Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Banca: Julio Cesar Ferraz Jacob / Resumo: A colheita de espermatozóides da cauda do epidídimo e sua criopreservação representam um grande avanço biotecnológico na equinocultura, e pode ser a última chance de preservação do material genético de garanhões após sua morte inesperada ou lesões que impossibilitem a cobertura ou colheita de sêmen. Os objetivos dessa pesquisa foram comparar a efetividade de dois diluidores utilizados para a recuperação dos espermatozóides epididimários em relação aos índices de congelabilidade determinados laboratorialmente (Experimento I) e as taxas de concepção proporcionadas por cada metodologia ao utilizar baixa dose inseminante (Experimento II). No Experimento I foram utilizados 58 testículos, o ducto epididimário de um testículo de cada garanhão foi lavado com o diluidor sem pentoxifilina-Botu-Sêmen®1 (Controle) e o ducto epididimário do testículo contralateral, com o diluidor contendo 7,18 mM de pentoxifilina-Botu-Turbo®2 (PTX). No Experimento II, foi utilizado um "pool de espermatozóides" dos testículos de dois garanhões. As amostras foram congeladas e direcionadas às inseminações artificiais em diferentes doses inseminantes, formando os seguintes grupos: 800x106 espermatozóides recuperados com o diluidor sem pentoxifilina (800 Controle), 100x106 espermatozóides recuperados com diluidor sem pentoxifilina (100 Controle) e 100x106 espermatozóides recuperados com o diluidor com pentoxifilina (100 PTX). O índice de concepção para as éguas inseminadas nos grupos 800 Controle, 100 Controle e 100 PTX foi de 68% (11/16), 31,25% (5/16) e 50% (8/16), respectivamente. Frente aos resultados obtidos, conclui-se inseminações artificiais com apenas 100x106 espermatozóides colhidos com o meio diluidor contendo pentoxifilina garantem índices aceitáveis de concepção e maximiza o uso de espermatozóides epididimários congelados / Abstract: The recovery of spermatozoa from epididymal cauda and its cryopreservation represents a great technological advance, since it is the last possibility to preserve genetic material from dead or deceased valuable males. The aims of this study were to compare the effectiveness of two extenders used for recovery of epididymal sperm in relation to its freezability (Experiment I) and conception rates provided by each methodology using a low insemination dose (Experiment II). In Experiment I, 58 testis were used, epididymal cauda of each stallion were separated and flushed with a skim milk-extender either without (Botu-Sêmen®; Control Group) or with 7,18 mM of pentoxifylline (Botu-Turbo®; PTX Group) and then frozen. In Experiment II, a "pool" of epididymal sperm from 2 stallions was used. The samples were frozen and artificial insemination was performed using different insemination doses, comprising the following groups: 800x106 sperm recovered without PTX (800 Control); 100x106 sperm recovered without PTX (100 Control) and 100x106 sperm recovered with PTX (100 PTX). The conception rates were 68% (11/16), 31.25% (5/16) e 50% (8/16) for 800 Control, 100 Control and 100 PTX group, respectively. Based in these results, it was possible to conclude that artificial inseminations with 100x106 sperm recovered with PTX guarantee acceptable conception rates and maximize the use of frozen equine epididymal sperm / Mestre

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Marciane da Silva Maia / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Cezinande de Meira / Resumo: Objetivou-se estudar as implicações da redução na proporção de gema de ovo no meio diluidor Glicina-Gema-Leite e testar a prevenção do estresse oxidativo utilizando os antioxidantes Trolox®, Catalase ou Glutationa no processo de criopreservação de sêmen ovino. No Experimento 1, determinou-se o efeito da redução na proporção da gema de ovo no meio diluidor Glicina-Gema-Leite, utilizando-se quatro ejaculados de cada carneiro das raças Santa Inês (n=4) e Dorper (n=4), colhidos por meio de vagina artificial. Após as avaliações macro e microscópicas, o sêmen foi mantido sob temperatura de 32oC e diluído para atingir-se concentração de 400 x 106 espermatozóides/mL no meio Glicina- Gema-Leite contendo 20% (GGL20), 15% (GGL15), 10% (GGL10) ou 5% (GGL5) (v/v) de gema de ovo. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,25 mL, e em seguida, as amostras foram refrigeradas e congeladas em sistema com controle automatizado. A descongelação foi feita em banho-maria à 40oC/20 segundos. A cinética espermática foi determinada em sistema computadorizado de análise de sêmen (CASA) e a integridade total das membranas espermáticas pela combinação dos fluorocromos diacetato de carboxifluoresceína (DIC) e iodeto de propídio (IP). Na análise pósdescongelação, as motilidades total (MT) e progressiva (MP) nos tratamentos GGL10 e GGL5 foram maiores (P<0,05) do que no GGL20. A VAP foi menor em GGL20 dos demais meios (P<0,05) e a VSL foi maior em GGL5 do que em GGL20 (P<0,01). A VCL e o ALH apresentaram maiores valores no GGL10 e GGL5 do que no GGL15 e GGL20 (P<0,01). O BCF no GGL5 foi maior (P<0,05) do que nos demais diluidores e o sêmen criopreservado nos meios GGL10 e GGL5 apresentaram maior percentual de espermatozóides com membranas íntegras do que no meio GGL20 (P<0,05). Frente aos resultados obtidos, o GGL5 foi utilizado como meio base no experimento seguinte. No Experimento 2, ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of the study was the implications of the reduction in the proportion of egg yolk in the extender Glycine-Yolk-Milk and to test the prevention of oxidative stress using antioxidants Trolox, Catalase or glutathione in the process of cryopreservation of ovine semen. In Experiment 1, we determined the effect of reduction in the proportion of egg yolk in the extender Glycine-yolk-milk, using four ejaculates from each ovine of Santa Inês breed (n=4) and Doper breed (n=4), collected using artificial vagina. After the assessment, macro and microscopic, semen was kept at a temperature of 32oC and diluted to achieve concentrations up to 400 x 106 sperm / mL in the extender Glycine-yolk-milk containing 20% (GGL20), 15% (GGL15), 10% (GGL10) ou 5% (GGL5) (v/v) of egg yolk. The semen was stored in straws of 0.25 mL, and then, samples were refrigerated and frozen in system with automated control. Thawing was done in a water bath to 40oC/20 seconds. The kinetics was determined in sperm computerized semen analysis (CASA) and the overall integrity of sperm membranes by the combination of fluorochromes carboxyfluorescein diacetate (DIC) and propidium iodide (IP). In analyzing post-thawing, motilities total (MT) and progressive (MP) in the treatments GGL10 and GGL5 were higher (P <0.05) than in GGL20. The VAP was lower in GGL20 of other means (P <0.05) and VSL was higher in GGL20 than in GGL20 (P <0.01). The VCL and ALH showed higher values in GGL10 and GGL5 than in GGL15 and GGL20 (P <0.01). The BCF in GGL5 was higher (P <0.05) than in the other extenders and cryopreserved semen in the environments GGL10 and GGL5 showed higher percentages of spermatozoon with intact membranes than in the extender GGL20 (P <0.05). Given our results, the GGL5 was used as a base extender in the experiment following. In Experiment 2, ...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Banca: Ériklis Nogueira / Banca: Karina Beloti Avelino / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: objetivo deste estudo foi contribuir para o conhecimento da técnica de criopreservação de embriões in vitro. Oócitos (n=965) foram maturados durante 24h em TCM-199 suplementado com 0,2mM de piruvato, 25 mM de bicarbonato de sódio e 75 mg/ml de gentamicina. Os zigotos foram cultivados em meio SOFm suplementado com 0,5% BSA e FCS 2,5%. Culturas foram realizadas a 38,5°C em 5% de CO2 no ar umidificado, em 100 μl de meio de gotículas recuperado com óleo mineral. No sétimo dia da cultura, os embriões (n = 387) foram marcados e apenas blastocistos excelente a boa qualidade foram criopreservados (10 embriões / palheta 0,25 ml). Os seguintes grupos experimentais foram concebidos, nomeado de acordo com a solução de crioprotetor utilizado: glicerol 1,0 M de etileno glicol em PBS (G); glicerol 1,0 M + 0,3 M de sacarose em PBS (GS); etilenoglicol 1.5 M em PBS (E) e 1,5 M + 0,3 M de sacarose em PBS (ES). Após o descongelamento, os embriões foram re-cultivadas em 100 ml de meio de gotas SOFm a 38,5 º C e 5% de CO2 no ar por 72 h. Os dados demonstraram que a qualidade do embrião, avaliada pelo escore de embriões e número de células embrionárias, parece ser melhor no grupo E e ES. No processo de vitrificação, 300 embriões de excelente qualidade morfológica, Bi e Bl foram vitrificados, e foram sincronizadas 500 receptoras de embriões, divididas em 3 grupos de 150 animais cada grupo. O diagnóstico de gestação nas receptoras após a inovulação dos embriões foram realizados após 42 dias. A taxa de concepção variou entre os grupos, sendo que no grupo I obteve 6 gestações (18,75%) de receptoras que receberam embriões da raça Nelore, 9 gestações (26,47%) de receptoras que receberam embriões da raça Brangus e 12 gestações (35,3%) de receptoras que receberam embriões da raça Brahman ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to contribute to the knowledge of the technique of cryopreservation of embryos in vitro. Oocytes (n = 965) were matured for 24h in TCM- 199 supplemented with 0.2 mM pyruvate, 25 mM sodium bicarbonate and 75 mg / ml of gentamicin. Zygotes were cultured in medium supplemented with 0.5% SOFm BSA and 2.5% FCS. Cultures were performed at 38.5 ° C in 5% CO2 in humidified air in 100 l of medium droplets recovered with mineral oil. On the seventh day of culture, the embryos (n = 387) were scored and only good quality excellent blastocysts were cryopreserved (10 embryos / straw 0.25 ml). The following experimental groups were designed, named according to the cryoprotectant solution used: glycerol 1.0 M ethylene glycol in PBS (G) 1.0 M glycerol + 0.3 M sucrose in PBS (GS), ethylene glycol 1.5 M PBS (E) and 1.5 M + 0.3 M sucrose in PBS (ES). After thawing, the embryos were re-grown in 100 ml of medium SOFm drops to 38.5 º C and 5% CO2 in air for 72 h. The data demonstrated that embryo quality was evaluated by scoring the number of embryos and embryonic cells, seems to be better in group E and ES. In the process of vitrification, 300 embryos of excellent morphology, Bi and Bl, were vitrified, and 500 were synchronized embryo recipients were divided into 3 groups of 150 animals each group. Pregnancies after embryo transfer in recipient embryos were performed after 42 days. The conception rate varied between the groups, whereas in group I had six pregnancies (18.75%) of recipients that received embryos Nellore, 9 pregnancies (26.47%) of recipients that received embryos of Brangus and 12 pregnancies (35.3%) of recipients that received embryos from Brahman ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Jose Mauricio Barbanti Duarte / Coorientador: Rodrigo del Rio do Valle / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Marcílio Nichi / Resumo: As alterações constantes do meio ambiente com diminuição do habitat natural dos primatas brasileiros têm estimulado o desenvolvimento de biotecnologias na área da reprodução, visando à preservação de espécies. Este estudo teve por objetivo avaliar, pela primeira vez, técnicas de criopreservação de sêmen de Alouatta caraya. Foram colhidas 26 amostras de sêmen de seis Alouatta caraya machos adultos e sadios, mantidos em cativeiro no Centro Nacional de Primatas (CENP), Ananindeua, PA. As amostras foram analisadas imediatamente após a colheita quanto aos parâmetros volume, pH, concentração, motilidade total e progressiva, integridade de membrana plasmática, integridade de acrossoma, atividade citoquímica mitocondrial, estresse oxidativo (TBARS) e fragmentação de DNA (SCSA). Após as análises iniciais, as amostras foram congeladas com quatro diluidores diferentes - Test-gema de ovo com glicerol 3 ou 4% e Test-lecitina de soja com glicerol 3 ou 4%, utilizando máquina de congelação automática TK 3000. As amostras foram descongeladas e analisadas aos 10, 40 e 80 minutos pós-descongelação. Diluidores à base de gema de ovo foram mais adequados para congelação de sêmen dessa espécie, quando comparados aos diluidores à base de lecitina de soja. Não houve diferença estatística quanto à concentração de glicerol, porém para o diluidor à base de gema de ovo, a concentração de 4% apresentou melhores resultados. Este trabalho trouxe informações inéditas a respeito de características seminais e aspectos da criopreservação de sêmen dessa espécie, todavia os protocolos de congelação testados não foram considerados adequados para a preservação das amostras estudadas / Abstract: The constant environmental changes with reduction of the natural habitat of the Brazilian primates require the development of assisted reproductive techniques (ARTs) for species conservation. The objective of this study was to evaluate, for the first time, cryopreservation techniques for Alouatta caraya semen. Twenty-six semen samples were collected from six captive adult Alouatta caraya from the National Primate Center, Ananindeua, PA - Brazil. Samples were analyzed immediately after collection for the following parameters: volume, pH, concentration, total and progressive motility, plasma membrane integrity, acrosome integrity, oxidative stress (TBARS), and DNA fragmentation (SCSA). After initial evaluation, samples were frozen in four different extenders - Test-egg yolk with 3 or 4% glycerol and Test-soy lecithin with 3 or 4% glycerol - using an automatic freezer TK 3000. Samples were thawed and analyzed for the same parameters at 10, 40 and 80 minutes post-thaw. Egg yolk-based extenders seemed better for cryopreservation of semen from this species when compared to soy lecithin-based extenders. Although there was no statistical difference between the different glycerol concentrations, for the egg yolk-based extenders, 4% glycerol had better results. This study brought novel information on semen characteristics and cryopreservation aspects for this species, although the protocols tested were not considered suitable for the cryopreservation of the samples studied / Mestre

Orientador: Francisco Guilherme Leite / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Rubens Paes Arruda / Resumo: A utilização da L-carnitina - ácido y-trimethilamino- ß-hidróxido butírico - visando melhorar os parâmetros espermáticos tem sido intensivamente utilizado em medicina humana e em menor escala em medicina veterinária com resultados satisfatórios. O objetivo deste estudo foi verificar a influência da suplementação oral de L-carnitina em sêmen criopreservado de garanhões. Utilizou-se neste experimento quatro garanhões submetidos a duas colheitas de sêmen por semana por um período de quatro semanas durante o mês de agosto de 2001; amostras se sêmen desses animais, agora denominado TO, foram criopreservadas. Os mesmos quatro garanhões receberam uma suplementação oral de quinze gramas de L-carnitina uma vez ao dia nos meses de maio, junho, julho e agosto de 2002 e no mês de agosto de 2002 foram submetidos a duas colheitas de sêmen semanais, tendo suas amostras também criopreservadas, que passaram a ser denominado tratado (T1). Foram analisados e comparados entre si os seguintes parâmetros espermáticos:- total de espermatozóides no ejaculado e integridade da membrana espermática e através de análise computadorizada as variáveis motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP), linearidade (LIN), velocidade de trajeto (VAP), velocidade progressiva (VSL) e velocidade curvilinear (VCL) antes e após da realização de um teste de termo-resistência (TTR). Foi realizado um delineamento casualizado com oito repetições (dois tratamentos e quatro garanhões); empregou-se análise de variância - ANOVA - com posterior desdobramento para estudar o efeito dos tratamentos em cada um dos garanhões - Teste de Tukey - o nível de significância adotado foi p<0,05... (resumo completo, clicar acesso no endereço eletrônico abaixo) / Abstract: Owing its positive effect on the improvement of spermatic parameters, L- carnitine - ?-trimethilamino- ß-hidroxid butiric acid - has been intensively utilized in human medicine and in a lower scale in veterinary medicine with satisfactory results. The objective of this study was to verify the influence of oral supplementation with L-carnitine on cryopreserved stallion semen. Four stallions were submitted to semen collection twice a week during a four week period in August of 2001. The collected samples from those horses were then cryopreserved and they were assigned as a control group (T0). The same horses received fifteen grams of L- carnitine by oral supplementation, once a day, during May, June, July and August of 2002, and then they were submitted to semen collection twice a week in August of 2002. Those collected samples were also equally cryopreserved, and assigned as treatment group (T1). The following spermatic parameters were analyzed and submitted to a pair wise comparison: total sperm number in the ejaculate and sperm membrane integrity and by computer analyze, variables as: total motility (TM), progressive motility (PM), linearity (LIN), path velocity (VAP), progressive velocity (VSL), and track speed (VCL). Those variables were then determined before and after a term resistance test (TRT). A casual design was established using eight repetitions (two treatments and four stallions). To investigate the treatment effect, analysis of variance (ANOVA) was performed and to investigate de effect within stallion, the Tukey's test - significance level was established as p£ 0.05. The means and standard errors of means for the variable total motility, determined before and after the term resistance test, total sperm number in the ejaculate and sperm membrane integrity was significantly higher in the treatment group (T1) when compared to the control group (T0)... (complete abstract, access undermentioned eletronic address) / Mestre

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Carlos Antonio de Miranda Bomfim / Banca: André Luis Rios Rodrigues / Resumo: Objetivou-se avaliar e validar o sistema automatizado de refrigeração e congelação de fabricação nacional TK 3000, comparativamente ao sistema de refrigeração e de congelação pelo método geladeira/vapor de nitrogênio líqüido. Foram utilizados dez carneiros da raça Santa Inês sendo colhidos, por meio de vagina artificial, três ejaculados de cada reprodutor. Após as avaliações do ejaculado, o sêmen foi diluído em meio para congelação Glicina-Gema-Leite e envasado em palhetas de 0,25 Ml com 100 x 106 espermatozóides totais/doses, sob temperatura de 32° C. As amostras foram refrigeradas em geladeira e/ou com controle automatizado e posteriormente congeladas em vapor de nitrogênio líqüido e/ou com controle automatizado. Os resultados foram similares (P<0,05) entre a refrigeração em geladeira e a refrigeração com controle automatizados em todos os parâmetros avaliados pós descongelação e ao final do teste de exaustão, o mesmo observou-se entre a refrigeração em geladeira e congelação em vapor de nitrogênio líqüido e refrigeração e congelação com controle automatizado e as combinações refrigeração em geladeira e congelação com controle automatizado e refrigeração com controle automatizado e congelação em vapor de nitrogênio líqüido. Concluí-se que o sistema automatizado TK 3000 é adequado a criopreservação do sêmen ovino, com qualidade equivalente àquela processada no sistema geladeira/vapor de nitrogênio líqüido. / Abstract: The objectives of the present study were to validate and evaluate a programmed automatic system for freezing and cooling, using a national equipment TK 3000, compared to a method using refrigerator and liquid nitrogen for the same procedures. Ten rams from Santa Ines breed were submitted to semen collection by artificial vagina, with a total of three ejaculates from each sire. After the ejaculate evaluation, semen was diluted in a freezing extender Egg- Glycine - Milk and stored in a 0.25 mL straws with a total of 100 x 10 6 sperm per dose at 32° C. The samples were cooled inside a refrigerator and /or utilizing an automatic programmed system, being then frozen in liquid nitrogen vapor and/ or using automatic control. The results were simmilar (P< 0.05) between samples submitted to cooling using refrigerator and automatic control for all analyzed parameters after thawing and at the end of the resistant test. The same was observed among samples submitted to cooling in refrigerator followed by liquid nitrogen vapor for freezing, samples cooled and frozen both using an automatic control, samples processed by the combinations of cooling in refrigerator followed by freezing with an automatic control, and samples cooled with automatic control followed by freezing in liquid nitrogen vapor. In conclusion, the TK 3000 is an adequate automatic system for ovine semen cryopreservation and it provides a quality which is equivalent to semen processed in refrigerator/ liquid nitrogen vapor system. / Mestre

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Resumo: A recuperação de espermatozóides da cauda do epidídimo e sua criopreservação pode ser a última chance para recuperação do material genético quando ocorre morte súbita ou lesão grave em garanhões de alto valor genético. Sendo assim, o objetivo do experimento I foi comparar os parâmetros espermáticos dos espermatozóides da cauda do epidídimo recuperados imediatamente após orquiectomia e em diferentes momentos após armazenamento a 5°C e a temperatura ambiente. Já o experimento II, teve o objetivo de comparar os parâmetros espermáticos e fertilidade dos espermatozóides do ejaculado e do epidídimo recuperados logo depois da orquiectomia e após armazenamento por 24 horas a 5°C. No experimento I, 48 garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral, sendo que em oito a colheita dos espermatozóides do epidídimo foi realizada imediatamente após orquiectomia (grupo controle). Nos outros 40 garanhões, um epidídimo foi armazenado a temperatura ambiente e o contralateral armazenado a 5°C por 6, 12, 18, 24 e 30 horas, de acordo com o grupo. No experimento II, dois ejaculados de oito garanhões foram colhidos com vagina artificial e congelados (grupo EJ-0h). Uma semana após, os garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral, sendo que os espermatozóides de um epidídimo foram congelados imediatamente após orquiectomia (grupo EP-0h) e o epidídimo contralateral foi previamente armazenado por 24 horas a 5°C (EP-24h). O teste de fertilidade demonstrou que o grupo EP-0h (92,3%; n=13) tendem a ser maior que os grupos EJ-0h (61,5%; n=13) e EP-24h (61,5%; n=13). Conclui-se que o armazenamento dos testículos-epidídimos a 5°C proporcionou melhor preservação espermática e que, independente da temperatura, a motilidade progressiva é o parâmetro espermático mais sensível ao tempo de armazenamento. / Abstract: Cauda epididymis sperm recovery and cryopreservation may be the last chance to obtain genetical material when sudden death or serious injury occur in valuable stallions. Thus, the aim of experiment I was to compare sperm parameters of epididymal sperm recovered immediately after orchiectomy and at different moments after storage at 5°C and at room temperature. Experiment II aimed to compare sperm parameters and fertility of ejaculated sperm and epididymal sperm recovered immediately after orchiectomy and after storage for 24h at 5°C. In experiment I, 48 stallions were submitted to bilateral orchiectomy, in eight of those the sperm collection were done immediately after orchiectomy (control group). In the other 40 stallions, one epididymis was stored at room temperature and the other was stored at 5°C for 6, 12, 18, 24 and 30 hours accorded to groups. In experiment II, two ejaculated from eight stallions were obtained with artificial vagina and cryopreserved (group EJ-0h). One week later, the stallions were submitted to bilateral orchiectomy, and the sperm of one epididymal were frozen immediately after orchiectomy (group EP-0h) and the contralateral epididymal was previously storage for 24h at 5°C (EP-24h). Fertility test showed that group EP-0h (92,3%; n=13) tended to be higher than groups EJ-0h (61,5%; n=13) and EP-24h (61,5%; n=13). These results allowed concluding that storage of the testis-epididymis complex at 5°C is more efficient in preserving sperm parameters than room temperature storage and that progressive motility is the parameter that is more affected by storage period, regardless of the temperature. / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: César Roberto Esper / Banca: Karina Beloti Avelino / Resumo: Dentre as biotecnologias aplicadas à reprodução animal, atualmente um dos maiores desafios é a criopreservação de embriões PIV. Esses embriões apresentam alta criosensibilidade, devido principalmente a excessiva deposição lipídica no citoplasma, e que por sua vez está relacionada com a utilização de SFB nos meios. Neste trabalho foram avaliados os efeitos da suplementação protéica com BSA, SFB e FE e suas associações na PIV de embriões bovinos durante as etapas de MIV e CIV, visando melhorar sua criotolerância. Na MIV foram utilizadas sete diferentes combinações (SFB, BSA, FE, BSA+SFB, BSA+FE, SFB+FE e BSA+SFB+FE), e no CIV quatro tratamentos (BSA, BSA+SFB, BSA+FE e BSA+SFB+FE). Os embriões em estádios de Bl e Bx foram vitrificados e após seu reaquecimento foram avaliadas as taxas de eclosão embrionária em 24 e 48 horas. Dos oócitos colocados em maturação, obteve-se um total de 85,4% de clivagem e 35,52% de produção embrionária. Ao analisar os efeitos da fonte protéica na MIV notou-se que o grupo tratado com BSA apresentou as piores taxas de clivagem (80,96%) (p<0,05) em relação aos demais grupos, o melhor resultado de produção embrionária foi obtido com BSA+SFB (46,69%) e os melhores índices de eclosão embrionária pós reaquecimento foram nos tratamentos BSA+FE (44,35%), SFB+FE (44,90%) e BSA+SFB+FE (42,48%). Quando se avaliou os efeitos de fonte protéica na CIV, não houve diferença significativa entre os tratamentos quanto a clivagem, o BSA apresentou o pior desempenho na produção de embriões (31,88%) (p<0,05) em relação aos demais grupos que não diferiram entre si, e os melhores índices de eclosão embrionária 24 e 48h pós reaquecimento foram obtidos com o tratamento BSA+FE (37,64% e 51,34%, respectivamente) / Abstract: Among the biotechnology applied to animal reproduction, nowadays one of the biggest challenges is the cryopreservation of embryos produced in vitro. These embryos have a high cryosensitivity, mainly due to excessive fat deposition in the cytoplasm, which in turn is related with the FCS used in the mediums for embryo production in vitro. The aim of this study was to evaluate the effects of protein supplementation with BSA, FBS and FE, and their associations in IVP bovine embryos during the stages of IVM and IVC, to improve their cryotolerance. For IVM were used seven different combinations (FCS, BSA, FE, BSA + FCS, BSA + FE, FE and FBS + BSA + FCS + FS), and four treatments during IVC (BSA, BSA + FCS, BSA + FE, BSA+ FE+ FCS). Embryos in stage of Bl and Bx were vitrified and after their reheating the rates of hatched blastocysts at 24 and 48 hours were evaluated. Of the oocytes placed into maturation, we obtained 85.4% of cleavage and 35.52% of embryo produced. When were evaluated the effects of protein source in IVM was noted that the BSA-treated group showed the worst rates of cleavage (80.96%) (p <0.05) compared to other groups, the best result of embryo production was obtained with FCS + BSA (46.69%) and the highest rates of hatched blastocysts after rewarming were obtained with FE + BSA (44.90%), FE + FCS (44.35%) and FS + FCS + BSA ( 42.48%). When we assessed the effects of protein source in the IVC, there was no significant difference between treatments for the cleavage, the BSA group had the worst performance in the production of embryos (31.88%) (p <0.05) compared to other groups that not differ, and the highest hatched blastocysts in 24 and 48 hours after rewarming were obtained by treating BSA + FE (37.64% and 51.34%, respectively) / Mestre

Resumo: Este trabalho foi conduzido com duas espécies arbóreas do gênero Anadenanthera (Mimosaceae): A. peregrina var. falcata (angico-do-cerrado) e A. colubrina var. cebil (angico-vermelho), com os objetivos de (a) confirmar a classificação das sementes quanto ao comportamento fisiológico no armazenamento e quanto à longevidade; (b) conservar a qualidade fisiológica das sementes a médio prazo; (c) testar métodos de secagem para reduzir, com segurança, o teor de água das sementes a baixos níveis; (d) armazenar as sementes desidratadas em temperatura inferior a zero, visando à conservação a longo prazo. As sementes foram desidratadas sobre soluções salinas saturadas, sobre sílica gel e por liofilização. As sementes desidratadas foram armazenadas por diferentes períodos nos ambientes de sala de laboratório, câmara seca, câmara fria, freezer, ultra-freezer e nitrogênio líquido fase vapor. Foram avaliados o teor de água, a capacidade germinativa e o vigor das sementes. As duas espécies são ortodoxas e de curta longevidade quando armazenadas na sala de laboratório. Os três métodos de secagem foram eficientes para reduzir o teor de água das sementes. As sementes conservaram sua qualidade fisiológica a médio prazo quando (a) acondicionadas em embalagem permeável e armazenadas em câmara seca; (b) acondicionadas em embalagem impermeável e armazenadas em câmara fria; (c) liofilizadas, acondicionadas em embalagem impermeável e armazenadas em sala de laboratório. As sementes desidratadas suportaram o armazenamento em temperaturas baixa e ultra-baixa, demonstrando possibilidades de serem conservadas a longo prazo. / Abstract: This work was carried out with two brazilian tree species of the Anadenanthera genus (Mimosaceae): A. peregrina var. falcata and A. colubrina var. cebil , with the objectives of (a) to confirm the seed classification concerning both to the physiological behaviour during storage and to the longevity; (b) to conserve the seed physiological quality in medium-term storage; (c) to test drying methods for reduce safely to low values the seed moisture content; (d) to store dried seeds at sub-zero temperatures for a long-term storage. The seeds were dried over saturated salt solutions, over silica gel and by freeze-drying methods. Dried seeds were stored during different periods at room temperature, dry chamber, cold chamber, freezer, ultra-freezer and liquid nitrogen vapour phase. During storage, seed moisture content, germinability and vigour were evaluated. Seeds of both species showed orthodox behaviour and short longevity when stored at room temperature. The three drying methods were effective to reduce safely the seed moisture content. In medium-term storage, seeds maintained their physiological quality when (a) packaged into permeable container and stored at dry chamber; (b) packaged into impermeable container and stored at cold chamber; (c) freeze-dried, packaged into impermeable container and stored at room temperature. Dried seeds tolerated both low and ultra-low storage temperatures, showing possibility for long-term storage. / Orientador: Ivor Bergemann de Aguiar / Coorientador: Antonio Carlos de Souza Medeiros / Banca: Márcia Balistiero Figliolia / Banca: Claudio Jose Barbedo / Banca: Rinaldo Cesar de Paula / Banca: Teresinha de Jesus Deléo Rodrigues / Doutor

Resumo: O experimento foi realizado em uma suinocultura de produção comercial da linhagem Topigs, utilizando dez machos reprodutores, com o objetivo de avaliar o efeito das suplementações intramusculares com vitaminas e minerais (Selen- Fos® e Zimag®) na qualidade espermática do sêmen in natura e após a congelação. Foram realizadas duas análises estatísticas: Multivariada para descrição das alterações observadas; ANOVA utilizando o modelo inteiramente casualizado. As variáveis seminais analisadas foram: volume, concentração, turbilhonamento, motilidade, vigor, porcentagem de espermatozóides vivos, mortos, e vivos sem acrossomo, morfologia e integridade da membrana (Teste hiposmótico). O experimento foi dividido em duas fases. Na primeira fase o sêmen in natura dos 10 cachaços foi avaliado e posteriormente congelado. Uma vez terminada esta fase iniciou-se a segunda fase onde sete animais receberam as suplementações com vitaminas e minerais via intravenosa e três permaneceram sem recebê-las. Após um período de 60 dias contados a partir do dia da administração das vitaminas e dos minerais se iniciaram novamente as coletas de sêmen e as avaliações tanto in natura como o descongelado. O sêmen in natura apresentou melhor qualidade espermática quando comparado com o sêmen descongelado e o sêmen dos cachaços que receberam as suplementações tiveram melhora (p 0,05) significativa na qualidade do sêmen e na criotolerância / Abstract: The experiment was conducted in a commercial swine production using ten boars of Topigs® line. The aim was to evaluate the effect of intramuscular supplementation of vitamins and minerals (Selen-Fos® and Zimag®) on fresh semen quality and after freezing. Two statistical analysis were used: multivariate description of the observed changes and ANOVA with randomized design. Analyzed seminal variables were: concentration, turbilhamento, motility, vigor, percentage of live sperm, dead and alive without acrosome, morphology and membrane integrity (HO). The experiment was divided into two phases. In the first phase, the fresh semen of 10 boars was evaluated and subsequently frozen. About three days after the freezing process, the semen was thawed and the quality was assessed. After this in the second phase, seven boars received intramuscular supplementation of minerals and vitamins and three boars received without the supplementation for control. About 60 days later, all these boars were submitted to semen collection and the semen was again evaluated both, fresh and thawed. The fresh semen showed better quality than the frozenthawed in the two phases of the experiment (p< 0,05). The semen of boars that received the supplementation had a significant improvement on semen quality and freezing resistant (p< 0,05) / Orientadora: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Coorientadora: Maria Cristina Thomaz / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: Juliana Corrêa Borges Silva / Mestre