Dermatofitoses são infecções fúngicas de natureza crônica cujo principal agente etiológico é Trichophyton rubrum. Apesar de sua alta ocorrência mundial, pouco se sabe sobre os mecanismos imunológicos envolvidos nestas infecções. Neste trabalho investigamos a participação de duas classes de receptores de imunidade inata (NLRs e CLRs) na resposta a T.rubrum e avaliamos o perfil proteômico de macrófagos quando estimulados com o fungo. Observamos que T.rubrum foi capaz de induzir a produção de IL-1β dependente do inflamassomo NLRP3 e destacamos o papel da sinalização de IL-1 na modulação da resposta de IL-17. Determinamos os CLRs dectina-1 e dectina-2 como receptores essenciais na produção de citocinas inflamatórias e para o controle da infecção experimental. Curiosamente, a IL-17 e os linfócitos T e B foram dispensáveis para a eliminação do fungo. Também identificamos a proteína CLEC1A como uma novo receptor para fungos, envolvido no reconhecimento de glicolipídeos de T.rubrum. Por fim, a análise proteômica de macrofagos revelou a vimentina e a plastina-2 como duas proteínas potencialmente envolvidas na relação patógeno-hospedeiro. / Dermatophytosis are chronic fungal infections whose main causative agent is Trichophyton rubrum. Despite its high incidence worldwide, the immunological mechanisms underlying these infections remain largely unknown. Here we investigated the involvement of two classes of innate immune receptors (NLRs and CLRs) in the reponse to T.rubrum and performed a proteomic profiling of macrophages upon T.rubrum stimulation. We observed that T.rubrum was able to drive NLRP3 inflammasome-derived IL-1β production and highlighted IL-1 signaling as an important component in the shaping of the IL-17 response. We defined the CLRs dectin-1 and dectin-2 as key receptors for the induction of inflammatory cytokines and for the infection control in the in vivo settings. Curiously, IL-17 cytokines and T and B lymphocytes were dispensable for fungal clearance. In addition, we uncovered CLEC1A as a new receptor in fungal sensing, involved in the recognition of T.rubrum glycolipids. Finally, the proteomic analysis revealed Vimentin and Plastin-2 as two proteins potentially involved in the host-pathogen interaction.

Dermatofitoses são infecções fúngicas de natureza crônica cujo principal agente etiológico é Trichophyton rubrum. Apesar de sua alta ocorrência mundial, pouco se sabe sobre os mecanismos imunológicos envolvidos nestas infecções. Neste trabalho investigamos a participação de duas classes de receptores de imunidade inata (NLRs e CLRs) na resposta a T.rubrum e avaliamos o perfil proteômico de macrófagos quando estimulados com o fungo. Observamos que T.rubrum foi capaz de induzir a produção de IL-1β dependente do inflamassomo NLRP3 e destacamos o papel da sinalização de IL-1 na modulação da resposta de IL-17. Determinamos os CLRs dectina-1 e dectina-2 como receptores essenciais na produção de citocinas inflamatórias e para o controle da infecção experimental. Curiosamente, a IL-17 e os linfócitos T e B foram dispensáveis para a eliminação do fungo. Também identificamos a proteína CLEC1A como uma novo receptor para fungos, envolvido no reconhecimento de glicolipídeos de T.rubrum. Por fim, a análise proteômica de macrofagos revelou a vimentina e a plastina-2 como duas proteínas potencialmente envolvidas na relação patógeno-hospedeiro. / Dermatophytosis are chronic fungal infections whose main causative agent is Trichophyton rubrum. Despite its high incidence worldwide, the immunological mechanisms underlying these infections remain largely unknown. Here we investigated the involvement of two classes of innate immune receptors (NLRs and CLRs) in the reponse to T.rubrum and performed a proteomic profiling of macrophages upon T.rubrum stimulation. We observed that T.rubrum was able to drive NLRP3 inflammasome-derived IL-1β production and highlighted IL-1 signaling as an important component in the shaping of the IL-17 response. We defined the CLRs dectin-1 and dectin-2 as key receptors for the induction of inflammatory cytokines and for the infection control in the in vivo settings. Curiously, IL-17 cytokines and T and B lymphocytes were dispensable for fungal clearance. In addition, we uncovered CLEC1A as a new receptor in fungal sensing, involved in the recognition of T.rubrum glycolipids. Finally, the proteomic analysis revealed Vimentin and Plastin-2 as two proteins potentially involved in the host-pathogen interaction.

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2017-04-27T14:24:41Z No. of bitstreams: 1 DAIANE DE OLIVEIRA CUNHA.pdf: 2074632 bytes, checksum: 76e82c4169a9d294dcddcc8e9ad849cb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T14:24:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DAIANE DE OLIVEIRA CUNHA.pdf: 2074632 bytes, checksum: 76e82c4169a9d294dcddcc8e9ad849cb (MD5) Previous issue date: 2017-03-13 / The present dissertation was constructed in the form of scientific articles, being constituted by two articles. The first one, titled "Epidemiological evaluation of patients submitted to the serum galactomannan test with suspected Aspergillosis Invasive", aimed to evaluate the incidence of Invasive Aspergillosis in patients with hematological diseases followed at a reference hospital in Goiânia, Goiás, Brazil. Determine the main factors that contribute to the development of the disease. For this, 1367 samples of 264 patients with malignant hematological diseases treated in the Hematology Sector of Hospital Araújo Jorge, who underwent galactomannan detection, were evaluated in the period from 2013 to 2015, and were excluded patients who had no clinical data in Medical records and loss of follow-up at the hospital. Among the data obtained through the present study it was observed that the mean age was 43.7 years, where 55.5% were male. Of the total number of patients evaluated, 133 performed BMT, 38.9% of which were autologous and 17.9% of the allogeneic type. According to the classification for Invasive Aspergillosis according to the European Organization for Research and Treatment of Cancer, the disease was interpreted as proven in 7.3%, defined by culture positive for the fungus, 6.4% as probable by the detection of galactomannan in the Blood and presence of pulmonary infiltrates and 5.1% as possible by radiological alterations suggestive of Invasive Aspergillosis and galactomannan negative. The estimated / probable / probable Aspergillosis Invasive mortality rate was 61.3% and showed that the disease was significantly associated with the risk of death (p <0.0001). When considering the high mortality rate caused by the development of Aspergillosis Invasive and the fact that an early therapy promotes a significant improvement in the prognosis of patients, we conclude that the detection of galactomannan, performed as a follow-up of patients at high risk of developing the disease, can Be considered an effective method to aid in the identification of Invasive Aspergillosis. The second article entitled "Association between polymorphisms of genes encoding Dectin-1 and Toll-like cellular receptors and susceptibility to Invasive Aspergillosis", aimed to describe the polymorphisms in genes encoding Dectin-1 and Tolllike receptors, Seeking possible associations with the individual susceptibility to Invasive Aspergillosis. This study used as a methodological basis a systematic review of the literature and as a database to PubMed and PMC of the NCBI. The keywords used were: Invasive aspergillosis, polymorphism, Dectin-1 and Toll-like. From this search, 415 studies were found and according to the inclusion and exclusion criteria 8 studies were selected. With the accomplishment of this, it was verified that several are the studies that describe the single base polymorphisms with a greater susceptibility to the Invasive Aspergillosis. The major ones are in genes encoding Toll-like receptors and those that encode cytokines and chemokines (Dectin-1). Thus, it can be observed that, according to studies already carried out, there is a significant association of genetic polymorphisms with Aspergillosis Invasive, but more extensive studies must be performed to obtain more reliable results. In general, we conclude with this dissertation that the development of Invasive Aspergillosis is associated with several factors, one of them being genetic, and that, due to the high mortality rates caused by Invasive Aspergillosis, the detection of galactomannan is of fundamental importance for the Treatment of patients who are more likely to develop the disease, mainly aiding in the prognosis and early diagnosis of it. / A presente dissertação foi construída na modalidade de artigos científicos, sendo constituída por dois artigos. O primeiro, intitulado “Avaliação epidemiológica de pacientes submetidos ao teste de galactomanana sérica com suspeita de Aspergilose Invasiva”, teve como objetivo avaliar a incidência de Aspergilose Invasiva em pacientes com doenças hematológicas acompanhadas em um hospital de referência de Goiânia, Goiás, Brasil, e determinar os principais fatores que contribuem para o desenvolvimento da doença. Para isso, foram avaliadas 1367 amostras de 264 pacientes com doenças hematológicas malignas tratadas no Setor de Hematologia do Hospital Araújo Jorge, os quais realizaram exame de detecção de galactomanana, no período de 2013 a 2015, e foram excluídos pacientes que não possuíam dados clínicos em prontuários e com perda de seguimento no hospital. Dentre os dados alcançados por meio do presente estudo observou-se que a média de idade foi de 43,7 anos, onde 55,5% eram pertencentes ao sexo masculino. Do total de pacientes avaliados, 133 realizaram TMO, sendo que 38,9% eram do tipo autólogo e 17,9% do tipo alogênico. De acordo com a classificação para Aspergilose Invasiva conforme a European Organization for Research and Treatment of Cancer, a doença foi interpretada como comprovada em 7,3%, definida por cultura positiva para o fungo, 6,4% como provável pela detecção de galactomanana no sangue e presença de infiltrados pulmonares e 5,1% como possível por alterações radiológicas sugestivas de Aspergilose Invasiva e galactomanana negativo. A taxa de mortalidade para Aspergilose Invasiva comprovada/provável/possível foi de 61,3% e mostrou que a doença estava significativamente associada com o risco de morte (p<0,0001). Ao considerarmos a alta taxa de mortalidade causada pelo desenvolvimento da Aspergilose Invasiva e que a realização de uma terapia precoce promove significativa melhora do prognóstico dos pacientes, concluímos que a detecção de galactomanana, realizada como acompanhamento dos pacientes com alto risco de desenvolver a doença, pode ser considerada um método eficaz para auxiliar na identificação de Aspergilose Invasiva. O segundo artigo, intitulado “Associação entre polimorfismos dos genes que codificam os receptores celulares Dectina-1 e Toll-like e susceptibilidade à Aspergilose Invasiva”, teve como objetivo descrever os polimorfismos nos genes que codificam os receptores Dectina-1 e Toll-like, buscando possíveis associações com a susceptibilidade individual à Aspergilose Invasiva. Este estudo utilizou como base metodológica uma revisão sistemática da literatura e como base de dados a PubMed e PMC do NCBI. As palavras-chaves utilizadas foram: Invasive aspergillosis, polymorphism, Dectin-1 e Toll-like. A partir desta busca, 415 estudos foram encontrados e de acordo com os critérios de inclusão e exclusão 8 estudos foram selecionados. Com a realização deste, constatou-se que vários são os estudos que descrevem os polimorfismos de base única com uma maior susceptibilidade à Aspergilose Invasiva. Os principais são em genes que codificam os receptores Toll-like e os que codificam citocinas e quimiocinas (Dectina-1). Assim, pode-se perceber que de acordo com estudos já realizados há uma associação significativa de polimorfismos genéticos com a Aspergilose Invasiva, porém estudos mais amplos devem ser realizados para se obter resultados mais fidedignos. De modo geral, concluímos com essa dissertação que o desenvolvimento da Aspergilose Invasiva está associado com diversos fatores, sendo um deles o genético, e que, devido aos altos índices de mortalidade causados pela Aspergilose Invasiva, a detecção de galactomanana é de fundamental importância para o tratamento dos pacientes que apresentam uma maior probabilidade de desenvolver a doença, auxiliando principalmente no prognóstico e diagnóstico precoce da mesma.

Orientador: Ronei Luciano Mamoni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T05:56:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castro_LiviaFurquimde_M.pdf: 5966667 bytes, checksum: bd25c56ae25a8825069884bedd9ca8ce (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Diversos estudos demonstram que a resposta inflamatória é de extrema importância para o controle da Paracoccidioidomicose (PCM). Essa resposta inflamatória é iniciada pelo reconhecimento das células fúngicas por receptores expressos por células do sistema imunológico inato. Dentre esses receptores, o NLRP3 foi associado com o reconhecimento de fungos patogênicos em modelos experimentais, atuando em conjunto com o TLR2 e a dectina-1. O NLRP3 atua na formação de um complexo multiproteico denominado inflamassoma, o qual ativa a caspase-1, que é responsável pela produção das formas ativas de duas importantes citocinas inflamatórias: a IL-1? e a IL-18. Esse estudo teve por objetivo investigar o envolvimento do NLRP3 na ativação da resposta inflamatória de macrófagos e células dendríticas humanas (DCs) derivadas de monócitos em resposta ao Paracoccidioides brasiliensis (Pb), além de avaliar a participação do NLRP3 na indução da resposta imunológica adaptativa. Nossos resultados demonstraram que células de lesões de pacientes com PCM (mucosa oral ou linfonodos) apresentam produção de IL-1beta, IL-18 e IL-37 e que macrófagos dessas lesões são positivos para Caspase-1 e NLRP3. Também fomos capazes de demonstrar que o reconhecimento de células leveduriformes por DCs e macrófagos humanos leva à ativação do inflamassoma NLRP3 e consequente produção de IL-1 e IL-18. Esse reconhecimento envolve a participação de receptores de superfície (TLR2 e Dectina-1), sendo que a produção dessas citocinas é dependente da sinalização via dectina-1 e fosforilação da proteína Syk. Além disso, observamos que a ativação do inflamassoma NLRP3, após o reconhecimento do fungo, envolve como principais mecanismos a produção de ROS e o efluxo de K+. Nossos dados também demonstraram que o inflamassoma NLRP3 é essencial para a diferenciação de células Th17 e Th1 e que sua inibição leva à um aumento de células Th2 e Treg. Em conjunto nossos dados indicam que a ativação do NLRP3 desempenha um papel importante, tanto na indução de uma resposta inflamatória inicial, quanto no desenvolvimento de uma resposta adquirida que pode ser associada à resistência à infecção pelo P. brasiliensis / Abstract: Several studies have shown that the inflammatory response is crucial for the control of paracoccidioidomycosis (PCM). This inflammatory response is initiated by the recognition of fungal yeast cells by receptors expressed by cells of the innate immune system. Among these receptors, NLRP3 was associated with the recognition of pathogenic fungi in experimental models, working in conjunction with TLR2 and dectin-1. The NLRP3 acts forming a multiproteic complex called inflammasome, which activates caspase-1, and the production of the active forms of two important cytokines: IL-1? and IL-18. This study aimed to investigate the involvement of NLRP3 activation in the inflammatory response of macrophages and human dendritic cells (DCs) derived from monocytes, in response to Paracoccidioides brasiliensis (Pb), and to evaluate the participation of NLRP3 in the induction of the subsequent adaptive immune response. Our results demonstrated that cells of lesions from PCM patients (oral mucosa and lymph nodes) express IL-1beta, IL-18 and IL-37, and that macrophages in these lesions are positive for caspase-1 and NLRP3. We were also able to demonstrate that the recognition of Pb yeast cells by human macrophages and DCs leads to the NLRP3 inflammasome activation and production of IL-1 and IL-18. This recognition involves the participation of surface receptors (TLR2 and Dectin-1), and the production of these cytokines was dependent on signaling via dectin-1 and phosphorylation of Syk. In addition, we observed that the activation of the NLRP3 inflammasome, after recognition of the fungus, involves as main mechanisms the ROS production and the K+ efflux. Our data also demonstrate that the NLRP3 inflammasome are essential for the differentiation of Th1 and Th17 cells and its inhibition leads to an increased frequency of Th2 and Treg cells. Taken together our data indicated that activation of NLRP3 present an important role in both the induction of an initial inflammatory response, and in the development of an acquired immune response, which can be associated with the resistance to the P. brasiliensis infection / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas