Orientador: Angelo Pires do Prado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T00:07:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gianizella_SergioLuis_M.pdf: 2000462 bytes, checksum: de05de51468420f129425e6e104b09e9 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Este trabalho teve por objetivo determinar as relações existentes entre Musca domestica e coleópteros histerídeos na Granja de Aves Poedeiras Capuavinha no Município de Monte Mor, SP. Foram realizadas 26 coletas quinzenais através de três métodos: 1. armadilha-de-solo (para a coleta de histerídeos adultos); 2. armadilha para mosca ou "jug-trap" (para a coleta de dípteros adultos) e 3. Funil de Berlese (para a coleta de histerídeos adultos e larvas de dípteros). Foram utilizadas 40 armadilhas-de-solo e 20 armadilhas para mosca em 40 m 2 de área amostrada por coleta. Para a extração do material através de Funil de Berlese foram coletados aproximadamente 10 kg de esterco por local de coleta. O material foi coletado, separado, contado e identificado no Laboratório de Entomologia do Departamento de Parasitologia da UNICAMP. Foram coletados 19.699 histerídeos adultos, 97.740 dípteros adultos e 11.741 larvas de dípteros sinantrópicos. Euspilotus modestus e Carcinops troglodytes foram os histerídeos mais abundantes correspondendo a 86% de todos os histerídeos coletados. Essas duas espécies também foram as mais dominantes (100%) no período de coleta. Também foram encontradas mais 5 espécies de histerídeos previamente identificados como: Hololepta quadridentata, Hister dubius, Euspilotus sp, Acritus sp e Phelister sp. . Além disso, foram coletadas 7 famílias de larvas de dípteros sinantrópicos: STRATYOMYIDAE (30%), CALLIPHORIDAE (28%), MUSCIDAE (26%), SPHAEROCERIDAE (9%), SEPSIDAE (5%), SYRPHIDAE (2%) e FANNIIDAE (0,420/0). Euspilotus modestus mostrou correlação positiva com adultos de M. domestica entre janeiro e junho de 1993, e correlação positiva com larvas de MUSCIDAE e SPHAEROCERIDAE (em agosto de 1993) e STRA TYOMYIDAE (emjaneiro de 1993). Carcinops troglodytes mostrou correlação positiva com MUSCIDAE (nos meses de outubro de 1992 e junho e julho de 1993) e com SPHAEROCERIDAE e STRATYOMYIDAE (nos meses de outubro de 1992 e fevereiro de 1993). O índice de dominância das duas espécies juntas ficou em 100%. O índice de diversidade foi relativamente baixo (entre O e 37%) o que confirma a grande abundância dessas espécies. A Análise de Regressão mostrou as relações significativas entre adultos de mosca doméstica com temperatura por mês (F=42,5; P<O,OI) e também entre adultos de histerídeos e temperatura por mês (t=26,6; P< 0,01). Baseado nestes dados concluímos que as populações de coleópteros histerídeos podem estar produzindo um grande impacto sobre as populações de larvas de dípteros sinantrópicos e poderão ser de grande valia para um futuro Manejo Integrado de Pragas em acúmulo de esterco de aves poedeiras no Brasil / Abstract: This work was carried out in a poultry facility (Granja Capuavianha) located in the Monte Mor county, São Paulo state, and aimed to study the relationships between Musca domestica and histerid beetles. Three different methods were employed on each to sample beetles and flies over 40 m2 of sampling area: 1. Forty pitfall-traps to capture adult histerids; 2. Twenty jug-traps to capture adult flies; 3. Berlese's funnel to extract adult histerids and immature flies from 10 kg of manure coIlected each time. The material brought from the poultry facility was handled at the Entomology Laboratm)' from the Department ofParasitology at UNICAMP. We sorted and identified 19,699 adult histerids, 97,740 synanthropic flies and 1l,7411arvae ofthese flies. Euspilotus modestus and Carcinops troglodytes were the most abundant histerids, making up 86% of the total histerids captured. These two species were also the most dominant (100%) throughout the duration of the study. Five more species of histerid beetle were also found Hololepta quadridentata, Hister dubius, Euspilotus sp., Acritus sp. and Phelister sp. Among the larvae of synanthropic flies, we identified 7 families: STRATIOMYIDAE (30%), CALLIPHORIDAE (28%), MUSCIDAE (26%), SPHAEROCERIDAE (90/0), SEPSIDAE (5%), SYRPHIDAE (2%) and FANNIIDAE (0,42%). There was a positive correlation between adults of M. domestica and E. modestus from January to June, 1993. There also was a positive correlation between E. modestus and larvae of Muscidae and Sphaeroceridae in August, 1993 and between E. modestus and larvae of Stratyomyidae in January of 1993. There was a positive correlation between C troglodytes and MUSCIDAE from October, 1992 and June to July, 1993. There also was a positive correlation with STRATIOMYIDAE from January, 1993. The dominance index for E. modestus and C troglodytes together was 100%. The relatively low diversity index (between O and 37%) confirms the great abundance of these species. Regression analysis showed a significative relationship between M. domestica and the monthly temperature (F=42.5; P< 0,01) and also between adult histerids and monthly temperature (t=26.6; P<O.OI). From the data coIlected, we concluded that the populations of histerid beetles might be of a strong influence on the populations of larvae of synanthropic flies and this association can be of important value when a Integrated Pest Management program wiIl be employed in manure of caged layer hens in Brazil / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Angelo Pires do Prado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T12:01:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camargo_ElianaAnunciatoFrancode_M.pdf: 3827490 bytes, checksum: 39f345573fd5305b009c5e79ea55c9fe (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: No presente trabalho amostras de seis populações de Musca domestica foram coletadas em Botucatu, Itupeva, Moji das Cruzes, Moji Guaçu, Monte Mor e Pirassununga no Estado de São Paulo, mantendo-as em laboratório a fim de determinar a susceptibilidade e possíveis efeitos subletais a diferentes tipos de larvicidas: cyromazine, diflubenzuron, doramectina, ivermectina e moxidectina Os larvicidas foram estudados através de meios larvais tratados e os dados foram expressos com CLso e CL9s. Os resultados mostraram que as populações foram sensíveis aos compostos, demonstrando ligeiras diferenças na susceptibilidade. A CLso foi usada para identificar efeitos subletais através da estimativa do valor adaptativo e da assimetria flutuante. Análise da assimetria flutuante mostrou diferenças na população coletada em Botucatu para todos os larvicidas, na população coletada em Moji das Cruzes para o cyromazine e a moxidectina e, para a população coletada em Moji Guaçu para o cyromazine. A estimativa do valor adaptativo foi estudada através da construção de tabelas de vida e os resultados demonstraram diferenças significantes entre as populações / Abstract: Samples of six house fly (Musca domestica L.) populations were collected from areas (Botucatu, Itupeva, Moji das Cruzes, Moji Guaçu, Monte Mor and Pirassununga) of the state of São Paulo and kept in the laboratory to determine their susceptibility and sublethal effects to different types of larvicides: cyromazine, diflubenzuron, doramectin, ivermectin and moxidectin. The larvicides were studied with treated larval medium and the data were expressed as LC5o and LC95. The results showed that ali the populations were sensitive to the evaluated compounds although demonstrating slightly differences in susceptibility. The LC5o were used to identify sublethal effects through fitness estimation and fluctuating asymmetry. Fluctuating asymmetry analysis showed differences among the populations collected at Botucatu for any larvicide, Moji das Cruzes for cyromazine and moxidectin and Moji Guaçu for cyromazine. The fitness estimation were studied through life tables construction and the results showed significant differences among the populations / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Angelo Pires do Prado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T23:09:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Justus_Angela_M.pdf: 4318136 bytes, checksum: e82475db8aa4ecd6a123307505e6076f (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Colonização de uma população de Musca domestica L., oriunda de uma granja de aves poedeiras do município de Santa Cruz da Conceição/ SP, foi feita no Laboratório de Entomologia do Departamento de Parasitologia - UNICAMP. A partir desta amostra com diferentes densidades populacionais, foram feitos estudos sobre tabela de vida e de fertilidade, bem como a análise da morfometria e assimetria flutuante. Os machos e as fêmeas foram mantidos em gaiolas plásticas (de dimensões: 25 cm de comprimento X 35 cm de largura X 35 cm de altura), cobertas com tela em diferentes densidades (10,50, 100 e 200 individuos por gaiola); em sala climatizada com temperatura de 27°C ± 1°C, umidade relativa de 60 ± 10%, fotoperíodo 12: 12 horas, com água e alimento em abundância. Os experimentos para tabelas de vida e fertilidade foram montados a partir de gaiolas com individuos isolados (machos ou fêmeas) e com individuos agrupados (machos e fêmeas, juntos na proporção 1: 1). A longevidade variou com a densidade, o sexo e com a presença ou ausência de cópula; Indivíduos isolados vivem mais que indivíduos agrupados e em densidades baixas tem maior longevidade que em densidades altas. A razão sexual dos descendentes para todas as densidades foi de aproximadamente 1: 1 e quanto maior é a densidade maior é a probabilidade dos ovos gerados se tomarem adultos. Em relação à fertilidade, a densidade 200 apresentou a taxa líquida de reprodução mais elevada e uma das menores durações médias de geração. Para os experimentos de morfometria e as simetria flutuante, foram estudados 50 fêmeas e 50 machos parentais oriundos do campo e da 22a geração mantida em laboratório; foram obtidas medidas da asa, cabeça, tíbia e tórax, por dois métodos (em microscópio estereoscópico com ocular graduada e pelo programa de captura de images IMAGE-PRO LITE versão 4.0 for Windows 95/NT/98, acoplado ao microscópio estereoscópico). A partir dos resultados obtidos com as medidas constatou-se que todos os caracteres apresentaram-se maiores nos parentais do que na 22ª geração. Na grande maioria das medidas utilizadas, fêmeas se mostraram maiores que machos. Que existe assimetria dentro da mesma população e mesmo sexo e os parentais apresentaram-se mais assimétricos, com uma média da diferença maior. Baseando-se nos resultados pode-se notar que tais estudos são importantes para ampliar os conhecimentos sobre a biologia do inseto e auxiliar em futuras formas de controle / Abstract: A colony of Musca domestica L. was established in the Entomology Laboratory, Department of Parasitology - UNICAMP, from adult flies collected in a poultry farm located in Santa Cruz da Conceição, São Paulo. The colony was used to determine life and fertility tables at different population densities as well as for studies on the morphometry and fluctuating asymmetry. Male and Female flies were kept in plastic cages (25 cm long X 35 cm wide X 35 cm tall) covered by a fine mesh cloth, at densities of 10, 50, 100 and 200 individuals per cage. The room temperature, was set at 27° C ± 10 C; relative humidity of 60 ± 10%, photoperiod of 12: 12 hours. Water and food was supplied ad libitum. The life and fertility table experiments were done with isolated caged individuals (males and females) and with grouped individuals (sex-ratio 1: 1). The longevity varied with density, sex and ocurrence of copulation. In average individuals kept in lower densities lived longer than the grouped ones. The sex-ratio of the descendants in all densities were approximately 1 : 1 and the probability of eggs to develop into adults was directely related to parental t1y density. The highest intrinsic rate of reproduction as well as one of the shortest rate of generational time occurred for flies kept at 200 flies/case. The morphometry and fluctuating asymmetry experiments were done with 50 parental females and male collected in the farm and flies from the 22nd laboratory generation. The wings, head, tibia and thorax were measured by 2 methods : the stereoscopic microscope with a graded ocular, and the software IMAGE PRO LlTE version 4.0 for Windows 95/NT/98. It was concluded that all the measured characters were larger on the parental sample than on the flies of the 22nd generation. In general females were larger than males, and asymmetry occurred within the same population and same sex. In addition, the parental flies were more asymmetric with a larger diference mean. These studies may be an important tool to assess biological parameters of insect species, and as background to future population control efforts / Mestrado / Mestre em Parasitologia

A macieira (Malus × domestica) possui importância mundial entre as frutíferas de clima temperado, e o Brasil se destaca entre os maiores produtores mundiais de maçã.À sarna da macieira, causada pelo fungo ascomiceto Venturia inaequalis, é uma das principais doenças nessa cultura. As duas cultivares mais consumidas no Brasil, Fuji e Gala, são altamente suscetíveis à sarna. O gene Vf2, derivado do clone 821 da espécie silvestre Malus floribunda, é capaz de conferir resistência à doença. O processo de melhoramento genético da macieira e a introgressão de novos genes derivados de germoplasma é um processo demorado e difícil devido ao longo tempo de geração das plantas e à autoincompatibilidade à autopolinização em Malus.Historicamente a introgressão recombinante de genes em vegetais baseou-se na transformação genética via Agrobacterium tumefaciens. Porém, novas técnicasestão sendo estabelecidas e vem revolucionado o campo da genômica funcional em plantas como a utilização de DNA epissomal em plasmídeos vegetais derivados de vírus. Estes vetores não se integram ao genoma da planta hospedeira e não são herdáveis. Os vetores consistem de vírus modificados capazes de espalhar-se por todos os tecidos da planta tratadasem causar doença e levando à expressão de genes de interesse sem a necessidade de obtenção de plantas transgênicas. Este trabalho tevecomo objetivo transferir a resistência aV. inaequalis, conferida pelo gene Vf2, para as cultivares de macieira Fuji e Gala, utilizando-seplasmídeos vegetais baseado nos vírus TYLCV (Tomato Yellow Leaf Curl Virus). O gene de resistência Vf2 derivado de Malus floribunda 821 foi clonado nosvetores de expressão e injetadoem plantas de macieira das cultivares Maxi Gala e Fuji Suprema.O DNA plasmidial foi detectado sistemicamente nas plantas tratadas e este se manteve estável durante os8 meses de testes. A expressão do gene Vf2 foi quantificada por RT-qPCR e diversas plantas apresentaram níveis elevados de expressão deste gene de resistência. Estas plantas foram desafiadas com esporos de V. inaequalis e a maioria das plantas tratadas apresentou fenótipo resistente à sarna. A introgressão recombinante baseada em plasmídeos vegetais demonstrou ser eficaz em transferir material genético de forma sistêmica nas duas cultivares de macieira testadas. O vetor plasmidial foi detectado nas plantas tratadas durante todo o período(8 meses) avaliado neste estudo, e a expressão do gene de resistência foi detectada em diversos indivíduos. Nosso estudo reforça a aplicabilidade desta técnica em plantas lenhosas perenes e abre a possibilidade para a introgressão rápida de outras características de interesse derivadas da expressão heteróloga de genes com potencial biotecnológico. / Apple (Malus x domestica) is an important crop among temperate fruit trees, and Brazil features among the world’s biggest apple producers. The apple scab, caused by the ascomycete fungus Venturia inaequalis, is a major disease of the culture. The two most consumed cultivars in Brazil, Fuji and Gala, are highly susceptible to apple scab. The Vf gene, derived from clone 821 of the wild species Malus floribunda, is capable of conferring resistance to the scab disease. The genetic improvement process of apple by introgression of new genes derived from germplasm is lenghty due to long generation time and self-incompatibility. Historically the recombinant introgression of genes in plantshas been based on genetic transformation emplyingAgrobacterium tumefaciens. However, new techniques have been developed and are revolutionizing plantfunctional genomics such as virus-derived plant episomalplasmids.These vectors do not integrate in to thehost plant genome and are not inheritable. The vectors consist of a modified virus capable of spreading to all tissues of thetreated plant without causing disease and leading to the systemic expression of the gene of interest without the need of obtaining transgenic plants.This workaimed to transfer the resistance against V. inaequalis, granted by the Vf2 gene, to Fuji and Gala apple suceptible cultivars, by using plant plasmids based on TYLCV (Tomato Yellow Leaf Curl virus).The resistance gene Vf2 derived from Malus floribunda 821 was cloned on expression vectors and injectedto Maxi Gala and Fuji Supremaplants.The plasmid DNA was systemically detected on treated plants and remained stable for at least8 months.The expression of theVfgene was quantified by RT-qPCR and several plants presented high levels of Vf2expression. These plants were challenged by spores of V. inaequalis and the majority of the treated plants displayed scab resistant phenotypes.The Vf2introgression based on plant plasmidswas shown to be effective on transferring genetic material sistemically to the apple cultivars tested. The plasmids weredetected on treated plants during the whole evaluated time of this study (8 months), and the resistance gene expression was detected on several individuals. Our study reinforces the applicability of such technique in woody perennial plants and givesthe possibility for fast introgression of other characteristics of interest dependent on genes with diverse biotechnological potential.

A macieira (Malus x domestica) é uma das mais importantes frutíferas do mundo, e sua produção tem destaque na região sul do Brasil. Comparações entre padrões de expressão gênica de diferentes variedades constituem uma estratégia de alto valor científico para seu melhoramento genético. Contudo, a acurácia das análises é dependente de genes de referência estáveis para a normalização dos dados. A escolha de controles inapropriados pode resultar em determinações estatísticas e conclusões incorretas. Pelo presente trabalho, teve-se como objetivo selecionar os melhores genes-referência para estudos de expressão gênica em macieiras, via reação em cadeia da DNA polimerase quantitativa precedida de transcrição reversa (RT-qPCR). A expressão de 21 genes, incluindo tradicionais “housekeeping genes” ou genes sugeridos como constitutivos por dados de microarranjos disponíveis na literatura, foram avaliados em diferentes tecidos vegetativos e reprodutivos da cultivar ‘Gala’ de macieira. Para todos os genes, as combinações de primers testadas permitiram amplificações específicas e curvas de eficiência apropriadas. A estabilidade dos genes foi determinada por dois diferentes algoritmos estatísticos, geNorm e NormFinder. Os resultados permitiram concluir que, para os tecidos e condições avaliadas, EF1β, MDH, SAND, THFS e WD40 são os melhores genes normalizadores para quantificação relativa da abundância de transcritos de interesse em diferentes tecidos-alvos de macieira. A expressão de PAL foi utilizada para validação dos controles selecionados. Combinações específicas de dois ou três genes-referência demonstraram ser suficientes para a normalização dos dados em cada conjunto de amostras analisado. Finalmente, a expressão do gene MDP0000232313 ou MdDAM6, potencial gene MADS-box associado à dormência em macieira, foi avaliada em gemas da cultivar ‘Fuji Standard’, amostradas durante o ciclo vegetativo e de dormência das plantas ao longo do ano 2009. As análises foram conduzidas via RT-qPCR e de forma relativa aos genes EF1β e WD40. Observou-se um nível basal de expressão de MdDAM6 durante o verão e um aumento de cerca de 10 vezes no inverno, refletindo sua possível função no estabelecimento e/ou manutenção do estado endodormente das gemas de macieira, uma vez que este tenha sido estabelecido. / Apple (Malus x domestica) is one of the most important fruit tree crop in the world, and its production is prominent in southern Brazil. Comparisons among profiles of gene expression from different cultivars are valuable scientific tools for apple genetic breeding. However, the accuracy of the analyses is dependent on the evaluation of stable reference genes for data normalization. The inappropriate choice of controls may result in statistical significance undue or incorrect conclusions. In the present work, the objective was to select the best reference genes for gene expression studies by reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) in apple trees. The expression of 21 genes, including traditional housekeeping or genes suggested as constitutive by microarray data available in the literature, was evaluated in different vegetative and reproductive tissues of the apple ‘Gala’ cultivar. For all genes, tested combinations of primers allowed specific amplification and suitable efficiency curves. The stability of the genes was determined by two different statistical algorithms, geNorm and NormFinder. The results allowed us to conclude that, for tissues and conditions evaluated, EF1β, MDH, SAND, THFS and WD40 are the best normalizing genes for relative quantification of interest transcript abundance in different target tissues of apple. PAL expression was used to validate the selected normalizers. Specific combinations of two or three reference genes were shown to be sufficient to normalize each apple sample set analyzed. Finally, the MDP0000232313 or MdDAM6 gene expression, a potential MADS-box gene associated with dormancy in apple, was evaluated in buds of the apple 'Fuji' cultivar, sampled in the vegetative and dormant cycle of plants during the year of 2009. The analysis was performed by RT-qPCR and quantified in relation to the EF1β and WD40 normalizing genes. It a basal level of expression was observed during summer and a ten fold increase during winter, reflecting its possible function associated with the establishment and/or maintenance of the endodormant state of apple buds, once it has been established.

A macieira (Malus x domestica) é uma das mais importantes frutíferas do mundo, e sua produção tem destaque na região sul do Brasil. Comparações entre padrões de expressão gênica de diferentes variedades constituem uma estratégia de alto valor científico para seu melhoramento genético. Contudo, a acurácia das análises é dependente de genes de referência estáveis para a normalização dos dados. A escolha de controles inapropriados pode resultar em determinações estatísticas e conclusões incorretas. Pelo presente trabalho, teve-se como objetivo selecionar os melhores genes-referência para estudos de expressão gênica em macieiras, via reação em cadeia da DNA polimerase quantitativa precedida de transcrição reversa (RT-qPCR). A expressão de 21 genes, incluindo tradicionais “housekeeping genes” ou genes sugeridos como constitutivos por dados de microarranjos disponíveis na literatura, foram avaliados em diferentes tecidos vegetativos e reprodutivos da cultivar ‘Gala’ de macieira. Para todos os genes, as combinações de primers testadas permitiram amplificações específicas e curvas de eficiência apropriadas. A estabilidade dos genes foi determinada por dois diferentes algoritmos estatísticos, geNorm e NormFinder. Os resultados permitiram concluir que, para os tecidos e condições avaliadas, EF1β, MDH, SAND, THFS e WD40 são os melhores genes normalizadores para quantificação relativa da abundância de transcritos de interesse em diferentes tecidos-alvos de macieira. A expressão de PAL foi utilizada para validação dos controles selecionados. Combinações específicas de dois ou três genes-referência demonstraram ser suficientes para a normalização dos dados em cada conjunto de amostras analisado. Finalmente, a expressão do gene MDP0000232313 ou MdDAM6, potencial gene MADS-box associado à dormência em macieira, foi avaliada em gemas da cultivar ‘Fuji Standard’, amostradas durante o ciclo vegetativo e de dormência das plantas ao longo do ano 2009. As análises foram conduzidas via RT-qPCR e de forma relativa aos genes EF1β e WD40. Observou-se um nível basal de expressão de MdDAM6 durante o verão e um aumento de cerca de 10 vezes no inverno, refletindo sua possível função no estabelecimento e/ou manutenção do estado endodormente das gemas de macieira, uma vez que este tenha sido estabelecido. / Apple (Malus x domestica) is one of the most important fruit tree crop in the world, and its production is prominent in southern Brazil. Comparisons among profiles of gene expression from different cultivars are valuable scientific tools for apple genetic breeding. However, the accuracy of the analyses is dependent on the evaluation of stable reference genes for data normalization. The inappropriate choice of controls may result in statistical significance undue or incorrect conclusions. In the present work, the objective was to select the best reference genes for gene expression studies by reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) in apple trees. The expression of 21 genes, including traditional housekeeping or genes suggested as constitutive by microarray data available in the literature, was evaluated in different vegetative and reproductive tissues of the apple ‘Gala’ cultivar. For all genes, tested combinations of primers allowed specific amplification and suitable efficiency curves. The stability of the genes was determined by two different statistical algorithms, geNorm and NormFinder. The results allowed us to conclude that, for tissues and conditions evaluated, EF1β, MDH, SAND, THFS and WD40 are the best normalizing genes for relative quantification of interest transcript abundance in different target tissues of apple. PAL expression was used to validate the selected normalizers. Specific combinations of two or three reference genes were shown to be sufficient to normalize each apple sample set analyzed. Finally, the MDP0000232313 or MdDAM6 gene expression, a potential MADS-box gene associated with dormancy in apple, was evaluated in buds of the apple 'Fuji' cultivar, sampled in the vegetative and dormant cycle of plants during the year of 2009. The analysis was performed by RT-qPCR and quantified in relation to the EF1β and WD40 normalizing genes. It a basal level of expression was observed during summer and a ten fold increase during winter, reflecting its possible function associated with the establishment and/or maintenance of the endodormant state of apple buds, once it has been established.

A macieira (Malus × domestica) possui importância mundial entre as frutíferas de clima temperado, e o Brasil se destaca entre os maiores produtores mundiais de maçã.À sarna da macieira, causada pelo fungo ascomiceto Venturia inaequalis, é uma das principais doenças nessa cultura. As duas cultivares mais consumidas no Brasil, Fuji e Gala, são altamente suscetíveis à sarna. O gene Vf2, derivado do clone 821 da espécie silvestre Malus floribunda, é capaz de conferir resistência à doença. O processo de melhoramento genético da macieira e a introgressão de novos genes derivados de germoplasma é um processo demorado e difícil devido ao longo tempo de geração das plantas e à autoincompatibilidade à autopolinização em Malus.Historicamente a introgressão recombinante de genes em vegetais baseou-se na transformação genética via Agrobacterium tumefaciens. Porém, novas técnicasestão sendo estabelecidas e vem revolucionado o campo da genômica funcional em plantas como a utilização de DNA epissomal em plasmídeos vegetais derivados de vírus. Estes vetores não se integram ao genoma da planta hospedeira e não são herdáveis. Os vetores consistem de vírus modificados capazes de espalhar-se por todos os tecidos da planta tratadasem causar doença e levando à expressão de genes de interesse sem a necessidade de obtenção de plantas transgênicas. Este trabalho tevecomo objetivo transferir a resistência aV. inaequalis, conferida pelo gene Vf2, para as cultivares de macieira Fuji e Gala, utilizando-seplasmídeos vegetais baseado nos vírus TYLCV (Tomato Yellow Leaf Curl Virus). O gene de resistência Vf2 derivado de Malus floribunda 821 foi clonado nosvetores de expressão e injetadoem plantas de macieira das cultivares Maxi Gala e Fuji Suprema.O DNA plasmidial foi detectado sistemicamente nas plantas tratadas e este se manteve estável durante os8 meses de testes. A expressão do gene Vf2 foi quantificada por RT-qPCR e diversas plantas apresentaram níveis elevados de expressão deste gene de resistência. Estas plantas foram desafiadas com esporos de V. inaequalis e a maioria das plantas tratadas apresentou fenótipo resistente à sarna. A introgressão recombinante baseada em plasmídeos vegetais demonstrou ser eficaz em transferir material genético de forma sistêmica nas duas cultivares de macieira testadas. O vetor plasmidial foi detectado nas plantas tratadas durante todo o período(8 meses) avaliado neste estudo, e a expressão do gene de resistência foi detectada em diversos indivíduos. Nosso estudo reforça a aplicabilidade desta técnica em plantas lenhosas perenes e abre a possibilidade para a introgressão rápida de outras características de interesse derivadas da expressão heteróloga de genes com potencial biotecnológico. / Apple (Malus x domestica) is an important crop among temperate fruit trees, and Brazil features among the world’s biggest apple producers. The apple scab, caused by the ascomycete fungus Venturia inaequalis, is a major disease of the culture. The two most consumed cultivars in Brazil, Fuji and Gala, are highly susceptible to apple scab. The Vf gene, derived from clone 821 of the wild species Malus floribunda, is capable of conferring resistance to the scab disease. The genetic improvement process of apple by introgression of new genes derived from germplasm is lenghty due to long generation time and self-incompatibility. Historically the recombinant introgression of genes in plantshas been based on genetic transformation emplyingAgrobacterium tumefaciens. However, new techniques have been developed and are revolutionizing plantfunctional genomics such as virus-derived plant episomalplasmids.These vectors do not integrate in to thehost plant genome and are not inheritable. The vectors consist of a modified virus capable of spreading to all tissues of thetreated plant without causing disease and leading to the systemic expression of the gene of interest without the need of obtaining transgenic plants.This workaimed to transfer the resistance against V. inaequalis, granted by the Vf2 gene, to Fuji and Gala apple suceptible cultivars, by using plant plasmids based on TYLCV (Tomato Yellow Leaf Curl virus).The resistance gene Vf2 derived from Malus floribunda 821 was cloned on expression vectors and injectedto Maxi Gala and Fuji Supremaplants.The plasmid DNA was systemically detected on treated plants and remained stable for at least8 months.The expression of theVfgene was quantified by RT-qPCR and several plants presented high levels of Vf2expression. These plants were challenged by spores of V. inaequalis and the majority of the treated plants displayed scab resistant phenotypes.The Vf2introgression based on plant plasmidswas shown to be effective on transferring genetic material sistemically to the apple cultivars tested. The plasmids weredetected on treated plants during the whole evaluated time of this study (8 months), and the resistance gene expression was detected on several individuals. Our study reinforces the applicability of such technique in woody perennial plants and givesthe possibility for fast introgression of other characteristics of interest dependent on genes with diverse biotechnological potential.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-03-02Bitstream added on 2014-06-13T19:36:54Z : No. of bitstreams: 1 mendonca_mo_me_jab_prot.pdf: 1448270 bytes, checksum: b107fcd3b3356a9773e10b15c32243c0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Foram conduzidos seis ensaios para determinar os níveis de energia metabolizável (EM) e a melhor relação energia:proteína (E:P) para aves de corte de crescimento lento, machos e fêmeas, criadas em sistema semiconfinado nas fases: inicial (um a 21), crescimento (22 a 49) e final (50 a 70 e 50 a 85 dias de idade para machos e fêmeas, respectivamente). A fase final para as fêmeas estendeu-se até 85 dias devido não terem atingido o peso de 2,3kg. Cada piquete da instalação experimental dispõe de uma área coberta de 3, 13m2 e uma área de pastejo de 72,87m2. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado com cinco tratamentos e quatro repetições de 20 aves cada. A proteína bruta e os demais nutrientes foram mantidos constantes em todas as rações de acordo com as recomendações do NRC (1994) para cada fase. Os dados foram analisados utilizando aSAS (1999). A relação E:P e o nível de EM que maximizaram o desempenho e as características da carcaça de frangos machos e fêmeas de crescimento lento em cada fase estudada foram: 128 e 2750 (inicial); 147 e 2850 (crescimento); 172 e 3100 kcal de EM/kg na ração (final). Paralelamente aos ensaios de desempenho, foram conduzidos três ensaios de metabolismo para determinar o aproveitamento da energia das rações utilizadas nas respectivas fases. As aves demonstraram aumentar a capacidade de metabolização da energia da dieta com a idade. / Six trials were conducted to determine the metabolizable energy (ME) and the energy to protein ratio (E:P) for broilers of slow growth, males and females, raised in semi confined system in the starter (one to 21), grower (22 to 49) and finisher phase (50 to 70 and 50 to 85 days of age, males and females, respectively). The final phase of the females extended to 85 days in order to reach 2.3kg. Each picket of the experimental unit were constituted a covering area of 3.13m2 and a pasture area of 72.87m2. The experimental design was the completely randomized with five levels of ME, four replications of 20 birds per experimental unit. The crude protein and other nutrients were maintained at the same levei in ali diets according to the NRC (1994) recommendations. The data were analysed by SAS (1999). According to the results obtained, the E:P ratio and the ME levei that provide the best performance and carcass characterists of broilers of slow growth, males and females, in each phase were: 128 and 2750 (starter); 147 and 2850 (grower); 172 and 3100 kcal of ME/kg of diet (finisher). At the same time to the performance trials were conducted three metabolism trials to determine the utilization of the energy of the diets used in the respective phases. The birds demonstrated increase the capacity of using the energy of the diet with the age.

Orientador: Nilva Kazue Sakomura / Banca: Marcos Barcellos Café / Banca: Vera Maria Barbosa de Moraes / Resumo: Foram conduzidos seis ensaios para determinar os níveis de energia metabolizável (EM) e a melhor relação energia:proteína (E:P) para aves de corte de crescimento lento, machos e fêmeas, criadas em sistema semiconfinado nas fases: inicial (um a 21), crescimento (22 a 49) e final (50 a 70 e 50 a 85 dias de idade para machos e fêmeas, respectivamente). A fase final para as fêmeas estendeu-se até 85 dias devido não terem atingido o peso de 2,3kg. Cada piquete da instalação experimental dispõe de uma área coberta de 3, 13m2 e uma área de pastejo de 72,87m2. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado com cinco tratamentos e quatro repetições de 20 aves cada. A proteína bruta e os demais nutrientes foram mantidos constantes em todas as rações de acordo com as recomendações do NRC (1994) para cada fase. Os dados foram analisados utilizando aSAS (1999). A relação E:P e o nível de EM que maximizaram o desempenho e as características da carcaça de frangos machos e fêmeas de crescimento lento em cada fase estudada foram: 128 e 2750 (inicial); 147 e 2850 (crescimento); 172 e 3100 kcal de EM/kg na ração (final). Paralelamente aos ensaios de desempenho, foram conduzidos três ensaios de metabolismo para determinar o aproveitamento da energia das rações utilizadas nas respectivas fases. As aves demonstraram aumentar a capacidade de metabolização da energia da dieta com a idade. / Abstract: Six trials were conducted to determine the metabolizable energy (ME) and the energy to protein ratio (E:P) for broilers of slow growth, males and females, raised in semi confined system in the starter (one to 21), grower (22 to 49) and finisher phase (50 to 70 and 50 to 85 days of age, males and females, respectively). The final phase of the females extended to 85 days in order to reach 2.3kg. Each picket of the experimental unit were constituted a covering area of 3.13m2 and a pasture area of 72.87m2. The experimental design was the completely randomized with five levels of ME, four replications of 20 birds per experimental unit. The crude protein and other nutrients were maintained at the same levei in ali diets according to the NRC (1994) recommendations. The data were analysed by SAS (1999). According to the results obtained, the E:P ratio and the ME levei that provide the best performance and carcass characterists of broilers of slow growth, males and females, in each phase were: 128 and 2750 (starter); 147 and 2850 (grower); 172 and 3100 kcal of ME/kg of diet (finisher). At the same time to the performance trials were conducted three metabolism trials to determine the utilization of the energy of the diets used in the respective phases. The birds demonstrated increase the capacity of using the energy of the diet with the age. / Mestre

A macieira (Malus x domestica) é uma das mais importantes frutíferas do mundo, e sua produção tem destaque na região sul do Brasil. Comparações entre padrões de expressão gênica de diferentes variedades constituem uma estratégia de alto valor científico para seu melhoramento genético. Contudo, a acurácia das análises é dependente de genes de referência estáveis para a normalização dos dados. A escolha de controles inapropriados pode resultar em determinações estatísticas e conclusões incorretas. Pelo presente trabalho, teve-se como objetivo selecionar os melhores genes-referência para estudos de expressão gênica em macieiras, via reação em cadeia da DNA polimerase quantitativa precedida de transcrição reversa (RT-qPCR). A expressão de 21 genes, incluindo tradicionais “housekeeping genes” ou genes sugeridos como constitutivos por dados de microarranjos disponíveis na literatura, foram avaliados em diferentes tecidos vegetativos e reprodutivos da cultivar ‘Gala’ de macieira. Para todos os genes, as combinações de primers testadas permitiram amplificações específicas e curvas de eficiência apropriadas. A estabilidade dos genes foi determinada por dois diferentes algoritmos estatísticos, geNorm e NormFinder. Os resultados permitiram concluir que, para os tecidos e condições avaliadas, EF1β, MDH, SAND, THFS e WD40 são os melhores genes normalizadores para quantificação relativa da abundância de transcritos de interesse em diferentes tecidos-alvos de macieira. A expressão de PAL foi utilizada para validação dos controles selecionados. Combinações específicas de dois ou três genes-referência demonstraram ser suficientes para a normalização dos dados em cada conjunto de amostras analisado. Finalmente, a expressão do gene MDP0000232313 ou MdDAM6, potencial gene MADS-box associado à dormência em macieira, foi avaliada em gemas da cultivar ‘Fuji Standard’, amostradas durante o ciclo vegetativo e de dormência das plantas ao longo do ano 2009. As análises foram conduzidas via RT-qPCR e de forma relativa aos genes EF1β e WD40. Observou-se um nível basal de expressão de MdDAM6 durante o verão e um aumento de cerca de 10 vezes no inverno, refletindo sua possível função no estabelecimento e/ou manutenção do estado endodormente das gemas de macieira, uma vez que este tenha sido estabelecido. / Apple (Malus x domestica) is one of the most important fruit tree crop in the world, and its production is prominent in southern Brazil. Comparisons among profiles of gene expression from different cultivars are valuable scientific tools for apple genetic breeding. However, the accuracy of the analyses is dependent on the evaluation of stable reference genes for data normalization. The inappropriate choice of controls may result in statistical significance undue or incorrect conclusions. In the present work, the objective was to select the best reference genes for gene expression studies by reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) in apple trees. The expression of 21 genes, including traditional housekeeping or genes suggested as constitutive by microarray data available in the literature, was evaluated in different vegetative and reproductive tissues of the apple ‘Gala’ cultivar. For all genes, tested combinations of primers allowed specific amplification and suitable efficiency curves. The stability of the genes was determined by two different statistical algorithms, geNorm and NormFinder. The results allowed us to conclude that, for tissues and conditions evaluated, EF1β, MDH, SAND, THFS and WD40 are the best normalizing genes for relative quantification of interest transcript abundance in different target tissues of apple. PAL expression was used to validate the selected normalizers. Specific combinations of two or three reference genes were shown to be sufficient to normalize each apple sample set analyzed. Finally, the MDP0000232313 or MdDAM6 gene expression, a potential MADS-box gene associated with dormancy in apple, was evaluated in buds of the apple 'Fuji' cultivar, sampled in the vegetative and dormant cycle of plants during the year of 2009. The analysis was performed by RT-qPCR and quantified in relation to the EF1β and WD40 normalizing genes. It a basal level of expression was observed during summer and a ten fold increase during winter, reflecting its possible function associated with the establishment and/or maintenance of the endodormant state of apple buds, once it has been established.