Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / During the 2005 and 2006 southern hemisphere natural breeding season, 104 Criollo mares were used to evaluate deep frozen semen fertility from 5 Criollo stallions. FR4 was used as extender (Nutricell, Brazil) with 5% glycerol (GLY) or 5% dimethylformamid (DMF) as cryoprotectants. Semen was loaded in 0.5mL straws (100x106 spermatozoa/straw). Mares were examined every other day by ultrasonography until detection of ≥30mm diameter follicles, when hCG was injected (2500UI i.v.). After 24 hours, mares were examined daily in Experiment I, and every 6 hours, in experiment II. Insemination with frozen semen was performed deep in the uterine horn ipsilateralis to the dominant follicle. Controls were inseminated with fresh semen in the body of the uterus. Only one estrus period per mare was used. Pregnancy diagnosis through ultrasonography was performed on the 15th day postovulation. In experiment I, pregnancy rates were 11.9% (5/42) and 62.5% (20/32), respectively for DMF and fresh semen (P<0.0001). In experiment II, pregnancy rates were 40% (4/10), 10% (1/10) and 70% (7/10), respectively for DMF, GLY (P>0.05) and fresh semen (P<0.0001). It was showed that GLY and DMF can be used for frozen of Criollo Stallion s semen. In this context DMF brought better results. / Durante a estação reprodutiva natural de 2005 e 2006 do hemisfério sul, 104 éguas Crioulas foram utilizadas para avaliar a fertilidade do sêmen congelado de cinco garanhões Crioulos. Como diluente usou-se FR4 (Nutricell, Brasil) com 5% de glicerol (GLI) ou 5% de dimetilformamida (DMF) como crioprotetores. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,5mL (100x106 espermatozóides/palheta). Examinou-se as éguas em dias alternados por ultra-sonografia transretal para detecção de folículos ≥30mm de diâmetro, quando recebiam hCG (2500UI i.v.). Apos 24h eram examinadas diariamente no Experimento I e a cada 6h no Experimento II. As inseminações com sêmen congelado eram realizadas no fundo do corno ipsislateralis ao folículo dominante. Nas controle, com sêmen fresco no corpo uterino. Utilizou-se um ciclo estral/animal. O diagnóstico de gestação foi conduzido por ultra-sonografia no 15o dia pós-ovulação. No experimento I, a taxa de prenhez foi 11,9% (5/42) e 62,5% (20/32), respectivamente para DMF e sêmen fresco (P<0,0001). No experimento II, a taxa de prenhez foi 40% (4/10), 10% (1/10) e 70% (7/10), respectivamente para DMF, GLI (P>0,05) e sêmen fresco (P<0,0001). Demonstrou-se que o GLI e a DMF podem ser utilizados como crioprotetores para o congelamento do sêmen de garanhões Crioulos. Neste contexto, a DMF apresentou melhores resultados.