Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Eloir Paulo Schenkel / Banca: Taís Maria Bauab / Resumo: As espécies Vismia guianensis (Aubl.) (Clusiaceae) e Senna reticulata (Willd.) Irwin & Barneby (Caesalpiniaceae), conhecidas popularmente por lacre e mata-pasto, respectivamente, são encontradas na região amazônica, onde são utilizadas na medicina popular para o tratamento de diversas moléstias, principalmente infecções e dermatomicoses. Diante do exposto, o presente trabalho objetivou avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos e frações das referidas espécies vegetais, através da bioautografia e da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) pelo método de microdiluição. Foi avaliada também a atividade imunológica dos extratos hidroetanólicos das cascas do caule e das folhas de Senna reticulata e de Vismia guianensis através da produção e inibição de óxido nítrico por células peritoneais de camundongos. Todos os extratos apresentaram atividade inibitória frente às cepas padrão (ATCC) e clínicas dos fungos Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes e Microsporum canis. O extrato hidroalcoólico das cascas de V. guianensis apresentou melhor atividade antimicrobiana, com CIM de 62,5 μg/mL, de 125 μg/mL e de 500 μg/mL frente às cepas padrão de T. mentagrophytes, T. rubrum e M. canis, respectivamente; CIM de 125 μg/mL para as cepas clínicas de T. rubrum e T. mentagrophytes e, de 15,63 μg/mL frente à cepa clínica de M. canis. O extrato hidroetanólico das cascas de V. guianensis também apresentou atividade antimicrobiana contra todas as bactérias testadas, sendo as cepas de S. aureus, S. epidermidis e B. subtilis foram as mais sensíveis. As cepas de C. albicans foram resistentes aos extratos de ambas espécies vegetais. Através dos ensaios de atividade imunológica in vitro observou-se que na concentração de 50 μg/mL os extratos não apresentaram citotoxicidade e que apresentaram potencial atividade antiinflamatória / Abstract: The Vismia guianensis (Aubl.) (Clusiaceae) and Senna reticulata (Willd.) Irwin & Barneby (Caesalpiniaceae), popularly known as seal and obtusifolia, respectively, are found in the Amazon region, where they are used in folk medicine for the treatment of various diseases, especially infections and dermatomycoses. In this light, this study aimed to evaluate the antimicrobial activity of extracts and fractions of these plant species by bioautography and determination of minimum inhibitory concentration (MIC) by microdilution method. We also evaluate the immunological activity of the hydroethanolic from the stem bark and leaves of Senna reticulata and Vismia guianensis and production through the inhibition of nitric oxide by peritoneal cells of mice. All the extracts showed activity against the standard strains (ATCC) and clinical fungi Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes and Microsporum canis. The hydroalcoholic extract of the bark of V. guianensis showed better antimicrobial activity, with MIC of 62.5 μg/mL, 125 μg/mL and 500 μg/mL against the standard strains of T. mentagrophytes, T. rubrum and M. canis, respectively, MIC of 125 μg/mL for clinical strains of T. rubrum and T. mentagrophytes and of 15.63 μg/mL against the clinical strain of M. canis. The hydroalcoholic extract of the bark of V. guianensis also showed antimicrobial activity against all bacteria tested, with strains of S. aureus, S. epidermidis and B. subtilis were the most sensitive. The strains of C. albicans were resistant to the extracts of both species. Through the in vitro testing of immune activity was observed that the concentration of 50 μg/mL extracts showed no cytotoxicity and showed potential anti-inflammatory activity / Mestre

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karolinska institutet, 2002. / Härtill 5 uppsatser.

Os dermatófitos são fungos que apresentam a capacidade de invadir o estrato córneo da pele e de outros tecidos queratinizados como os cabelos e as unhas. Esses fungos podem provocar infecções em qualquer local da pele, no entanto os pés, região inguinal, axilas, couro cabeludo e unhas são mais freqüentemente afetados. O Trichophyton rubrum é um fungo antropofílico responsável por aproximadamente 80% das micoses superficiais em humanos. Indivíduos saudáveis podem apresentar dermatofitoses, embora nesses indivíduos a doença ocorra de forma localizada. Por outro lado, indivíduos que apresentam comprometimento da imunidade celular tendem a apresentar formas mais disseminadas. Tendo o objetivo de avaliar a resposta imunológica celular de pacientes portadores de dermatofitoses extensas causadas pelo Trichophyton rubrum, utilizamos um método bastante sensível de avaliação da imunidade celular que mede a resposta linfoproliferativa a mitógenos como: a fitohemaglutinina (PHA); o anti-CD3 (OKT3); e o Pokeweed (PWM). Foram avaliadas também as respostas linfoproliferativas para antígenos como: o antígeno metabólico de Candida sp (CMA); o extrato antigênico do Trichophyton rubrum, e o peptídeo sintético (YIIDTGIDID) que corresponde ao principal epítopo do fungo. Avaliamos também a dosagem das citocinas IL-4, IL-10, IL-12 e IFN- sob estímulo inespecífico pela PHA e CMA, e sob estímulo específico pelo peptídeo imunodominante do fungo. Os resultados da imunofenotipagem celular para CD3, CD4, CD8, CD19, CD56 e CD206 nos mostraram que não houve diferença entre os grupos de controles e pacientes. Os resultados dos ensaios de linfoproliferação demonstraram diferenças significativas entre os grupos controles e pacientes sob o estímulo inespecífico do PWM e ao antígeno não relacionado CMA. Houve semelhança dos resultados para os grupos controles e pacientes frente ao estímulo pelo extrato antigênico, e diferenças significativas entre os grupos controles e pacientes frente ao peptídeo imunodominante, onde o índice de estimulação foi nitidamente superior para o grupo controle. A quantificação de citocinas demonstrou diferença significativa apenas para IFN- entre os grupos de controles e pacientes sob os estímulos de PHA e do peptídeo sintético. Podemos concluir que o extrato fúngico obtido é antigênico e induz linfoproliferação. No entanto, a resposta ao peptídeo YIIDTGIDID (Tri r2) foi mais específica. Nosso trabalho demonstrou que nem todos os pacientes com Dermatofitoses extensas apresentam uma resposta celular deficiente, pois esses pacientes demonstram respostas tanto para o extrato quanto para o peptídeo antigênico de Trichophyton rubrum / Dermatophytes are fungi that have the ability to invade the stratum corneum of the skin and other keratinized tissues such as hair and nails. These fungi can cause infections anywhere on the skin, however the feet, inguinal region, axillae, scalp and nails are most often affected. Trichophyton rubrum is an anthropophilic fungus responsible for approximately 80% of superficial mycoses in humans. Healthy individuals can present dermatophytoses, although in these individuals the involvement occurs on localized areas. On the other hand, individuals with impaired cellular immunity tend to have disseminated forms. With the aim of evaluating the cellular immune response of patients with extensive dermatophytosis caused by Trichophyton rubrum, we used a very sensitive method for assessing cellular immunity, measuring the lymphoproliferative response to mitogens such as: phytohemagglutinin (PHA); anti-CD3 (OKT3); and pokeweed (PWM). We also evaluated the lymphoproliferative response to antigens as: the metabolic antigen of Candida sp (CMA), the antigenic extract of Trichophyton rubrum; and the synthetic peptide (YIIDTGIDID) that corresponds to the main fungal epitope . We also evaluated the levels of IL-4, IL-10, IL-12 and IFN- after stimulation by PHA, CMA, and the immunodominant peptide of the fungus. The immunophenotyping results showed no differences between the groups of patients and controls. The lymphoproliferation test results showed significant differences between the groups of patients and controls under the PWM and CMA stimuli. There were similar results for the groups of controls and patients after the antigenic stimulation by the extract, and significant differences between the groups of controls and patients against the immunodominant peptide, being the stimulation index significantly higher for the control group. The cytokines quantification showed a significant difference between the groups of controls and patients only for IFN- under PHA and the synthetic peptide stimulation. We can conclude that the obtained fungal extract is antigenic and can stimulate lymphoproliferation. However the response to the peptide YIIDTGIDID (Tri r2) was more specific. We showed that not all patients with extensive dermatophytosis have an impaired cellular response, demonstrating responses to both the extract and the antigenic peptide of T. rubrum

Os dermatófitos são fungos que apresentam a capacidade de invadir o estrato córneo da pele e de outros tecidos queratinizados como os cabelos e as unhas. Esses fungos podem provocar infecções em qualquer local da pele, no entanto os pés, região inguinal, axilas, couro cabeludo e unhas são mais freqüentemente afetados. O Trichophyton rubrum é um fungo antropofílico responsável por aproximadamente 80% das micoses superficiais em humanos. Indivíduos saudáveis podem apresentar dermatofitoses, embora nesses indivíduos a doença ocorra de forma localizada. Por outro lado, indivíduos que apresentam comprometimento da imunidade celular tendem a apresentar formas mais disseminadas. Tendo o objetivo de avaliar a resposta imunológica celular de pacientes portadores de dermatofitoses extensas causadas pelo Trichophyton rubrum, utilizamos um método bastante sensível de avaliação da imunidade celular que mede a resposta linfoproliferativa a mitógenos como: a fitohemaglutinina (PHA); o anti-CD3 (OKT3); e o Pokeweed (PWM). Foram avaliadas também as respostas linfoproliferativas para antígenos como: o antígeno metabólico de Candida sp (CMA); o extrato antigênico do Trichophyton rubrum, e o peptídeo sintético (YIIDTGIDID) que corresponde ao principal epítopo do fungo. Avaliamos também a dosagem das citocinas IL-4, IL-10, IL-12 e IFN- sob estímulo inespecífico pela PHA e CMA, e sob estímulo específico pelo peptídeo imunodominante do fungo. Os resultados da imunofenotipagem celular para CD3, CD4, CD8, CD19, CD56 e CD206 nos mostraram que não houve diferença entre os grupos de controles e pacientes. Os resultados dos ensaios de linfoproliferação demonstraram diferenças significativas entre os grupos controles e pacientes sob o estímulo inespecífico do PWM e ao antígeno não relacionado CMA. Houve semelhança dos resultados para os grupos controles e pacientes frente ao estímulo pelo extrato antigênico, e diferenças significativas entre os grupos controles e pacientes frente ao peptídeo imunodominante, onde o índice de estimulação foi nitidamente superior para o grupo controle. A quantificação de citocinas demonstrou diferença significativa apenas para IFN- entre os grupos de controles e pacientes sob os estímulos de PHA e do peptídeo sintético. Podemos concluir que o extrato fúngico obtido é antigênico e induz linfoproliferação. No entanto, a resposta ao peptídeo YIIDTGIDID (Tri r2) foi mais específica. Nosso trabalho demonstrou que nem todos os pacientes com Dermatofitoses extensas apresentam uma resposta celular deficiente, pois esses pacientes demonstram respostas tanto para o extrato quanto para o peptídeo antigênico de Trichophyton rubrum / Dermatophytes are fungi that have the ability to invade the stratum corneum of the skin and other keratinized tissues such as hair and nails. These fungi can cause infections anywhere on the skin, however the feet, inguinal region, axillae, scalp and nails are most often affected. Trichophyton rubrum is an anthropophilic fungus responsible for approximately 80% of superficial mycoses in humans. Healthy individuals can present dermatophytoses, although in these individuals the involvement occurs on localized areas. On the other hand, individuals with impaired cellular immunity tend to have disseminated forms. With the aim of evaluating the cellular immune response of patients with extensive dermatophytosis caused by Trichophyton rubrum, we used a very sensitive method for assessing cellular immunity, measuring the lymphoproliferative response to mitogens such as: phytohemagglutinin (PHA); anti-CD3 (OKT3); and pokeweed (PWM). We also evaluated the lymphoproliferative response to antigens as: the metabolic antigen of Candida sp (CMA), the antigenic extract of Trichophyton rubrum; and the synthetic peptide (YIIDTGIDID) that corresponds to the main fungal epitope . We also evaluated the levels of IL-4, IL-10, IL-12 and IFN- after stimulation by PHA, CMA, and the immunodominant peptide of the fungus. The immunophenotyping results showed no differences between the groups of patients and controls. The lymphoproliferation test results showed significant differences between the groups of patients and controls under the PWM and CMA stimuli. There were similar results for the groups of controls and patients after the antigenic stimulation by the extract, and significant differences between the groups of controls and patients against the immunodominant peptide, being the stimulation index significantly higher for the control group. The cytokines quantification showed a significant difference between the groups of controls and patients only for IFN- under PHA and the synthetic peptide stimulation. We can conclude that the obtained fungal extract is antigenic and can stimulate lymphoproliferation. However the response to the peptide YIIDTGIDID (Tri r2) was more specific. We showed that not all patients with extensive dermatophytosis have an impaired cellular response, demonstrating responses to both the extract and the antigenic peptide of T. rubrum

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-10Bitstream added on 2014-06-13T20:36:54Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_ah_me_arafcf.pdf: 1108772 bytes, checksum: a928fad3b03387d257dd3feacdfbd70b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As espécies Vismia guianensis (Aubl.) (Clusiaceae) e Senna reticulata (Willd.) Irwin & Barneby (Caesalpiniaceae), conhecidas popularmente por lacre e mata-pasto, respectivamente, são encontradas na região amazônica, onde são utilizadas na medicina popular para o tratamento de diversas moléstias, principalmente infecções e dermatomicoses. Diante do exposto, o presente trabalho objetivou avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos e frações das referidas espécies vegetais, através da bioautografia e da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) pelo método de microdiluição. Foi avaliada também a atividade imunológica dos extratos hidroetanólicos das cascas do caule e das folhas de Senna reticulata e de Vismia guianensis através da produção e inibição de óxido nítrico por células peritoneais de camundongos. Todos os extratos apresentaram atividade inibitória frente às cepas padrão (ATCC) e clínicas dos fungos Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes e Microsporum canis. O extrato hidroalcoólico das cascas de V. guianensis apresentou melhor atividade antimicrobiana, com CIM de 62,5 μg/mL, de 125 μg/mL e de 500 μg/mL frente às cepas padrão de T. mentagrophytes, T. rubrum e M. canis, respectivamente; CIM de 125 μg/mL para as cepas clínicas de T. rubrum e T. mentagrophytes e, de 15,63 μg/mL frente à cepa clínica de M. canis. O extrato hidroetanólico das cascas de V. guianensis também apresentou atividade antimicrobiana contra todas as bactérias testadas, sendo as cepas de S. aureus, S. epidermidis e B. subtilis foram as mais sensíveis. As cepas de C. albicans foram resistentes aos extratos de ambas espécies vegetais. Através dos ensaios de atividade imunológica in vitro observou-se que na concentração de 50 μg/mL os extratos não apresentaram citotoxicidade e que apresentaram potencial atividade antiinflamatória / The Vismia guianensis (Aubl.) (Clusiaceae) and Senna reticulata (Willd.) Irwin & Barneby (Caesalpiniaceae), popularly known as seal and obtusifolia, respectively, are found in the Amazon region, where they are used in folk medicine for the treatment of various diseases, especially infections and dermatomycoses. In this light, this study aimed to evaluate the antimicrobial activity of extracts and fractions of these plant species by bioautography and determination of minimum inhibitory concentration (MIC) by microdilution method. We also evaluate the immunological activity of the hydroethanolic from the stem bark and leaves of Senna reticulata and Vismia guianensis and production through the inhibition of nitric oxide by peritoneal cells of mice. All the extracts showed activity against the standard strains (ATCC) and clinical fungi Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes and Microsporum canis. The hydroalcoholic extract of the bark of V. guianensis showed better antimicrobial activity, with MIC of 62.5 μg/mL, 125 μg/mL and 500 μg/mL against the standard strains of T. mentagrophytes, T. rubrum and M. canis, respectively, MIC of 125 μg/mL for clinical strains of T. rubrum and T. mentagrophytes and of 15.63 μg/mL against the clinical strain of M. canis. The hydroalcoholic extract of the bark of V. guianensis also showed antimicrobial activity against all bacteria tested, with strains of S. aureus, S. epidermidis and B. subtilis were the most sensitive. The strains of C. albicans were resistant to the extracts of both species. Through the in vitro testing of immune activity was observed that the concentration of 50 μg/mL extracts showed no cytotoxicity and showed potential anti-inflammatory activity