Orientador: Reinaldo Marchetto / Banca: Saulo Santesso Garrido / Banca: Clóvis Ryuichi Nakaie / Resumo: O sistema toxina-antitoxina ParE-ParD é um sistema bacteriano de morte póssegregacional codificado numa ampla gama de hospedeiros. ParE é uma proteína pequena, de aproximadamente 12 kDa codificada pelo gene parE. ParD é uma antitoxina de cerca de 9 kDa, codificada pelo gene parD, capaz de complexar com ParE e neutralizá-la. Estudos têm mostrado o envolvimento da enzima DNA girase no processo de morte celular pela ParE, entretanto, não se tem disponível na literatura nenhuma evidência de inibição desta proteína sobre a atividade da topoisomerase IV. Embora encontrada numa ampla diversidade de microorganismos, ParE não possui função celular totalmente elucidada e seu mecanismo de citotoxicidade permanece ainda desconhecido. Com base na estrutura primária da proteína ParE de E. coli e nos escassos dados disponíveis para esta toxina, peptídeos miméticos foram racionalmente projetados visando compreender o mecanismo de inibição de ParE sobre a atividade da DNA girase, bem como, avaliar a ação destes miméticos na atividade da Topoisomerase IV e da Topo II humana. Estas sequências peptídicas foram sintetizadas pela metodologia de fase sólida, purificadas e analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência e caracterizadas por espectrometria de massas. A capacidade de inibição destes peptídeos miméticos sobre a atividade das topoisomerases foi testada por ensaios de eletroforese em gel. Os peptídeos que apresentaram melhores resultados de inibição sobre a atividade das topoisomerases foram o ParERM3 e o ParEC3, projetados para conter os resíduos de aminoácidos L61-R100 e L69-R100, respectivamente, presentes na porção C-terminal da estrutura da proteína ParE de Escherichia coli. A sequência "LNIES" (L101 a S105), quando presente nos peptídeos miméticos atenuou a toxicidade dos mesmos frente às topoisomerases, provavelmente por interferir na interação peptídeo-topoisomerase. Embora não existam... / Abstract: The toxin-antitoxin system ParE-ParD is a bacterial system of post-segregational death encoded in a wide range of hosts. ParE is a small protein of approximately 12 kDa encoded by parE gene. ParD is an antitoxin about 9 kDa, encoded by the parD gene, able of complexing with ParE and neutralize it. Studies have shown the involvement of the enzyme DNA gyrase in the cell death process by ParE, however, is not available in the literature any evidence of inhibition of this protein on the activity of topoisomerase IV. Although found in a wide variety of micro-organisms, the ParE function has not been fully elucidated and its cytotoxic mechanism remains unknown. Based on the primary structure of the E. coli ParE and the limited data available for this toxin, mimetic peptides were rationally designed aiming at understanding the mechanism of inhibition of ParE on the activity of DNA gyrase, as well as on the topoisomerase IV and human topoisomerase II activities. These peptides sequences were synthesized by solid phase methodology, purified and analyzed by high performance liquid chromatography and characterized by mass spectrometry. The ability of these mimetics to inhibit the activity of topoisomerases was tested by electrophoresis on agarose gel. The peptides that showed better results on the inhibition activity of topoisomerases were ParERM3 and ParEC3 , designed to contain the L61-R100 and L69-R100 amino acids sequence, respectively, found of the C-terminal portion of the ParE structure of Escherichia coli. The "LNIES" sequence (L101 to S105), when present in the mimetic peptides, attenuated the toxicity of the peptides on topoisomerases activity, probably by interfering in the topoisomerase - peptide interactions. Despite the absence of data in the literature regarding the toxicity of ParE protein on the topo IV and human topo II activities, the peptides ParERM3 and ParEC3 showed better inhibitory activity on these enzymes when compared... / Mestre

Orientador: Valdecir Farias Ximenes / Coorientador: Aguinaldo Robinson de Souza / Banca: Daniel Rinaldo / Banca: Marinonio Lopes Cornelio / Resumo: A albumina é a proteína solúvel mais abundante no sangue e desempenha um papel crítico na manutenção da pressão osmótica e no transporte de substâncias. A divanilina apresenta propriedades antioxidantes e pode ser usada como intensificador de sabor e cremosidade nos alimentos. Em nosso trabalho realizamos um estudo abrangente sobre a interação da divanilina com a albumina do soro bovino (BSA) aplicando técnicas de fluorescência molecular e dicroísmo circular (CD) para determinar a constante de ligação, as características físico-químicas de suas interações e utilizar a divanilina como sonda suscetível a dicroísmo circular na discriminação de sítios de ligação na albumina a partir do monitoramento do sinal de Dicroísmo Circular Induzido (ICD). Os resultados obtidos indicaram que a divanilina pode se ligar aos sítios I e II, mas liga-se preferencialmente ao sítio de drogas I da BSA com constante de associação (Ka) de 3,33, 2,83, 2,03x105 M-1, em temperaturas de 298, 308 e 318 K, respectivamente. Esses valores foram cerca de 4 vezes mais elevados em comparação com a vanilina. Os valores obtidos de energia livre de Gibbs, variação de entalpia e entropia para a ligação a partir da equação de Van't Hoff foram de -31,5 kJ/mol, -19,42 kJ/mol e 40,8 J/mol.K-1, respectivamente, demonstrando que as forças principais que atuaram para a estabilização do complexo foram ligações de hidrogênio e interações hidrofóbicas. Em presença de BSA a divanilina tornou-se uma molécula quiral, fato evide... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The albumin is the most abundant soluble protein in blood and plays a critical role in maintaining the osmotic pressure and transport of substances. The divanillin has antioxidant properties and can be used as flavor enhancer in food and creaminess. In this work, we carried out a comprehensive study on the interaction of divanillin with bovine serum albumin (BSA) applying molecular fluorescence techniques and circular dichroism (CD) to determine the binding constant and the physicochemical characteristics of their interactions and use divanillin as susceptible probe circular dichroism in discrimination of albumin binding sites from the ICD signal monitoring. The results indicated that divanillin can bind to sites I and II, but preferentially binds to site I of drugs in BSA with association constant (Ka) 3.33, 2.83, 2.03x10M-1, at temperature (298, 308, 3181K) respectively. These values were about 5 times higher compared to vanillin. The values of Gibbs free energy, enthalpy and entropy changes for the connection from the van't Holf equation were - 31,5 kJ/mol, -19,42 kJ/mol and 40,8 J/mol.K-1, respectively, showing that the main forces that have acted to stabilize the complex were hydrogen bonds and hydrophonic interactions. In the presence of BSA, divanillin became a chiral molecule as evidenced by its induced circular dichroism spectrum. The axial chirality was was theoretically confirmed from the study of the most stable conformations adopted by divanillin using the Functional Theory Density (DFT). Axial chirality was theoretically confirmed from the study of the more stable conformations adopted by divanillin using the Functional Density Theory (DFT). Molecular docking studies confirmed the conformational structure to which divanilin bound in BSA with anti-aS having a dihedral angle between 230º and 241º. The preference for site I can also be confirmed by docking due... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Orientador: Eduardo Maffud Cilli / Banca: José Roberto Ernandes / Banca: Patricia Targon Campana / Banca: Antonio José da Costa Filho / Banca: Vani Xavier de Oliveira Junior / Resumo: A diidroorotato desidrogenase é uma enzima que apresenta um papel central na biossíntese de pirimidinas e catalisa a oxidação do diidroorotato a orotato. A enzima atua durante a via "de novo" de síntese de pirimidinas e está presente em quase todos os organismos vivos. A diidroorotato desidrogenase humana (HsDHODH) pode representar um importante alvo para o tratamento de doenças hiperproliferativas e inflamatórias, já que sua inibição bloqueia a síntese de ácidos nucléicos, impedindo a sua proliferação. Esta enzima tem uma estrutura monomérica e está associada com a membrana interna das mitocôndrias pela sua extensão N-terminal. Assim, entender em detalhes como esta enzima interage com a membrana poderia elucidar um alvo seletivo para drogas antiproliferativas, antiparasíticas e imunossupressivas. Esta região está também envolvida com a catálise central da enzima, sequestrando moléculas de ubiquinona presentes na membrana, fundamentais para as reações de oxirredução feitas pela enzima. Deste modo, para um melhor entendimento destes aspectos, neste trabalho foram sintetizados, por meio da Síntese de Peptídeos em Fase Sólida (SPFS) o peptídeo Ac-GDERFYAEHLMPTLQGLLDPESAHRLAVRFTSLG-NH2, que corresponde ao microdomínio existente na porção N-terminal da HsDHODH, entre os resíduos 33 e 66. Três análogos marcados com o aminoácido paramagnético TOAC nas posições 0, 12 ou 20, além de dois análogos duplamente marcados também foram obtidos. Ambos os peptídeos com dupla marcação possuem uma cisteína ligada ao spin MTSSL na posição 35 (C-terminal) se diferenciando pela posição do segundo marcador: um contendo outra cisteína ligada ao MTSSL na posição 12 e o segundo possuindo o TOAC na posição 0 (ou N-terminal). Estes peptídeos foram estudados por técnicas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The dihydroorotate dehydrogenase is an enzyme that has a central role on the pyrimidine biosynthesis and catalyses the oxidation of dihydrorotate to orotate. The enzyme acts on "de novo" pyrimidines nucleotides pathway and it is present in almost all the live organisms. The human dihydroorotate dehydrogenase (HsDHODH) can represent an important target for the treatment of hiperproliferative and inflammatory diseases, since its inhibition blocks the nucleic acid synthesis, which restrains the cell proliferation. This enzyme has a monomeric structure and it is associated into the inner mitochondrial membrane by the N-terminal extension. Thus, understanding in details how this enzyme interacts with the membrane could help to elucidate a selective target for antiproliferative, antineoplasic and immunosuppressive drugs. This region is also involved with the central enzyme catalysis, harboring quinones molecules that are in the membranes, which is essential for the oxidation-reduction reactions made by the HsDHODH. In this way, for a better evaluation of these aspects, in this work we synthesized through the Solid Phase Peptide Synthesis (SPPS) the peptide Ac-GDERFYAEHLMPTLQGLLDPESAHRLAVRFTSLG-NH2, which corresponds to the HsDHODH N-terminal microdomain, between the residues 33 to 66. Three analogues labeled with the paramagnetic amino acid TOAC in the positions 0, 12 or 20 and two doubly labeled analogues were also synthesized. Both doubly labeled peptides contain a MTSSL-attached cysteine residue bounded to the position 35 (C-terminus), differing by the position of the second spin label: one possessing a cysteine with MTSSL at position 12 and the other contains TOAC at position 0 (N-terminus). These peptides were studied by spectroscopy techniques in order to obtain information about... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Aguinaldo Robinson de Souza / Coorientador: Valdecir Farias Ximenes / Banca: Nelson Henrique Morgon / Banca: Ignez Caracelli / Resumo: A Albumina do Soro Humano (HSA) desempenha um papel importante no transporte de substâncias com propriedades farmacológicas devido a sua alta concentração e especificidade plasmática, colocando-a como uma das proteínas fundamentais responsáveis pela implicação farmacocinética dos fármacos. O derivado de aminoácido dansilglicina (DanGly) é um marcador fluorescente específico para o sítio II na HSA. Além disso, ao se ligar à proteína, a DanGly adquire quiralidade, uma característica que também pode ser usada para caracterizar o sítio de ligação de novos compostos na HSA. Este trabalho teve como objetivo elucidar a indução de quiralidade na DanGly por sua ligação com a HSA. Os espectros de Dicroísmo Circular Eletrônico (ECD) da DanGly (100 μM) na ausência ou presença de HSA (30 μM) em solução fosfato de sódio 50 mM em pH 7,0 foram obtidos num espectropolarímetro Jasco J-815 a 25o C com uma resolução de 1 nm numa velocidade de 50 nm/min. Os ECDs teóricos foram simulados usando a abordagem da Teoria do Funcional da Densidade (DFT) com os funcionais híbridos B3LYP e CAM-B3LYP no conjunto de bases 6-311 ++ G (2d, p) e o Modelo de Solvação baseado em Densidade (SMD) para os solventes etanol, metanol, acetonitrilo, água e tetra-hidrofurano; os cálculos foram realizados com o programa Gaussian09. A formação do complexo DanGly-HSA em tampão resultou no aparecimento de um espectro positivo de ECD centrado em 346 nm. Considerando que o sinal do ICD deve surgir a partir de uma conformação ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Human serum albumin (HSA) plays an important role in the transport of substances with pharmacological properties due to their high plasma concentration and specificity, placing it as the fundamental protein responsible for the pharmacokinetic implication of the drugs. The dansylglycine amino acid derivative (DanGly) is a fluorescent marker specific for the II site on the HSA. In addition, when binding to the protein, DanGly acquires chirality, a feature that can also be used to characterize the binding site of new compounds in albumin. This work aimed to elucidate the induction of chirality in the DanGly by its bonding to the HSA. Experimental Electronic Circular Dichroism (ECD) spectra of DanGly (100 μM) in the absence or presence of HSA (30 μM) in 50 mM sodium phosphate buffer pH 7.0 were obtained in a Jasco J-815 spectropolarimeter at 25o C. The spectra were obtained with a resolution of 1 nm and a scanning speed of 50 nm/min. The theoretical ECDs were simulated using the Density Functional Theory (DFT) approach with the hybrid functional B3LYP and CAM-B3LYP in the base set 6- 311 ++ G (2d, p) and the implicit Solvation Model based on Density (SMD) for the solvents ethanol, methanol, acetonitrile, water and tetrahydrofuran; the calculations were performed with the Gaussian09 program. The DanGly -HSA complex formation in buffer resulted in the appearance of a positive ECD spectrum centered at 346 nm. Considering that the ICD signal should arise from a chiral conformation of... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Valdecir Faria Ximenes / Banca: Rodrigo Cardoso de Oliveira / Banca: Marinonio Lopes Cornelio / Banca: Paulo Noronha Lisboa Filho / Banca: Aguinaldo Robinson de Souza / Resumo: A proteína presente no plasma sanguíneo e conhecida como albumina humana possui inúmeras funções fisiológicas e propriedades como o transporte de fármacos e metabólitos na corrente sanguínea. Neste sentido, quando se estuda as características farmacocinéticas de um novo fármaco, entre as propriedades estudadas, busca-se elucidar a capacidade de ligação do mesmo na albumina e caracterizar o sítio de ligação da mesma. Neste projeto, estudamos as características espectroscópicas e biofísicas do corante vermelho Congo (VC) como potencial sonda para caracterização dos sítios de ligação da albumina e caracterização de agregados amiloidais. Os ensaios de supressão de fluorescência e dicroísmo circular induzido (ICD) revelaram uma forte associação entre VC e a albumina de soro bovina (BSA). Ensaios de deslocamento de sondas fluorescentes e alteração do espectro de ICD revelaram que o corante VC pode se ligar nos sitios I e II da BSA. Agregados proteicos com características de fibrilas amiloidais foram preparados por aquecimento da BSA a 70°C e caracterizados por fluorescência de tioflavina-T e espalhamento de luz Rayleigh. Observamos um deslocamento no sinal de ICD do VC ligado aos agregados. A monitoração do sinal de ICD em função do aumento de temperatura revelou uma típica curva de alteração de fase da proteína. Considerando que, quando presente, um sinal de ICD pode ser bastante específico e não sujeito às influências espectrais dos compostos presentes, propomos que esta técnica ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The protein present in blood plasma and known as human albumin has countless physiological functions, including transporting drugs and metabolites in the bloodstream. In this regard, when studying pharmacokinetic characteristics of a new drug, between the properties studied, it is common to elucidate its binding capacity in albumin and to characterize the binding site of the drug. In this project, we studied the spectroscopic and biophysical characteristics of Congo Red (CR) dye as a potential probe to characterize the albumin binding sites and amyloid aggregates. The fluorescence quenching tests and induced circular dichroism (ICD) showed a strong association between CR and bovine serum albumin (BSA). Displacement tests of fluorescent probes and change in the ICD spectrum revealed that the CR dye may bind to sites I and II of BSA. Protein aggregates with features of amyloid fibrils were prepared by heating the BSA at 70 °C and characterized by thioflavinT fluorescence and Rayleigh light scattering. We observed a shift in the ICD signal CR connected to the aggregates. When monitoring the ICD signal as a function of temperature, a typical phase change curve was obtained. Considering that, when present, an ICD can be a quite specific signal and not subject to spectral influences of the compounds, we proposed that this spectroscopic technique could be used to aid in the elucidation of the binding sites of the albumin and for the studies of the formation of amyloid aggregates in ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Os calcógenos de európio (EuX, onde X representa O, S, Se ou Te) possuem propriedades magneto-ópticas únicas e interessantes, devido ao enorme magnetismo gerado dos elétrons na camada f do átomo pertencente a família dos terras raras, tornando estes materiais atraentes para aplicações na spintrônica (eletrônica baseada nos transporte de spins e não de carga). Neste trabalho investigamos em baixa temperatura o espectro de absorção utilizando luz circularmente polarizada na região próxima do limiar da banda para o telureto de európio EuTe e o seleneto de európio EuSe em alto campo magnético no ordenamento ferromagnético dos spins de Eu^{2+} da rede cristalina. As amostras crescidas por epitaxia por feixe molecular apresentaram um dicroísmo circular magnético intenso no espectro de absorção para a configuração de Faraday. O par de linhas estreitas observadas estão separadas de aproximadamente 200 meV para o EuTe e 300 meV para o EuSe. Em seguida, formulamos um modelo teórico para a interpretação deste espectro de absorção no arcabouço do modelo de transições eletrônicas entre o estado fundamental 4f^{7}({8}^S_{7/2}) e o estado excitado formado dos estados do caroço remanescente 4f^{6}({7}^F_{J=0...6}) mais o estado em que o elétron se encontra na banda de condução 5d(t_{2g}), resultando em uma excelente concordancia qualitativa e quantitativa com o experimento. / Europium chalcogenides (EuX, where X stands for O, S, Se or Te) have very interesting and unique magneto-optical properties, due to the huge magnetism that arises from the electrons in the f?shell of the rare earth element and which makes them attractive for spintronics applications ( spin transport electronics or spin basedelectronics) In this work we investigate the band-edge optical absorption in high magnetic fields in the Faraday geometry for EuTe and EuSe in the ferromagnetic order attained at low temperatures. In thin layers grown by molecular beam epitaxy, an intense magnetic circular dichroism were observed. The doublet of absorption lines showed a separation by about 200meV in EuTe and 300meV in EuSe. Next, we developed a theoretical model for the interpretation of the absorption spectrum, based in the framework of the model of an electronic transition from a localized ground state 4f^{7}({8}^S_{7/2)) to an excited state formed by the core states 4f^{6}({7}^F_{J=0...6}) and the electron extended state in the 5d(t_{2g}) conduction band, yielding an excellent qualitative and quantitavie agreement with experiment.

Made available in DSpace on 2015-02-27T17:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 23.pdf: 1389389 bytes, checksum: 79ab5a32cd4a782ac19d9bd08bfa4066 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Os interferons (INFs) são proteínas produzidas por células animais em resposta a infecções virais. Essas substâncias possuem vários efeitos farmacológicos, incluindo antiviral, antitumoral e imunomodulatório. Com o advento da tecnologia do DNA recombinante, vários interferons passaram a ser produzidos e comercializados como Biofármacos. O mais importante é o α2b, que é uma das bases do tratamento das hepatites virais. A única norma oficial que regulamenta a produção de INF-α2b é a Farmacopéia Européia, sendo que restringe-se a matéria prima. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo para caracterizar a estrutura molecular do INF-α2b em formulações farmacêuticas por espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF. Para a análise por MALDI-TOF foi necessário inicialmente desenvolver um método de cromatografia líquida para promover a separação entre o INF-α2b constituinte ativo e minoritário e o soro albumina humana, também componente presente nas formulações farmacêuticas. Primeiramente foi desenvolvido um procedimento baseado em imunoafinidade e cromatografia de gel filtração. As amostras preparadas dessa forma apresentaram homogeneidade protéica por eletroforese, sendo analisadas por dicroísmo circular e fluorescência, o que demonstrou ter ocorrido degradação da estrutura tridimensional. Adicionalmente, essas amostras não geraram espectros de massa. Foi desenvolvido então outro método de separação cromatográfica, baseado em fase reversa, obtendo-se amostras com homogeneidade protéica, revelada por eletroforese. / Os interferons (INFs) são proteínas produzidas por células animais em resposta a infecções virais. Essas substâncias possuem vários efeitos farmacológicos, incluindo antiviral, antitumoral e imunomodulatório. Com o advento da tecnologia do DNA recombinante, vários interferons passaram a ser produzidos e comercializados como Biofármacos. O mais importante é o α2b, que é uma das bases do tratamento das hepatites virais. A única norma oficial que regulamenta a produção de INF-α2b é a Farmacopéia Européia, sendo que restringe-se a matéria prima. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo para caracterizar a estrutura molecular do INF-α2b em formulações farmacêuticas por espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF. Para a análise por MALDI-TOF foi necessário inicialmente desenvolver um método de cromatografia líquida para promover a separação entre o INF-α2b constituinte ativo e minoritário e o soro albumina humana, também componente presente nas formulações farmacêuticas. Primeiramente foi desenvolvido um procedimento baseado em imunoafinidade e cromatografia de gel filtração. As amostras preparadas dessa forma apresentaram homogeneidade protéica por eletroforese, sendo analisadas por dicroísmo circular e fluorescência, o que demonstrou ter ocorrido degradação da estrutura tridimensional. Adicionalmente, essas amostras não geraram espectros de massa. Foi desenvolvido então outro método de separação cromatográfica, baseado em fase reversa, obtendo-se amostras com homogeneidade protéica, revelada por eletroforese. As amostras em solução foram submetidas à digestão com tripsina, levadas ao espectrômetro de massa MALDI-TOF, onde seus fragmentos trípticos foram identificados segundo a correlação entre os resultados encontrados a partir das amostras e do padrão de INF-α2 da Farmacopéia Européia submetido aos mesmos procedimentos. As coberturas de seqüência atingida no padrão foram de 72,7 % e para as amostras de 45,5 %. No produto comercial foi identificada uma ponte disulfeto. Esse trabalho fornece dados importantes que subsidiam o estabelecimento de um protocolo para a análise de INF-α2b em produto final, que poderia substituir o mapa de peptídeos tradicional por cromatografia líquida, com a vantagem de resultar em um maior número de informações sobre a estrutura molecular do biofármaco, importante para a ação farmacológica. Portanto, implementar o controle de qualidade e caracterização estrutural com a introdução de metodologias analíticas sensíveis de maneira que tenhamos informação acerca da segurança, qualidade e eficácia do biofármaco para o devido suporte para as ações de Vigilância Sanitária.

Os calcógenos de európio (EuX, onde X representa O, S, Se ou Te) possuem propriedades magneto-ópticas únicas e interessantes, devido ao enorme magnetismo gerado dos elétrons na camada f do átomo pertencente a família dos terras raras, tornando estes materiais atraentes para aplicações na spintrônica (eletrônica baseada nos transporte de spins e não de carga). Neste trabalho investigamos em baixa temperatura o espectro de absorção utilizando luz circularmente polarizada na região próxima do limiar da banda para o telureto de európio EuTe e o seleneto de európio EuSe em alto campo magnético no ordenamento ferromagnético dos spins de Eu^{2+} da rede cristalina. As amostras crescidas por epitaxia por feixe molecular apresentaram um dicroísmo circular magnético intenso no espectro de absorção para a configuração de Faraday. O par de linhas estreitas observadas estão separadas de aproximadamente 200 meV para o EuTe e 300 meV para o EuSe. Em seguida, formulamos um modelo teórico para a interpretação deste espectro de absorção no arcabouço do modelo de transições eletrônicas entre o estado fundamental 4f^{7}({8}^S_{7/2}) e o estado excitado formado dos estados do caroço remanescente 4f^{6}({7}^F_{J=0...6}) mais o estado em que o elétron se encontra na banda de condução 5d(t_{2g}), resultando em uma excelente concordancia qualitativa e quantitativa com o experimento. / Europium chalcogenides (EuX, where X stands for O, S, Se or Te) have very interesting and unique magneto-optical properties, due to the huge magnetism that arises from the electrons in the f?shell of the rare earth element and which makes them attractive for spintronics applications ( spin transport electronics or spin basedelectronics) In this work we investigate the band-edge optical absorption in high magnetic fields in the Faraday geometry for EuTe and EuSe in the ferromagnetic order attained at low temperatures. In thin layers grown by molecular beam epitaxy, an intense magnetic circular dichroism were observed. The doublet of absorption lines showed a separation by about 200meV in EuTe and 300meV in EuSe. Next, we developed a theoretical model for the interpretation of the absorption spectrum, based in the framework of the model of an electronic transition from a localized ground state 4f^{7}({8}^S_{7/2)) to an excited state formed by the core states 4f^{6}({7}^F_{J=0...6}) and the electron extended state in the 5d(t_{2g}) conduction band, yielding an excellent qualitative and quantitavie agreement with experiment.

Orientador: João Ruggiero Neto / Banca: Fernando Luís Barroso da Silva / Banca: Amando Siuti Ito / Resumo: Em força iônica e concentração de polímero neutro adequadas, moléculas de DNA transitam da conformação dispersa em solução para uma forma compacta de alta densidade numérica de segmentos. Tal transição é denominada transição-psi (ou transição Ψ). Nesse trabalho, usamos espectroscopia de dicroísmo circular para monitorar a transição Ψ multimolecular e estimar os valores críticosdas concentrações do polímero neutro como função da concentração do sal NaCl necessárias para induzir a transição-Ψ em soluções de DNA de baixo peso molecular. Essas estimativas foram realizadas para PEGs de diferentes graus de polimeração. As concentrações críticas necessárias para induzir o decolapso também foram estimadas. Os resultados experimentais para as concentrações críticas foram comparados com os valores teórico obtidos usando um modelo recentemente proposto por de Vries (de Vries, 2001) para explicar a condensação de DNA / Abstract: in adequate conditions of ionic strenght and neutral polymer concentration, DNA undergoes a transition from its random-coil state to a compact form of high density of numerical segments of chain. Such transition is often called psi-transition ( or transition-Ψ). In this work, we used the circular dichroism spectroscopy to monitor the multimolecular transition-Ψ of DNA and estimate the critical values of the neutral polymer concentration (PEG) as a function of the NaCl molar concentration to induced the transition-Ψ in the DNA of low molecular weight. This estimation has been carried out for PEG of different degree of polimerization. It was estimated the critical PEG and NaCl concentration for the DNA decollapse. The experimental results of the critical concentrations were compared with theoretical values obtained using a model recently proposed by the compared with theoretical values obtained using a model recently proposed by de Vries (de Vries, 2001) to explain the DNA condensation / Mestre

Resumo: Nas últimas décadas, um grande número de peptídeos antimicrobianos tem sido isolado de várias espécies de seres vivos, fazendo parte da sua imunidade inata. Estes peptídeos possuem algumas características em comum: 1) apresentam carga positiva (grande ocorrência de aminoácidos básicos); 2) possuem um porcentual considerável de aminoácidos hidrofóbicos e 3) apresentam grande tendência de adotarem estruturas secundárias anfipáticas. Devido à sua propriedade de permeabilizar e destruir membranas bacterianas, levando-as à morte, estes peptídeos são um foco de interesse no desenvolvimento de novos antibióticos. Um modo de estudo destas moléculas é por meio da adição de marcadores na seqüência peptídica, permitindo relacionar as propriedades conformacionais com a atividade biológica envolvida. Desta forma, este trabalho teve como objetivo sintetizar e avaliar 3 análogos de um novo peptídeo antimicrobiano extraído da pele da rã Hypsiboas albopunctatus de seqüência GWLDVAKKIGKAAFNVAKNF( I/L), denominado de hilina C (hyC), a fim de obter informações a respeito do seu mecanismo de ação e estruturação frente a miméticos de membrana. Os análogos possuem o composto paramagnético ácido 2,2,6,6-tetrametilpiperidina-N-oxil-4- amino-4-carboxílico (TOAC) substituindo os aminoácidos alanina na posição 13 e triptofano na posição 2, ou adicionado na extremidade N-terminal do peptídeo. Os peptídeos foram sintetizados por Síntese Peptídica em Fase Sólida (SPFS) utilizando a estratégia química Fmoc. As propriedades conformacionais dos peptídeos e as suas dinâmicas foram investigadas por dicroísmo circular (CD) e ressonância paramagnética eletrônica (RPE) em água, trifluoretanol (agente indutor de estrutura secundária), micelas zwitteriônicas (lisofosfatidilcolina - LPC) e em dois tipos de lipossomas de composições lipídicas diferentes:... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In recent decades, a large number of antimicrobial peptides have been isolated from several species of microorganisms as part of their innate immunity. These peptides have some particular features: 1) positive charges (high occurrence of basic amino acids), 2) a considerable percentage of hydrophobic amino acids and 3) greater tendency to adopt amphipatic secondary structures. Due to the property of permeabilizing and destroying bacterial membranes, causing cell death, these peptides are interesting regarding the development of new antibiotics. To study these molecules, markers were added in the peptide sequence, allowing conformational properties to relate with the biological activity involved. Thus, this work aimed to synthesize and evaluate 3 analogues of a new antimicrobial peptide extracted from the skin secretion of the frog Hypsiboas albopunctatus, whose sequence is GWLDVAKKIGKAAFNVAKNFI/L, called Hilina C (hyC) in order to obtain information of the mechanism of action and structure of this peptide, using membrane mimetics. The analogues have the compound paramagnetic amino acid 2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl-4-amino-4-carboxylic acid (TOAC) replacing the alanine at position 13 and triptofan in position 2, or added to the end of the Nterminal peptide. The peptides were synthesized by Solid Phase Peptide Synthesis (SPPS) using the Fmoc chemistry strategy. The conformational properties of peptides and their dynamics were investigated by electronic paramagnetic resonance (EPR) and circular dichroism (CD) in water, trifluorethanol (TFE) (secondary structure inducer agent), zwitterionics micelles (lysophosphatidylcholine - LPC) and two types of liposomes in different lipid compositions: PE:PA:PC and SM:PA:PC. The biological activities were examined by determining the minimal inhibitory concentration (MIC) in bacteria (two Gram-positive and two Gram-negative) and the minimal... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Eduardo Maffud Cilli / Coorientador: Reinaldo Marchetto / Banca: Antonio José da Costa Filho / Banca: Clovis Ryuichi Nakaie / Mestre