Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-12T18:41:28Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Geraldo Sampaio.pdf: 579470 bytes, checksum: 5ea9d0a4310f23ecab87dc463848dc1e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-12T18:41:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Geraldo Sampaio.pdf: 579470 bytes, checksum: 5ea9d0a4310f23ecab87dc463848dc1e (MD5) / Introdução: Com o avanço no entendimento de bioprocessos, houve um significativo aumento de novas técnicas que geram diversas informações sobre as interações celulares. Dentre estas técnicas, a citometria de fluxo têm se consolidado como uma importante ferramenta com amplas aplicações, como por exemplo contar, examinar e classificar partículas microscópicas suspensas em meio líquido em fluxo, com a análise de vários parâmetros simultaneamente. Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico da linfadenite caseosa principalmente em caprinos e ovinos, doença que deprecia o valor do couro e carne no mercado agro-industrial. Objetivo: padronizar técnicas, através da citometria de fluxo, para avaliar a contagem absoluta deste microrganismo, bem como aspectos fisiológicos e da interação entre C.pseudotuberculosis e células fagocitárias murinas. Metodologia: Cultivo de C.pseudotuberculosis em meio BHI - T80 0,5%, seguido da marcação deste microrganismo com corantes fluorescentes, em diferentes períodos que definem diferentes estados fisiológicos ao longo do seu crescimento. Ensaio de fagocitose utilizando células do peritônio de murinos de duas linhagens após peritonite induzida por Tioglicolato de Sódio, cultivadas e lavadas para aderência celular. Após a adesão celular, foi feito o desafio com bactérias coradas com regente fluorescente, com 1h 30 min de infecção as células aderentes foram tripsinizadas, posteriormente lavadas e centrifugadas para o ensaio por citometria de fluxo. Resultados: Observou-se um período de crescimento similar a uma curva padrão de crescimento microbiano (fases lag, log, estacionária e de declínio), contudo a técnica utilizada permitiu a distinção entres diferentes estados fisiológicos. Os dados obtidos na citometria evidenciam populações de células fagocíticas contendo bactérias no citoplasma, sendo observadas duas populações envolvidas neste processo. Uma população de baixa complexidade interna, similar à apresentada por linfócitos, e uma população com complexidade interna moderada similar a apresentada por células de origem monocítica. As células dos camundongos CBA participando da fagocitose de microrganismos da linhagem T1 apresentam uma maior granulação interna que aquelas encontradas no peritônio dos camundongos da linhagem suíça nas mesmas condições, sugerindo uma maior ativação celular. O mesmo fenômeno pode ser observado quando as células participam da fagocitose da linhagem C57. Células peritoneais de camundongos CBA apresentaram maior capacidade de fagocitose e nesta linhagem se observou um maior envolvimento de células mononucleares fagocíticas nesta atividade. Para a linhagem suíça, observou-se uma maior participação de células compatíveis com linfócitos na fagocitose deste microrganismo. Conclusões: A técnica de citometria de fluxo com a marcação por florescência foi eficaz para a avaliação do crescimento e viabilidade de Corynebacterium pseudotuberculosis, bem como da interação das células bacterianas com as células fagocitárias peritoneais murinas. A CF constitui-se, portanto, numa técnica eficiente para a avaliação da curva de crescimento desta bactéria, permitindo a distinção dos diferentes estados fisiológicos, inclusive podendo indicar um mecanismo de escape à fagocitose. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-07-12T16:42:07Z No. of bitstreams: 1 Tese _ICS_Ricardo Evangelista Fraga.pdf: 5154897 bytes, checksum: af2af2c3bb0b0542ad0b616f2fd0beb9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-12T16:42:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese _ICS_Ricardo Evangelista Fraga.pdf: 5154897 bytes, checksum: af2af2c3bb0b0542ad0b616f2fd0beb9 (MD5) / O presente trabalho trata de estudos relacionados à Corynebacterium pseudotuberculosis (Cp), agente etiológico da linfadenite caseosa. Tem como finalidade estabelecer o perfil da resposta imune durante o percurso da infecção por estirpe atenuada (T1), relacionado ao primeiro experimento, ou selvagem (C57), segundo experimento, de Cp, em diferentes linhagens de camundongos, e desta forma estabelecer o padrão de resposta imune em animais susceptíveis e resistentes, além de avaliar o envolvimento do óxido nítrico, INF-gama e da citocina IL-10 no início do processo infeccioso. Uma comparação entre as respostas imunes a estas duas estirpes foi feita no terceiro experimento. Na metodologia empregada, para o primeiro e segundo experimento, foram utilizados 133 animais de diferentes linhagens, por experimento, sendo: de linhagem heterogênea - 28 Swiss; de linhagem isogênica - 28 Balb/c, 35 C57Black/6 selvagem, 14 C57Black/6 knockout (KO) para óxido nítrico (ON), 14 C57Black/6-KO-IFN-gama e 14 C57Black/6 knockout-KO-IL-10. Cada linhagem estudada foi dividida em dois grupos (controle e teste). Para o terceiro experimento foram utilizados 15 animais Balb/c divididos em três grupos. Os animais do grupo teste foram infectados com a estirpe T1 com 107/ml (1° experimento), a C57 com 102/ml (2° experimento) ou 104/ml das duas estirpes (T1 ou C57), no 3° experimento. Após a infecção os animais Swiss, Balb/c e C57Black/6 selvagens, foram avaliados aos 07, 30, 60 e 120 dias, enquanto que os animais C57Black/6 selvagens e knockout, foram analisados aos 07 e 14 dias (1° e 2° experimentos). Os animais referentes ao 3° experimento foram avaliados aos 70 dias após a infecção. Foi realizada a construção da curva de mortalidade; avaliação morfológica, que constava da identificação de granulomas, bem como dos locais de acometimento e avaliação do peso do baço; avaliação do direcionamento celular para o local da infecção, que corresponde a avaliação total e diferencial das células da cavidade peritoneal; produção das citocinas IL-1α, TNF-α, INF-γ, GMC-SF, IL-10, IL-6, IL-2, IL-17 por células aderentes da cavidade peritoneal estimuladas com antígenos secretados ou com bactéria viva (1° e 2° experimento); imunofenotipagem, avaliando as células T CD4+ e T CD8+; bem como a mensuração das citocinas IL-1α, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13, IL-17, IL-21, IL-22, IL-27, INF-γ e TNF-α no homogenato do baço, em todos os experimentos. Os resultados obtidos mostram uma diferença entre as linhagens Balb/c, C57Black/6 e Swiss no tipo de resposta imune estabelecida durante infecção com T1 e com C57, onde os animais C57Black/6 demonstraram ser mais resistentes. Dentre os animais nocauteados, aqueles KO-IL-10 demonstraram ser mais resistentes, enquanto que os animais KO-ON e KO-INF-γ foram mais sensíveis à infecção. No 3° experimento foi possível visualizar que a estirpe C57 induziu alterações morfológicas mais acentuadas e maior direcionamento de células para o local da infecção, quando comparada com tais induções feitas pela estirpe T1. Com os experimentos realizados e resultados obtidos, pretendeu-se fornecer subsídios para uma melhor compreensão da relação parasito-hospedeiro no modelo murino, em infecções experimentais que confrontam duas estirpes desta bactéria com diferentes linhagens de camundongos. Estes conhecimentos poderão orientar a construção de protocolos de imunização/desafio visando o desenvolvimento de vacinas ou/e imunoterapias. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-08-14T20:09:15Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Miriam Flores.pdf: 1077091 bytes, checksum: b0adcded73dce2647872382d21f4a4be (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-14T20:09:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Miriam Flores.pdf: 1077091 bytes, checksum: b0adcded73dce2647872382d21f4a4be (MD5) / FAPEX;CNPq / Corynebacterium pseudotuberculosis is the etiologic agent of caseous lymphadenitis (CLA), a chronic disease that affects goats and sheep, characterized by granuloma formation in subcutaneous and internal lymph nodes. CLA causes significant economic losses in commercial goat herds; the best procedure to avoid spread of this disease is elimination of infected animals. Secreted antigens from T1 strain bacteria grown in brain heart infusion (BHI) broth were tested in an indirect ELISA system to determine if this system could be used to identify specific immunoglobulins against C. pseudotuberculosis. The electrophoretic profile of the BHI antigen was analyzed, as well as the recognition pattern by CLA infected sheep sera. The ELISA results were compared to Multiplex PCR assay and IFN-gamma production. The ELISA was able to discriminate between negative and positive animals, with a sensitivity of 89% and a specificity of 99%, and a large difference between positive and negative optical density values. When this assay was compared with other immunological and molecular methods, it was found only two discrepant results among thirty-two samples. We concluded that an ELISA using secreted antigens from C. pseudotuberculosis T1 strain growth in BHI broth culture would be a reliable tool for the serodiagnosis of caseous ymphadenitis in sheep. / Salvador

Corynebacterium striatum (CS) is an underappreciated human pathogen that has been associated with serious infections in both immunocompetent and immunocompromised hosts. CS infections tend to be more frequent in males and major infection sites have included blood stream, lung, and central nervous system. Most are nosocomially acquired and there is a significant association with medical devices ranging from intravascular catheters to central nervous system drainage devices. Empiric therapy with vancomycin is advisable as susceptibility to other agents is variable. Treatment may also include removal of foreign material such as an intravascular catheter. The present review describes the wide spectrum of infections associated with CS and we add a unique case of CS pancreatic abscess where treatment included linezolid.

Our research has shown the carotenoid pigment to be found in the cell membrane of C. poinsettiae. These results suggest that the pigment is bound to protein and that protein tertiary structure is important in the binding.

Call number: LD2668 .T4 1986 D42 / Master of Science / Diagnostic Medicine/Pathobiology

The purpose of this investigation was to determine the site of the carotenoid pigments in C. spp. strain 7E1C as a step towards resolving the role of the pigment in the cell.

Specific bacterial commensals demonstrating multidrug resistance (MDR) are opportunistic pathogens for immunocompromised patients, including Corynebacterium species (spp.). Severe infections due to MDR corynebacteria are being increasingly reported where several MDR phenotypes have been described. One such phenotype, the macrolide-lincosamide-streptogramin B phenotype (MLSB), is characterized by high-level resistance to macrolides, lincosamides, and streptogramin B. Resistance is thought to be attributable to acquisition of the ermX gene, a methyltransferase that alters the ribosomal macrolide binding site. Until recently, ermX had been reported in only six Corynebacterium spp. We have observed other corynebacteria can also display high-level resistance to MLSB antimicrobials and are ermX positive. Hypotheses being tested include: 1) high-level macrolide and lincosamide resistance in Corynebacterium spp. is caused by acquiring ermX; 2) distribution of ermX is more widespread than previously published; 3) ermX is associated with transposon Tn5432; 4) multidrug resistance has spread to Canadian C. afermentans and C. aurimucosum strains.

Specific bacterial commensals demonstrating multidrug resistance (MDR) are opportunistic pathogens for immunocompromised patients, including Corynebacterium species (spp.). Severe infections due to MDR corynebacteria are being increasingly reported where several MDR phenotypes have been described. One such phenotype, the macrolide-lincosamide-streptogramin B phenotype (MLSB), is characterized by high-level resistance to macrolides, lincosamides, and streptogramin B. Resistance is thought to be attributable to acquisition of the ermX gene, a methyltransferase that alters the ribosomal macrolide binding site. Until recently, ermX had been reported in only six Corynebacterium spp. We have observed other corynebacteria can also display high-level resistance to MLSB antimicrobials and are ermX positive. Hypotheses being tested include: 1) high-level macrolide and lincosamide resistance in Corynebacterium spp. is caused by acquiring ermX; 2) distribution of ermX is more widespread than previously published; 3) ermX is associated with transposon Tn5432; 4) multidrug resistance has spread to Canadian C. afermentans and C. aurimucosum strains.

Universiẗat, Diss., 2004--Düsseldorf.