT, 21 exclusivas de IN e 42 comuns a ambas. Essas proteínas foram caracterizadas funcionalmente em 18 grupos de acordo com o Dentre as proteínas identificadas, foram verificadas algumas com funções secundárias relacionadas ao controle de expressão gênica e algumas com papel relacionado à imunogenicidade do hospedeiro. Através da análise do emPAI das proteínas nos dois extratos, foram verificadas 12 proteínas com alterações quantitativas na expressão. Dessa forma, através desse trabalho, foi possível a caracterização preliminar dos perfis protéicos de tetratirídeos e induzidos, obtendo-se alguns indícios dos mecanismos envolvidos na diferenciação de M. corti em nível proteômico. / In Cestodes, the strobilation process leads to the development of the adult form from the larvae, giving a great adaptative advantage to these organisms by increasing the fecundity and spread. Mesocestoides corti has been used as a model for the study of varius aspects involved in strobilation. In this study we employed proteomic approaches in the study of tetrathyridia that had been exposed or not to segmentation induction treatment (IN and TT, respectively): two0dimensional gel electrophoresis (2DE) followed by MALDITOF MS or MS/MS and analysis of extracts by LC-ESI-Q-TOF MS/MS were performed. By 2DE-MALDI-TOF MS or MS/MS the proteomic profile of TT and IN on the pH range of 4-7 and 3-10 were defined. Seven proteins could be identified and mass data for further 106 spots were obtained for TT samples, and, from IN samples, one protein was identified and mass data was obtained for 66 spots. When 2DE profiles of TT and IN were compared, 102 spots were differentially expressed. Through LC-ESI-Q-TOF MS/MS, 80 proteins were identified within two samples, 17 exclusive from TT, 21 from IN and 42 common to both. These proteins were function characterized in 18 groups according to KOG. Among the proteins identified, we observed some with secondary roles related to gene expression control and some related to host immunogenicity. Through emPAI analysis, 12 showed quantitative differences in expression. Through this work, it was possible to preliminarily characterize the protein profiles of TT and IN and, thus, obtain some evidence of the mechanisms involved in the differentiation of M. corti in the proteomic level.

Em Cestódeos, o processo de estrobilização é aquele que leva ao desenvolvimento da fase adulta a partir da larva, conferindo uma grande vantagem adaptativa a esses organismos através do aumento da fecundidade e dispersão. Mesocestoides corti vem sendo utilizado como modelo de estudos de diversos aspectos envolvidos na estrobilização. Neste trabalho, empregaram-se abordagens proteômicas no estudo de tetratirídeos que foram expostos ou não a tratamento de indução de segmentação (IN e TT, respectivamente): eletroforese bidimensional (2DE) seguida de MALDI-TOF MS ou MS/MS e a análise de extratos por LC- ESI-Q-TOF MS/MS. Através da 2DE-MALDITOF MS ou MS/MS, foram definidos os padrões 2DE de TT e IN nas faixas de pH 3-10 e 4-7. Foi possível identificar sete proteínas e obter dados de massa para mais 106 spots em tetratirídeos, e uma proteína e 66 spots em tetratirídeos após indução de estrobilização. Quando o perfil eletroforético das amostras foi analisado, foram evidenciados 102 spots diferencialmente expressos. Através de LC-ESI-Q-TOF MS/MS, foram identificadas 80 proteínas entre as duas fases, sendo 17 exclusivas de TT, 21 exclusivas de IN e 42 comuns a ambas. Essas proteínas foram caracterizadas funcionalmente em 18 grupos de acordo com o Dentre as proteínas identificadas, foram verificadas algumas com funções secundárias relacionadas ao controle de expressão gênica e algumas com papel relacionado à imunogenicidade do hospedeiro. Através da análise do emPAI das proteínas nos dois extratos, foram verificadas 12 proteínas com alterações quantitativas na expressão. Dessa forma, através desse trabalho, foi possível a caracterização preliminar dos perfis protéicos de tetratirídeos e induzidos, obtendo-se alguns indícios dos mecanismos envolvidos na diferenciação de M. corti em nível proteômico. / In Cestodes, the strobilation process leads to the development of the adult form from the larvae, giving a great adaptative advantage to these organisms by increasing the fecundity and spread. Mesocestoides corti has been used as a model for the study of varius aspects involved in strobilation. In this study we employed proteomic approaches in the study of tetrathyridia that had been exposed or not to segmentation induction treatment (IN and TT, respectively): two0dimensional gel electrophoresis (2DE) followed by MALDITOF MS or MS/MS and analysis of extracts by LC-ESI-Q-TOF MS/MS were performed. By 2DE-MALDI-TOF MS or MS/MS the proteomic profile of TT and IN on the pH range of 4-7 and 3-10 were defined. Seven proteins could be identified and mass data for further 106 spots were obtained for TT samples, and, from IN samples, one protein was identified and mass data was obtained for 66 spots. When 2DE profiles of TT and IN were compared, 102 spots were differentially expressed. Through LC-ESI-Q-TOF MS/MS, 80 proteins were identified within two samples, 17 exclusive from TT, 21 from IN and 42 common to both. These proteins were function characterized in 18 groups according to KOG. Among the proteins identified, we observed some with secondary roles related to gene expression control and some related to host immunogenicity. Through emPAI analysis, 12 showed quantitative differences in expression. Through this work, it was possible to preliminarily characterize the protein profiles of TT and IN and, thus, obtain some evidence of the mechanisms involved in the differentiation of M. corti in the proteomic level.

Em Cestódeos, o processo de estrobilização é aquele que leva ao desenvolvimento da fase adulta a partir da larva, conferindo uma grande vantagem adaptativa a esses organismos através do aumento da fecundidade e dispersão. Mesocestoides corti vem sendo utilizado como modelo de estudos de diversos aspectos envolvidos na estrobilização. Neste trabalho, empregaram-se abordagens proteômicas no estudo de tetratirídeos que foram expostos ou não a tratamento de indução de segmentação (IN e TT, respectivamente): eletroforese bidimensional (2DE) seguida de MALDI-TOF MS ou MS/MS e a análise de extratos por LC- ESI-Q-TOF MS/MS. Através da 2DE-MALDITOF MS ou MS/MS, foram definidos os padrões 2DE de TT e IN nas faixas de pH 3-10 e 4-7. Foi possível identificar sete proteínas e obter dados de massa para mais 106 spots em tetratirídeos, e uma proteína e 66 spots em tetratirídeos após indução de estrobilização. Quando o perfil eletroforético das amostras foi analisado, foram evidenciados 102 spots diferencialmente expressos. Através de LC-ESI-Q-TOF MS/MS, foram identificadas 80 proteínas entre as duas fases, sendo 17 exclusivas de TT, 21 exclusivas de IN e 42 comuns a ambas. Essas proteínas foram caracterizadas funcionalmente em 18 grupos de acordo com o Dentre as proteínas identificadas, foram verificadas algumas com funções secundárias relacionadas ao controle de expressão gênica e algumas com papel relacionado à imunogenicidade do hospedeiro. Através da análise do emPAI das proteínas nos dois extratos, foram verificadas 12 proteínas com alterações quantitativas na expressão. Dessa forma, através desse trabalho, foi possível a caracterização preliminar dos perfis protéicos de tetratirídeos e induzidos, obtendo-se alguns indícios dos mecanismos envolvidos na diferenciação de M. corti em nível proteômico. / In Cestodes, the strobilation process leads to the development of the adult form from the larvae, giving a great adaptative advantage to these organisms by increasing the fecundity and spread. Mesocestoides corti has been used as a model for the study of varius aspects involved in strobilation. In this study we employed proteomic approaches in the study of tetrathyridia that had been exposed or not to segmentation induction treatment (IN and TT, respectively): two0dimensional gel electrophoresis (2DE) followed by MALDITOF MS or MS/MS and analysis of extracts by LC-ESI-Q-TOF MS/MS were performed. By 2DE-MALDI-TOF MS or MS/MS the proteomic profile of TT and IN on the pH range of 4-7 and 3-10 were defined. Seven proteins could be identified and mass data for further 106 spots were obtained for TT samples, and, from IN samples, one protein was identified and mass data was obtained for 66 spots. When 2DE profiles of TT and IN were compared, 102 spots were differentially expressed. Through LC-ESI-Q-TOF MS/MS, 80 proteins were identified within two samples, 17 exclusive from TT, 21 from IN and 42 common to both. These proteins were function characterized in 18 groups according to KOG. Among the proteins identified, we observed some with secondary roles related to gene expression control and some related to host immunogenicity. Through emPAI analysis, 12 showed quantitative differences in expression. Through this work, it was possible to preliminarily characterize the protein profiles of TT and IN and, thus, obtain some evidence of the mechanisms involved in the differentiation of M. corti in the proteomic level.

The inorganic components in calcareous corpuscles from Mesocestoides corti have been identified by use of powder x-ray diffraction and emission spectroscopy. Difference methods were compared for the isolation of the calcareous corpuscles from the residual tissue of the Mesocestoides corti. Previously reported and newly developed methods for the isolation are discussed. Analyses by powder x-ray diffraction for in vivo samples which had been heated at various temperatures ranging from room temperature to 1000°C are reported. The qualitative emission spectrographic analyses for in vivo and in vitro corpuscles are reported for normal systems and systems designed to study the ion uptake of the corpuscles. The relationship between the corpuscles’ composition and the parasites’ environment is discussed. A method for the quantitative emission spectrographic analysis was initiated for the percent calcium and magnesium. There is a linear relationship between the intensities and the percent calcium or magnesium.

Mesocestoides corti é um modelo para o estudo da biologia de cestódeos. Neste modelo é viável a manutenção do seu estágio larval in vivo, como também é possível induzir e acompanhar in vitro o seu desenvolvimento para o estágio adulto (estrobilização). Neste trabalho, foi realizada uma análise proteômica, por meio de uma abordagem de LC-MS/MS, para a caracterização dos repertórios de proteínas de quatro diferentes estágios do desenvolvimento de M. corti. Inicialmente, foi comparado o estágio larval (tetratirídeo, TT) e o estágio adulto (verme adulto estrobilizado, ST) de M. corti. No total, 364 proteínas únicas foram detectadas. Deste repertório, foram exclusivamente detectadas em TT 31 proteínas, em ST foram exclusivamente detectadas 126 proteínas, ao passo que 207 proteínas foram compartilhadas entre os dois estágios. O repertório de proteínas detectadas em TT incluem proteínas relacionadas com metabolismo, sinalização celular e regulação proteica. Possivelmente estas proteínas estão envolvidas com o crescimento/desenvolvimento vegetativo e reprodução assexuada deste estágio. Por outro lado, o repertório de proteínas detectadas em ST incluem proteínas relacionadas com expressão gênica, tradução, modificação e processamento de proteínas. Estes resultados podem indicar uma maior atividade metabólica nesse estágio de vida do parasito, o que pode ser associado à sua fisiologia mais complexa, que envolve estrobilização e diferenciação sexual. Em uma segunda abordagem, foram analisadas as primeiras horas pós-indução (PI) da estrobilização (TT, TT 24h-PI e TT 48h-PI). Foram detectadas um total de 241 proteínas únicas neste estudo. As proteínas detectadas apontam para um aumento da proliferação celular e desenvolvimento muscular após a indução da estrobilização, com o enriquecimento de categorias como “cellular component assembly involved in morphogenesis”, “muscle cell differentiation” e “muscle structure development” exclusivamente em TT 24h-PI. Globalmente, este conjunto de proteínas é um ótimo ponto de partida para estudos funcionais, como a busca por marcadores moleculares do desenvolvimento, alvos diagnósticos mais sensíveis e alvos para novas drogas anti-helmínticas. / Mesocestoides corti is a model for the study of cestode biology. In this model, it is possible to maintain its larval stage in vivo, as well as to induce and accompany its development to the adult stage (strobilization) in vitro. Here, a proteomic analysis was performed, through an LC-MS/MS approach, to characterize the protein repertoires of four different stages of M. corti development. Initially, the larval stage (tetrathyridia, TT) and adult stage (strobilized adult worm, ST) of M. corti were compared. In total, 364 unique proteins were detected. From this repertoire, 31 proteins were exclusively detected in TT and 126 proteins were exclusively detected in ST, whereas 207 proteins were shared between the two stages. The repertoire of proteins detected in TT includes proteins related to metabolism, cell signaling, and protein regulation. Possibly these proteins are involved with the vegetative growth/development and asexual reproduction of this stage. On the other hand, the repertoire of proteins detected in ST includes proteins related to gene expression, translation, modification, and processing of proteins. These results can be indicate a higher metabolic activity, which may be associated with its more complex physiology, strobilization, and sexual differentiation. In a second approach, the first hours post-induction (IP) of the strobilization were analyzed (TT, TT 24h-PI, and TT 48h-PI). A total of 241 unique proteins were detected in this study. The detected proteins point to an increase in cell proliferation and muscle development after the induction of strobilization, in which the enrichment of categories such as "cellular component assembly involved in morphogenesis", "muscle cell differentiation" and "muscle structure development" were exclusively in TT 24h- PI. Overall, these set proteins are a great starting point for functional studies, such as the search for molecular markers of development, more sensitive diagnostic targets and targets for new anthelmintic drugs.

Mesocestoides corti é um modelo para o estudo da biologia de cestódeos. Neste modelo é viável a manutenção do seu estágio larval in vivo, como também é possível induzir e acompanhar in vitro o seu desenvolvimento para o estágio adulto (estrobilização). Neste trabalho, foi realizada uma análise proteômica, por meio de uma abordagem de LC-MS/MS, para a caracterização dos repertórios de proteínas de quatro diferentes estágios do desenvolvimento de M. corti. Inicialmente, foi comparado o estágio larval (tetratirídeo, TT) e o estágio adulto (verme adulto estrobilizado, ST) de M. corti. No total, 364 proteínas únicas foram detectadas. Deste repertório, foram exclusivamente detectadas em TT 31 proteínas, em ST foram exclusivamente detectadas 126 proteínas, ao passo que 207 proteínas foram compartilhadas entre os dois estágios. O repertório de proteínas detectadas em TT incluem proteínas relacionadas com metabolismo, sinalização celular e regulação proteica. Possivelmente estas proteínas estão envolvidas com o crescimento/desenvolvimento vegetativo e reprodução assexuada deste estágio. Por outro lado, o repertório de proteínas detectadas em ST incluem proteínas relacionadas com expressão gênica, tradução, modificação e processamento de proteínas. Estes resultados podem indicar uma maior atividade metabólica nesse estágio de vida do parasito, o que pode ser associado à sua fisiologia mais complexa, que envolve estrobilização e diferenciação sexual. Em uma segunda abordagem, foram analisadas as primeiras horas pós-indução (PI) da estrobilização (TT, TT 24h-PI e TT 48h-PI). Foram detectadas um total de 241 proteínas únicas neste estudo. As proteínas detectadas apontam para um aumento da proliferação celular e desenvolvimento muscular após a indução da estrobilização, com o enriquecimento de categorias como “cellular component assembly involved in morphogenesis”, “muscle cell differentiation” e “muscle structure development” exclusivamente em TT 24h-PI. Globalmente, este conjunto de proteínas é um ótimo ponto de partida para estudos funcionais, como a busca por marcadores moleculares do desenvolvimento, alvos diagnósticos mais sensíveis e alvos para novas drogas anti-helmínticas. / Mesocestoides corti is a model for the study of cestode biology. In this model, it is possible to maintain its larval stage in vivo, as well as to induce and accompany its development to the adult stage (strobilization) in vitro. Here, a proteomic analysis was performed, through an LC-MS/MS approach, to characterize the protein repertoires of four different stages of M. corti development. Initially, the larval stage (tetrathyridia, TT) and adult stage (strobilized adult worm, ST) of M. corti were compared. In total, 364 unique proteins were detected. From this repertoire, 31 proteins were exclusively detected in TT and 126 proteins were exclusively detected in ST, whereas 207 proteins were shared between the two stages. The repertoire of proteins detected in TT includes proteins related to metabolism, cell signaling, and protein regulation. Possibly these proteins are involved with the vegetative growth/development and asexual reproduction of this stage. On the other hand, the repertoire of proteins detected in ST includes proteins related to gene expression, translation, modification, and processing of proteins. These results can be indicate a higher metabolic activity, which may be associated with its more complex physiology, strobilization, and sexual differentiation. In a second approach, the first hours post-induction (IP) of the strobilization were analyzed (TT, TT 24h-PI, and TT 48h-PI). A total of 241 unique proteins were detected in this study. The detected proteins point to an increase in cell proliferation and muscle development after the induction of strobilization, in which the enrichment of categories such as "cellular component assembly involved in morphogenesis", "muscle cell differentiation" and "muscle structure development" were exclusively in TT 24h- PI. Overall, these set proteins are a great starting point for functional studies, such as the search for molecular markers of development, more sensitive diagnostic targets and targets for new anthelmintic drugs.

Mesocestoides corti é um modelo para o estudo da biologia de cestódeos. Neste modelo é viável a manutenção do seu estágio larval in vivo, como também é possível induzir e acompanhar in vitro o seu desenvolvimento para o estágio adulto (estrobilização). Neste trabalho, foi realizada uma análise proteômica, por meio de uma abordagem de LC-MS/MS, para a caracterização dos repertórios de proteínas de quatro diferentes estágios do desenvolvimento de M. corti. Inicialmente, foi comparado o estágio larval (tetratirídeo, TT) e o estágio adulto (verme adulto estrobilizado, ST) de M. corti. No total, 364 proteínas únicas foram detectadas. Deste repertório, foram exclusivamente detectadas em TT 31 proteínas, em ST foram exclusivamente detectadas 126 proteínas, ao passo que 207 proteínas foram compartilhadas entre os dois estágios. O repertório de proteínas detectadas em TT incluem proteínas relacionadas com metabolismo, sinalização celular e regulação proteica. Possivelmente estas proteínas estão envolvidas com o crescimento/desenvolvimento vegetativo e reprodução assexuada deste estágio. Por outro lado, o repertório de proteínas detectadas em ST incluem proteínas relacionadas com expressão gênica, tradução, modificação e processamento de proteínas. Estes resultados podem indicar uma maior atividade metabólica nesse estágio de vida do parasito, o que pode ser associado à sua fisiologia mais complexa, que envolve estrobilização e diferenciação sexual. Em uma segunda abordagem, foram analisadas as primeiras horas pós-indução (PI) da estrobilização (TT, TT 24h-PI e TT 48h-PI). Foram detectadas um total de 241 proteínas únicas neste estudo. As proteínas detectadas apontam para um aumento da proliferação celular e desenvolvimento muscular após a indução da estrobilização, com o enriquecimento de categorias como “cellular component assembly involved in morphogenesis”, “muscle cell differentiation” e “muscle structure development” exclusivamente em TT 24h-PI. Globalmente, este conjunto de proteínas é um ótimo ponto de partida para estudos funcionais, como a busca por marcadores moleculares do desenvolvimento, alvos diagnósticos mais sensíveis e alvos para novas drogas anti-helmínticas. / Mesocestoides corti is a model for the study of cestode biology. In this model, it is possible to maintain its larval stage in vivo, as well as to induce and accompany its development to the adult stage (strobilization) in vitro. Here, a proteomic analysis was performed, through an LC-MS/MS approach, to characterize the protein repertoires of four different stages of M. corti development. Initially, the larval stage (tetrathyridia, TT) and adult stage (strobilized adult worm, ST) of M. corti were compared. In total, 364 unique proteins were detected. From this repertoire, 31 proteins were exclusively detected in TT and 126 proteins were exclusively detected in ST, whereas 207 proteins were shared between the two stages. The repertoire of proteins detected in TT includes proteins related to metabolism, cell signaling, and protein regulation. Possibly these proteins are involved with the vegetative growth/development and asexual reproduction of this stage. On the other hand, the repertoire of proteins detected in ST includes proteins related to gene expression, translation, modification, and processing of proteins. These results can be indicate a higher metabolic activity, which may be associated with its more complex physiology, strobilization, and sexual differentiation. In a second approach, the first hours post-induction (IP) of the strobilization were analyzed (TT, TT 24h-PI, and TT 48h-PI). A total of 241 unique proteins were detected in this study. The detected proteins point to an increase in cell proliferation and muscle development after the induction of strobilization, in which the enrichment of categories such as "cellular component assembly involved in morphogenesis", "muscle cell differentiation" and "muscle structure development" were exclusively in TT 24h- PI. Overall, these set proteins are a great starting point for functional studies, such as the search for molecular markers of development, more sensitive diagnostic targets and targets for new anthelmintic drugs.

Os cestódeos são agentes etiológicos de doenças parasíticas em humanos e em animais domesticados. Estamos utilizando Mesocestoides corti como um sistema modelo para estudar a biologia do desenvolvimento dos cestódeos, particularmente a transição da fase larval para a fase adulta segmentada. Com o propósito de isolar seqüências diferencialmente expressas durante o processo de segmentação, aplicamos a metodologia de análise das diferenças de representações de cDNA (cDNA RDA) utilizando RNA total extraído de larvas e vermes segmentados em cultivos in vitro de M. corti. Duas bibliotecas de cDNA subtraídas, enriquecidas com seqüências diferencialmente expressas das formas larvais ou segmentadas, foram construídas usando uma razão de driver:tester de 100:1 e 800:1 no 1º e 2º ciclos de subtração, respectivamente. A eficiência de subtração foi avaliada com experimentos de hibridização, utilizando as seqüências subtraídas como sondas contra os produtos de cDNA amplificados por PCR, com análise de macroarranjos e com confirmação individual, em experimentos de Northern virtual, de clones selecionados. Uma estratégia de RT-PCR em tempo real para confirmação dos resultados está sendo otimizada e resultados preliminares são apresentados. Após o seqüenciamento de 1036 clones de cDNA independentes e adoção de uma estratégia de seqüenciamento de alta qualidade, foram identificadas 190 seqüências, preferencialmente expressas em tetratirídeos (49) ou em vermes segmentados (141). Entre os genes identificados, 71 foram funcionalmente anotados, incluindo seqüências relacionadas a reguladores de estrutura de cromatina e controle de transcrição, cujos ortólogos estão implicados em processos de desenvolvimento em Drosophila e em vertebrados.

Os cestódeos são agentes etiológicos de doenças parasíticas em humanos e em animais domesticados. Estamos utilizando Mesocestoides corti como um sistema modelo para estudar a biologia do desenvolvimento dos cestódeos, particularmente a transição da fase larval para a fase adulta segmentada. Com o propósito de isolar seqüências diferencialmente expressas durante o processo de segmentação, aplicamos a metodologia de análise das diferenças de representações de cDNA (cDNA RDA) utilizando RNA total extraído de larvas e vermes segmentados em cultivos in vitro de M. corti. Duas bibliotecas de cDNA subtraídas, enriquecidas com seqüências diferencialmente expressas das formas larvais ou segmentadas, foram construídas usando uma razão de driver:tester de 100:1 e 800:1 no 1º e 2º ciclos de subtração, respectivamente. A eficiência de subtração foi avaliada com experimentos de hibridização, utilizando as seqüências subtraídas como sondas contra os produtos de cDNA amplificados por PCR, com análise de macroarranjos e com confirmação individual, em experimentos de Northern virtual, de clones selecionados. Uma estratégia de RT-PCR em tempo real para confirmação dos resultados está sendo otimizada e resultados preliminares são apresentados. Após o seqüenciamento de 1036 clones de cDNA independentes e adoção de uma estratégia de seqüenciamento de alta qualidade, foram identificadas 190 seqüências, preferencialmente expressas em tetratirídeos (49) ou em vermes segmentados (141). Entre os genes identificados, 71 foram funcionalmente anotados, incluindo seqüências relacionadas a reguladores de estrutura de cromatina e controle de transcrição, cujos ortólogos estão implicados em processos de desenvolvimento em Drosophila e em vertebrados.

Os cestódeos são agentes etiológicos de doenças parasíticas em humanos e em animais domesticados. Estamos utilizando Mesocestoides corti como um sistema modelo para estudar a biologia do desenvolvimento dos cestódeos, particularmente a transição da fase larval para a fase adulta segmentada. Com o propósito de isolar seqüências diferencialmente expressas durante o processo de segmentação, aplicamos a metodologia de análise das diferenças de representações de cDNA (cDNA RDA) utilizando RNA total extraído de larvas e vermes segmentados em cultivos in vitro de M. corti. Duas bibliotecas de cDNA subtraídas, enriquecidas com seqüências diferencialmente expressas das formas larvais ou segmentadas, foram construídas usando uma razão de driver:tester de 100:1 e 800:1 no 1º e 2º ciclos de subtração, respectivamente. A eficiência de subtração foi avaliada com experimentos de hibridização, utilizando as seqüências subtraídas como sondas contra os produtos de cDNA amplificados por PCR, com análise de macroarranjos e com confirmação individual, em experimentos de Northern virtual, de clones selecionados. Uma estratégia de RT-PCR em tempo real para confirmação dos resultados está sendo otimizada e resultados preliminares são apresentados. Após o seqüenciamento de 1036 clones de cDNA independentes e adoção de uma estratégia de seqüenciamento de alta qualidade, foram identificadas 190 seqüências, preferencialmente expressas em tetratirídeos (49) ou em vermes segmentados (141). Entre os genes identificados, 71 foram funcionalmente anotados, incluindo seqüências relacionadas a reguladores de estrutura de cromatina e controle de transcrição, cujos ortólogos estão implicados em processos de desenvolvimento em Drosophila e em vertebrados.