Os probióticos são produtos ou preparações que contém microrganismos viáveis, com concentrações definidas, capazes de alterar a microbiota intestinal do hospedeiro, exercendo efeitos benéficos a sua saúde. Os microrganismos mais usados para esta finalidade são as bactérias lácticas, destacando-se espécies de Lactobacillus. Apesar do avanço científico nesta área, poucos estudos são encontrados a respeito da ação probiótica sobre protozoários, como Cryptosporidium parvum, um parasito intestinal importante por causar uma das principais infecções oportunistas em indivíduos imunodebilitados, como aidéticos e transplantados. Os produtos probióticos podem ser uma alternativa para o tratamento da criptosporidiose, uma vez que, ainda, não há um tratamento eficaz contra esta parasitose. Sendo assim, o presente estudo visou avaliar a ação de cepas de Lactobacillus plantarum, L. acidophillus e L. delbruekii, na forma de pool, sobre Cryptosporidium parvum em camundongos imunossuprimidos. Os experimentos foram desenvolvidos utilizando-se 42 animais divididos em seis grupos: Controle - não imunossuprimidos, não infectados e não tratados; Imuno - imunossuprimidos, não infectados e não tratados; Não tratado - imunossuprimidos, infectados e não tratado; NTZ - imunossuprimidos, infectados e tratados com o antiprozotoário nitazoxanida (150mg/kg); PRO - imunossuprimidos, infectados e tratados com a preparação probiótica (3x10¹²UFC/mL); e, Preventivo - imunossuprimidos, tratados com a preparação probiótica e posteriormente infectados. Após 12 dias de imunossupressão os animais foram infectados com 1,6x106 oocistos e, os respectivos tratamentos iniciados após cinco dias da inoculação dos oocistos. A infecção foi analisada pela contagem de oocistos nas fezes, purificados pela técnica de sedimentação de formol-éter. A colonização intestinal pelos lactobacilos foi analisada pela técnica de \"pour plate\" em ágar MRS com antibiótico Rifampcina. O desempenho nutricional dos camundongos foi analisado por meio da conversão alimentar, uma relação entre a quantidade de ração consumida e o ganho de peso dos animais. Os resultados demonstraram que os animais que receberam o tratamento preventivo com os probióticos apresentaram uma eliminação de oocistos significativamente menor (P<=0,05) que os demais grupos infectados. O tratamento com a preparação probiótica, pós-infecção, também se mostrou eficaz, pois todos os animais eliminaram a infecção. Estes resultados podem ser explicados por meio do mecanismo de ação conhecido como exclusão competitiva, devido a colonização do trato gastrointestinal ou, pela produção de substância antimicrobiana, produzida por Lactobacillus, que apresentou ação sobre os oocistos. Observou-se, também, que os animais tratados com probióticos tiveram um melhor desempenho nutricional. Estes resultados confirmam a hipótese que microrganismos com propriedades probióticas representam uma forma alternativa, e promissora, na prevenção e tratamento da criptosporidiose. / The probiotics are products or preparation containing viable microorganisms, in defined concentrations, capable of change the host\'s microbiota, exerting beneficial effects on the host\'s health. The most important microorganisms which present these properties belong to the group of lactic acid bacterium, mainly species of Lactobacillus. Even though technological advances in this area, few studies are found concerning the action probiotics on protozoan, as Cryptosporidium parvum, an important intestinal parasite which causes one of the main opportunist infection in immunodeficient individuals, such as AIDS and transplanted patients. The probiotics products can be an alternative to treatment against cryptosporidiosis, since, so far an effective treatment against this infection has not been found. Therefore, the present study aimed to evaluate the action of strains of Lactobacillus plantarum, L. acidophillus and L. delbruekii, as a pool, on Cryptosporidium parvum in immunosuppressed mice. The experiments were developed using 42 animals separated in six groups: Control - the mices were not immunosuppressed, no infected and no treated; Immuno - immunosuppressed, no infected and no treated; No treated - immunosuppressed, infected and no treated; NTZ - immunosuppressed, infected and treated with a Nitazoxanide antimicrobial (150mg/kg); PRO - immunosuppressed, infected and treated with a preparation probiotic (3x10¹²UFC/mL); and, Preventive - immunosuppressed, treated with the probiotic preparation and then infected. After 12 days of immunosuppression procedure the animals were infected with 1,6x106 oocysts and, the respective treatments were started after five days of the inoculation of the oocysts. The infection was analyzed by counting of purified oocysts by tecnic of formol ether sedimentation of the feces. The intestinal colonization by lactobacilli was analyzed by pour plate technique on MRS agar containing Rifampicin antibiotic. The nutritional performance of the animals was calculated based on the rate of feed conversion, which is a relation between the amount of food consumed and the body weight gained by each animal. The results showed that the animals that received a preventive treatment with the probiotic preparation presented an elimination of oocysts lower than (P<=0,05) the other infected groups. The treatment with the probiotic preparation, post-infection also showed to be effective, once all the animals eliminated the infection. These results can be explained by competitive exclusion due to the colonization of gastrointestinal tract of the animals or by production of antimicrobial substances produced by Lactobacillus, which presented somehow any action on oocysts. It was also observed that the treated animals with the probiotic preparation presented better nutritional performance. These results confirm the hypothesis that the microorganisms which present probiotic properties represent an alternative way and promising, in the preventing and treatment of cryptosporidiosis.

Os probióticos são produtos ou preparações que contém microrganismos viáveis, com concentrações definidas, capazes de alterar a microbiota intestinal do hospedeiro, exercendo efeitos benéficos a sua saúde. Os microrganismos mais usados para esta finalidade são as bactérias lácticas, destacando-se espécies de Lactobacillus. Apesar do avanço científico nesta área, poucos estudos são encontrados a respeito da ação probiótica sobre protozoários, como Cryptosporidium parvum, um parasito intestinal importante por causar uma das principais infecções oportunistas em indivíduos imunodebilitados, como aidéticos e transplantados. Os produtos probióticos podem ser uma alternativa para o tratamento da criptosporidiose, uma vez que, ainda, não há um tratamento eficaz contra esta parasitose. Sendo assim, o presente estudo visou avaliar a ação de cepas de Lactobacillus plantarum, L. acidophillus e L. delbruekii, na forma de pool, sobre Cryptosporidium parvum em camundongos imunossuprimidos. Os experimentos foram desenvolvidos utilizando-se 42 animais divididos em seis grupos: Controle - não imunossuprimidos, não infectados e não tratados; Imuno - imunossuprimidos, não infectados e não tratados; Não tratado - imunossuprimidos, infectados e não tratado; NTZ - imunossuprimidos, infectados e tratados com o antiprozotoário nitazoxanida (150mg/kg); PRO - imunossuprimidos, infectados e tratados com a preparação probiótica (3x10¹²UFC/mL); e, Preventivo - imunossuprimidos, tratados com a preparação probiótica e posteriormente infectados. Após 12 dias de imunossupressão os animais foram infectados com 1,6x106 oocistos e, os respectivos tratamentos iniciados após cinco dias da inoculação dos oocistos. A infecção foi analisada pela contagem de oocistos nas fezes, purificados pela técnica de sedimentação de formol-éter. A colonização intestinal pelos lactobacilos foi analisada pela técnica de \"pour plate\" em ágar MRS com antibiótico Rifampcina. O desempenho nutricional dos camundongos foi analisado por meio da conversão alimentar, uma relação entre a quantidade de ração consumida e o ganho de peso dos animais. Os resultados demonstraram que os animais que receberam o tratamento preventivo com os probióticos apresentaram uma eliminação de oocistos significativamente menor (P<=0,05) que os demais grupos infectados. O tratamento com a preparação probiótica, pós-infecção, também se mostrou eficaz, pois todos os animais eliminaram a infecção. Estes resultados podem ser explicados por meio do mecanismo de ação conhecido como exclusão competitiva, devido a colonização do trato gastrointestinal ou, pela produção de substância antimicrobiana, produzida por Lactobacillus, que apresentou ação sobre os oocistos. Observou-se, também, que os animais tratados com probióticos tiveram um melhor desempenho nutricional. Estes resultados confirmam a hipótese que microrganismos com propriedades probióticas representam uma forma alternativa, e promissora, na prevenção e tratamento da criptosporidiose. / The probiotics are products or preparation containing viable microorganisms, in defined concentrations, capable of change the host\'s microbiota, exerting beneficial effects on the host\'s health. The most important microorganisms which present these properties belong to the group of lactic acid bacterium, mainly species of Lactobacillus. Even though technological advances in this area, few studies are found concerning the action probiotics on protozoan, as Cryptosporidium parvum, an important intestinal parasite which causes one of the main opportunist infection in immunodeficient individuals, such as AIDS and transplanted patients. The probiotics products can be an alternative to treatment against cryptosporidiosis, since, so far an effective treatment against this infection has not been found. Therefore, the present study aimed to evaluate the action of strains of Lactobacillus plantarum, L. acidophillus and L. delbruekii, as a pool, on Cryptosporidium parvum in immunosuppressed mice. The experiments were developed using 42 animals separated in six groups: Control - the mices were not immunosuppressed, no infected and no treated; Immuno - immunosuppressed, no infected and no treated; No treated - immunosuppressed, infected and no treated; NTZ - immunosuppressed, infected and treated with a Nitazoxanide antimicrobial (150mg/kg); PRO - immunosuppressed, infected and treated with a preparation probiotic (3x10¹²UFC/mL); and, Preventive - immunosuppressed, treated with the probiotic preparation and then infected. After 12 days of immunosuppression procedure the animals were infected with 1,6x106 oocysts and, the respective treatments were started after five days of the inoculation of the oocysts. The infection was analyzed by counting of purified oocysts by tecnic of formol ether sedimentation of the feces. The intestinal colonization by lactobacilli was analyzed by pour plate technique on MRS agar containing Rifampicin antibiotic. The nutritional performance of the animals was calculated based on the rate of feed conversion, which is a relation between the amount of food consumed and the body weight gained by each animal. The results showed that the animals that received a preventive treatment with the probiotic preparation presented an elimination of oocysts lower than (P<=0,05) the other infected groups. The treatment with the probiotic preparation, post-infection also showed to be effective, once all the animals eliminated the infection. These results can be explained by competitive exclusion due to the colonization of gastrointestinal tract of the animals or by production of antimicrobial substances produced by Lactobacillus, which presented somehow any action on oocysts. It was also observed that the treated animals with the probiotic preparation presented better nutritional performance. These results confirm the hypothesis that the microorganisms which present probiotic properties represent an alternative way and promising, in the preventing and treatment of cryptosporidiosis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-08Bitstream added on 2014-06-13T20:55:59Z : No. of bitstreams: 1 homem_cg_me_araca.pdf: 468363 bytes, checksum: b293bfbeab84c1a641ead5f90bd65ab2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A infecção por Cryptosporidium parvum em bovinos se manifesta como enfermidade subclínica ou com presença de morbidade e mortalidade, particularmente quando há associação com outros agentes infecciosos. Cryptosporidium parvum apresenta ainda grande importância em saúde pública. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para detecção de C. parvum em amostras fecais de bezerros e sua comparação com a reação em cadeia da polimerase (nested PCR), rotineiramente utilizada para diagnóstico de Cryptosporidium spp.. Duzentas e nove amostras fecais de bezerros entre um dia e seis meses de idade foram examinadas pela qPCR para amplificação de fragmentos do gene da actina e pela nested PCR para o gene da subunidade 18S do rRNA. A qPCR apresentou positividade para C. parvum em 73,21% (153/209) das amostras, enquanto a nested PCR apresentou amplificação positiva para Cryptosporidium spp. em 56,5% (118/209) das amostras. A sensibilidade analítica da qPCR foi de aproximadamente um oocisto de C. parvum. Não se observou amplificação inespecífica de DNA Cryptosporidium bovis, Cryptosporidium andersoni, Cryptosporidium ryanae, Cryptosporidium canis, Cryptosporidium serpentis, Cryptosporidium galli, Cryptosporidium baileyi e Cryptosporidium genótipo II de aves. Desta forma, conclui-se que a qPCR para o gene da actina é uma técnica sensível e específica para detecção de C. parvum em amostras fecais de bezerros / The infection with Cryptosporidium parvum in cattle results in subclinical disease or in the presence of morbidity and mortality, particularly when associated with other infectious agents. This species is also an important public health problem. The aim of this research was to develop a real time polymerase chain reaction (qPCR) for detection of C. parvum DNA in fecal samples of calves, in comparison to a nested PCR routinely used for Cryptosporidium spp. diagnosis. Two hundred and nine fecal samples from calves aged between one day and six weeks were screened by qPCR specific for the actin gene of C. parvum and using nested PCR targeting the 18S rRNA gene of Cryptosporidium spp.. The qPCR showed positivity for C. parvum in 73,21% (153/209) of the samples, and nested PCR was positive for Cryptosporidium spp. in 56.5% (118/209) of the samples. The analytical sensitivity of qPCR foi de aproximadamente one oocyst C. parvum per reaction tube. Evaluation of analytical specificity did not reveal inespecific amplification for DNA of the following Cryptosporidium species and genotypes: C. bovis, C. andersoni, C. ryanae, C. canis, C. serpentis, C. galli, C. baileyi and avian genotype II. These results allowed the conclusion that qPCR for actin gene is a sensitive and specific technique for detection of C. parvum in fecal samples from calves

Atualmente há um grande interesse em estudos voltados para sistema de tratamento de esgoto sanitário. Isso se deve principalmente pela presença de microrganismos e substâncias que podem interferir na saúde humana e ambiental. Dentre os microrganismos patogênicos responsáveis por transmissão de doenças estão os protozoários Giardia spp. e Cryptosporidium spp. No que se refere às substâncias nocivas à saúde humana e ambiental podem ser citados os desreguladores endócrinos que agem sobre o sistema endócrino de homens e animais causando efeitos adversos. Baseado na importância destes estudos, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a eficiência de remoção de protozoários patogênicos - Giardia spp. e Cryptosporidium spp. e da atividade de estrogenicidade em processos de tratamento de esgoto sanitário constituídos por reator UASB, sistema de lodos ativados e filtro de areia. Também foram avaliados os padrões de qualidade dos efluentes do reator UASB e sistema de lodos ativados utilizando sulfato de alumínio e cloreto férrico. A combinação dos processos biológicos sequenciais apresentou robustez em termos de remoção de matéria orgânica, microrganismos indicadores e (oo)cistos. A desinfecção com cloro mostrou-se eficiente em inativar os microrganismos indicadores: coliformes totais e Escherichia coli. A atividade estrogênica, avaliada pelo teste YES, foi maior no efluente do lodo ativado e do filtro de areia devido à conjugação dos compostos estrogênicos no esgoto bruto. Detectou-se toxicidade à levedura utilizada no teste YES (Saccharomyces cerevisae), principalmente nas menores diluições, a qual interferiu na expressão da estrogenicidade impossibilitando o cálculo em termos de concentração equivalente de 17&#946;-estradiol. / Currently there is great interest in studies related to the wastewater treatment system. This is mainly for the present of microorganisms and substances that can interfere with human and environmental health. Among the pathogens responsible for diDEse transmission are protozoa Giardia spp. and Cryptosporidium spp. With regard to substances harmful to human and environmental health can cite endocrine disrupters that act on the endocrine system of humans and animals causing adverse effects. Based on the importance of these studies, the present study aimed to evaluate the efficiency of removal of pathogenic protozoa - Giardia spp. and Cryptosporidium spp. - Activity and estrogenicity in processes of wastewater treatment consisting of UASB reactor, activated sludge system and sand filter. We also evaluated the quality standards of the effluent of the UASB reactor and activated sludge system using aluminum sulfate and ferric chloride. The combination of hardiness sequential biological processes presented in terms of removal of organic matter, microorganisms and indicators (oo) cysts. The chlorine disinfection proved effective in inactivating microorganisms indicators: total coliforms e Escherichia coli. The estrogenic activity, assessed by the YES assay, was higher in the effluent of the activated sludge and sand filter due to a combination of estrogenic compounds in raw sewage. Was detected toxicity to the yeast used in the YES assay (Saccharomyces cerevisiae), mainly in the lower dilutions, which interfered with the expression of estrogenicity it impossible to calculate in terms of an equivalent concentration of 17&#946;-estradiol.

Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T19:15:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_LucianaUrbanodos_D.pdf: 2872201 bytes, checksum: 3d486b0bfc4357c133c090e92209db49 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Entre muitas doenças de veiculação hídrica, a criptosporidiose e a giardiose são de particular interesse para a Saúde Pública, porque oocistos de Cryptosporidium spp e cistos de Giardia spp. podem persistir por longos períodos no ambiente, sendo que estes dois protozoários patogênicos têm sido implicados como a causa de muitos surtos epidêmicos de gastroenterites nos últimos 25 anos.Em muitos desses surtos, o esgoto doméstico foi incriminado como a fonte de contaminação do manancial; os variados métodos de tratamento de esgoto não removem totalmente agentes patogênicos, evidenciando a necessidade de desinfecçãodo esgoto tratado antes do seu lançamento no corpo hídrico. Uma forma de tratamento de esgoto amplamente utilizada é o processo por Iodos ativados, onde a degradação da matéria orgânica é realizada por bactérias aeróbicas.Em função da resistência de Cryptosporidium spp e Giardia spp. Ao processode desinfecção por cloração, a radiação por luz ultravioleta (UV) têm sidoavaliada como um processo alternativo. Para avaliar a eficiência de remoção de oocistose cistos pelo processo de Iodo ativado e de um reator de luz UV em inativaroocistos e cistos em uma Estação de Tratamento de Esgoto (ETE) da cidadede Campinas, 3 tipos de amostras foram selecionados para o estudo: I) afluente (n=53), iii) efluente desinfetado por luz UV (n=38) e, iii) efluente sem desinfecção por luz UV (n=53). As amostras de afluente foram concentradas por centrífugo-concentraçãoe as amostras de efluente (desinfetadas ou não por luz UV) foram processadas por filtração em membrana de éster de celulose) e, a visualizaçãodos protozoários, feita pela reação de imunofluorescência direta, com anticorposmonoclonais. A avaliação do processo de desinfecção por luz UV foi realizada com experimento de infectividade animal, inoculando-se 14/ cistos camundongos da linhagem BALB!c nude. Cistos de Giardia spp foram mais freqüentes e em maior densidade nos três tipos de amostras. Oocistos de Cryptosporidiumspp. foram observados somente em 2 amostras de afluente e em apenas uma amostra de efluente desinfetado por luz UV. O tratamento de esgoto pelo processo de Iodo ativado reduziu 98,9 % dos cistos e 99,7 % dos oocistos. A administração intragástrica de cistos de Giardia spp. desinfetados ou não por luz UV em camundongos, resultou na liberação de cistos de Giardia spp., nas fezes e trofozoítos foram observados nas lâminas confeccionadas por aposição do intestino. Estes resultados indicam que a desinfecção por luz UV não foi completamente eficiente na inativação dos cistos de Giardia spp, no caso da ETE estudada / Abstract: Among many water-borne diseases the cryptosporidiosis and giardiosis are of particular public health interest, because Cryptosporidium spp. oocysts and Giardia spp. cysts can persist for long periods in the environment, and both pathogenic protozoa have been implicated as the cause of many outbreaks of gastroenteritisin the last 25 years. In many of those outbreaks, the domestic sewer was incriminated as to source of contamination of the spring; they varied treatment sewage approaches do not remove entirely agent's pathogens, showing up the need of disinfection of the treated effluent before of their launching in the water body.A form of address of sewer broadly utilized is the trial by activated sludge whichway the degradation of the organic matter is carried out by aerobic bacteria and, in function of the resistance of Cryptosporidium spp and Giardia spp. to the chlorinedisinfection, the ultraviolet light (UV) has been evaluated like an alternative trial of disinfection. In order to evaluate the efficiency of cysts and oocysts removal by the activated sludge process, and by a UV reactor in inactivating cysts and oocystsin one Wastewater Treatment Plant (Wl/VTP)in Campinas, three sampling points were selected for study: i) influent (n=53),iii) treated effluent with UV disinfection (n=38) and iii) treated effluent without UV disinfection (n=53). The influent samples were concentrated by centrifugation and effluent samples (disinfectedwith UV light or not) were processed by cellulose esters membrane filtration, and protozoan visualization was analyzed by fluorescent monoclonal antibodytests. The investigation of disinfection potential by UV light was made with infectivityassay. Each mice of linage BALB/c nude were intragastrically inoculated a mean dosage 14 cysts. Giardia spp cysts prevailed with higher density in the three different sample types. Cryptosporidium spp. oocysts were observed in only 2 samples of influent and in just one sample of treated sewage with UV disinfection.The treatment by the activated sludge process promoted a reduction of 98.9% of cysts and 99.7 % of oocysts. Gastric intubation of Giardia spp. Cysts disinfected ar not by UV light to mice resulted in cysts released in feces and trophozoiteswere also observed toa in intestinal scrapings. The findings of this study indicate that disinfection by UV light was not completely efficient regarding the inactivationof Giardia spp cysts in the case of the / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T07:00:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franca_RitaBorges_M.pdf: 4952448 bytes, checksum: 49473f55f00ae94646a96bb8c6672aac (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O efluente hospitalar apresenta, dentre seus componentes, organismos como vírus, bactérias, protozoários e helmintos, que ocasionam muitas doenças com implicações em saúde pública. Cryptosporidium spp. e Giardia spp. são protozoários parasitos com grande importância por sua veiculação hídrica e cujas formas infectantes são resistentes aos processos rotineiramente usados no tratamento de água e esgoto. A transmissão destes pode ocorrer com a ingestão dos oocistos e cistos eventualmente presentes na água e nos alimentos contaminados, por contato direto (pessoa a pessoa), por contato indireto (objetos contaminados), pelo contato sexual ou pode ser zoonótica. Os métodos mais utilizados para desinfecção em estações de tratamento são a aeração, cloração e irradiação por UV, mas a cloração, não é suficiente para eliminar oocistos de Cryptosporidium spp e cistos de Giardia spp. A tecnologia eletroquímica oferece um meio de tratamento eficiente para a oxidação. da carga orgânica e microbiológica degradando-as ou mineralizando-as. O presente trabalho teve por objetivos: (1) verificar a ocorrência natural de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em amostras de esgoto do Hospital de Clínicas de Campinas, utilizando o método, de centrífugo-concentração seguido de clarificação com éter e visualização por, imunofluorescência direta, durante o período de um ano; (2) verificar a presença de ovos e larvas de helmintos no esgoto hospitalar empregando a técnica da NOM (Norma Oficial Mexicana) e (3) avaliar a taxa de destruição e o dano estrutural causado em cistos e oocistos após o tratamento fotoeletroquímico. No esgoto hospitalar bruto 4,1 % e 58,3 % das amostras foram positivas para Cryptosporidium spp. e Giardia spp., respectivamente, sendo observada a concentração média de 2,7 x 103 oocistos/L e 3,8 x 105 cistos/L. Foi possível verificar a elevada presença de helmintos, com 90 % das amostras apresentando positividade e concentração de 5,8 x 104 ovos/L e 4,0 x 105 larvas/L. Os protozoários e helmintos presentes em altas concentrações no esgoto hospitalar representam uma séria ameaça à saúde humana. Para os ensaios com o tratamento fotoeletroquímico, amostras de 1 L de esgoto hospitalar foram artificialmente contaminadas com cistos e oocistos e, posteriormente, submetidas a esse tratamento em um reator de bancada, com tempos de exposição de 0,30, 60 e 90 minutos. Por meio das técnicas de imunofluorescência direta, microscopia de contraste de fase e microscopia eletrônica de varredura verificou-se o dano estrutural causado pela ação dos radicais hidroxila nesses protozoários patogênicos e a destruição dos mesmos. O tratamento fotoeletroquímico mostrou uma redução na concentração dos protozoários nos tempos de 30 e 60 minutos e após 90 minutos, nenhum cisto ou oocisto foi detectado. A presença do cloreto no efluente bruto (média de 45 mg/l) desencadeou uma potencializaçáo da ação de mecanismo do reator, gerando efeito associado com a eletrólise, dos radicais hidroxila com a formação de hipoclorito / Abstract: Hospital effluent presents organisms as virus, bacteria, protozoan and helminthes, that cause many iIInesses with implications in public health. Cryptosporidium spp. and Giardia spp. are parasites with waterborne importance and its cysts and oocysts are resistant to the routinely processes used in water treatment. Their transmission can occur by oocysts and cysts ingestion in the water and contaminated foods, by direct contact (person the person), by indirect contact (contaminated objects), by sexual contact or zoonotic. The methods used for disinfection and treatment of sewage are aeration, chlorination and irradiation of ultraviolet light, but the treatment by chlorination is not enough to inactivate Cryptosporidium spp. oocyst and Giardia spp. cysts. The electrochemical technology offers an efficient treatment for the oxidation of organic and microbiological load, degrading and mineralizing them. The present work had as objectives: (1) to verify the natural occurrence of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in samples of Clinical Hospital sewage from Unicamp using centrifugal concentration followed by clarification with ether method and visualization by immunoflourescence assay, during one year, (2) to verify the presence of eggs and larvae of helminthes in the hospital sewage by NOM (Mexican Official Norm) technique and (3) to evaluate the destruction rate and the structural damage caused in cysts and oocysts by photoelectrochemical treatment. In raw hospital sewage 4.1 % and 58.3% of the samples were positive for Cryptosporidium spp. and Giardia spp., respectively, with concentrations of 2.7 x 103 oocysts/L and 3.8 x 105 cysts/L. The high presence of helminthes, 90% positive, with 5.8 x 104 eggs/L and 4.0 x 105 larvae/L and protozoan in hospital sewage represent a serious threat to human being health. For the assays with the photoelectrochemical treatment, samples of 1 L of hospital sewage artificially contaminated with cysts and oocysts ! were submitted to this treatment in a bench reactor, with times of exposition of 0, 30, 60 and 90 minutes. By the techniques of immunofluorescence assays, microscopy of phase contrast and scanning electronic microscopy, the structural damage and destruction were observed, caused by hydroxyl radicals in these pathogenic protozoans. The photoelectrochemical treatment showed a concentration reduction of the protozoan in 30 and 60 minutes, and after 90 minutes no cyst or oocysts were detected. The chloride present in raw effluent (average of 45 rng/L) unchained a potential action of the reactor mechanism, generating an effect associated with electrolysis of the hydroxyl radicals with production of hypochlorite / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Orientadores: José Euclides Stipp Paterniani, Cristiano de Mello Gallep / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Agrícola / Made available in DSpace on 2018-08-25T21:52:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_SamuelRicardodos_D.pdf: 51294263 bytes, checksum: 55a8bb93513a62aa29e85fe9467412c6 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Giardia spp. e Cryptosporidium spp. são organismos desafiadores em monitoramento ambiental, podendo afetar os seres humanos e os animais com grandes impactos na saúde pública. Métodos para detectar esses organismos são descritos na literatura ¿ p.ex.: o método EPA 1623.1. No entanto, muitos não são capazes de detectar a viabilidade destes parasitos. Este trabalho avaliou o uso de marcadores fluorescentes combinados com a técnica de detecção de fluorescência retardada na detecção de viabilidade de Giardia intestinalis e Cryptosporidium parvum. Testes de incubação com 6-carboxifluorceina-succinimidil-diacetato-éster (CFDA-SE), C12-resazurina e SYTOX Green foram desenvolvidos com cistos de G. intestinalis e oocistos de C. parvum. Medidas de fluorescência retardada em câmara escura projetada e em dispositivo comercial foram aplicados em amostras purificadas e concentradas de G. intestinalis após incubação com CFDA-SE. Grupos contendo cistos vivos e infecciosos, mortos a 100° C, estressados com luz UV-C e envelhecidos foram analisados via fluorescência retardada e microscopia de epifluorescência em oito séries experimentais. Os resultados demonstram que (oo)cistos vivos e infecciosos não são marcados com os marcadores fluorescentes. Dupla marcação em (oo)cistos mortos é observada após 30 minutos de incubação com C12-resazurina 5,0 ?M e SYTOX Green 100 nM. (Oo)cistos mortos apresentam marcação verde após incubação de CFDA-SE 5,0 ?M. O envelhecimento da amostra foi acompanhado pelo aumento da taxa de marcação celular com cistos apresentando ~50% de marcação aos 30 dias de idade e ~100% aos 50 dias de idade. Testes com fluorescência retardada demonstram que cistos vivos e com idade inferior a 20 dias apresentam intensidades superiores aos cistos mortos e estressados após excitação com 365 nm. A excitação com 365 nm apresentou correlação R2 > 95% após análise de cinética de decaimento com modelo exponencial de segunda ordem. Os dados indicam que o decaimento da fluorescência retardada é acompanhado por duas componentes k1 e k2 onde k2 = 5?k1, estando estas conectadas com as condições fisiológicas da Giardia. O procedimento pode ser efetuado em 10 passos laboratoriais em aproximadamente 60 minutos de análise. A fluorescência retardada apresenta futuro promissor na análise de viabilidade de parasitos em amostras purificadas / Abstract: Giardia spp. and Cryptosporidium spp. are challenging and important organisms in modern environmental monitoring. These protozoa can affect humans and animals seriously, as reflection of sanitation problems in water quality control, with huge impact over economics and public health. Methods to detect such organisms are well described in literature - i.e. the EPA Method 1623.1 and AWWA 2012. But those ones are not able to detect infectivity. For that, the usual procedures include infection of animal model leading to at least one week for confirming infectivity. Some research with dye probes are being developed in order to provide useful, reliable and low cost procedures for detection of protozoa viability, i.e. enabling to distinguish dead samples cells from living ones. This work describes the screening tests for viability detection of protozoa samples - Giardia intestinalis and Cryptosporidium parvum - using carboxifluorcein-succinimidyl-diacetate-ester (CFDA-SE), C12-resazurin and SYTOX Green. Living, heat-killed and UV-C stressed (oo)cysts were analyzed using these chemical probes. G. intestinalis in concentrated samples and stained with CFDA-SE were analysed by fluorescence imaging as well as by delayed fluorescence (DF) after UV-A and white-light excitation. The weak DF profiles were detected in photon-counting setups, in 8 series of tests for intact, for heat-killed and for UV-C-stressed samples are shown. Results show that fresh, i.e. living and viable (oo)cysts cannot be stained by the mentioned neither with CFDA-SE nor C12-resazurin and SYTOX Green dyes. Double-marked (oo)cysts are observed when C12-resazurin and SYTOX Green are applied to old cysts as well to dead ones. Aged samples show increasing number of stained organisms: 30-day-old with ~50% while samples older than 50 days with almost 100% marked. Intact samples present stronger fluorescence and DF than the stressed ones, with good replication after UV-A excitation. After excitation @365nm samples present DF better fitted by double exponential decay kinetics, with the decay constant k2 five times higher than the k1 constant. The procedure can be easily reproduced in 10 steps, taking around 1h of laboratorial work with purified samples / Doutorado / Agua e Solo / Doutor em Engenharia Agrícola

Orientador: Regina Maura Bueno Franco / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:37:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_PaulaVilmade_M.pdf: 3163607 bytes, checksum: cf552ae60ce22ed636ee5cbfa344ebd8 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Giardia spp. e Cryptosporidium spp. estão amplamente dispersos no ambiente aquático e foram responsáveis por diversos surtos de giardiose e criptosporidiose por veiculação hídrica em vários países. A presença destes patógenos em água utilizada para consumo humano é um fator de risco para aquisição destas parasitoses porque cistos e oocistos são resistentes aos processos de tratamento e às condições ambientais. Deste modo, a preocupação em relação à contaminação das fontes de água para uso humano por estes protozoários é crescente. No Brasil, há registros da ocorrência de ambos organismos em água superficial e subterrânea e em esgoto bruto e tratado. Atualmente, há uma recomendação oficial para a implantação da pesquisa de cistos e oocistos em água tratada. Assim, é necessário ter conhecimento sobre a freqüência e a distribuição destes parasitos nos mananciais. Os objetivos do presente estudo foram: i) verificar a ocorrência de cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium em amostras de água bruta superficial do Rio Atibaia (Campinas, São Paulo) utilizando a técnica de filtração em membrana (47 mm diâmetro; 3 ?m de porosidade nominal); ii) avaliar a influência do desaguamento do Ribeirão Pinheiros na qualidade da água do Rio Atibaia mediante a comparação e a correlação entre parâmetros microbiológicos, físicos, pluviométricos e concentração de cistos e oocistos em dois pontos: à montante (A1) e à jusante (A2) do desaguamento do Ribeirão Pinheiros; e iii) verificar a ocorrência de variação sazonal destes protozoários na água superficial do Rio Atibaia. De março de 2002 a abril de 2003, 50 amostras de água foram analisadas. No ponto A1, cistos de Giardia foram detectados em 52,0% das amostras (concentração = 25,12 cistos/l), enquanto no ponto A2, a positividade foi de 76,0% (64,16 cistos/l). Oocistos de Cryptosporidium foram detectados somente no ponto A2, em 0,04% das amostras (0,8 oocistos/l). Houve diferença significativa na concentração de cistos entre os pontos A1 e A2 (p = 0,011) e correlação entre a pluviosidade e os parâmetros: concentração de cistos de Giardia (r = 0,611); coliformes totais (r = 0,467) e fecais (r = 0,467) no ponto A2. Em ambos os pontos, não foi encontrada correlação entre concentração de cistos de Giardia e as variáveis: coliformes totais (A1: r = -0,276; A2; r = -0,201), fecais (A1: r = -0,187; A2: r = -0,201) e turbidez (A1: r = -0,252; A2: r = -0,055). Dentre estes parâmetros, apenas a turbidez teve variação entre verão/inverno e verão/outono (p = 0,06). A técnica de filtração em membrana apresentou uma eficiência de recuperação de 72,2% para cistos de Giardia e de 65,1% para oocistos de Cryptosporidium. Os resultados obtidos neste estudo são relevantes porque o Rio Atibaia é o manancial que abastece a cidade de Campinas e outros municípios da região e o conhecimento da epidemiologia ambiental destes protozoários é importante do ponto de vista da Saúde Pública e também das companhias de tratamento de água / Abstract: Giardia spp. and Cryptosporidium spp. are widely dispersed in the aquatic environment and are responsible for several waterborne outbreaks of giardiosis and cryptosporidiosis in many countries. The occurrence of these pathogens in drinking water is a risk factor for human infection because of the resistance of cyst and oocyst to water treatment processes and to the environment. Nowadays, there is an increasing concern about drinking water contamination by these protozoans. In Brazil, the presence of both organisms was registered in groundwater and superficial water and in raw and treated sewage. Currently, there is an official recommendation for monitoring the presence of Giardia and Cryptosporidium in drinking water samples; thus a federal decree aims to establish researches for (oo)cysts detection in treated water. The knowledge about the frequency and distribution of these protozoan parasites in water sources is necessary to establish policies on public health. The aims of the present study are: i) to verify the occurrence of Giardia cysts and Cryptosporidium oocysts in Atibaia River¿s (Campinas City, São Paulo State) superficial raw water samples using a membrane filtration method (47 mm diameter; 3 ?m of nominal porosity; ii) to evaluate the influence of the discharge of Pinheiros Stream on the water quality of the Atibaia River by the correlationship among microbiological and physical parameters, rainfall and oocysts levels in two points: upstream (A1) and downstream (A2) of Pinheiros Stream; and iii) to verify the seasonal variation of these protozoa occurrence in the superficial water of Atibaia River. From March 2002 to April 2003, 50 water samples were collected. In point A1, Giardia cysts were detected in 52,0% of the samples (concentration = 25,12 cysts/l) while in point A2 the positivity for this parasite was 76,0% (concentration = 64,16 cysts/l). Cryptosporidium oocysts were detected only in A2 point, in 0,04% of the samples (concentration = 0,8 oocysts/l). There was a significant difference for cysts concentration between A1 and A2 points (p = 0,011) and among rainfall and the parameters: cyst concentration (r = 0,611); total (r = 0,467) and fecal coliforms (r = 0,467) in A2 point. In both points, it was not found a correlationship among cyst concentration and the following parameters: total coliforms (A1: r = -0,276; A2; r = -0,201), fecal coliforms (A1: r = -0,187; A2: r = -0,201) and turbidity (A1: r = -0,252; A2: r = -0,055). The turbidity showed a variation between summer and winter periods as well as summer and fall periods (p = 0,06). The membrane filtration technique attained recovery efficiency rates of 72,2% for Giardia cysts and 65,1% for Cryptosporidium oocysts. The data obtained in this study are relevant because the Atibaia River is the major water source found in Campinas and other cities in the region. Thus, the knowledge about the environmental epidemiology of these protozoa is of very important to policies on to the Public Health and to the drinking water industry / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Orientador: Ricardo de Lima Isaac / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Civil, Arquitetura e Urbanismo / Made available in DSpace on 2018-08-26T15:48:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reis_Gabrielados_M.pdf: 4501335 bytes, checksum: f41add1d19b9cc7987740fb6604a17ed (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Dentre as etapas do tratamento de água para abastecimento público a filtração é essencial para remoção de partículas e microorganismos nocivos à saúde humana. Devido ao reduzido tamanho e resistência à cloração, os oocistos de Cryptosporidium tornam-se um problema nas estações de tratamento de água. Neste estudo foi investigada a eficiência da filtração em meio granular constituído de areia recoberta com nanopartículas de prata na remoção de microesferas de poliestireno, que simulam oocistos de Cryptosporidium spp.. A presença das nanopartículas de prata pode ser uma barreira adicional no tratamento de água, proporcionando ao grão de areia uma camada positiva, auxiliando na remoção de oocistos. O sistema de filtração em escala de laboratório foi composto de microcolunas de vidro borossilicato (diâmetro interno 1 cm) preenchidas com areia previamente impregnadas por imersão em solução de nanopartículas de prata (concentração 0,1 g/L). Os filtros foram alimentados por uma suspensão de água deionizada contendo microesferas de poliestireno (diâmetro médio 2 ?m). A influência na qualidade da água na filtração foi avaliada quanto aos parâmetros: concentração de ácido húmico (2,5, 5,0 e 10,0 mg.L-1), pH (6, 7 e 8), força iônica (24, 48 e 105 mM) e concentração inicial de microesferas (1,3 x 105, 2,4 x 106 e 1,4 x 107 partículas/mL). O efeito do parâmetro taxa de filtração foi avaliado sob a condição operacional de 2,4, 4,8 e 48 m3/m2.dia. A remoção de partículas do filtro proposto foi da ordem de 99,0 % contra 92,0 % do filtro controle. Os filtros teste constituídos de camada de areia recoberta com prata tiveram desempenho superior, na remoção da turbidez, aos filtros controle, com eficiência de remoção da ordem de 81,1 %, ao se filtrar até 10 VP (volume de poros). Contudo, a turbidez não se mostrou um bom indicativo da remoção de microesferas. A impregnação por nanopartículas de prata tornou os filtros mais eficientes na remoção de microesferas de poliestireno que simulam oocistos de Cryptosporidium / Abstract: Among the steps in treating water for public supply filtration is essential for removal of particles and microorganisms harmful to human health. Due to the small size and resistance to chlorination, Cryptosporidium oocysts become a problem in water treatment stations. This study investigated the efficiency of the filtration medium consisting of granular sand coated with silver nanoparticles in the removal of polystyrene microspheres that simulate Cryptosporidium spp.. Presence of silver nanoparticles can be an additional barrier for water treatment, providing a positive layer, aiding in the removal of oocysts. The filtration laboratory scale system was composed of borosilicate glass micro columns (inner diameter 1 cm) filled with sand previously impregnated by immersion in a solution of silver nanoparticles (concentration 0.1 g/L). The filters were fed with a suspension of deionized water containing polystyrene microspheres (mean diameter 2 ?m). The influence on water quality in filtration was evaluated for the following parameters: concentration of humic acid (2.5, 5.0 and 10.0 mg.L-1), pH (6, 7 and 8), ionic strength (24, 48 and 105 mM) and initial concentration of microspheres 1.3 x 105, 2.4 x 106 and 1.4 x 107 particles/ml). The effect of the filtration rate parameter was evaluated under operating conditions of 2.4, 4.8 and 48 m3/m2.day. The removal of particles of test filter was approximately 99.0 % compared with 92.0 % of the control filter. The test filters consisting of silver coated sand layer exhibited superior performance in the removal of turbidity, the control filters, with removal efficiency of about 81.1 % when filtering up to 10 filter PV (pore volume). However, turbidity was not a good indicator of removal of microspheres. The impregnation with silver nanoparticles made filters more effective on the removal of polystyrene microspheres that simulate Cryptosporidium oocysts / Mestrado / Saneamento e Ambiente / Mestra em Engenharia Civil

Techniques for the large-scale isolation of Cryptosporidium oocysts and sporozoites, obtained from the feces of experimentally infected Holstein calves, were developed employing discontinuous sucrose gradients and isopycnic Percoll gradients. The three step oocyst recovery method utilized two sequential discontinuous sucrose gradients followed by one Percoll gradient. Recovered oocysts were essentially free of debris and bacteria and represented 34% of the original oocyst suspension. Sporozoites were recovered from excystation mixtures on a single Percoll gradient. Sixty-three percent of the original sporozoites were recovered with 2.2% contamination by intact oocysts and virtually no oocyst walls. Eight anti-oocyst hybridomas were derived from oocyst-immunized mice: five from BALB/c mice and three from RBF/Dn mice. The monoclonal antibody (Mab) OW3 reacted specifically with C. parvum oocysts in immunofluorescent assays (IFA) and was shown to be superior to conventional stains for detecting oocysts in fecal smears from infected individuals. Sixteen anti-sporozoite hybridomas were derived from sporozoite-immunized BALB/c mice. The Mabs appeared to react with cell surface and cytoplasmic antigens by IFA. Two anti-sporozoite Mabs (C8C5, C6B6) reacted with a 20 kDa sporozoite antigen in western blots while the Mab C4A1 reacted with multiple antigens in western blots. These three Mabs (C8C5, C6B6, C4A1) were examined for potential modulation of cryptosporidial infections in vivo by oral Mab administration to oocyst-inoculated neonatal mice. The role for colostrum and breast milk in controlling cryptosporidial infections was examined by immunizing mouse dams and experimentally infecting their neonatal offspring. Colostrum and Mab-treated neonatal mice were sacrificed four days post infection. No difference in infection rates was observed among the treatment groups. Suckling mice treated daily with orally administered mixtures of Mabs (purified or ascitic fluid) showed significantly reduced parasite loads compared to control mice at four days post infection. In vitro cultivation of C. parvum was successful through asexual stages in human fetal lung, bovine turbinate and murine L929 cells. Parasite numbers that developed in the cell cultures varied from infection run to infection run.