No description available.

No description available.

No description available.

O excesso de tecido cicatricial (quelóides e cicatrizes hipertróficas) é um defeito do processo de cicatrização das feridas, caracterizado por um aumento na produção da matriz extracelular. Neste estudo, fibroblastos dérmicos humanos tratados com 50 <font face=\"symbol\">mM verapamil apresentaram discreta modificação na distribuição dos microfilamentos e alteraram sua morfologia de fusiformes para estrelados/arredondados. Estes efeitos poderiam estar associados a baixos níveis de cálcio citosólico. Esta hipótese foi confirmada através marcação de fibroblastos tratados com calcium green. Observamos também, que o verapamil inibiu a proliferação celular em 64,4%, aumentou a secreção de MMP1 e diminuiu o colágeno sintetizado pelos fibroblastos, sem aparentes efeitos citotóxicos. O metabolismo celular do cálcio está aparentemente relacionado a produção da matriz extracelular e portanto as patologias hipertróficas da cicatrização (quelóides e cicatrizes hipertróficas) podem responder ao tratamento com bloqueadores do canal de cálcio (verapamil). / Excessive scar tissue (keloids and hypertrophic scars) is a defective wound healing process characterized by overproduction of extracellular matrix. In the present study human dermal fibroblasts treated with 50 <font face=\"symbol\">mM verapamil changed their normal spindle-shaped morphology to stellate/rounded and showed discrete reorganization of microfilaments We hypothesized that these effects would be associated to lower levels of cytosolic Ca2+. Indeed, short time loading with calcium green confirmed that verapamil-treated fibroblasts exhibited lower intracellular calcium levels. We also observed that verapamil decrease cellular proliferation by 64.4%, increase the secretion of MMP1 and decrease synthesis of collagen in cultured fibroblasts. This alterations induced by verapamil are not associated with cytotoxic effects. The cellular calcium metabolism appears to regulate extracellular matrix production and so those hypertrophic disorders of wound healing (keloids and hypertrophic scars) may respond to therapy with calcium antagonist drugs (verapamil).

O excesso de tecido cicatricial (quelóides e cicatrizes hipertróficas) é um defeito do processo de cicatrização das feridas, caracterizado por um aumento na produção da matriz extracelular. Neste estudo, fibroblastos dérmicos humanos tratados com 50 <font face=\"symbol\">mM verapamil apresentaram discreta modificação na distribuição dos microfilamentos e alteraram sua morfologia de fusiformes para estrelados/arredondados. Estes efeitos poderiam estar associados a baixos níveis de cálcio citosólico. Esta hipótese foi confirmada através marcação de fibroblastos tratados com calcium green. Observamos também, que o verapamil inibiu a proliferação celular em 64,4%, aumentou a secreção de MMP1 e diminuiu o colágeno sintetizado pelos fibroblastos, sem aparentes efeitos citotóxicos. O metabolismo celular do cálcio está aparentemente relacionado a produção da matriz extracelular e portanto as patologias hipertróficas da cicatrização (quelóides e cicatrizes hipertróficas) podem responder ao tratamento com bloqueadores do canal de cálcio (verapamil). / Excessive scar tissue (keloids and hypertrophic scars) is a defective wound healing process characterized by overproduction of extracellular matrix. In the present study human dermal fibroblasts treated with 50 <font face=\"symbol\">mM verapamil changed their normal spindle-shaped morphology to stellate/rounded and showed discrete reorganization of microfilaments We hypothesized that these effects would be associated to lower levels of cytosolic Ca2+. Indeed, short time loading with calcium green confirmed that verapamil-treated fibroblasts exhibited lower intracellular calcium levels. We also observed that verapamil decrease cellular proliferation by 64.4%, increase the secretion of MMP1 and decrease synthesis of collagen in cultured fibroblasts. This alterations induced by verapamil are not associated with cytotoxic effects. The cellular calcium metabolism appears to regulate extracellular matrix production and so those hypertrophic disorders of wound healing (keloids and hypertrophic scars) may respond to therapy with calcium antagonist drugs (verapamil).

O presente estudo indica que o pHi basal do segmento S3 do túbulo proximal é 7.10 ? 0.007 (n = 444/2117), sendo a extrusão celular de H+ feita pelo trocador Na+/H+ (marjoritariamante) e pela H+-ATPase. Nossos resultados sugerem um papel do cálcio citosólico na regulação do processo de recuperação do pHi após carga ácida, mediada pelo trocador Na+/H+ e pela H+-ATPase. O trocador é estimulado por Aldosterona (10-12, 10-10 e 10-8 M) e inibido por Aldosterona (10-6 M) via ação genômica e não-genômica. Esses resultados são compatíveis com a estimulação do trocador por moderado aumento da [Ca2+]i citosólico (com Aldosterona 10-12 M) e sua inibição por pronunciado aumento da [Ca2+]i (com Aldosterona 10-6 M). A H+-ATPase é estimulada por Aldosterona em todas as doses utilizadas via ação genômica e não-genômica e esses resultados são coincidentes com um aumento da [Ca2+]i, dose dependente. Esses nossos achados são também compatíveis com a demonstração de uma ação hormonal não-genômica (após 1 ou 15 min) e genômica (após 1 hora) na [Ca2+]i, no trocador e na H+-ATPase. Adicionalmente, nossos resultados indicando que os efeitos hormonais genômicos ocorrem via receptor MR são coincidentes com nossos dados demonstrando a expressão desses receptores no segmento S3. Esses efeitos da Aldosterona que acabamos de descrever podem representar uma regulação fisiológica relevante, em condições de depleção e expansão de volume no animal intacto. / The present study indicate that the basal pHi of proximal S3 segment is 7.10 ? 0.007 (n = 444/2117), being made the extrusion by of Na+/H+ exchanger (mainly) and H+-ATPase. Our results suggest a role for cell calcium in regulating the process of pHi recovery after the acid load induced by NH4Cl, mostly mediated by a basolateral Na+/H+ exchanger, and stimulated by Aldosterone (10-12, 10-10 e 10-8 M) and impaired by Aldosterone (10-6 M) via a genomic and nongenomic action. They are compatible with stimulation of the Na+/H+ exchanger by increases in cell calcium in the lower range (at Aldosterone 10-12 M) and inhibition at high cell calcium levels (at Aldosterone 10-6 M). The H+-ATPase is stimulated in all the used doses via a genomic and nongenomic action, this is coincident with the dose-dependent increase in [Ca2+]i. This finding is also compatible with the demonstration of a hormonal nongenomic (after 1 min or 15 min) and genomic (after 1 h) action on [Ca2+]i, on the Na+/H+ exchanger and on H+-ATPase. Our results indicating that the genomics effects are via MR receptor are in accordanc with our finding showing expression of the receptors in the proximal S3 segment of rat. These Aldosterone effects may represent physiologically relevant regulation in conditions of volume depletion or expansion in the intact animal.

O presente estudo indica que o pHi basal do segmento S3 do túbulo proximal é 7.10 ? 0.007 (n = 444/2117), sendo a extrusão celular de H+ feita pelo trocador Na+/H+ (marjoritariamante) e pela H+-ATPase. Nossos resultados sugerem um papel do cálcio citosólico na regulação do processo de recuperação do pHi após carga ácida, mediada pelo trocador Na+/H+ e pela H+-ATPase. O trocador é estimulado por Aldosterona (10-12, 10-10 e 10-8 M) e inibido por Aldosterona (10-6 M) via ação genômica e não-genômica. Esses resultados são compatíveis com a estimulação do trocador por moderado aumento da [Ca2+]i citosólico (com Aldosterona 10-12 M) e sua inibição por pronunciado aumento da [Ca2+]i (com Aldosterona 10-6 M). A H+-ATPase é estimulada por Aldosterona em todas as doses utilizadas via ação genômica e não-genômica e esses resultados são coincidentes com um aumento da [Ca2+]i, dose dependente. Esses nossos achados são também compatíveis com a demonstração de uma ação hormonal não-genômica (após 1 ou 15 min) e genômica (após 1 hora) na [Ca2+]i, no trocador e na H+-ATPase. Adicionalmente, nossos resultados indicando que os efeitos hormonais genômicos ocorrem via receptor MR são coincidentes com nossos dados demonstrando a expressão desses receptores no segmento S3. Esses efeitos da Aldosterona que acabamos de descrever podem representar uma regulação fisiológica relevante, em condições de depleção e expansão de volume no animal intacto. / The present study indicate that the basal pHi of proximal S3 segment is 7.10 ? 0.007 (n = 444/2117), being made the extrusion by of Na+/H+ exchanger (mainly) and H+-ATPase. Our results suggest a role for cell calcium in regulating the process of pHi recovery after the acid load induced by NH4Cl, mostly mediated by a basolateral Na+/H+ exchanger, and stimulated by Aldosterone (10-12, 10-10 e 10-8 M) and impaired by Aldosterone (10-6 M) via a genomic and nongenomic action. They are compatible with stimulation of the Na+/H+ exchanger by increases in cell calcium in the lower range (at Aldosterone 10-12 M) and inhibition at high cell calcium levels (at Aldosterone 10-6 M). The H+-ATPase is stimulated in all the used doses via a genomic and nongenomic action, this is coincident with the dose-dependent increase in [Ca2+]i. This finding is also compatible with the demonstration of a hormonal nongenomic (after 1 min or 15 min) and genomic (after 1 h) action on [Ca2+]i, on the Na+/H+ exchanger and on H+-ATPase. Our results indicating that the genomics effects are via MR receptor are in accordanc with our finding showing expression of the receptors in the proximal S3 segment of rat. These Aldosterone effects may represent physiologically relevant regulation in conditions of volume depletion or expansion in the intact animal.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-06-29T16:18:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE - Evellyne - com ficha catalográfica.pdf: 3540470 bytes, checksum: 42d4abc2752fe4f60bc667d7c9829075 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T16:18:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE - Evellyne - com ficha catalográfica.pdf: 3540470 bytes, checksum: 42d4abc2752fe4f60bc667d7c9829075 (MD5) Previous issue date: 2015-09-18 / CAPES / Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não-imunológica que possuem a capacidade de aglutinar eritrócitos ou outras células e precipitar polissacarídeos ou outras glicoproteínas. Cramoll 1, Cramoll 2, Cramoll 3 e Cramoll 4 são lectinas extraídas das sementes de Cratylia mollis. Cramoll 1,4 é uma mistura de Cramoll 1 e sua isoforma Cramoll 4 e rCramoll foi sintetizada pela técnica de expressão heteróloga, a partir da sequência de aminoácidos de Cramoll 1. Este trabalho objetivou avaliar a atividade indutora de morte celular das lectinas Cramoll 1,4 e rCramoll em células de adenocarcinoma de próstata humano (PC-3), além de verificar as propriedades das lectinas Cramoll 1, Cramoll 2, Cramoll 3 e Cramoll 4 em aglutinar plaquetas lavadas de diferentes tipos sanguíneos humanos e de sangue de coelho. Cramoll 1,4 e rCramoll diminuíram a viabilidade das células PC-3 com o aumento das concentrações das lectinas ou do tempo de exposição. Os valores de concentrações capazes de matar 50% das células PC-3 expostas às lectinas foram 39.69 μg/mL e 29.91 μg/mL para Cramoll 1,4 e rCramoll, respectivamente. Elas apresentaram maior citotoxicidade para células PC-3 quando comparadas à lectina ConA. Tratamento com Cramoll 1,4 e com rCramoll induziu a morte celular por necrose, com um aumento de cerca de 3 vezes nos níveis de superóxido mitocondrial, bem como aumento dos níveis de cálcio citosólico. Quando utilizados inibidores da abertura do poro de transição de permeabilidade mitocondrial não foi observada proteção das células PC-3 no processo de morte celular. Provavelmente, a morte de células PC-3 ocorreu devido aos aumentos nas concentrações de cálcio citosólico e de espécies reativas de oxigênio (EROs) mitocondrial, culminando com uma diminuição na fosforilação oxidativa, deficiência de ATP e privação de energia. Com relação à propriedade em aglutinar plaquetas, a aglutinação ocorreu em maior percentual nas plaquetas provenientes de sangue tipo A e em menor intensidade em plaquetas provenientes de sangue tipo AB e apesar da especificidade a carboidratos diferente entre Cramoll 3 e Cramoll 4, estas isoformas apresentaram semelhança quanto à promoção de aglutinação de plaquetas humanas. Quanto aos ensaios de inibição da aglutinação de plaquetas, foi observado que, na maior parte das vezes, os carboidratos específicos não inibiram completamente a aglutinação de plaquetas. / Lectins are proteins or glycoproteins of non-immune origin that have the ability to agglutinate erythrocytes or other cells and precipitating polysaccharides and glycoproteins other. Cramoll 1, Cramoll 2, Cramoll 3 and Cramoll 4 are lectin extracted from seeds Cratylia mollis. Cramoll 1,4 is a mixture of Cramoll 1 and isoform Cramoll 4. rCramoll was synthesized by heterologous expression technique, from the Cramoll amino acid sequence 1. This study evaluated the activity of inducing cell death of lectins Cramoll 1,4 and rCramoll in human prostate adenocarcinoma cells (PC-3), and evaluate the properties of lectins Cramoll 1, Cramoll 2, Cramoll 3 and Cramoll 4 washed platelets agglutinate in different human blood types and rabbit blood. Cramoll 1,4 and rCramoll decreased viability of PC-3 cells with increasing concentrations of lectins or exposure time. The values of effective concentrations to kill 50% of PC-3 cells treated were 39.69 μg/ml and 29.91 μg/mL for the lectins Cramoll 1,4 and rCramoll, respectively. They showed greater toxicity for PC-3 cells compared to the lectin ConA. Treatment with Cramoll 1,4 and rCramoll induced cell death by necrosis, with an increase about 3 times higher the levels mitochondrial superoxide as well as in cytosolic calcium levels. When used inhibitors opening of the mitochondrial permeability transition pore protection was not observed in PC-3 cells in cell death process. Probably, PC-3 cell death occurred due to these previous increases in cytosolic calcium concentrations and reactive oxygen species (ROS) mitochondrial, culminating in a decrease in oxidative phosphorylation, ATP deficiency and deprivation of energy. Platelet agglutination occurred in a higher percentage in platelets from blood type A and to a lesser intensity in platelets from blood type AB. Despite the specificity of different carbohydrates between Cramoll 3 and Cramoll 4, these isoforms were similar as to promoting platelet agglutination human. As for inhibition assays of platelet agglutination it was observed that, in most of times, the specific carbohydrate didn’t completely inhibit platelet agglutination