Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-14T17:04:39Z No. of bitstreams: 1 TESE-TATIANE SANTANA SALES.pdf: 2251188 bytes, checksum: 871fe88b233e8e23e585f22cc3a33431 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-03-23T12:58:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE-TATIANE SANTANA SALES.pdf: 2251188 bytes, checksum: 871fe88b233e8e23e585f22cc3a33431 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T12:58:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE-TATIANE SANTANA SALES.pdf: 2251188 bytes, checksum: 871fe88b233e8e23e585f22cc3a33431 (MD5) / FAPESB / Na caprino-ovinocultura do nordeste brasileiro observa-se alta prevalência da infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis que resulta na Linfadenite Caseosa, gerando prejuízos econômicos significativos. O nematódeo gastrointestinal Haemonchus contortus também infecta os pequenos ruminantes, resultando em prejuízos econômicos e produtivos. Dessa forma, é importante a compreensão da interferência da infecção pelo H. contortus na possível modulação imune contra C. pseudotuberculosis em caprinos. Uma vez que a infecção por C. pseudotuberculosis desenvolve uma resposta Th1 predominante e que o H. contortus, induz uma expressiva estimulação Th2. O presente estudo avaliou a indução de resposta imune humoral e celular contra o Corynebacterium pseudotuberculosis em caprinos co-infectados pelo nematóide Haemonchus contortus. Assim, nos diferentes grupos experimentais, caprinos foram inoculados ou não com 107 UFC de uma linhagem de alta virulência (C57) de C. pseudotuberculosis, por via subcutânea, e com aproximadamente 10.000 larvas infectante L3 de H. contortus por via oral. Foram acompanhados por um período de oito meses até serem necropsiados. Utilizou-se o teste ELISA e westen blotting para o acompanhamento da cinética da resposta e da reatividade específica por anticorpos da classe IgG e a dosagem de IFN- para avaliação da reatividade in vitro, em culturas de sangue periférico estimuladas com antígenos destes dois patógenos. A técnica parasitológica de OPG e a morfométrica das células inflamatórias na mucosa abomasal foram realizadas para avaliação in loco da infecção pelo nematódeo. Os resultados evidenciaram expressivos níveis de anticorpos e uma reduzida produção da citocina IFN- contra o C. pseudotuberculosis nos animais co-infectados, que manifestaram lesões nos linfonodos internos e em algumas vísceras e alta carga parasitária. Ainda nos animais co-infectados observou-se níveis menos expressivos de IgG anti-H. contortus. Quanto ao reconhecimento antigênico através do wesrtern blotting, identificou-se oito proteínas de C. pseudotuberculosis e cinco proteínas do helminto. A ocorrência da resposta imune inata foi observada através da análise morfométrica da mucosa abomasal, onde foram identificados os linfócitos, eosinófilos, plasmócitos e macrófagos em todos os grupos; e uma população de mastócitos expressiva nos grupos infectados com este verme. Com os resultados obtidos conclui-se que as respostas imunes inata e adaptativa contra o H. contortus implicam numa significativa estimulação de mecanismos Th2. Os resultados também sugerem que tal estimulação module negativamente a resposta Th1 contra o C. pseudotuberculosis, entretanto, torna-se necessário novos estudos para a melhor compreensão desta modulação. / In goat and sheep breeding in northeastern Brazil, observed a high prevalence of infection with Corynebacterium pseudotuberculosis resulting in caseous lymphadenitis, causing significant economic losses. Gastrointestinal nematode Haemonchus contortus also infect small ruminants, resulting in economic and production losses. Thus, it is important to understand the interference of infection with H. contortus in possible immune modulation against C. pseudotuberculosis in goats. Once infection with C. pseudotuberculosis develops a predominantly Th1 response and H. contortus, induces a significant stimulation of Th2. This study evaluated the induction of humoral and cellular immune response against Corynebacterium pseudotuberculosis in co-infected goats by Haemonchus contortus. Thus, the different experimental groups, goats were inoculated with or without 107 CFU of a highly virulent strain (C57) of C. pseudotuberculosis, subcutaneously, and approximately 10.000 infective larvae L3 H. contortus orally. They were followed by a period of eight months before being necropsied. We used ELISA and Westen blotting for monitoring the response kinetics and specific reactivity of antibodies of the IgG and IFN- dosage for evaluation of in vitro reactivity in peripheral blood cultures stimulated with antigens of these two pathogens. The parasitological technique OPG and morphometric of inflammatory cells in the abomasal mucosa were performed to on-site evaluation of nematode infection. The results showed significant levels of antibodies and a reduced production of IFN- cytokine against C. pseudotuberculosis in co-infected animals, which showed lesions in lymph nodes and internal in some viscera and high parasite load. Also in co-infected animals there was less significant levels of IgG anti-H.contortus. As for the antigen recognition by westen blotting, it identified eight proteins of C. pseudotuberculosis and five proteins helminth. The occurrence of the innate immune response was observed using the morphometric analysis of the abomasal mucosa were identified where lymphocytes, eosinophils, plasma cells and macrophages in all groups; and a population of mast cells in significant with this worm groups infected. With the results obtained it is concluded that the innate and adaptive immune responses against H. contortus imply a significant stimulation of Th2 mechanisms. The results also suggest that such stimulation negatively modulates the Th1 response against C. pseudotuberculosis, however, it is necessary to further studies to better understand this negative regulation.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-14T19:10:47Z No. of bitstreams: 1 tese Danielle versão impressão.pdf: 1369230 bytes, checksum: 604c9e73ccec35bb56dba2e4a42c429b (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-07T13:17:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 tese Danielle versão impressão.pdf: 1369230 bytes, checksum: 604c9e73ccec35bb56dba2e4a42c429b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T13:17:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese Danielle versão impressão.pdf: 1369230 bytes, checksum: 604c9e73ccec35bb56dba2e4a42c429b (MD5) / FAPESB / Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente causador da linfadenite caseosa em caprinos e ovinos caracterizado por formação de granulomas nos linfonodos superficiais e em órgãos internos. Diversas tentativas já foram realizadas para o desenvolvimento de candidatos vacinais que sejam capazes de induzir uma resposta imune protetora eficaz. O presente estudo avaliou indicadores da resposta imune inata e adaptativa em ovinos inoculados com uma linhagem de baixa virulência de C. pseudotuberculosis e a seus antígenos secretados. Cinco ovinos foram inoculados com a dose 109 UFC de uma linhagem de baixa virulência (T1) de C. pseudotuberculosis, cinco com 250μg de antígenos secretados em um meio quimicamente definido (MQD) e três animais foram utilizados para compor o grupo controle. Os animais foram desafiados com uma dose de 2x105 UFC de uma linhagem virulenta de C. pseudotuberculosis, e posteriormente necropsiados. Foram utilizados testes ELISA para identificação de IgM e IgG específica, e dosagem de IFN- para avaliação dos mecanismos humoral e celular. A técnica de PCR em tempo real foi utilizada para avaliação da expressão do RNAm de TNF-α, IL-1β e dos TLRs 2, 4, 9 em células de linfonodos inguinais. Com este experimento, conclui-se que o aumento na produção de IgG e uma maior expressão de RNAm de TNF-α e dos TLRs 2,4 e 9 em células de linfonodos inguinais podem estar associados a uma menor chance de surgimento de lesões em animais inoculados com a cepa de baixa virulência (T1). Os níveis de IFN- estiveram associados à progressão clínica da enfermidade no grupo MQD. / Corynebacterium pseudotuberculosis is the causative agent of caseous lymphadenitis in goats and sheep, which induces the formation of caseous lesions in subcutaneous lymph nodes and in internal organs. Several attempts have already been made for the development of vaccine candidates capable of inducing an effective protective immune response. The present study aimed to evaluate indicators of innate and adaptive immune response in sheep inoculated with a strain of low virulence of C.pseudotuberculosis and their secreted antigens. Five animals were inoculated with a dose 109 CFU of C. pseudotuberculosis of low virulence strain (T1), five with 250μg of secreted antigens in a chemically defined medium (CDM) more 1,5 mg saponins from Quillaja saponaria saponin as adjuvant and three animals were used to compose the control group. Animals were challenged with a dose of 2x105 CFU of virulent strain of C. pseudotuberculosis, and later necropsied. ELISA tests for identification of specific IgM and IgG and dosage of IFN -  were used to evaluate the humoral and cellular response. The technique of real-time PCR was used to evaluate the mRNA expression of TNF - α , IL - 1β and TLRs 2 , 4 , 9 . In this experiment, it was concluded that the increase in IgG production and increased mRNA expression of TNF- α and TLRs 2,4 and 9 may be associated with a lower chance of lesions in animals inoculated with a strain of low virulence of C.pseudotuberculosis. The levels of IFN -  were associated with clinical progression of the disease in MQD group.

Submitted by Barroso Patrícia (barroso.p2010@gmail.com) on 2013-04-04T19:59:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação milton galdino 05062012 - DEFINITIVA.pdf: 2594051 bytes, checksum: 1b7dc66215e94866d37e7c0e7c6430df (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-04T19:59:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação milton galdino 05062012 - DEFINITIVA.pdf: 2594051 bytes, checksum: 1b7dc66215e94866d37e7c0e7c6430df (MD5) Previous issue date: 2011 / A Linfadenite Caseosa, causada por Corynebacterium pseudotuberculosis (C. pseudotuberculosis, é uma enfermidade de alta prevalência nos rebanhos de pequenos ruminantes da região semi-árida brasileira, trazendo grandes prejuízos particularmente para os pequenos produtores, pois a criação desses animais é a principal atividade de subsistência nesta região. O presente trabalho teve como objetivo avaliar aspectos da resposta imune de camundongos da linhagem C57/Black 6 selvagem e C57/Black 6 Knockout para o óxido nítrico (KO-NO), durante a infecção experimental por C. pseudotuberculosis. A utilização de animais Knockout possibilitou a compreensão da atuação de alguns tipos celulares do sistema imune frente ao patógeno, já que se sabe que o óxido nítrico é um importante agente na eliminação de microrganismos intracelulares. Para tanto, foram utilizados e eutanasiados 28 animais em dois tempos (7 e 14 dias), divididos em quatro grupos, a saber: grupo 1 – controle – com 4 animais selvagens; grupo 2 - infectado por C. pseudotuberculosis – com 10 animais selvagens; grupo 3 – controle – com 4 animais KO-NO; e grupo 4 – infectado por C. pseudotuberculosis – com 10 animais KO-NO. Na metodologia avaliamos a suscetibilidade de camundongos KO-NO, na infecção, verificando que animais C57/Black 6 KO-NO são susceptíveis à infecção por C. pseudotuberculosis com mortalidade observada a partir do 4º dia, o que indica a importância dessa molécula na defesa inata contra essa bactéria. No estudo de células do lavado peritoneal os neutrófilos foram as células encontradas em maior número no infiltrado dos animais KO-NO, o que pode indicar um mecanismo compensatório pela ausência do óxido nítrico. Com o estudo do baço observou-se a presença de linfócitos, com predomínio de TCD8 entre as células esplênicas de ambos os grupos, o que sugere a importância dessa sub-população na resposta imune contra esse microorganismo. A partir da presença de granulomas verificou-se a maior presença nos animais KO-NO infectados com 7 dias, sendo os linfonodos os mais afetados, o que aponta também para uma tentativa compensatória de conter a infecção; constatou-se uma maior recuperação bacteriana de linfonodo mesentério nos camundongos KO-NO, provavelmente devido a sua maior capacidade de escape. Foi realizado também o estudo de anticorpos séricos, através da detecção de IgG total e subclasses, o qual foi observado uma produção 14 dias pós infecção, tanto nos animais selvagens como nos KO-NO, similar aos animais controle, o que indica uma resposta humoral tardia por esse tipo de anticorpo para esse microorganismo. Os resultados obtidos sugerem a importância do óxido nítrico no processo de combate à infecção por este microrganismo, posto que os animais KO-NO para esta substância foram os mais afetados pelo processo infeccioso instalado. / Universidade Federal da Bahia, Instituto de Ciências da Saúde

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-10T18:39:59Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Italaney Fehlberg.pdf: 1641383 bytes, checksum: 5783529c67edcfba0dd7902fb837f098 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-10T18:39:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Italaney Fehlberg.pdf: 1641383 bytes, checksum: 5783529c67edcfba0dd7902fb837f098 (MD5) / CAPES; FAPEX / Infecções por Corynebacterium pseudotuberculosis, com alta prevalência na Bahia, e Mycobacterium spp., sem dados oficiais de ocorrência neste estado, podem resultar na formação de lesão granulomatosa, tanto em linfonodos superficiais quanto em órgãos internos. Isto pode gerar confusão no diagnóstico clínico de linfadenite caseosa e tuberculose nestes animais, mas que em decorrência da alta prevalência desta primeira acabam sendo diagnosticados clinicamente como linfadenite caseosa. Para estimar a ocorrência destas infecções como causadoras de hipertrofia nos linfonodos superficiais de caprinos é que o presente estudo foi realizado. Mil seiscentos e trinta e nove caprinos de cinco municípios do semi-árido baiano foram examinados quanto à presença destas lesões externas e dos 59 animais (3,6%) que as apresentavam, amostras de sangue total e do conteúdo dos abscessos foram coletadas. O sangue foi destinado para a realização do ELISA indireto anti-Corynebacterium pseudotuberculosis e os materiais de 56 abscessos foram destinados para a cultura de Corynebacterium e extração dos DNAs para identificação direta dos patógenos por PCR. A cultura detectou Corynebacterium pseudotuberculosis em 40 (71,4%) abscessos, enquanto o mPCR detectou em 41(73,2%). Mycobacterium spp. não foi identificado pela técnica molecular em nenhuma das amostras avaliadas. A sorologia para C. pseudotuberculosis identificou 42 (71,2%) dos 59 caprinos como positivos para linfadenite caseosa. Assim, a infecção por Corynebacterium pseudotuberculosis foi responsável pelas hipertrofias superficiais em mais de 71% dos caprinos avaliados pela cultura, sorologia e PCR, confirmando o diagnóstico clínico de linfadenite caseosa nestes animais. Exames adicionais são requeridos para garantir que a tuberculose não ocorre nos caprinos destes municípios da Bahia. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-06-10T21:27:30Z No. of bitstreams: 3 Tese_ICS_ Cláudia Valle dos Santos.pdf: 1227134 bytes, checksum: 3d07c84824756a4fec14e205dd588442 (MD5) Tese_ICS_ Cláudia Valle dos Santos.pdf: 1227134 bytes, checksum: 3d07c84824756a4fec14e205dd588442 (MD5) Tese_ICS_ Cláudia Valle dos Santos.pdf: 1227134 bytes, checksum: 3d07c84824756a4fec14e205dd588442 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-10T21:27:30Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Tese_ICS_ Cláudia Valle dos Santos.pdf: 1227134 bytes, checksum: 3d07c84824756a4fec14e205dd588442 (MD5) Tese_ICS_ Cláudia Valle dos Santos.pdf: 1227134 bytes, checksum: 3d07c84824756a4fec14e205dd588442 (MD5) Tese_ICS_ Cláudia Valle dos Santos.pdf: 1227134 bytes, checksum: 3d07c84824756a4fec14e205dd588442 (MD5) / O Brasil possui grande diversidade genética vegetal. O uso de plantas com finalidades terapêuticas se perpetuou na história da civilização e chegou até os nossos dias amplamente difundido. A Schinus terebinthifolius (Raddi), conhecida por Aroeira, pertence a família Anacardiaceae, de grande plasticidade ecológica ocorrendo em quase todo o território brasileiro. É um dos espécimes mais utilizados na medicina popular da região Nordeste do país. Já foram isolados de várias de suas partes, diversos metabólitos secundários, a exemplo de terpenos, lectinas, saponinas, taninos, compostos fenólicos, flavonóides e alcalóides. Seus constituintes químicos exibem amplo espectro de atividades biológicas tais como ação antibacteriana, antiviral, antifúngica, anti-inflamatória, anticarcinogênica, anti-hipertensiva e hipolipidêmica. A Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico da linfadenite caseosa em caprinos e ovinos, enfermidade de alta prevalência na região Nordeste do Brasil acarretando danos para o criador através da desvalorização das peles, perda de peso e óbito do animal. Neste trabalho foram produzidos extratos aquoso e metanólico obtidos de folhas da Schinus terebinthifolius (Raddi) e analisados seus efeitos no crescimento in vitro de cepas virulentas e atenuadas da Corynebacterium pseudotuberculosis e sobre a proliferação in vitro de esplenócitos de camundongos (Mus musculus). O extrato metanólico foi testado nas concentrações de 2.000, 1500, 1000, 500, 250, 100 e 10 μg/dL, durante 48 horas. Nas quatro primeiras, houve produção de halos de inibição do crescimento do microorganismo de diâmetros variados, demonstrando poder microbicida do extrato da S. terebinthifolius nas concentrações citadas. Os esplenócitos expostos as concentrações de 100, 200 e 500 μg/dL, durante 24 e 72 horas, apresentaram acentuada proliferação celular. A viabilidade, crescimento e ativação celular foi estudada pelo método do brometo de 3-(4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difeniltetrazolio (MTT). Verificamos que a proliferação significativa observada pela contagem celular foi acompanhada de um bom desempenho pelo teste do MTT, assim como pela análise da atividade da enzima lactato desidrogenase. A atividade do compartimento lisossômico, assim como a dosagem de proteínas totais, demonstrou valores estatisticamente significantes com 24 e 72 horas de exposição sobre o crescimento celular , principalmente na concentração de 500 μg/dL de fenóis totais. Ao que parece, o aumento da atividade enzimática lisossômica aconteceu pela alta proliferação celular desencadeada pelos extratos da aroeira, de modo similar aos valores encontrados da ação da lactato desidrogenase, bem como a dosagem protéica. Foram medidos os níveis de IFN-gama, IL-2, IL-12, IL-17 e TNF-alfa e IL-6, IL-10, IL-13 e não houve diferença significativa entre os tratamentos, tempo ou linhagem murina. Todos os resultados revelam alta capacidade mitogênica dos extratos de aroeira com preservação da viabilidade celular. / Salvador

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

学位プログラム名: 京都大学大学院思修館 / 京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(総合学術) / 甲第22613号 / 総総博第13号 / 新制||総総||2(附属図書館) / 京都大学大学院総合生存学館総合生存学専攻 / (主査)教授 山口 栄一, 教授 山敷 庸亮, 教授 植田 充美, 大嶌 幸一郎 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Philosophy / Kyoto University / DFAM

Seventeen species of facultative anaerobic bacteria belonging to three genera (Serratia, Cellulomonas, and Corynebacterium) were screened for the production of xylitol; a sugar alcohol used as a sweetener in the pharmaceutical and food industries. A chromogenic assay of both solid and liquid cultures showed that 10 of the 17 species screened could grow on D-xylose and produce detectable quantities of xylitol during 24-96 h of fermentation. The ten bacterial species were studied for the effect of environmental factors, such as temperature, concentration of D-xylose, and aeration, on xylitol production. Under most conditions, Corynebacterium sp. NRRL B 4247 produced the highest amount of xylitol. The xylitol produced by Corynebacterium sp. NRRL B 4247 was confirmed by mass spectrometry. Corynebacterium sp. NRRL B 4247 was studied for the effect of initial D-xylose concentration, glucose, glyceraldehyde, and gluconate, aeration, and growth medium. Corynebacterium sp. NRRL B 4247 produced xylitol only in the presence of xylose, and did not produce xylitol when gluconate or glucose was the substrate. The highest yield of xylitol produced in 24 h (0.57 g/g xylose) was using an initial D-xylose concentration of 75 g/l. Under aerobic conditions the highest xylitol yield was 0.55 g/g while under anaerobic conditions the highest yield was 0.2 g/g. Glyceraldehyde in concentrations greater than 1 g/l inhibited Corynebacterium sp. B 4247 growth and xylitol production. Corynebacterium sp. NRRL B 4247 culture grown in the presence of potassium gluconate (96 g/l) for 48 h and on addition of D-xylose to the media increased accumulation to 10.1 g/l of xylitol after 150 h. Corynebacterium sp. NRRL B 4247 exhibited both NADH and NADPH-dependent xylose reductase activity in cell-free extracts. The NADPH-dependent activity was substrate dependent. The activity was 2.2-fold higher when DL-glyceraldehyde was used as substrate than with D-xylose. In cell-free extracts the difference in xylose reductase and xylitol dehydrogenase activity was highest at 24 h, whereas for cell cultures that were grown in gluconate and xylose, the difference in the reductase and dehydrogenase activities was highest at 12 h after xylose addition. The NAD+ dependent xylitol dehydrogenase activity was low compared to the cells grown without gluconate. The molecular weight of NADPH-dependent xylose reductase protein obtained by gel filtration chromatography was 58 kDa. Initial purification was performed on a DE-52 anion exchange column. Purification using Red Sepharose affinity column resulted in a 58 kDa protein on the SDS PAGE gel and was further purified on a Mono-Q column. The activity stained band on the native gel yielded 58, 49, 39 and 30 kDa bands on the denaturing gel. The peptides of the 58 kDa protein of Corynebacterium sp. B 4247 sequenced by mass spectrometry, identified with E2 and E3 (Bacillus subtilis) components of multi-enzyme system consisting of pyruvate dehydrogenase complex, 2-oxoglutarate dehydrogenase complex and oxo-acid dehydrogenase complex. A 75% match was shown by the peptide "QMSSLVTR" with E-value of 8e-04 to the Saccharomyces cerevisiae protein that was capable of reducing xylose to xylitol. The peptide "LLNDPQLILMEA" had conserved match "LL + DP" over several aldose reductases. The xylose reductase of the yeast Candida tropicalis ATCC 96745 was also purified. The molecular weight of the yeast NADPH-dependent xylose reductase was about 37 kDa on an SDS PAGE / Ph. D.

A mastite bovina destaca-se negativamente no cenário mundial em decorrência aos prejuízos ocasionados pelo seu dispendioso tratamento, sendo considerada a principal doença que acomete a pecuária leiteira. Como alternativa ao uso de antibióticos, a terapia fotodinâmica se apresenta como uma opção terapêutica no tratamento de infecções locais, que atua sem que haja seleção de micro-organismos resistentes. Seu mecanismo de ação resulta da interação entre uma substância fotossensibilizadora e luz em comprimento de onda ressonante, promovendo a formação de espécies reativas de oxigênio que apresentam ação citotóxica contra micro-organismos. O objetivo deste estudo foi investigar a habilidade da terapia fotodinâmica, in vitro, para inativar cepas causadoras da mastite bovina. Culturas de Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Corynebacterium bovis e Prototheca zopfii suspensas em PBS foram estimadas por meio da turbidez da suspensão correspondendo à concentração de 107 UFC/mL, caracterizando desta forma, oito grupos avaliados: controle (C), luz LED vermelho (L) =660nm/2 minutos de irradiação (12,22J/cm2), AM (azul de metileno - 1mM), PDT 5 segundos (0,50J/cm2), PDT 10 segundos (1,01J/cm2), PDT 30 segundos (3,05J/cm2), PDT 1 minuto (6,11J/cm2) e PDT 2 minutos (12,22J/cm2) de irradiação. Os grupos tratados com AM e Luz isoladamente não apresentaram ação citotóxica sobre os micro-organismos avaliados. S. dysgalactiae, S. aureus, C. bovis foram inativados sob 30 segundos de irradiação (3,05J/cm2); S. agalactiae e P. zopfii foram inativados sob 2 minutos de irradiação (12,22J/cm2). / Bovine mastitis stands out negatively on the world scenario due to the damage caused by its expensive treatment, being considered the main disease affecting dairy cattle. As an alternative to antibiotics, photodynamic therapy is presented as a therapeutic option in the treatment of local infections, which acts without any selection of resistant microorganisms. Its mechanism of action results from the interaction between a photosensitizing substance and light in the resonant wavelength, promoting the formation of reactive oxygen species, which have cytotoxic activity against micro -organisms. The aim of this study was to investigate, in vitro, the ability of photodynamic therapy to inactivate strains that cause bovine mastitis. Cultures of Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Corynebacterium bovis and Prototheca zopfii suspended in PBS were estimated by the turbidity of the suspension corresponding to a concentration of 107 CFU / mL, characterizing eight study groups: control (C), light - red LED (L) = 660nm / 2 minutes of irradiation (12.22J/cm2), BM (methylene blue - 1 mM ), PDT 5 seconds (0.50 J/cm2 ), PDT 10 seconds (1.01J/cm2), PDT 30 seconds (3.05 J/cm2 ), PDT 1 minute (6.11 J/cm2) and PDT 2 minutes (12.22 J/cm2) of irradiation. The groups treated with methylene blue and light alone had no cytotoxic effect on microorganisms evaluated. S. dysgalactiae, S. aureus, C. bovis were inactivated after 30 seconds of irradiation (3.05 J/cm2 ); S. agalactiae and P. zopfii were inactivated after 2 minutes of irradiation (12.22 J/cm2).

A mastite é a inflamação da glândula mamária cuja causa mais comum são as infecções bacterianas. É considerada a doença de maiores prejuízos e prevalência em vacas leiteiras. A forma subclínica da mastite é o tipo mais predominante de infecção intramamária (IIM), sendo Corynebacterium spp. um dos agentes mais frequentemente isolados. Portanto, os objetivos gerais deste estudo foram: 1) avaliar o efeito de IIMs subclínicas causadas por Corynebacterium spp. sobre a composição e a produção de leite de quartos mamários; 2) determinar o efeito da IIM causada por Corynebacterium spp. sobre o teor de gordura, proteína bruta, lactose, caseína, extrato seco total, extrato seco desengordurado do leite e contagem de células somáticas (CCS); 3) avaliar a técnica de Espectrometria de massas por Ionização e Dessorção à Laser Assistida por Matriz Tempo de Voo (MALDI/TOF-MS) para a identificação das espécies de Corynebacterium isoladas de quartos mamários. Foram utilizados 21 rebanhos leiteiros (n=1.242 animais), nos quais foram selecionadas vacas em lactação previamente identificadas com IIM causada por Corynebacterium spp. (n=285). Amostras de leite de quartos mamários de vacas previamente identificadas com IIM causada por Corynebacterium spp. (n=1.140) foram coletadas, identificadas por meio de cultura microbiológica e criopreservadas. Os isolados de Corynebacterium spp. (n=351) foram descongelados, recultivados e submetidos à identificação pela técnica de sequenciamento de genes 16S rRNA (standard gold) e MALDI/TOF-MS. Para a análise de MALDI/TOF-MS, os isolados bacterianos foram submetidos a protocolo de extração em tubo, baseado no uso de ácido fórmico. Do total de quartos mamários infectados por Corynebacterium spp. (n=190) identificados pelo sequenciamento de genes 16S rRNA, 46 quartos mamários apresentaram contralaterais sadios (controle). Para a coleta de amostras de leite para composição e CCS, as vacas foram submetidas à ordenha completa e individual dos quartos mamários. Foi avaliado o efeito de IIM causada por Corynebacterium spp. sobre a produção e a composição do leite, utilizando delineamento em parcelas subdivididas em faixas (strip-plot). Todos os quartos mamários infectados por Corynebacterium spp. (n=190) apresentaram média de CCS de 690x103células/mL. Dentre os quartos contralaterais, a CCS foi maior para os quartos com IIM causada por Corynebacterium spp. (194x103células/mL) que em quartos não infectados (81x103células/mL). Não houve efeito de Corynebacterium spp. sobre a produção de leite, gordura, proteína, caseína, lactose, sólidos totais e extrato seco desengordurado. Um total de 222 isolados foram identificados pela MALDI/TOF-MS como Corynebacterium spp., dos quais, Corynebacetium bovis foi o mais frequentemente isolado (n = 208). Espécies não-lipofíficas representaram 4,5% do total de isolados (n=10), destes C. auriscanis (n=3), C. xerosis (n=3), C. amycolatum (n=1), C. casei (n=1), C. efficiens (n=1), C. pseudotuberculosis (n=1). Apenas quatro amostras (1,8%) não foram identificadas ao nível de espécie, Corynebacterium spp. Houve equivalência de resultados de 95% entre as duas técnicas de identificação utilizadas. Em conclusão, IIMs causadas por Corynebacterium spp. não apresentam efeito sobre a produção e composição de leite, porém apresentam aumento significativo da CCS. Adicionalmente, a técnica de MALDI/TOF-MS com o uso da extração em tubo por ácido fórmico/acetonitrila foi aplicada com 91,57% de sensibilidade de identificação das espécies de Corynebacterium nos casos de mastite bovina subclínica, quando comparado aos resultados do sequenciamento de genes 16S rRNA. / Mastitis is an inflammation of the mammary glands which bacteria are the most common cause of infections. It is considered a disease with higher prevalence and losses in dairy cows. The subclinical form of mastitis is the most prevalent type of intramammary infection (IMI), and Corynebacterium spp., one of the agents most frequently isolated. Therefore, the main objectives of this study were: 1) to evaluate the effect of subclinical IMI caused by Corynebacterium spp. on milk composition and yield of mammary quarters; 2) to determine the effect of IMI caused by Corynebacterium spp. on the concentration of fat, protein, lactose, casein, total solids, non fat dry milk and somatic cell count (SCC); 3) to evaluate the technique of Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization - Time-of-Flight - Mass Spectrometry (MALDI/TOF-MS) for species identification of Corynebacterium isolated from mammary glands. Twenty-one dairy herds were used (n = 1242 animals) on which lactating cows were selected previously identified with IMI caused by Corynebacterium spp. (n = 285). Samples of milk from mammary glands of cows previously identified with IMI caused by Corynebacterium spp. (n = 1140) were collected, identified by microbiological culture and cryopreserved. The strains of Corynebacterium spp. (n = 351) were thawed and recultivated wich were submitted for identification by the technique of sequencing 16S rRNA (gold standard) and MALDI/TOF-MS. For analysis of MALDI/TOF-MS, the isolates were subjected to tube-extraction protocol based on the use of formic acid and acetonitrile. Of the total number of mammary quarters infected by Corynebacterium spp. (n = 190) identified by sequencing 16S rRNA genes, 46 showed contralateral healthy mammary quarters (control). For the collection of milk composition samples and SCC, cows were submitted to a complete milking in individual mammary quarters. The effect of IMI caused by Corynebacterium spp. on milk yield and composition were analyzed using strip-plot design. All mammary quarters infected with Corynebacterium spp. (n = 190) had mean of CCS 690x103cells/mL. Among the contralateral quarters, CCS was higher in quarters with IMI caused by Corynebacterium spp. (194x103células/mL) comparing with uninfected quarters (81x103cells/mL). There was no effect of Corynebacterium spp. on milk yield, on the concentration of fat, protein, casein, lactose, total solids and solids not fat. A total of 222 isolates were identified by MALDI/TOFMS as Corynebacterium spp. of which, Corynebacetium bovis were the most isolated (n = 208). Species no-lipophilic represented 4.5% of isolates (n = 10) of these C. auriscanis (n = 3), C. xerosis (n = 3), C. amycolatum (n = 1), C. casei (n = 1), C. efficiens (n = 1), C. pseudotuberculosis (n = 1). Only four samples (1.8%) were not identified to the specie level. There were equivalence results of 95% between the two identification techniques used. In conclusion, IMI caused by Corynebacterium spp. have no effect on milk yield and composition, but exhibit a significant increase in CCS. Additionally, the technique of MALDI/TOF-MS using the tube-extraction by formic acid/acetonitrile was applied with 91.57% sensitivity for identifying the species of Corynebacterium on cases of bovine mastitis subclinical when compared to the results of genes sequencing 16S rRNA.