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Envolvimento de receptores da resposta imune inata e dos inflamassomos na biogênese e função dos corpúsculos lipídicos durante infecção por Mycobacterium bovis BCG

Freitas, Carla January 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2014-12-05T18:41:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) carla_freitas_ioc_dout_2014.pdf: 2452947 bytes, checksum: a652971a9d288c473c5d3b704f051ada (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Corpúsculos lipídicos (CLs) são organelas citoplasmáticas altamente associadas à resposta inflamatória. Eles estão presentes em diversos tipos celulares e podem aumentar em número e/ou tamanho frente à situações infecciosas. Também altamente envolvidos com os fenômenos inflamatórios estão os inflamassomos. Classicamente, esses complexos moleculares são formados por um tipo de receptor tipo Nod (NLR), uma proteína adaptadora (geralmente ASC) e a enzima caspase-1 ativada. A reunião destas proteínas e a ativação de caspase-1 levam à clivagem das pro-formas de IL-1\03B2 e de IL-18 em suas formas maduras prontas para liberação. Apesar do avanço no conhecimento da biologia destas duas estruturas, corpúsculos lipídicos e inflamassomos, nada foi descrito sobre uma possível interação entre elas. Utilizando um modelo de estudo em macrófagos derivados de medula óssea de camundongos C57Bl/6 e infecção com Mycobacterium bovis BCG buscamos pesquisar se existe essa interação e de que maneira isso ocorreria. Num primeiro momento, pesquisamos a influência de receptores tipo nod e proteínas relacionadas, na biogêsene de CLs, na liberação de IL-1\03B2 e de eicosanóides. Observamos que a infecção dos macrófagos com BCG é capaz de induzir liberação de IL-1\03B2 e ativação de caspase-1, caracterizando ativação de inflamassomos. Vimos que a ausência de Nod1, Nod2, Rip2, IL-1R1 e IL-18R não interfere na biogênese de CL, nem na liberação de IL-1\03B2 e de PGE2 e LTB4. A ausência de ASC, caspase-1 e o bloqueio de NLRP3 e P2X7 potencializam a formação de corpúsculos lipídicos induzida por BCG A ausência de ASC e caspase-1 não altera a liberação de eicosanóides e o bloqueio de NLRP3 reduz a liberação de IL-1\03B2 e de PGE2. Vimos que ATP é capaz de induzir a biogênese de corpúsculos lipídicos de maneira dependente de P2X7. Concluimos que a presença de proteínas envolvidas na via dos inflamassomos regula negativamente a biogênese de corpúsculo lipídicos. Corpúsculos lipídicos são conhecidos por compartimentalizar diversas proteínas envolvidas em importantes fenômenos celulares, dependendo do tipo celular e do estímulo. Sendo assim, no segundo bloco, avaliamos se os corpúsculos gerados pela infecção com BCG seriam capazes de armazenar NLRs e proteínas associadas. Também avaliamos se a inibição da formação de corpúsculos lipídicos teria impacto sobre a ativação de inflamassomos e liberação de mediadores inflamatórios. Observamos a presença de NLRP3, caspase-1, IL-1\03B2, Nod1, Nod2 e Rip2, mas não de ASC, nos corpúsculos lipídicos. Também vimos que a redução da formação de CL induzida por BCG leva à redução da liberação e da síntese de IL-1\03B2, mas não interfere na atividade de caspase-1. Diminui também a liberação de citocinas pro e anti-inflamatórias, além de PGE2. Baseado em nossos resultados, concluimos que existe sim uma relação entre CLs e inflamassomos, onde o segundo pode regular negativamente o primeiro e CLs podem servir de plataforma, pelo menos transitória, para a localização de proteínas da via dos NLRs. O avanço no entendimento das funções de inflamassomos e corpúsculos lipídicos pode colaborar para a geração de estratégias de combate às patologias associadas à estas duas estruturas / Pathogen - triggered dysregulation of host - cell lipid metabolism is emerging as a key feature in the pathogenesis of mycobacterial infection. Accumulating evidence suggests that modulation of host lipid metabolism through mycobacteria - induced lipid body (LB) formation is an important mechanism for mycobacterial survival and growth. However the mechanisms involved in lipid body biogenesis are still not completely understood. Mycobacterial - induced inflammasome activation of caspase - 1 and consequent secretion of IL - 1β and IL - 18 in macrophages has been demonstrated as a host - defense mechanism. In the present study we investigated the participation of inflammasomes in lipid body biogenesis and function during infection with Mycobacterium bovis BCG in macrophages. W e observed IL - 1 β release and caspase - 1 activation in bone marrow macrophage, featuring inflammasome activation induced by BCG. Nod1, Nod2, Rip2, IL - 1R1 and IL - 18R doesn't influence lipid bodies biogenesis, neither IL - 1 β nor PGE 2 and LTB 4 release induced by BCG . ASC and caspase - 1 absence and the block of NLRP3 and P2X 7 leads to increase lipid bodies number induced by BCG . The absence of caspase - 1 and ASC inhibited the release of IL - 1β induced by BCG , but does not alter the release of eicosanoids. Blocking NLRP3 reduces the release of both, IL - 1β and PGE 2 . Using an activator of inflam ma somes , ATP, we observed an indu ce d lipid body biogenesis in a P2X 7 - depende nt manner . Activation of inflam m asome s by L PS and ATP leads to increased release of eicosanoids, besides the formati on of LB s. W e conclude that the presence of proteins involved in the pathway of inflamassom e s negatively regulate s biogenesis of lipid bodies. Lipid bodies are known to compartmentalize many different proteins associated with cell signaling , depending on t he cell type and stimulus. Thus , in the second block , we assessed whether the LBs generated by infection with BCG would be able to contain NLR s and associated proteins. We also evaluated whether the inhibition of lipid body for mation would impact inflam m asome s activation and re lease of inflammatory mediators. We observed NLRP3, caspase - 1 , IL - 1β, Nod1, Nod2 and RIP2 , but not ASC are associated wi th lipid bodies. Also , we have that the reduction in the formation of LC induced by BCG leads to reduced synthesis and release of IL - 1β but did not interf ere in the activity of caspase - 1. It also reduces the release of cytokines , in addition to PGE 2 . Base d o n our results , we conclude that inflam m asome s activation could negatively regulate the lipid bodies biogenesis . Moreover, lipid bodies could be site of localization to NLRs and associated - protein , but they doesn't interfere in inflammasomes activation, although the IL - 1β release is reduced by lipid bobies numbers decreased. The knowledge of inflammasome and lipid bodies biology could be useful to generate new approaches to diseases associated with these structures
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Mecanismos de ativação plaquetária na denguecontribuições para a patogênese

Hottz, Eugenio Damaceno January 2014 (has links)
Made available in DSpace on 2016-03-18T12:14:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 eugenio_hottz_ioc_dout_2014.pdf: 16733087 bytes, checksum: 8997b2db1738619b3afa2e139fcbb5b8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A dengue é a arbovirose humana mais prevalente no mundo. A infecção pelo vírus da dengue (DENV) tem um vasto espectro de sintomas, causando desde febre auto-limitada até casos graves com sangramento e choque podendo evoluir para o óbito. Apesar de plaquetopenia ser frequentemente observada em pacientes com dengue, a participação das plaquetas na patogênese da dengue permanece pouco explorada. Nós inicialmente investigamos a ativação plaquetária em pacientes com dengue ou em plaquetas expostas ao DENV in vitro. Na tentativa de associar a ativação plaquetária com mecanismos imunopatogênicos da dengue, a secreção de citocinas e quimiocinas em plaquetas estimuladas com o DENV e a síntese de IL-1\03B2 em plaquetas de pacientes com dengue foram investigadas. Os mecanismos envolvidos no processamento e secreção da IL-1\03B2, bem como suas contribuições para a permeabilidade endotelial também foram objetos de estudo. A formação de agregados plaqueta-monócito e a expressão de marcadores de ativação de monócitos também foram avaliados em pacientes com dengue. Finalmente, nós investigamos o impacto da apoptose de plaquetas na dengue e sua relação com o desfecho de plaquetopenia. Nossos resultados indicam intensa ativação plaquetária em pacientes com dengue, especialmente em pacientes com dengue grave Nós observamos uma expressão elevada de IL-1\03B2 em plaquetas e micropartículas (MP) derivadas de plaquetas de pacientes com dengue, ou após a exposição de plaquetas ao DENV in vitro. Nós demonstramos que a dengue induz a montagem do inflamassoma NLRP3, ativação de caspase-1 e secreção de IL-1\03B2 de modo dependente da geração de espécies reativas de oxigênio na mitocôndria. A IL-1\03B2 sintetizada por plaquetas foi secretada principalmente em MPs. A ativação do inflamassoma e secreção de MPs contendo IL-1\03B2 correlacionaram com sinais de permeabilidade endotelial aumentada nos pacientes. Além disso, MPs recuperadas de plaquetas expostas ao DENV induziram aumento de permeabilidade endotelial in vitro de modo dependente do receptor de IL-1. Plaquetas de pacientes com dengue também apresentaram características de apoptose como despolarização da mitocôndria, ativação de caspase-3 e de caspase-9 e exposição de fosfatidilserina, que foram associadas à plaquetopenia nos pacientes com dengue. Nós também demonstramos níveis elevados de agregados plaqueta-monócito em pacientes com dengue. A exposição de monócitos isolados de voluntários saudáveis a plaquetas isoladas de pacientes com dengue induziu a secreção das citocinas IL-1\03B2, IL-8, IL-10 e MCP-1 pelos monócitos A secreção de citocinas nos agregados plaqueta-monócito foi dependente tanto da adesão mediada por Pselectina quanto do reconhecimento de plaquetas apoptóticas, que regulou a secreção de IL- 10. Nossos resultados trazem novas evidências de que as plaquetas participam ativamente como efetoras da resposta inflamatória na dengue, e contribuem para os mecanismos patogênicos envolvidos nas alterações hemodinâmicas comuns aos casos de dengue grave / Dengue is the most frequent hemorrhagic viral disease and re-emergent infection in the world. Dengue infection has a large spectrum of clinical manifestations from self-limited febrile illness to severe syndromes accompanied by bleeding and shock. Although thrombocytopenia is characteristically observed in mild and severe forms of dengue, the role of platelet activation in dengue pathogenesis has not been fully elucidated. We hypothesize that platelet activation have major roles in inflammatory amplification and increased vascular permeability during severe forms of dengue. Here we investigate platelet activation in patients with dengue or in platelets exposed to DENV in vitro. The secretion of cytokines and chemokines in DENV-stimulated platelets and the synthesis of IL-1β in platelets from patients with dengue were investigated. The mechanisms involved in processing and secretion of IL-1β, as well as potential contribution of these events to endothelial permeability during infection were also evaluated. Platelet-monocyte aggregates formation and markers of monocyte activation were evaluated in patients with dengue. Finally, we investigated the impact of platelet apoptosis in dengue-associated thrombocytopenia. Our results show increased platelet activation in patients with dengue, especially patients with severe dengue. We showed higher expression of IL-1β in platelets and platelet-derived MPs from patients with dengue or after platelet exposure to DENV in vitro. We demonstrated that DENV infection leads to assembly of NLRP3 inflammasomes, activation of caspase-1, and caspase-1-dependent IL-1β secretion. Our findings also indicate that platelet-derived IL-1β is chiefly released in MPs through mechanisms dependent on mitochondrial reactive oxygen species-triggered NLRP3 inflammasomes. Inflammasome activation and platelet shedding of IL-1β-rich microparticles correlated with signs of increased vascular permeability. Moreover, microparticles from DENV-stimulated platelets induced enhanced endothelial permeability in vitro in an IL-1R-dependent manner. Platelets from dengue-infected patients also showed characteristics of apoptosis, including mitochondrial depolarization, activation of caspase-3 and -9 and phosphatidylserine exposure, which were associated with thrombocytopenia. We also observed increased levels of platelet-monocyte aggregates in blood samples from patients with dengue. The exposure of monocytes from healthy volunteers to platelets from patients with dengue induced the secretion of the cytokines IL-1β, IL-8, IL-10 and MCP-1. In addition to the well-established modulation of monocyte cytokine responses by activated platelets through P-selectin binding, we found that interaction of monocytes with apoptotic platelets mediate IL-10 secretion through phosphatidylserine recognition in platelet-monocyte aggregates. Our findings provide new evidence that platelets actively participate as effector cells in inflammatory response of dengue infection, and contribute to the pathogenesis of dengueassociated vasculopathy.
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Papel do inflamassoma NLRP3 em modelo de infecção sistêmica por Sporothrix schenckii /

Gonçalves, Amanda Costa. January 2016 (has links)
Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Fernanda Freitas Anibal / Banca: Luciana Simon Pereira Crott / Banca: Angela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Cleni Mara Marzocchi Machado / Resumo: A esporotricose é uma infecção fúngica causada pelas espécies do complexo Sporothrix, incluindo Sporothrix schenckii sensu stricto. Os receptores de reconhecimento padrão (PRRs), pertencentes às células da resposta imune inata, reconhecem os padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs). Uma classe de PRRs que tem sido associada ao reconhecimento de fungos é a dos receptores Nod-like (NLR). Após o reconhecimento de PAMPs, os receptores NLR family pyrin domain-containing 3 (NLRP3), em conjunto com a molécula adaptadora Apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain (ASC) e com a caspase-1, formam o inflamassoma NLRP3. Quando ativado, este complexo protéico promove a maturação das citocinas pró-inflamatórias IL-1β e IL-18, que influenciam no desenvolvimento das respostas imune Th17 e Th1, respectivamente. O inflamassoma NLRP3 também é responsável pela piroptose, uma morte celular inflamatória regulada por caspase-1. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel do inflamassoma NLRP3 em modelo de infecção sistêmica por S. schenckii, utilizando um camundongo selvagem (WT) e três diferentes camundongos knockout (KO): NLRP3-/-, ASC-/- e Casp-1-/-. Todos os animais KO foram mais suscetíveis que os WT na infecção por S. schenckii. A ativação do inflamassoma NLRP3 foi essencial para a liberação ex vivo de NO, IL-1β, IL-17, IL-18, mas não para IFN-γ. Além disso, S. schenckii desencadeou maior expressão de caspase-1 ativa e maior porc... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sporotrichosis is a mycosis caused by fungi from the Sporothrix schenckii species complex, whose prototypical member is Sporothrix schenckii sensu stricto. Pattern recognition receptors (PRRs) recognize and respond to pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) and shape the following adaptive immune response. A family of PRRs most frequently associated to fungal recognition is the nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor (NLR). After recognition of a PAMP, NLR family pyrin domain-containing 3 (NLRP3) binds to apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain (ASC) and caspase-1 to form the NLRP3 inflammasome. When activated, this complex promotes maturation of the pro-inflammatory cytokines interleukin (IL)-1β and IL-18 that influence the development of the Th17 and Th1 immune responses, respectively. In addition, the NLRP3 inflammassome is responsible for pyroptosis, a highly inflammatory cell death regulated by caspase-1. In this work, we aimed to evaluate the role of the NLRP3 inflammasome to the outcome of the S. schenckii infection using a wild-type mice (WT) and three different knockout mice (KO): NLRP3-/-, ASC-/-, and Casp-1 -/- . All the KO mice were more susceptible to the infection than the WT during the S. schenckii infection. Furthermore, the NLRP3 inflammasome seems to be critical to the ex vivo release of NO, IL-1β, IL-18, and IL-17, but not IFN-γ. The S. schenckii infection led to increased activation of caspase-1 and cell death by pyroptosis in WT mice. Also, a role for the inflammasome in shaping the adaptive immune response was suggested by lower frequencies of type 17 helper T (Th17) and Th1/Th17 cells in S. schenckii-infected KO mice. On the other hand, absence of any of the inflammasome components resulted in increased frequency of cytotoxic T cells in this infection... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Expressão do inflamassoma NLRP3 e do fator de lipólise CGI-58 na obesidade

Rheinheimer, Jakeline January 2018 (has links)
A obesidade é considerada uma epidemia na atualidade, principalmente nos países em desenvolvimento. Indivíduos com obesidade possuem maior risco para desenvolvimento de doenças cardiovasculares, diabetes mellitus tipo 2 (DM2) e alguns tipos de câncer, o que diminui a qualidade e expectativa de vida destes indivíduos. O tecido adiposo (TA) é o sítio anatômico da manifestação dos principais efeitos fisiopatológicos da obesidade. Alterações neste tecido estão implicadas, não somente no desenvolvimento da obesidade, mas também destas outras doenças associadas. Uma das alterações presentes nos indivíduos com obesidade é uma inflamação crônica de baixo grau, associada à produção aumentada de citocinas proinflamatórias. Evidências sugerem que o inflamassoma NLRP3 (Nod-like receptores family pyrin domain containing 3) é um dos principais responsáveis pela produção de citocinas proinflamatórias no TA, como a interleucina- 1β (IL-1β). Embora vários estudos tenham relatado uma associação do NLRP3 com obesidade e / ou resistência à insulina (RI); resultados contraditórios também foram relatados por outros estudos. Portanto, realizamos uma revisão sistemática para resumir os resultados de estudos que avaliaram a associação do NLRP3 com obesidade e RI. Dezenove estudos foram incluídos na revisão. Os estudos foram selecionados por apresentarem análises de expressão do NLRP3 no TA de indivíduos com e sem obesidade ou avaliarem associações entre polimorfismos neste gene e obesidade. Em geral, estudos em humanos indicam que a obesidade e RI estão associadas com a expressão aumentada de NLRP3 no TA. Estudos em ratos obesos corroboraram essa associação. Além disso, dieta com alto teor de gordura (DATG) aumenta a expressão de Nlrp3 no TA de camundongos, enquanto que a dieta que restringe calorias diminui sua expressão. Da mesma 12 forma, o bloqueio do Nlrp3 em camundongos protege contra a obesidade e RI induzidas por DATG. São escassos os estudos que avaliaram polimorfismos no NLRP3 e obesidade. Visto que a obesidade é uma doença multifatorial, com componentes ambientais e genéticos envolvidos no seu desenvolvimento, fatores diversos devem ser analisados, em especial, no TA. O comparative gene identification-58 (CGI-58) foi primeiramente identificado como um co-ativador da adipose triglyceride lipase (ATGL), aumentado a lipólise. Estudos mais recentes também identificaram funções do CGI-58 independentes da ativação da ATGL. O CGI-58 parece atuar como uma lysophosphatidic acid acyltransferase (LPAAT), ou seja, possui a capacidade de catalisar a modificação do ácido lisofosfatídico em ácido fosfatídico. Isto representa um passo importante na biossíntese de lipídios neutros e glicerofosfolipídios, gerando moléculas de sinalização que regulam processos inflamatórios e a ação da insulina. Até o momento, apenas alguns poucos estudos avaliaram a associação entre CGI-58 e obesidade, com resultados inconclusivos. Assim, comparamos a expressão de CGI-58 no TA subcutâneo (TAS) de indivíduos com diferentes categorias de índice de massa corporal (IMC). Também avaliamos se o CGI-58 se correlaciona com parâmetros de composição corporal, taxa metabólica de repouso (TMR), RI e perfis lipídicos e glicêmicos. Para tal, utilizamos biópsias de TAS de 67 indivíduos submetidos à cirurgia bariátrica ou cirurgia abdominal eletiva. Os pacientes foram divididos em: Grupo 1 (n = 14; IMC ˂ 27,0 kg/m2), Grupo 2 (n = 24; IMC 30,0 - 39,9 kg/m2) e Grupo 3 (n = 29; IMC ≥ 40,0 kg/m2). A expressão gênica do CGI-58 foi quantificada usando RT-qPCR. A expressão de CGI-58 foi diminuída em pacientes do Grupo 3 [mediana de 0,60 (0,45 - 0,85, percentil 25º - 75º)] e Grupo 2 [0,85 (0,50 - 1,23)] em comparação com pacientes do Grupo 1 [1,70 (0,99 - 2,70)] (p ˂ 0,001). Valores de CGI-58 acima da mediana foram associados com menor risco de obesidade, ajustando-se para as covariáveis (RC = 0,036, IC 95% 0,003 - 0,410). Além disso, a expressão de CGI-58 foi negativamente correlacionada com parâmetros de composição corporal (IMC, circunferência da cintura, porcentagens de massa gorda e massa magra), TMR, perfil lipídico (colesterol total e triglicerídeos), RI e hemoglobina glicada, enquanto correlacionou-se positivamente com o colesterol HDL. Sendo assim, a expressão de CGI-58 está diminuída em indivíduos com obesidade, estando associada com um pior perfil metabólico. De acordo com exposto é possível que NLRP3 e CGI-58 tenham um papel importante no desenvolvimento da obesidade. Parece que estes dois genes atuam de forma inversa, pois o NLRP3 está aumentado em indivíduos com obesidade enquanto o CGI-58 está diminuído. De forma interessante, um estudo anterior demonstrou que ratos com bloqueio de CGI-58 especificamente nos macrófagos e tratados com DATG tiveram inflamação exacerbada e RI devido à ativação do inflamassoma NLRP3 e consequente secreção de IL-1β. No entanto, mais estudo são necessários para esclarecer o papel do CGI-58 na patogênese da obesidade. / Nowadays, obesity is considered epidemic, especially in developing countries. Individuals with obesity are at greater risk for developing cardiovascular diseases, type 2 diabetes mellitus (T2DM) and some types of cancer, which reduces the quality and life expectancy of these individuals. Adipose tissue (AT) is the anatomical site of the manifestation of the main pathophysiological effects of obesity. Alterations in this tissue are implicated, not only in the development of obesity, but also of these other associated diseases. One of the alterations present in individuals with obesity is a chronic low-grade inflammation, associated with increased production of pro-inflammatory cytokines. Evidence has suggested that the NLRP3 inflammasome (Nod-like receptors family pyrin domain containing 3) is one of the main factors involved in the production of pro-inflammatory cytokines in AT, such as interleukin-1β (IL-1β). Although several studies have reported an association of the NLRP3 inflammasome with obesity and / or insulin resistance (IR); contradictory results have also been reported by other studies. Therefore, we conducted a systematic review to summarize the results of the studies that evaluated the association of NLRP3 with obesity and IR. Nineteen studies were included in the review. Selected studies focused on NLRP3 expression in the TA of individuals with and without obesity or evaluated associations between polymorphisms in this gene and obesity. Overall, human studies indicate that obesity and IR are associated with increased NLRP3 expression in AT. Studies in obese mice corroborate this association. Moreover, high fat diet (HFD) increases Nlrp3 expression in murine AT while calorie-restricted diet decreases its expression. Hence, Nlrp3 blockade in mice protects against HFD-induced obesity and IR. Few studies analyzed the association of NLRP3 polymorphisms with obesity. Considering that obesity is a multifactorial 15 disease, with environmental and genetic components involved in its development, several factors must be analyzed, especially in AT. Initially, comparative gene identification-58 (CGI-58) was identified as a co-activator of adipose triglyceride lipase (ATGL), increasing lipolysis. Recent studies have also identified CGI-58 functions independent of ATGL activation. CGI-58 seems to act as a lysophosphatidic acid acyltransferase (LPAAT), that is, it has the ability to catalyze the modification of lysophosphatidic acid in phosphatidic acid. This represents an important step in the biosynthesis of neutral lipids and glycerol-phospholipids, generating signaling molecules that regulate inflammatory processes and insulin action. To date, only few studies have evaluated the association between CGI-58 and obesity, with inconclusive results. Thus, we compared CGI-58 expression among subcutaneous adipose tissue (SAT) of subjects with different body mass index (BMI) categories. We also evaluated if CGI-58 correlates with body composition parameters, resting energy expenditure (REE), insulin resistance (IR), and lipid and glycemic profiles. To this, SAT biopsies were obtained from 67 individuals who underwent bariatric surgery or elective abdominal surgery. Patients were divided in: Group 1 (n = 14; BMI ˂ 27.0 kg/m2), Group 2 (n = 24; BMI 30.0 - 39.9 kg/m2) and Group 3 (n = 29; BMI ≥40.0 kg/m2). CGI-58 expression was quantified using RT-qPCR. CGI-58 expression was decreased in patients from Group 3 [median 0.60 (0.45 – 0.85, 25th – 75th percentiles)] and Group 2 [0.85 (0.50 – 1.23)] compared to Group 1 patients [1.70 (0.99 – 2.70)] (P ˂ 0.001). CGI-58 values above median were associated with protection for obesity, adjusting for covariables (OR = 0.036, 95% CI 0.003 – 0.410). Moreover, CGI-58 expression was negatively correlated with body composition parameters (BMI, waist circumference, fat mass, and fat-free mass), REE, lipid profile (total cholesterol and triglycerides), IR, and glycated hemoglobin, while it was positively 16 correlated with HDL cholesterol. Therefore, CGI-58 expression is decreased in patients with obesity, and it was associated with worse metabolic profile. According to the aforementioned data, it is possible that NLRP3 and CGI-58 might play an important role in the development of obesity. It seems that these two genes act in opposite ways, since NLRP3 is increased in individuals with obesity while CGI-58 is decreased. Interestingly, a previous study demonstrated that macrophage-specific Cgi-58 blockade in AT from mice increased inflammation and IR after HFD, due to the activation of the NLRP3 inflammasome and, consequent secretion of IL-1β. However, additional studies are needed to clarify the role of CGI- 58 in the pathogenesis in the obesity.
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Expressão do inflamassoma NLRP3 e do fator de lipólise CGI-58 na obesidade

Rheinheimer, Jakeline January 2018 (has links)
A obesidade é considerada uma epidemia na atualidade, principalmente nos países em desenvolvimento. Indivíduos com obesidade possuem maior risco para desenvolvimento de doenças cardiovasculares, diabetes mellitus tipo 2 (DM2) e alguns tipos de câncer, o que diminui a qualidade e expectativa de vida destes indivíduos. O tecido adiposo (TA) é o sítio anatômico da manifestação dos principais efeitos fisiopatológicos da obesidade. Alterações neste tecido estão implicadas, não somente no desenvolvimento da obesidade, mas também destas outras doenças associadas. Uma das alterações presentes nos indivíduos com obesidade é uma inflamação crônica de baixo grau, associada à produção aumentada de citocinas proinflamatórias. Evidências sugerem que o inflamassoma NLRP3 (Nod-like receptores family pyrin domain containing 3) é um dos principais responsáveis pela produção de citocinas proinflamatórias no TA, como a interleucina- 1β (IL-1β). Embora vários estudos tenham relatado uma associação do NLRP3 com obesidade e / ou resistência à insulina (RI); resultados contraditórios também foram relatados por outros estudos. Portanto, realizamos uma revisão sistemática para resumir os resultados de estudos que avaliaram a associação do NLRP3 com obesidade e RI. Dezenove estudos foram incluídos na revisão. Os estudos foram selecionados por apresentarem análises de expressão do NLRP3 no TA de indivíduos com e sem obesidade ou avaliarem associações entre polimorfismos neste gene e obesidade. Em geral, estudos em humanos indicam que a obesidade e RI estão associadas com a expressão aumentada de NLRP3 no TA. Estudos em ratos obesos corroboraram essa associação. Além disso, dieta com alto teor de gordura (DATG) aumenta a expressão de Nlrp3 no TA de camundongos, enquanto que a dieta que restringe calorias diminui sua expressão. Da mesma 12 forma, o bloqueio do Nlrp3 em camundongos protege contra a obesidade e RI induzidas por DATG. São escassos os estudos que avaliaram polimorfismos no NLRP3 e obesidade. Visto que a obesidade é uma doença multifatorial, com componentes ambientais e genéticos envolvidos no seu desenvolvimento, fatores diversos devem ser analisados, em especial, no TA. O comparative gene identification-58 (CGI-58) foi primeiramente identificado como um co-ativador da adipose triglyceride lipase (ATGL), aumentado a lipólise. Estudos mais recentes também identificaram funções do CGI-58 independentes da ativação da ATGL. O CGI-58 parece atuar como uma lysophosphatidic acid acyltransferase (LPAAT), ou seja, possui a capacidade de catalisar a modificação do ácido lisofosfatídico em ácido fosfatídico. Isto representa um passo importante na biossíntese de lipídios neutros e glicerofosfolipídios, gerando moléculas de sinalização que regulam processos inflamatórios e a ação da insulina. Até o momento, apenas alguns poucos estudos avaliaram a associação entre CGI-58 e obesidade, com resultados inconclusivos. Assim, comparamos a expressão de CGI-58 no TA subcutâneo (TAS) de indivíduos com diferentes categorias de índice de massa corporal (IMC). Também avaliamos se o CGI-58 se correlaciona com parâmetros de composição corporal, taxa metabólica de repouso (TMR), RI e perfis lipídicos e glicêmicos. Para tal, utilizamos biópsias de TAS de 67 indivíduos submetidos à cirurgia bariátrica ou cirurgia abdominal eletiva. Os pacientes foram divididos em: Grupo 1 (n = 14; IMC ˂ 27,0 kg/m2), Grupo 2 (n = 24; IMC 30,0 - 39,9 kg/m2) e Grupo 3 (n = 29; IMC ≥ 40,0 kg/m2). A expressão gênica do CGI-58 foi quantificada usando RT-qPCR. A expressão de CGI-58 foi diminuída em pacientes do Grupo 3 [mediana de 0,60 (0,45 - 0,85, percentil 25º - 75º)] e Grupo 2 [0,85 (0,50 - 1,23)] em comparação com pacientes do Grupo 1 [1,70 (0,99 - 2,70)] (p ˂ 0,001). Valores de CGI-58 acima da mediana foram associados com menor risco de obesidade, ajustando-se para as covariáveis (RC = 0,036, IC 95% 0,003 - 0,410). Além disso, a expressão de CGI-58 foi negativamente correlacionada com parâmetros de composição corporal (IMC, circunferência da cintura, porcentagens de massa gorda e massa magra), TMR, perfil lipídico (colesterol total e triglicerídeos), RI e hemoglobina glicada, enquanto correlacionou-se positivamente com o colesterol HDL. Sendo assim, a expressão de CGI-58 está diminuída em indivíduos com obesidade, estando associada com um pior perfil metabólico. De acordo com exposto é possível que NLRP3 e CGI-58 tenham um papel importante no desenvolvimento da obesidade. Parece que estes dois genes atuam de forma inversa, pois o NLRP3 está aumentado em indivíduos com obesidade enquanto o CGI-58 está diminuído. De forma interessante, um estudo anterior demonstrou que ratos com bloqueio de CGI-58 especificamente nos macrófagos e tratados com DATG tiveram inflamação exacerbada e RI devido à ativação do inflamassoma NLRP3 e consequente secreção de IL-1β. No entanto, mais estudo são necessários para esclarecer o papel do CGI-58 na patogênese da obesidade. / Nowadays, obesity is considered epidemic, especially in developing countries. Individuals with obesity are at greater risk for developing cardiovascular diseases, type 2 diabetes mellitus (T2DM) and some types of cancer, which reduces the quality and life expectancy of these individuals. Adipose tissue (AT) is the anatomical site of the manifestation of the main pathophysiological effects of obesity. Alterations in this tissue are implicated, not only in the development of obesity, but also of these other associated diseases. One of the alterations present in individuals with obesity is a chronic low-grade inflammation, associated with increased production of pro-inflammatory cytokines. Evidence has suggested that the NLRP3 inflammasome (Nod-like receptors family pyrin domain containing 3) is one of the main factors involved in the production of pro-inflammatory cytokines in AT, such as interleukin-1β (IL-1β). Although several studies have reported an association of the NLRP3 inflammasome with obesity and / or insulin resistance (IR); contradictory results have also been reported by other studies. Therefore, we conducted a systematic review to summarize the results of the studies that evaluated the association of NLRP3 with obesity and IR. Nineteen studies were included in the review. Selected studies focused on NLRP3 expression in the TA of individuals with and without obesity or evaluated associations between polymorphisms in this gene and obesity. Overall, human studies indicate that obesity and IR are associated with increased NLRP3 expression in AT. Studies in obese mice corroborate this association. Moreover, high fat diet (HFD) increases Nlrp3 expression in murine AT while calorie-restricted diet decreases its expression. Hence, Nlrp3 blockade in mice protects against HFD-induced obesity and IR. Few studies analyzed the association of NLRP3 polymorphisms with obesity. Considering that obesity is a multifactorial 15 disease, with environmental and genetic components involved in its development, several factors must be analyzed, especially in AT. Initially, comparative gene identification-58 (CGI-58) was identified as a co-activator of adipose triglyceride lipase (ATGL), increasing lipolysis. Recent studies have also identified CGI-58 functions independent of ATGL activation. CGI-58 seems to act as a lysophosphatidic acid acyltransferase (LPAAT), that is, it has the ability to catalyze the modification of lysophosphatidic acid in phosphatidic acid. This represents an important step in the biosynthesis of neutral lipids and glycerol-phospholipids, generating signaling molecules that regulate inflammatory processes and insulin action. To date, only few studies have evaluated the association between CGI-58 and obesity, with inconclusive results. Thus, we compared CGI-58 expression among subcutaneous adipose tissue (SAT) of subjects with different body mass index (BMI) categories. We also evaluated if CGI-58 correlates with body composition parameters, resting energy expenditure (REE), insulin resistance (IR), and lipid and glycemic profiles. To this, SAT biopsies were obtained from 67 individuals who underwent bariatric surgery or elective abdominal surgery. Patients were divided in: Group 1 (n = 14; BMI ˂ 27.0 kg/m2), Group 2 (n = 24; BMI 30.0 - 39.9 kg/m2) and Group 3 (n = 29; BMI ≥40.0 kg/m2). CGI-58 expression was quantified using RT-qPCR. CGI-58 expression was decreased in patients from Group 3 [median 0.60 (0.45 – 0.85, 25th – 75th percentiles)] and Group 2 [0.85 (0.50 – 1.23)] compared to Group 1 patients [1.70 (0.99 – 2.70)] (P ˂ 0.001). CGI-58 values above median were associated with protection for obesity, adjusting for covariables (OR = 0.036, 95% CI 0.003 – 0.410). Moreover, CGI-58 expression was negatively correlated with body composition parameters (BMI, waist circumference, fat mass, and fat-free mass), REE, lipid profile (total cholesterol and triglycerides), IR, and glycated hemoglobin, while it was positively 16 correlated with HDL cholesterol. Therefore, CGI-58 expression is decreased in patients with obesity, and it was associated with worse metabolic profile. According to the aforementioned data, it is possible that NLRP3 and CGI-58 might play an important role in the development of obesity. It seems that these two genes act in opposite ways, since NLRP3 is increased in individuals with obesity while CGI-58 is decreased. Interestingly, a previous study demonstrated that macrophage-specific Cgi-58 blockade in AT from mice increased inflammation and IR after HFD, due to the activation of the NLRP3 inflammasome and, consequent secretion of IL-1β. However, additional studies are needed to clarify the role of CGI- 58 in the pathogenesis in the obesity.
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Expressão do inflamassoma NLRP3 e do fator de lipólise CGI-58 na obesidade

Rheinheimer, Jakeline January 2018 (has links)
A obesidade é considerada uma epidemia na atualidade, principalmente nos países em desenvolvimento. Indivíduos com obesidade possuem maior risco para desenvolvimento de doenças cardiovasculares, diabetes mellitus tipo 2 (DM2) e alguns tipos de câncer, o que diminui a qualidade e expectativa de vida destes indivíduos. O tecido adiposo (TA) é o sítio anatômico da manifestação dos principais efeitos fisiopatológicos da obesidade. Alterações neste tecido estão implicadas, não somente no desenvolvimento da obesidade, mas também destas outras doenças associadas. Uma das alterações presentes nos indivíduos com obesidade é uma inflamação crônica de baixo grau, associada à produção aumentada de citocinas proinflamatórias. Evidências sugerem que o inflamassoma NLRP3 (Nod-like receptores family pyrin domain containing 3) é um dos principais responsáveis pela produção de citocinas proinflamatórias no TA, como a interleucina- 1β (IL-1β). Embora vários estudos tenham relatado uma associação do NLRP3 com obesidade e / ou resistência à insulina (RI); resultados contraditórios também foram relatados por outros estudos. Portanto, realizamos uma revisão sistemática para resumir os resultados de estudos que avaliaram a associação do NLRP3 com obesidade e RI. Dezenove estudos foram incluídos na revisão. Os estudos foram selecionados por apresentarem análises de expressão do NLRP3 no TA de indivíduos com e sem obesidade ou avaliarem associações entre polimorfismos neste gene e obesidade. Em geral, estudos em humanos indicam que a obesidade e RI estão associadas com a expressão aumentada de NLRP3 no TA. Estudos em ratos obesos corroboraram essa associação. Além disso, dieta com alto teor de gordura (DATG) aumenta a expressão de Nlrp3 no TA de camundongos, enquanto que a dieta que restringe calorias diminui sua expressão. Da mesma 12 forma, o bloqueio do Nlrp3 em camundongos protege contra a obesidade e RI induzidas por DATG. São escassos os estudos que avaliaram polimorfismos no NLRP3 e obesidade. Visto que a obesidade é uma doença multifatorial, com componentes ambientais e genéticos envolvidos no seu desenvolvimento, fatores diversos devem ser analisados, em especial, no TA. O comparative gene identification-58 (CGI-58) foi primeiramente identificado como um co-ativador da adipose triglyceride lipase (ATGL), aumentado a lipólise. Estudos mais recentes também identificaram funções do CGI-58 independentes da ativação da ATGL. O CGI-58 parece atuar como uma lysophosphatidic acid acyltransferase (LPAAT), ou seja, possui a capacidade de catalisar a modificação do ácido lisofosfatídico em ácido fosfatídico. Isto representa um passo importante na biossíntese de lipídios neutros e glicerofosfolipídios, gerando moléculas de sinalização que regulam processos inflamatórios e a ação da insulina. Até o momento, apenas alguns poucos estudos avaliaram a associação entre CGI-58 e obesidade, com resultados inconclusivos. Assim, comparamos a expressão de CGI-58 no TA subcutâneo (TAS) de indivíduos com diferentes categorias de índice de massa corporal (IMC). Também avaliamos se o CGI-58 se correlaciona com parâmetros de composição corporal, taxa metabólica de repouso (TMR), RI e perfis lipídicos e glicêmicos. Para tal, utilizamos biópsias de TAS de 67 indivíduos submetidos à cirurgia bariátrica ou cirurgia abdominal eletiva. Os pacientes foram divididos em: Grupo 1 (n = 14; IMC ˂ 27,0 kg/m2), Grupo 2 (n = 24; IMC 30,0 - 39,9 kg/m2) e Grupo 3 (n = 29; IMC ≥ 40,0 kg/m2). A expressão gênica do CGI-58 foi quantificada usando RT-qPCR. A expressão de CGI-58 foi diminuída em pacientes do Grupo 3 [mediana de 0,60 (0,45 - 0,85, percentil 25º - 75º)] e Grupo 2 [0,85 (0,50 - 1,23)] em comparação com pacientes do Grupo 1 [1,70 (0,99 - 2,70)] (p ˂ 0,001). Valores de CGI-58 acima da mediana foram associados com menor risco de obesidade, ajustando-se para as covariáveis (RC = 0,036, IC 95% 0,003 - 0,410). Além disso, a expressão de CGI-58 foi negativamente correlacionada com parâmetros de composição corporal (IMC, circunferência da cintura, porcentagens de massa gorda e massa magra), TMR, perfil lipídico (colesterol total e triglicerídeos), RI e hemoglobina glicada, enquanto correlacionou-se positivamente com o colesterol HDL. Sendo assim, a expressão de CGI-58 está diminuída em indivíduos com obesidade, estando associada com um pior perfil metabólico. De acordo com exposto é possível que NLRP3 e CGI-58 tenham um papel importante no desenvolvimento da obesidade. Parece que estes dois genes atuam de forma inversa, pois o NLRP3 está aumentado em indivíduos com obesidade enquanto o CGI-58 está diminuído. De forma interessante, um estudo anterior demonstrou que ratos com bloqueio de CGI-58 especificamente nos macrófagos e tratados com DATG tiveram inflamação exacerbada e RI devido à ativação do inflamassoma NLRP3 e consequente secreção de IL-1β. No entanto, mais estudo são necessários para esclarecer o papel do CGI-58 na patogênese da obesidade. / Nowadays, obesity is considered epidemic, especially in developing countries. Individuals with obesity are at greater risk for developing cardiovascular diseases, type 2 diabetes mellitus (T2DM) and some types of cancer, which reduces the quality and life expectancy of these individuals. Adipose tissue (AT) is the anatomical site of the manifestation of the main pathophysiological effects of obesity. Alterations in this tissue are implicated, not only in the development of obesity, but also of these other associated diseases. One of the alterations present in individuals with obesity is a chronic low-grade inflammation, associated with increased production of pro-inflammatory cytokines. Evidence has suggested that the NLRP3 inflammasome (Nod-like receptors family pyrin domain containing 3) is one of the main factors involved in the production of pro-inflammatory cytokines in AT, such as interleukin-1β (IL-1β). Although several studies have reported an association of the NLRP3 inflammasome with obesity and / or insulin resistance (IR); contradictory results have also been reported by other studies. Therefore, we conducted a systematic review to summarize the results of the studies that evaluated the association of NLRP3 with obesity and IR. Nineteen studies were included in the review. Selected studies focused on NLRP3 expression in the TA of individuals with and without obesity or evaluated associations between polymorphisms in this gene and obesity. Overall, human studies indicate that obesity and IR are associated with increased NLRP3 expression in AT. Studies in obese mice corroborate this association. Moreover, high fat diet (HFD) increases Nlrp3 expression in murine AT while calorie-restricted diet decreases its expression. Hence, Nlrp3 blockade in mice protects against HFD-induced obesity and IR. Few studies analyzed the association of NLRP3 polymorphisms with obesity. Considering that obesity is a multifactorial 15 disease, with environmental and genetic components involved in its development, several factors must be analyzed, especially in AT. Initially, comparative gene identification-58 (CGI-58) was identified as a co-activator of adipose triglyceride lipase (ATGL), increasing lipolysis. Recent studies have also identified CGI-58 functions independent of ATGL activation. CGI-58 seems to act as a lysophosphatidic acid acyltransferase (LPAAT), that is, it has the ability to catalyze the modification of lysophosphatidic acid in phosphatidic acid. This represents an important step in the biosynthesis of neutral lipids and glycerol-phospholipids, generating signaling molecules that regulate inflammatory processes and insulin action. To date, only few studies have evaluated the association between CGI-58 and obesity, with inconclusive results. Thus, we compared CGI-58 expression among subcutaneous adipose tissue (SAT) of subjects with different body mass index (BMI) categories. We also evaluated if CGI-58 correlates with body composition parameters, resting energy expenditure (REE), insulin resistance (IR), and lipid and glycemic profiles. To this, SAT biopsies were obtained from 67 individuals who underwent bariatric surgery or elective abdominal surgery. Patients were divided in: Group 1 (n = 14; BMI ˂ 27.0 kg/m2), Group 2 (n = 24; BMI 30.0 - 39.9 kg/m2) and Group 3 (n = 29; BMI ≥40.0 kg/m2). CGI-58 expression was quantified using RT-qPCR. CGI-58 expression was decreased in patients from Group 3 [median 0.60 (0.45 – 0.85, 25th – 75th percentiles)] and Group 2 [0.85 (0.50 – 1.23)] compared to Group 1 patients [1.70 (0.99 – 2.70)] (P ˂ 0.001). CGI-58 values above median were associated with protection for obesity, adjusting for covariables (OR = 0.036, 95% CI 0.003 – 0.410). Moreover, CGI-58 expression was negatively correlated with body composition parameters (BMI, waist circumference, fat mass, and fat-free mass), REE, lipid profile (total cholesterol and triglycerides), IR, and glycated hemoglobin, while it was positively 16 correlated with HDL cholesterol. Therefore, CGI-58 expression is decreased in patients with obesity, and it was associated with worse metabolic profile. According to the aforementioned data, it is possible that NLRP3 and CGI-58 might play an important role in the development of obesity. It seems that these two genes act in opposite ways, since NLRP3 is increased in individuals with obesity while CGI-58 is decreased. Interestingly, a previous study demonstrated that macrophage-specific Cgi-58 blockade in AT from mice increased inflammation and IR after HFD, due to the activation of the NLRP3 inflammasome and, consequent secretion of IL-1β. However, additional studies are needed to clarify the role of CGI- 58 in the pathogenesis in the obesity.
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Avaliação da função macrofágica na hanseníase virchowiana : marcadores de superfície, receptores TLR e NLR e mediadores inflamatórios /

Gigliotti, Patrícia. January 2014 (has links)
Orientador: Vânia Nieto Brito de Souza / Coorientador: Alessandra Pontillo / Banca: Alexandrina Sartori / Banca: Fátima Regina Vilani Moreno / Resumo: Os macrófagos desempenham um papel importante na eliminação do M. Leprae (ML). Estas células participam do reconhecimento de patógenos e ativação do sistema imune, no entanto na hanseníase virchowiana elas se tornam alvos, servindo de habitat para o bacilo, que ali se protege da ação do sistema imune. Assim, este estudo teve por objetivo avaliar a função macrofágica de pacientes com hanseníase virchowiana (LLP) em termos de expressão de marcadores de superfície e produção de mediadores inflamatórios. Além disso, considerando o possível envolvimento dos inflamassomas na resposta dos macrófagos ao ML, foi avaliada a expressão de genes do complexo do inflamassoma. Para tanto, macrófagos diferenciados a partir de monócitos sanguíneos de LLP e indivíduos saudáveis (HC) foram cultivados com ML. A expressão dos marcadores de ativação CD40 e ICAM, e dos receptores do tipo Toll envolvidos no reconhecimento do ML, TLR1 e TLR2, foi avaliada por citometria de fluxo. A produção de citocinas pró (TNF e IL-1β) e anti-inflamatórias (IL-10 e IL-1RA) foi determinada por ELISA e a produção de H2O2 foi avaliada por ensaio colorimétrico. A expressão relativa dos genes NLRP1, NLRP3, NLRC4, CASP1, IL1B e IL18 foi avaliada por PCR em tempo real. ML induziu expressão semelhante de CD40 e ICAM em HC e LLP, assim como dos TLR1 e TLR2. TNF e IL-1β mostraram comportamento diferente, sendo que o ML estimulou uma produção significativa de TNF em HC e LLP, mas não induziu a secreção de IL-1β. H2O2 não foi significativamente induzida pelo ML em LLP. Nenhuma diferença foi encontrada para as citocinas anti-inflamatórias entre HC e LLP. A análise da expressão de genes relacionados aos inflamassomas mostrou que ML é capaz de induzir o gene da IL-1β, mas não dos receptores analisados. Os dados aqui reportados mostrando deficiência na secreção de IL-1β em macrófagos estimulados com ML e a baixa quantidade de H2O2 produzida ... / Abstract: Macrophages play a major role in the elimination of M. leprae (ML). These cells participate in pathogen recognition and activation of the immune system. However in the lepromatous leprosy macrophages become targets, serving as habitat for the bacillus that protects itself from the action of the immune system. This study aimed to evaluate the macrophage function in lepromatous leprosy patients (LLP) in term of surface molecules expression and cytokine and H2O2 production. Moreover, considering the possible involvement of inflammasome complex in macrophage response against ML, inflammasome genes expression was evaluated. ML induced surface expression of activation markers CD40 and ICAM in healthy controls (HC) and LLP macrophages in a similar way, as well as TLRs involved in ML recognition (TLR1 and TLR2). Pro-inflammatory cytokines TNF and IL-1β showed a different behavior. ML was able to induce TNF in HC and LLP, but not IL-1β. Similarly, ML induced significant production of H2O2 in HC but not in LLP macrophages. No difference was found in the production of anti-inflammatory molecules IL-10 and IL1RA in HC and LLP macrophages stimulated with ML. When inflammasome genes expression was analyzed an up-regulation of IL1B gene was observed in both HC and LLP macrophages stimulated with ML. Together, our data indicate that the deficiency in the production of IL-1β and H2O2 in lepromatous leprosy patients combined with IL1B gene expression induction by M. leprae suggested that even if surface recognition of ML and general activation of macrophages are apparently normal, the bacteria is able to inhibits the pathways leading to I IL-1β and H2O2 production, possibly affecting inflammasome activation / Mestre
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Avaliação da função macrofágica na hanseníase virchowiana: marcadores de superfície, receptores TLR e NLR e mediadores inflamatórios

Gigliotti, Patrícia [UNESP] 31 July 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-31Bitstream added on 2015-01-26T13:30:39Z : No. of bitstreams: 1 000797469_20150731.pdf: 232290 bytes, checksum: 8b79e45ee61c9f4bcba697b70de0dd8d (MD5) Bitstreams deleted on 2015-08-03T12:21:06Z: 000797469_20150731.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-03T12:22:20Z : No. of bitstreams: 1 000797469.pdf: 489622 bytes, checksum: 0ef36ba06e14e49b785561d2153aacbb (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os macrófagos desempenham um papel importante na eliminação do M. Leprae (ML). Estas células participam do reconhecimento de patógenos e ativação do sistema imune, no entanto na hanseníase virchowiana elas se tornam alvos, servindo de habitat para o bacilo, que ali se protege da ação do sistema imune. Assim, este estudo teve por objetivo avaliar a função macrofágica de pacientes com hanseníase virchowiana (LLP) em termos de expressão de marcadores de superfície e produção de mediadores inflamatórios. Além disso, considerando o possível envolvimento dos inflamassomas na resposta dos macrófagos ao ML, foi avaliada a expressão de genes do complexo do inflamassoma. Para tanto, macrófagos diferenciados a partir de monócitos sanguíneos de LLP e indivíduos saudáveis (HC) foram cultivados com ML. A expressão dos marcadores de ativação CD40 e ICAM, e dos receptores do tipo Toll envolvidos no reconhecimento do ML, TLR1 e TLR2, foi avaliada por citometria de fluxo. A produção de citocinas pró (TNF e IL-1β) e anti-inflamatórias (IL-10 e IL-1RA) foi determinada por ELISA e a produção de H2O2 foi avaliada por ensaio colorimétrico. A expressão relativa dos genes NLRP1, NLRP3, NLRC4, CASP1, IL1B e IL18 foi avaliada por PCR em tempo real. ML induziu expressão semelhante de CD40 e ICAM em HC e LLP, assim como dos TLR1 e TLR2. TNF e IL-1β mostraram comportamento diferente, sendo que o ML estimulou uma produção significativa de TNF em HC e LLP, mas não induziu a secreção de IL-1β. H2O2 não foi significativamente induzida pelo ML em LLP. Nenhuma diferença foi encontrada para as citocinas anti-inflamatórias entre HC e LLP. A análise da expressão de genes relacionados aos inflamassomas mostrou que ML é capaz de induzir o gene da IL-1β, mas não dos receptores analisados. Os dados aqui reportados mostrando deficiência na secreção de IL-1β em macrófagos estimulados com ML e a baixa quantidade de H2O2 produzida ... / Macrophages play a major role in the elimination of M. leprae (ML). These cells participate in pathogen recognition and activation of the immune system. However in the lepromatous leprosy macrophages become targets, serving as habitat for the bacillus that protects itself from the action of the immune system. This study aimed to evaluate the macrophage function in lepromatous leprosy patients (LLP) in term of surface molecules expression and cytokine and H2O2 production. Moreover, considering the possible involvement of inflammasome complex in macrophage response against ML, inflammasome genes expression was evaluated. ML induced surface expression of activation markers CD40 and ICAM in healthy controls (HC) and LLP macrophages in a similar way, as well as TLRs involved in ML recognition (TLR1 and TLR2). Pro-inflammatory cytokines TNF and IL-1β showed a different behavior. ML was able to induce TNF in HC and LLP, but not IL-1β. Similarly, ML induced significant production of H2O2 in HC but not in LLP macrophages. No difference was found in the production of anti-inflammatory molecules IL-10 and IL1RA in HC and LLP macrophages stimulated with ML. When inflammasome genes expression was analyzed an up-regulation of IL1B gene was observed in both HC and LLP macrophages stimulated with ML. Together, our data indicate that the deficiency in the production of IL-1β and H2O2 in lepromatous leprosy patients combined with IL1B gene expression induction by M. leprae suggested that even if surface recognition of ML and general activation of macrophages are apparently normal, the bacteria is able to inhibits the pathways leading to I IL-1β and H2O2 production, possibly affecting inflammasome activation
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Inflamassomos NLRC4 E NLRP3 na Doença Periodontal Experimental Induzida por Aggregatibacter Actinomycetemcomitans /

Rocha, Fernanda Regina Godoy. January 2016 (has links)
Orientador: Carlos Rossa Junior / Banca: Shannon Margaret Wallet / Banca: Karina Gonzales Silvério Ruiz / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Paulo Sérgio Cerri / Resumo: Inflammasomes are multi-protein complexes that can amplify the inflammatory signal in situations involving host-microbial interactions and host tissue destruction, such as chronic periodontal disease. There is a relative scarcity of information on the role of NLRC4 and NLRP3 inflammasomes in periodontal disease. In this study, we used a model of bacteria-initiated periodontal disease in WT, Ipaf-knockout (Ipaf-KO), Caspase 1-knockout (Casp1-KO) and NLRP3-knockout (NLRP3-KO) mice to describe the effect of those inflammasomes on inflammation and alveolar bone resorption. Heat-killed Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) were injected in the gingival tissues on the palatal aspect adjacent to first molars of wild-type (WT), Ipaf-KO, Casp1-KO and NLRP3-KO mice, and control animals received the suspension vehicle (PBS). Severity of bone resorption was quantitated by μCT analysis. Inflammation was assessed by immunofluorescence, verifying the presence and intensity of a pan-leukocyte (CD45) and a neutrophil (Ly6G) markers. Osteoclast number was determined by TRAP and gene expression of RANKL, MMP-13, TNF-a, IL-6 and IL-10 in the gingival tissues was evaluated by RT-qPCR. In the first publication, μCT analysis showed a significantly greater inflammatory bone resorption in Ipaf-KO mice; however there was no difference between WT and Ipaf-KO on osteoclast numbers of inflammatory infiltrate. Expression of candidate genes was also similarly increased by the induction of experimental... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Inflamassomos são complexos multi protéicos capazes de amplificar o sinal inflamatório em condições de interações microbiota-hospedeiro e destruição tecidual, como a doença periodontal crônica. Devido à escassez de informações sobre o papel dos inflamassomos NLRC4 e NLRP3 na doença periodontal, utilizamos neste estudo um modelo de doença periodontal induzida por bactérias em camundongos WT, Ipafknockout (Ipaf-KO), Caspase 1-knockout (Casp1-KO) e NLRP3-knockout (NLRP3-KO) para descrever o efeito destes na inflamação e reabsorção óssea alveolar. Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) inativadas pelo calor foram injetadas nos tecidos gengivais palatais adjacentes aos primeiros molares dos camundongos normais e knockout, e os grupos controle receberam o mesmo volume do veículo de suspensão (PBS). A severidade da reabsorção óssea foi quantificada por análise de μCT. A inflamação foi avaliada por imunofluorescência, verificando-se presença e intensidade da coloração por marcadores de leucócitos (CD45) e neutrófilos (Ly6G). O número de osteoclastos foi determinado por TRAP e a expressão gênica de RANKL, MMP-13, TNF-a, IL-6 e IL-10 nos tecidos gengivais avaliada por RT-qPCR. A publicação 1 mostra uma reabsorção óssea inflamatória significativamente maior nos camundongos Ipaf-KO, sem diferenças, porém, no número de osteoclastos entre WT e Ipaf-KO. A expressão dos genes-alvo aumentou com a indução da doença periodontal, exceto de TNFa e IL-10, que foram altas n... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Estudo da participação do inflamassoma NLRP3 na resposta inflamatória induzida pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis / NLRP3 inflammasome participation in the inflammatory immune response induced by the dimorrphic fungi Paracoccidioides brasiliensis

Castro, Lívia Furquim de, 1990- 27 August 2018 (has links)
Orientador: Ronei Luciano Mamoni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T05:56:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castro_LiviaFurquimde_M.pdf: 5966667 bytes, checksum: bd25c56ae25a8825069884bedd9ca8ce (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Diversos estudos demonstram que a resposta inflamatória é de extrema importância para o controle da Paracoccidioidomicose (PCM). Essa resposta inflamatória é iniciada pelo reconhecimento das células fúngicas por receptores expressos por células do sistema imunológico inato. Dentre esses receptores, o NLRP3 foi associado com o reconhecimento de fungos patogênicos em modelos experimentais, atuando em conjunto com o TLR2 e a dectina-1. O NLRP3 atua na formação de um complexo multiproteico denominado inflamassoma, o qual ativa a caspase-1, que é responsável pela produção das formas ativas de duas importantes citocinas inflamatórias: a IL-1? e a IL-18. Esse estudo teve por objetivo investigar o envolvimento do NLRP3 na ativação da resposta inflamatória de macrófagos e células dendríticas humanas (DCs) derivadas de monócitos em resposta ao Paracoccidioides brasiliensis (Pb), além de avaliar a participação do NLRP3 na indução da resposta imunológica adaptativa. Nossos resultados demonstraram que células de lesões de pacientes com PCM (mucosa oral ou linfonodos) apresentam produção de IL-1beta, IL-18 e IL-37 e que macrófagos dessas lesões são positivos para Caspase-1 e NLRP3. Também fomos capazes de demonstrar que o reconhecimento de células leveduriformes por DCs e macrófagos humanos leva à ativação do inflamassoma NLRP3 e consequente produção de IL-1 e IL-18. Esse reconhecimento envolve a participação de receptores de superfície (TLR2 e Dectina-1), sendo que a produção dessas citocinas é dependente da sinalização via dectina-1 e fosforilação da proteína Syk. Além disso, observamos que a ativação do inflamassoma NLRP3, após o reconhecimento do fungo, envolve como principais mecanismos a produção de ROS e o efluxo de K+. Nossos dados também demonstraram que o inflamassoma NLRP3 é essencial para a diferenciação de células Th17 e Th1 e que sua inibição leva à um aumento de células Th2 e Treg. Em conjunto nossos dados indicam que a ativação do NLRP3 desempenha um papel importante, tanto na indução de uma resposta inflamatória inicial, quanto no desenvolvimento de uma resposta adquirida que pode ser associada à resistência à infecção pelo P. brasiliensis / Abstract: Several studies have shown that the inflammatory response is crucial for the control of paracoccidioidomycosis (PCM). This inflammatory response is initiated by the recognition of fungal yeast cells by receptors expressed by cells of the innate immune system. Among these receptors, NLRP3 was associated with the recognition of pathogenic fungi in experimental models, working in conjunction with TLR2 and dectin-1. The NLRP3 acts forming a multiproteic complex called inflammasome, which activates caspase-1, and the production of the active forms of two important cytokines: IL-1? and IL-18. This study aimed to investigate the involvement of NLRP3 activation in the inflammatory response of macrophages and human dendritic cells (DCs) derived from monocytes, in response to Paracoccidioides brasiliensis (Pb), and to evaluate the participation of NLRP3 in the induction of the subsequent adaptive immune response. Our results demonstrated that cells of lesions from PCM patients (oral mucosa and lymph nodes) express IL-1beta, IL-18 and IL-37, and that macrophages in these lesions are positive for caspase-1 and NLRP3. We were also able to demonstrate that the recognition of Pb yeast cells by human macrophages and DCs leads to the NLRP3 inflammasome activation and production of IL-1 and IL-18. This recognition involves the participation of surface receptors (TLR2 and Dectin-1), and the production of these cytokines was dependent on signaling via dectin-1 and phosphorylation of Syk. In addition, we observed that the activation of the NLRP3 inflammasome, after recognition of the fungus, involves as main mechanisms the ROS production and the K+ efflux. Our data also demonstrate that the NLRP3 inflammasome are essential for the differentiation of Th1 and Th17 cells and its inhibition leads to an increased frequency of Th2 and Treg cells. Taken together our data indicated that activation of NLRP3 present an important role in both the induction of an initial inflammatory response, and in the development of an acquired immune response, which can be associated with the resistance to the P. brasiliensis infection / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas

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