Memoria para optar el título de Bioquímico / La migración celular es un proceso esencial en organismos pluricelulares, cobrando gran importancia durante la embriogénesis y en la respuesta inmune. Para migrar las células deben ser capaces de generar protrusiones fuera del margen celular. Los principales tipos de protrusiones generados por la polimerización de actina son lamelipodios y filopodios, siendo los primeros generados a través del complejo Arp2/3 (Actin related protein). Se ha reportado que la polimerización de actina es regulada por varias GTPasas pequeñas, entre ellas Rab35, la cual recluta a Rac1 y Cdc42 a sitios de formación de protrusiones modulando la formación de lamelipodios y filopodios, respectivamente. PRPK (p53 related protein kinase) es una quinasa atípica, altamente conservada perteneciente al complejo KEOPS (kinase, putative endopeptidase and other proteins of small size), el cual modula la eficiencia del reconocimiento de codones de tipo ANN. En Drosophila se ha visto que PRPK es necesario para la integración de las señales de la vía PI3K/TOR, las cuales se traducen en crecimiento celular y proliferación. Sin embargo, hemos visto que la pérdida de función de PRPK altera la forma celular en hemocitos-células inmunes homólogas a los macrófagos-, generando un fenotipo estrellado, similar a la pérdida de función del complejo Arp2/3. Este fenotipo es suprimido al co-expresar Rab35. También se ha reportado la interacción física entre PRPK y Rab35 en células humanas. Con estos antecedentes me propuse determinar si PRPK posee un rol fuera del complejo KEOPS, participando en la dinámica de protrusiones de membrana y el patrón de migración de hemocitos en Drosophila melanogaster. Para ello manipulamos los niveles de PRPK en tiempos y tejidos específicos a través del sistema Gal4/UAS. Se analizó la dinámica del citoesqueleto de actina y los parámetros de migración celular mediante microscopía confocal, en contextos particulares de migración y cultivo celular. Finalmente se realizaron co-inmunoprecipitaciones para determinar la interacción física entre PRPK-Kae1 (otro miembro del complejo KEOPS) y PRPK-Rab35. Los resultados obtenidos en esta tesis muestran que la pérdida de función de PRPK altera la dinámica del citoesqueleto de actina in vitro, el patrón de migración de hemocitos en estadios embrionarios, disminuye el reclutamiento de hemocitos en larvas en respuesta a un daño tisular y disminuye la velocidad de migración de hemocitos en estadío pupal. También se corroboró la interacción física entre PRPK y Rab35 y, aún cuando PRPK interactúa con Kae1, se concluyó que el rol de PRPK en la determinación de la forma celular se debe a un rol no canónico fuera del complejo KEOPS. Estos resultados sugieren que PRPK posee dos roles: Integración de señales de crecimiento y migración celular / Cell migration is an essential process in multicellular organisms, gaining great importance during embryogenesis and in the immune response. To migrate the cells must be able to generate protrusions outside the cell margin. The main types of actin protrusions are lamellipodia and filopodia, both generated by actin polymerization through the Arp2/3 (Actin related protein) complex. It has been reported that the activation of numerous small GTPases complex including Rab35, which recruits Rac1 and Cdc42 to the site of protrusions formation, where the latter are involved in the formation of lamellipodia and filopodia respectively. p53-related protein kinase (PRPK) is a highly conserved atypical kinase. It is a member of the KEOPS (kinase, putative endopeptidase and other proteins of small size) complex, which modulates the efficiency of recognition of ANN codons. In Drosophila PRPK is necessary for the translation of PI3K/TOR growth signals, which lastly support cell growth and proliferation. However, we observed that loss of function of PRPK alters cellular shape in haemocytes -macrophage-like cells-, generating a star-like phenotype which is also observed in loss of function of the Arp2/3 complex. The phenotype is suppressed by co-expressing Rab35. Also, it has been reported physical interaction between PRPK and Rab35 in human cells. With all this evidence I decided to determine if PRPK has a function independent of the KEOPS complex participating in the dynamics of membrane protrusions and migration pattern of haemocytes in Drosophila melanogaster. To do this, we manipulated PRPK levels in tissues and times specific through the Gal4 / UAS system. In particular contexts, migration and cell cultures, the actin cytoskeleton dynamics and cell migration's parameters were analyzed by confocal microscopy. Finally co-immunoprecipitations were performed to determine the physical interaction between PRPK-kae1 (another member of the complex KEOPS) and PRPK-Rab35. The results obtained in this study show that the loss of function of PRPK alters the dynamics of membrane protrusions in vitro and the migration pattern of embryonic haemocytes, reduces the recruitment of larval haemocytes in response to tissue damage and decreases haemocyte migration rate in pupal stage. We confirmed the physical interaction between PRPK and Rab35 and even when PRPK interacts with kae1, it was concluded that the role of PRPK in determining cell shape is due to a non-canonical role independent of the KEOPS complex. These results suggest that PRPK has two roles: Integration of growth signals and cell migration / Fondecyt

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-29Bitstream added on 2014-06-13T20:43:01Z : No. of bitstreams: 1 costa_faa_dr_botib.pdf: 1521814 bytes, checksum: c9fb42a6157ca06307697af663f256e9 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo teve o intuito de isolar e caracterizar transcritos diferencialmente expressos em espécies de peixes, visando contribuir com novos dados genéticos acerca deste grupo basal de vertebrados. Desta forma, diferentes análises foram realizadas em Leporinus macrocephalus (piauçu) (Characiformes, Anostomidae), espécie de peixe que representa um importante recurso alimentar que tem sido intensamente explorado na aqüicultura subtropical e que apresenta um sistema de determinação sexual ZZ/ZW, e também em Danio rerio (zebrafish) (Cypriniformes, Cyprinidae), um organismo modelo já bem estabelecido em diferentes áreas da pesquisa científica. Os resultados indicaram que: (1) As α-actinas esqueléticas de tecido muscular branco e vermelho parecem ser genética e funcionalmente distintas não somente em L. macrocephalus como também em outras espécies de peixes, característica que, até o momento, não foi encontrada em outro grupo de vertebrados. Além disso, as características de cada tipo de actina podem ser relacionadas às demandas energéticas dos tecidos musculares branco e vermelho; (2) Um expressão dimórfica entre machos e fêmeas ocorre em tecido cerebral de L. macrocephalus, relacionada ao gene que codifica a proteína APBA2 (amyloid beta (A4) precursor protein-binding, family A, member 2), que está associada à produção da proteína β-amilóide a qual, por sua vez, é relacionada à doença de Alzheimer; (3) A estrutura do gene fabp6 (fatty acid-binding protein 6) de D. rerio é similar à maioria dos outros membros da família multigênica fabp de outros vertebrados, e sua distribuição tecidual em embriões, larvas e adultos da espécie também é similar à encontrada em outros organismos, especialmente mamíferos; (4) Os genes que codificam a proteína p300 (E1A binding protein p300) e a proteína ADCY2 (adenilato ciclase 2) representam dois... / The present study intent to isolate and characterize differentially expressed transcripts in fish species in order to contribute to new genetic data on this basal vertebrate group. Therefore, different analyses were performed in Leporinus macrocephalus (piauçu) (Characiformes, Anostomidae), a fish species that represents an important food resource that has been intensively exploited in the subtropical aquaculture and that presents a ZZ/ZW sex determination system, and also in Danio rerio (zebrafish) (Cypriniformes, Cyprinidae), a well-established model organism in different areas of scientific research. The results indicated that: (1) The α-skeletal actins from white and red muscle tissues appear to be somewhat genetically and functionally distinguishable not only in L. macrocephalus but also in other fish species, a feature that was not found in other vertebrate groups so far. Moreover, the characteristics of each actin type could be related to the energetic demands of white and red muscle tissues; (2) A sexually dimorphic gene expression occurs in brain tissue of males and females of L. macrocephalus related to the gene that codes for the protein APBA2 (amyloid beta (A4) precursor protein-binding, family A, member 2), that is associated to the production of the β- amyloid protein which, in turns, is related to the Alzheimer disease; (3) The fabp6 (fatty acid-binding protein 6) gene structure of D. rerio is similar to most of the other members of the multigenic fabp family of other vertebrates, and its tissue distribution in embryos, larvae, and adults of the species is also similar to the one found in other organisms, specially mammals; (4) The genes that code for the protein p300 (E1A binding protein p300) and for the ADCY2 protein (adenylate cyclase 2) represent two candidate differentially expressed genes among nontransgenic and growth hormone (GH)-transgenic homozygote... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Adriane Pinto Wasko / Banca: Luis Fernando Marins / Banca: Alexandre Azevedo / Banca: Claudio Oliveira / Banca: Maeli Dal Pai Silva / Resumo: O presente estudo teve o intuito de isolar e caracterizar transcritos diferencialmente expressos em espécies de peixes, visando contribuir com novos dados genéticos acerca deste grupo basal de vertebrados. Desta forma, diferentes análises foram realizadas em Leporinus macrocephalus (piauçu) (Characiformes, Anostomidae), espécie de peixe que representa um importante recurso alimentar que tem sido intensamente explorado na aqüicultura subtropical e que apresenta um sistema de determinação sexual ZZ/ZW, e também em Danio rerio (zebrafish) (Cypriniformes, Cyprinidae), um organismo modelo já bem estabelecido em diferentes áreas da pesquisa científica. Os resultados indicaram que: (1) As α-actinas esqueléticas de tecido muscular branco e vermelho parecem ser genética e funcionalmente distintas não somente em L. macrocephalus como também em outras espécies de peixes, característica que, até o momento, não foi encontrada em outro grupo de vertebrados. Além disso, as características de cada tipo de actina podem ser relacionadas às demandas energéticas dos tecidos musculares branco e vermelho; (2) Um expressão dimórfica entre machos e fêmeas ocorre em tecido cerebral de L. macrocephalus, relacionada ao gene que codifica a proteína APBA2 (amyloid beta (A4) precursor protein-binding, family A, member 2), que está associada à produção da proteína β-amilóide a qual, por sua vez, é relacionada à doença de Alzheimer; (3) A estrutura do gene fabp6 (fatty acid-binding protein 6) de D. rerio é similar à maioria dos outros membros da família multigênica fabp de outros vertebrados, e sua distribuição tecidual em embriões, larvas e adultos da espécie também é similar à encontrada em outros organismos, especialmente mamíferos; (4) Os genes que codificam a proteína p300 (E1A binding protein p300) e a proteína ADCY2 (adenilato ciclase 2) representam dois... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study intent to isolate and characterize differentially expressed transcripts in fish species in order to contribute to new genetic data on this basal vertebrate group. Therefore, different analyses were performed in Leporinus macrocephalus (piauçu) (Characiformes, Anostomidae), a fish species that represents an important food resource that has been intensively exploited in the subtropical aquaculture and that presents a ZZ/ZW sex determination system, and also in Danio rerio (zebrafish) (Cypriniformes, Cyprinidae), a well-established model organism in different areas of scientific research. The results indicated that: (1) The α-skeletal actins from white and red muscle tissues appear to be somewhat genetically and functionally distinguishable not only in L. macrocephalus but also in other fish species, a feature that was not found in other vertebrate groups so far. Moreover, the characteristics of each actin type could be related to the energetic demands of white and red muscle tissues; (2) A sexually dimorphic gene expression occurs in brain tissue of males and females of L. macrocephalus related to the gene that codes for the protein APBA2 (amyloid beta (A4) precursor protein-binding, family A, member 2), that is associated to the production of the β- amyloid protein which, in turns, is related to the Alzheimer disease; (3) The fabp6 (fatty acid-binding protein 6) gene structure of D. rerio is similar to most of the other members of the multigenic fabp family of other vertebrates, and its tissue distribution in embryos, larvae, and adults of the species is also similar to the one found in other organisms, specially mammals; (4) The genes that code for the protein p300 (E1A binding protein p300) and for the ADCY2 protein (adenylate cyclase 2) represent two candidate differentially expressed genes among nontransgenic and growth hormone (GH)-transgenic homozygote... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Tesis entregada a la Universidad de Chile en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al grado de Doctor en Ciencias, mención Biología Molecular, Celular y Neurociencias. / El citoesqueleto es un componente esencial en todas las células. En particular, el citoesqueleto de Actina cumple múltiples funciones, desde el desarrollo de un organismo, la migración celular, hasta la formación de distintas estructuras celulares, tales como pelos cuticulares o tricomas, que corresponden a una extensión de la membrana plasmática. En Drosophila melanogaster, las células epiteliales forman un único pelo o tricoma en la zona apico-distal de estas. Durante el desarrollo, esta estructura se forma por la acumulación polarizada de Actina y su subsecuente polimerización lineal, la que es finamente regulada. Sin embargo, aún no se tiene claro cuáles son los mecanismos moleculares que promueven la acumulación y polimerización de Actina para la formación de pelos en las células epiteliales de insectos como Drosophila melanogaster. En nuestro laboratorio se encontró una mutación en un gen no caracterizado en Drosophila melanogaster. Dicha mutación en homocigosis genera la letalidad del animal en el periodo embrionario. Para analizar el fenotipo celular asociado a la mutación de dicho gen, utilizamos mosaicos celulares. Se observó que en células epiteliales mutantes para pelado, la formación de pelos es inhibida. Junto con esto, en células del sistema inmune de Drosophila, la pérdida de función de Pelado genera una alteración en la forma celular, las que aparentemente no se adhieren bien a la superficie de contacto. Sin embargo, al inducir la ganancia de función en estas mismas células se observa la formación de filopodios. Estos datos en conjunto sugieren que Pelado promueve la polimerización lineal de Actina durante la formación del pelo. El fenotipo en la formación de pelos o tricomas generado por la pérdida de función de Pelado es revertido con la ganancia de función de Diaphanous, que corresponde a una formina, que nuclea y polimeriza la Actina de manera lineal. Este fenotipo también es revertido por la pérdida de función de Scar/WAVE, proteína que induce la polimerización ramificada de Actina. En el caso de los hemocitos, la pérdida de función de Diaphanous revierte la formación de filopodios inducida por Pelado. Esto indica que la función de Pelado podría estar mediada por la regulación de la formina Diaphanous. Se generó una mutante que carece del extremo C-terminal de Pelado con la intención de determinar si era suficiente para cumplir la función de la proteína completa. Al analizar el fenotipo de ganancia de función de esta mutante sobre los hemocitos, se observó que de todas maneras se induce la formación de filopodios. Sin embargo, esta mutante no es capaz de revertir el fenotipo de pérdida de función de Pelado en la formación del pelo. Indicando que el extremo N-terminal de Pelado cumple la función de inducir la polimerización lineal de Actina, pero no así en la formación del pelo. Finalmente, el análisis de la distribución celular de ambas versiones de Pelado, muestra que la versión silvestre se localiza más periféricamente que la que carece del extremo Cterminal, sugiriendo que esta región es necesaria para su localización subcelular durante el proceso de formación del pelo. / Cytoskeleton is an essential component in every cell. In particular, Actin cytoskeleton fulfill several functions, from development of an organism, cell migration, to different cell structures formation, such cellular as hairs or trichomes. In Drosophila melanogaster, a single hair grows at the distal side of the apical cortex of every epithelial cell. During development, this structure is formed by the polarized accumulation of Actin and its subsequent linear polymerization, which is tightly regulated. However, it is still not clear what are the molecular mechanisms that promote the accumulation and polymerization of Actin for the hair formation in insects as Drosophila melanogaster. In our lab, we found a mutation in an undescribed gene of Drosophila, which in homozygosity causes embryonic lethality. To analyze the cellular phenotype associated with this mutation, we use cell mosaics. We observed that in mutant epithelial cells, hair formation is inhibited. Moreover, loss of function of Pelado in immune cells generates cell shape defect and its gain of function promotes filopodia formation. All this data together, indicates that Pelado promotes linear actin polymerization during hair formation. The hair formation phenotype generated by Pelado loss of function, is reversed by Diaphanous gain of function, which is a type of formin, that nucleates and polymerize Actin in a linearly. This phenotype is also reversed by the Scar/WAVE loss of function, a protein that induces the branched actin polymerization. In hemocyte cells case, the Diaphanous loss of function reversed the filopodia formation induced by Pelado gain of function. This indicates that Pelado function in Actin polymerization could be mediated by Diaphanous. In order to start unveiling the role of the different domains of Pelado, we generated a new mutant, that lacks the C-terminal portion of Pelado. This mutant was generated to determine whether this region is enough to fulfill the entire protein function. This new mutant also induces the filopodia formation in hemocytes. However, this mutant is not able to revert the hair formation phenotype induced by Pelado loss of function, indicating that the amino portion of Pelado is sufficient to induce linear Actin polymerization, but not to induce hair formation. Finally, analyses of cellular distribution of Pelado forms shows that wild type version has a more peripheral location than the mutant, suggesting that the C-terminal region is required for its localization. / Mayo 2020

El trabajo llevado a cabo en esta tesis contribuye a esclarecer la relación morfo-funcional entre la actina y el complejo de Golgi. Estudios previos del laboratorio ponen de manifiesto que la actina regula no sólo la posición y morfología del complejo de Golgi en la célula (di Campli et al., 1999; Valderrama et al., 1998) sino también el transporte de proteínas desde el CG al retículo endoplasmático (transporte retrógrado; Valderrama et al., 2001). Un trabajo más reciente de nuestro grupo muestra a la Rho GTPasa Cdc42 como el componente molecular que regula los efectos del citoesqueleto de actina sobre el CG (Luna et al., 2002). En este trabajo se pone de manifiesto que Cdc42 se localiza en el CG y su activación comporta su acumulación en los laterales de las cisternas de este orgánulo. Además, la forma activa de Cdc42 (GTP-Cdc42) regula negativamente el transporte retrógrado de proteínas actuando a través de N-WASP y del complejo multiproteico Arp2/3. De estos resultados concluimos que la vía de señalización Cdc42-N-WASP-Arp2/3 que gobierna la nucleación y polimerización de actina a nivel de la membrana plasmática (Pollard y Borisy, 2003) también es funcional a nivel del complejo de Golgi. En esta Tesis nos planteamos estudiar si al igual que ocurre con Cdc42, sus efectores N-WASP y Arp2/3 se localizan también en el CG. La presencia de todos los componentes necesarios para la polimerización de actina en este orgánulo es requisito necesario para demostrar que efectivamente las membranas del CG pueden polimerizar actina.Otro de los objetivos de esta tesis era determinar de forma definitiva si Rac1 y RhoA regulaban también alguna de las etapas de la dinámica de membranas en la vía secretora temprana. Estas dos proteínas junto con Cdc42 son los miembros mejor conocidos de la familia de las Rho GTPasas. Todas ellas regulan, aunque de diferente forma, la organización del citoesqueleto de actina (Etienne-Manneville y Hall, 2002). En la actualidad son numerosos los estudios que muestran su papel como proteínas reguladoras de diferentes etapas de la vía endocítica (Ridley, 2001(a); Symons y Rusk, 2003) pero menos se conoce sobre su implicación en la vía secretora. Así pues, de los resultados expuestos en este trabajo se puede concluir que: Cdc42 es la única Rho GTPasa asociada al complejo de Golgi.La vía de señalización Cdc42/N-WASP/Arp2/3 implicada en los procesos de nucleación/polimerización de actina se localiza también en el CG y mayoritariamente en la porción cis-media.La activación de esta vía conlleva la redistribución de todos sus componentes a los laterales de las cisternas del CG donde probablemente regulan (junto con otras moléculas) los procesos de formación y/o fisión de los intermediarios de transporte retrógrado a través de la nucleación/polimerización de actina. Lo que finalmente nos indica que la cascada de señalización con actividad nucleadora/polimerizadora de actina que participa en la dinámica de membranas acontece no sólo en la membrana plasmática sino también a nivel del complejo de Golgi.

Neospora caninum é um protozoário pertencente ao filo Apicomplexa que atinge, dentre diversos hospedeiros intermediários, principalmente bovinos e tem emergido como um importante causador de problemas reprodutivos e abortos em rebanhos de corte e leiteiro. Organismos do filo Apicomplexa são parasitas intracelulares obrigatórios que, para locomoverem-se e realizarem a invasão das células hospedeiras, utilizam um mecanismo próprio de locomoção ativa impulsionada pelo motor actina/miosina denominado motilidade por deslizamento (gliding motility), cujo complexo motor localiza-se entre a membrana plasmática e o complexo de membrana interno do parasita. A investigação a respeito do funcionamento desse mecanismo de locomoção e invasão vem sendo realizada principalmente em Toxoplasma gondii e Plasmodium spp., entretanto não há nenhuma publicação envolvendo actina em N. caninum. Esse trabalho envolveu a clonagem e expressão da sequência NcAct201-310 e deu início a caracterização da actina de N. caninum (NcAct). A sequência NcAct foi obtida em banco de dados ToxoDB, e uma comparação por alinhamento entre as actinas de Apicomplexas relacionados revelou que NcAct é idêntica à TgACT1 (100% identidade). Com outras espécies, a NcAct tem maior identidade/similaridade com a actina de Eimeria tenella (97%/99%), seguida da actina de Plasmodium falciparum PfACT1 (93%/97%), da actina de Babesia bovis (86%/94%) e PfACT2 (80%/92%). Quando localizada com anticorpo anti-?-actina C4, NcAct apresenta-se em duas bandas de 43 e 45 kDa em gel de acrilamida 1D e em nove isoformas em gel de acrilamida 2D. Todas as identidades das bandas e spots foram confirmados por espectrometria de massas (MS/MS). Além disso, NcAct localiza-se, em sua maioria, na região periférica do taquizoíta de N. caninum e sua distribuição é alterada após incubação dos taquizoítas com 5 ?M de jasplakinolida (JAS) ou 2 ?M de citocalasina D (CytD). Por fim, por meio de ensaio de fracionamento de actina monomérica (actina-G) e filamentosa (actina-F), demonstramos que a JAS é capaz de aumentar a quantidade de actina-F em taquizoítas de N. caninum. / Neospora caninum is an Apicomplexan protozoan that infects, among a whole range of intermediate hosts, bovine where it is emerging as a relevant cause of reproductive problems and abortion in dairy and beef cattle. As obligatory intracellular organisms, parasites from Apicomplexa Phylum use their own active locomotion system to move and invade host cells. This mechanism is driven by the actin/myosin motor known as gliding motility, localized between the plasma and the inner membrane complex. Studies involving this locomotion and invasion system have been conducted mainly in Toxoplasma gondii and Plasmodium spp. To our knowledge there is no publication involving actin in N. caninum, so this work was outlined and involved the cloning and expression of the sequence NcAct201-310, initiating the characterization of actin of N. caninum (NcAct). The sequence NcAct was obtained from the Database ToxoDB, and a comparison of actins from Apicomplexa-related revealed total identity of NcAct with TgACT1 (100% identity). With other species, NcAct has higher identity/similarity with Eimeria tenella actin (97%/99%), followed by Plasmodium falciparum actin PfACT1 (93%/97%), Babesia bovis actin (86%/94%) and PfACT2 (80%/92%). When localized with the antibody anti-?-actin C4, NcAct is presented as two bands of 43 and 45 kDa in 1D acrylamide gel and as nine isoforms in 2D acrylamide gel. All these findings were confirmed by mass spectrometry (MS/MS). Moreover, NcAct localizes predominantly in the peripheric region of N. caninum tachyzoites. This distribution is altered after incubation of the tachyzoites with 5 ?M of jasplakinolide (JAS) or 2 ?M of cytochalasin D (CytD). Finally through fractionating assay of monomeric (actin-G) and filamentous (actin-F), we demonstrated that JAS is capable of increasing the quantity of actin-F in N. caninum tachyzoites.

Orientador: Ana Lia Anbinder / Coorientadora: Noala Vicensoto Moreira Milhan / Banca: Fábio Luiz Coracin / Banca: Monica Ghislaine Oliveira Alves / Resumo: Granuloma piogênico (GP) é uma lesão de origem inflamatória que ocorre frequentemente em pele e cavidade oral. Existem dois subtipos histológicos: o tipo não lobular (GPNL), que é caracterizado por proliferação vascular semelhante a tecido de granulação, sem padrão de organização; e o tipo lobular (GPL) que se caracteriza pela organização dos vasos em agregados lobulares, separados por feixes de tecido conjuntivo. O objetivo deste estudo foi revisar todos os casos de granulomas piogênicos do nosso serviço de patologia bucal, a partir do ano 2000, reclassificar e correlacionar as características clínicas, microscópicas e imuno-histoquímicas com os subtipos da lesão. No levantamento foram encontrados no arquivo 197 casos diagnosticados como granuloma piogênico e hemangioma lobular capilar. Após revisão das lâminas, 9 casos foram reclassificados, e 19 foram excluídos, restando 169 casos, sendo 62 de GPL e 107 de GPNL. Foram coletados ainda dados como sexo, idade, local da lesão, tipo de nódulo, ocorrência de trauma prévio e hipótese diagnóstica clínica. Reações imuno-histoquímicas (GLUT-1, CD34, D2-40, AML e Mast cell) de 22 casos, sendo 11 lobulados e 11 não lobulados. A média de idade de acometimento foi de 38,59±16,96 anos, com 55,62% dos casos ocorrendo em pacientes do sexo feminino (10,12% durante gravidez), com maior acometimento em gengiva (39,64%), 44,97% dos nódulos eram do tipo pediculado e 13,02% relataram trauma mecânico prévio. O GPNL ocorre mais em gengiva, enquant... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Pyogenic granuloma (GP) is an inflammatory lesion that occurs frequently in the skin and oral cavity. There are two histological subtypes: the non-lobular type (NLCH), which is characterized by vascular proliferation similar to granulation tissue, without organization pattern; and lobular capillary hemangioma (LCH) characterized by the organization of vessels in lobular aggregates, separated by bundles of connective tissue. The purpose of this study was to review all cases of pyogenic granulomas of our oral pathology service, from the year 2000, to reclassify and correlate the clinical, microscopic and immunohistochemical characteristics with the subtypes of the lesion. In the survey, 197 cases diagnosed as pyogenic granuloma and lobular capillary hemangioma were found in our files. After review, 9 cases were reclassified, and 19 were excluded, remaining 169 cases, being 62 LCH and 107 NLCH. Data such as sex, age, site of lesion, type of nodule, previous trauma and clinical diagnostic hypothesis were also collected. Immunohistochemical reactions (GLUT-1, CD34, D2-40, SMA and Mast cell) of 24 cases, 11 LCH and 11 NLCH. Mean age was 38.59±16.96 years, with 55.62% of cases occurring in female patients (10.12% during pregnancy), with a greater involvement in gingiva (39.64%), 44.97% of the nodules were pedunculated and 13.02% reported previous mechanical trauma. The NLCH occurs more in gingiva, while LCH affects more lips (p<0,05). The number of microvessels (CD34 positive), SMA ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

El citoesqueleto de actina es imprescindible para el mantenimiento de la morfología celular, así como para realizar diversas funciones como la movilidad/migración y división celular. En términos generales, este componente del citoesqueleto está constituido por los filamentos de actina o microfilamentos (MFs) y por una serie de proteínas de unión y/o relacionadas con la actina, implicadas en la organización estructural de los MFs y en la regulación de la dinámica de polimerización/despolimerización de actina. Una forma sencilla y eficaz de interferir en la dinámica de actina es mediante el uso de toxinas de actina. En este trabajo se ha realizado un estudio exhaustivo de los efectos provocados por estas toxinas a nivel de la morfología celular, arquitectura y de salida de proteínas del aparato de Golgi, bien por depolimerización de los MFs (citocalasina D, latrunculina B, micalolide B o toxina botulínica C2) o bien por su polimerización aberrante o estabilización (jasplakinolide). El análisis de los efectos provocados por las distintas toxinas revela como éstos son dependientes del tipo celular, modo de acción de la toxina así como de la concentración y tiempo de exposición a esta. Hemos observado como los cambios de la morfología de las cisternas producto de la despolimerización de los MFs se correlacionan con variaciones en la homeostasis el pH de este orgánulo. Según lo cual, pensamos que los MFs participan en el diseño y mantenimiento de la forma aplanada de las cisternas del aparato de Golgi, probablemente regulando, en parte, la maquinaria molecular implicada en el mantenimiento de la homeostasis iónica de este orgánulo. Por otro lado, hemos observado como los MFs participan de forma variable en la salida del aparato de Golgi de cargo no asociado a balsas lipídicas con destino basolateral y apical. Sin embargo, son prescindibles en la salida de cargo asociado a balsas lipídicas con destino apical. Paralelamente a estos resultados que implican a los MFs en la morfo-funcionalidad del aparato de Golgi, hemos desarrollado un modelo celular para generación de agresomas de actina filamentosa, los cuales han sido descritos en distintas enfermedades como el Alzheimer o el acoholismo crónico bajo el nombre de cuerpos de Hirano. En este sentido, el jasplakinolide es capaz de inducir la formación reversible de un agresoma de actina filamentosa similar al cuerpo de Hirano cuya degradación está mediada por los sistemas proteasomal y lisosomal/autofagia. Por último, describimos por primera vez in vitro la generación y coexistencia de dos agresomas originados por mecanismos diferentes sin que tenga lugar en ningún momento la mezcla de sus componentes moleculares.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-18Bitstream added on 2015-04-09T12:48:06Z : No. of bitstreams: 1 000816635.pdf: 1408307 bytes, checksum: 5daacbf627e5bb9b1039a599a8e5bed4 (MD5) / O presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência da infecção e realizar a caracterização molecular de Cryptosporidium spp. em caprinos jovens do município de Quixadá, Ceará, Brasil. Participaram do estudo um total de 400 animais, com idade entre três e 360 dias, com e sem padrão racial definido, nos quais 154 eram machos e 246 fêmeas, procedentes de 25 estabelecimentos rurais distribuídos em três circuitos. Amostras de fezes foram obtidas diretamente da ampola retal dos cabritos e cadastradas de acordo com o aspecto e a coloração. Uma quantidade de 200 mg de cada amostra foi distribuída em microtubos de 2 mL e congeladas “in natura” a -20 °C, até o momento das extrações de DNA genômico do parasito com auxílio de kit comercial. Todas as amostras foram submetidas a “Nested”-PCR para amplificação de fragmentos do gene da subunidade 18S RNA ribossômico. As positivas nesta amplificação foram testadas na “Nested”-PCR com os genes actina e HSP 70. As amostras que tiveram amplificação nesses três genes foram submetidas a “Nested”-PCR em triplicata e posterior sequenciamento nas direções “sense” e “anti-sense”. A ocorrência da infecção por Cryptosporidium spp. em cabritos de Quixadá foi de 7,50% (30/400) e 64,00% (16/25) das propriedades tinham cabritos positivos. O distrito Tapuiará foi o que apresentou maior número de animais positivos, e a frequência no período seco e chuvoso foi de 9,55% (19/199) e 5,47% (11/201), respectivamente (P = 0,1218). Das 30 amostras de fezes positivas, 50,00% (15/30) tinham aspecto normal e 70,00% (21/30) coloração normal, sugerindo que cabritos assintomáticos eliminam oocistos no ambiente. Não foi observada positividade para Cryptosporidium spp. em animais com 301 a 360 dias. Por meio do sequenciamento foi possível identificar que as espécies do coccídio detectadas nas fezes dos cabritos foram Cryptosporidium xiaoi ... / The present study aimed to evaluate the occurrence of infection and perform molecular characterization of Cryptosporidium spp. in goats kids from the town of Quixadá – state of Ceará – Brazil. A total of 400 animals, 154 males and 246 females, with aged between three and 360 days, with and without defined breed, from 25 farms distributed in three circuits, participated in this study. Stool samples were obtained directly from the goats rectum and registered in accordance to their appearance and coloring. An amount of 200 mg of each sample, were distributed in micro tubes of 2 mL and frozen “in nature” at -20 °C until the moment of extraction of the parasite genomic DNA using a commercial kit. All samples were submitted to Nested-PCR to amplify fragments of 18S subunit of ribosomal RNA. The positives samples in this amplification were tested in Nested-PCR with actin and HSP 70 genes. Samples that were amplified in these three genes were subjected to Nested-PCR triplicate and subjected to sequencing in sense and anti-sense directions. The occurrence of the infection by Cryptosporidium in goats kids of the town of Quixadá was 7.50% (30/400) and 64.00% (16/25) of the farms with positive goats. The Tapuiará district showed the highest number of positive animals and the frequency in dry and rainy period was 9.55% (19/199) and 5.47% (11/201), respectively (P = 0.1218). Considering 30 samples of positive stools, 50.00% (15/30) had normal appearance and 70.00% (21/30) normal coloring, suggesting that asymptomatic goats can eliminate oocysts in the environment. It was not observed positivity for Cryptosporidium spp. in animals aged between 301 and 360 days. Through sequencing, it was possible to identify that the species of coccidian found in the feces of the goats are Cryptosporidium xiaoi, Cryptosporidium ubiquitum and Cryptosporidium meleagridis. Different species of protozoa are present in rural farms ...

Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Coorientador: Luiz da Silva Vieira / Coorientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Márcia Benedita de Oliveira Silva / Banca: Jancarlo Ferreira Gomes / Banca: Luis Antonio Mathias / Banca: Gilson Helio Toniollo / Resumo: O presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência da infecção e realizar a caracterização molecular de Cryptosporidium spp. em caprinos jovens do município de Quixadá, Ceará, Brasil. Participaram do estudo um total de 400 animais, com idade entre três e 360 dias, com e sem padrão racial definido, nos quais 154 eram machos e 246 fêmeas, procedentes de 25 estabelecimentos rurais distribuídos em três circuitos. Amostras de fezes foram obtidas diretamente da ampola retal dos cabritos e cadastradas de acordo com o aspecto e a coloração. Uma quantidade de 200 mg de cada amostra foi distribuída em microtubos de 2 mL e congeladas "in natura" a -20 °C, até o momento das extrações de DNA genômico do parasito com auxílio de kit comercial. Todas as amostras foram submetidas a "Nested"-PCR para amplificação de fragmentos do gene da subunidade 18S RNA ribossômico. As positivas nesta amplificação foram testadas na "Nested"-PCR com os genes actina e HSP 70. As amostras que tiveram amplificação nesses três genes foram submetidas a "Nested"-PCR em triplicata e posterior sequenciamento nas direções "sense" e "anti-sense". A ocorrência da infecção por Cryptosporidium spp. em cabritos de Quixadá foi de 7,50% (30/400) e 64,00% (16/25) das propriedades tinham cabritos positivos. O distrito Tapuiará foi o que apresentou maior número de animais positivos, e a frequência no período seco e chuvoso foi de 9,55% (19/199) e 5,47% (11/201), respectivamente (P = 0,1218). Das 30 amostras de fezes positivas, 50,00% (15/30) tinham aspecto normal e 70,00% (21/30) coloração normal, sugerindo que cabritos assintomáticos eliminam oocistos no ambiente. Não foi observada positividade para Cryptosporidium spp. em animais com 301 a 360 dias. Por meio do sequenciamento foi possível identificar que as espécies do coccídio detectadas nas fezes dos cabritos foram Cryptosporidium xiaoi ... / Abstract: The present study aimed to evaluate the occurrence of infection and perform molecular characterization of Cryptosporidium spp. in goats kids from the town of Quixadá - state of Ceará - Brazil. A total of 400 animals, 154 males and 246 females, with aged between three and 360 days, with and without defined breed, from 25 farms distributed in three circuits, participated in this study. Stool samples were obtained directly from the goats rectum and registered in accordance to their appearance and coloring. An amount of 200 mg of each sample, were distributed in micro tubes of 2 mL and frozen "in nature" at -20 °C until the moment of extraction of the parasite genomic DNA using a commercial kit. All samples were submitted to Nested-PCR to amplify fragments of 18S subunit of ribosomal RNA. The positives samples in this amplification were tested in Nested-PCR with actin and HSP 70 genes. Samples that were amplified in these three genes were subjected to Nested-PCR triplicate and subjected to sequencing in sense and anti-sense directions. The occurrence of the infection by Cryptosporidium in goats kids of the town of Quixadá was 7.50% (30/400) and 64.00% (16/25) of the farms with positive goats. The Tapuiará district showed the highest number of positive animals and the frequency in dry and rainy period was 9.55% (19/199) and 5.47% (11/201), respectively (P = 0.1218). Considering 30 samples of positive stools, 50.00% (15/30) had normal appearance and 70.00% (21/30) normal coloring, suggesting that asymptomatic goats can eliminate oocysts in the environment. It was not observed positivity for Cryptosporidium spp. in animals aged between 301 and 360 days. Through sequencing, it was possible to identify that the species of coccidian found in the feces of the goats are Cryptosporidium xiaoi, Cryptosporidium ubiquitum and Cryptosporidium meleagridis. Different species of protozoa are present in rural farms ... / Doutor