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Avaliação do desempenho de testes rápidos na detecção de marcadores do vírus da hepatite BCruz, Helena Medina January 2014 (has links)
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Previous issue date: 2015-10-29 / O uso de testes rápidos (TR) para detecção de marcadores de infecção pelo vírus da hepatite B (HBV) pode ser uma ferramenta para aumentar o acesso ao diagnóstico em áreas de difícil acesso. O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho de TRs na detecção de marcadores do HBV para fins de diagnóstico e estudos epidemiológicos. Um painel de referência com amostras de soro de pacientes com infecção pelo HBV e indivíduos saudáveis foi confeccionado para avaliação dos testes rápidos na detecção do HBsAg. Após, amostras de soro, sangue total e saliva foram obtidas de indivíduos de três grupos: i) alta endemicidade, ii) Baixa prevalência, e iii) alta vulnerabilidade para aquisição do HBV, e foram empregadas para avaliação dos TRs de detecção de HBsAg, anti-HBs e anti-HBe. Cinco TR foram avaliados: Vikia HBsAg® (Biomérieux, França), HBsAg teste rápido (Doles, Brasil), e do fabricante Wama (Brasil), os testes: Imuno- Rápido HBsAg®, Imuno-rápido anti-HBsAg® e Imuno-rápido anti-HBeAg®. Amostras de soro foram avaliadas em todos os TR, saliva foi avaliada nos TR para a detecção do HBsAg e sangue total somente no TR Vikia HBsAg®. Os resultados dos TR foram comparados com os obtidos em testes imunoenzimáticos comerciais (EIE) para detecção de HBsAg e anti-HBs e teste de eletroquimioluminescencia (ECLIA) para detecção de anti-HBe. Os TR para detecção de HBsAg tiveram sua repetitividade e reprodutibilidade em amostras de soro e saliva avaliadas, assim como a determinação de reação cruzada a outras infecções
O Vikia HBsAg® apresentou melhor concordância, utilizando amostras de soro no painel de referencia (98,68%) e no total dos grupos de diferentes perfis (96,08%), sendo melhor no grupo i (95,81%). Os diferentes TR para detecção do HBsAg utilizando amostras de soro apresentaram concordância acima de 93% no painel de referência e 87% nos grupos de diferentes perfis. Nos dois cenários, houve aumento da sensibilidade dos TRs para detecção do HBsAg de acordo com a presença do HBV DNA. O TR Vikia HBsAg® apresentou concordância em amostras de sangue total de 72,72%, exceto no grupo ii, onde não foi possível detectar amostras HBsAg verdadeiro positivas. Os TR para HBsAg apresentaram baixos valores de concordância em amostras de saliva (45,65%), somente o Imuno-rápido HBsAg® conseguiu detectar um maior número de amostras verdadeiro positivos (n=34). Os TR para detecção de anti-HBs e anti-HBe apresentaram concordâncias iguais a 54,73% e 56,89%, respectivamente. O Imuno-rápido anti-HBs® apresentou melhores valores de sensibilidade em amostras com altos títulos de anti-HBs e naquelas obtidas de indivíduos com anti-HBc e anti-HBs reagente. Os TR para HBsAg apresentaram excelente repetitividade e reprodutibilidade (concordância igual à 100%) em amostras de soro e saliva. Não foram observados resultados HBsAg falso positivo ou negativo em amostras reativas para Dengue, porém resultados discordantes foram observados em todos os TRs avaliados em amostras com sorologia reativa para HCV, HIV e Treponema pallidum. Conclui-se que, TR para detecção do HBsAg podem ser empregados no diagnóstico da infecção em amostras de soro, enquanto os TR para detecção de anti-HBe e anti-HBs apresentam baixo desempenho para uso diagnóstico. Palavras-chave: Teste rápido, HBsAg, anti-HBs, anti-Hbe / The use of rapid tests (RT) for the detection of hepat
itis B virus (HBV) markers can
be a tool for increasing access to diagnosis in hard to r
each areas. The objective of
this study was to evaluate the performance of RTs for d
etection of HBV markers for
purposes of diagnostic and epidemiological studies. A re
ference panel with serum
samples from HBV patients with HBV infection and health
y individuals was made for
evaluation of rapid tests for HBsAg detection. Then, se
rum, whole blood and saliva
samples were obtained from subjects of three groups: i)
high endemicity, ii) low
endemicity, and iii) high vulnerability for acquisiti
on of HBV infection and were
employed for evaluation of TRs for HBsAg, anti- HBs , a
nti- HBe detection. Five RTs
were evaluated: Vikia HBsAg
®
(Biomérieux, France), HBsAg teste rápido
®
(Doles,
Brazil), and to manufactory Wama (Brazil) the testes:
Imuno-rapido HBsAg
®
, Imuno-
rapido anti-HBsAg
®
, and Imuno-rapido anti-HBeAg
®
. Serum samples were evaluated
in all rapid tests, saliva samples were evaluated in all
RTs for HBsAg detection and
whole blood was used only along to RT Vikia HBsAg
®
. The results of RT were
compared with the commercial enzyme immunoassays (EIA) f
or HBsAg and anti-HBs
detection and electrochemiluminescence assay for detectio
n of anti-HBe. The RT for
detection of HBsAg had the repeatability and reproduci
bility in serum and saliva
evaluated, as well as the determination of cross-reactivit
y to other infections. The
Vikia HBsAg
®
(Biomérieux) showed the best concordance using serum sa
mples in
the reference panel (98.68%) and in total of groups w
ith different profiles of
endemicity (96.08%), whereas was better in group i (95
.81%). RT for HBsAg
detection using serum samples showed concordance above: 93%
in the reference
panel and 87% in the groups with different profiles
. In both scenarios, there was
increased sensitivity of RT for HBsAg detection according
to the presence of HBV
DNA. The RT Vikia HBsAg
®
showed good agreement in whole blood samples
(72.72%), except in group ii , where it was not possib
le to detect HBsAg true positive
samples. RT for HBsAg showed low levels of agreement in
saliva samples (45.65%),
where only the Imuno-rápido HBsAg
®
was able to detect a larger number of true
positive samples (34). RT for detection of anti-HBs and
anti-HBe showed
concordance of 54.73% and 56.89%, respectively. The Imun
o-rápido anti-HBs
®
showed better sensibility results in samples with high
titers of anti-HBs and those
obtained from individuals with reactive anti-HBc and an
ti-HBs. RT for HBsAg showed
excellent repeatability and reproducibility (concordanc
e equal to 100%) in serum and
saliva. No HBsAg positive or false negative results were ob
served in samples
reactive for Dengue virus, but discordant results were o
bserved in all RT evaluated in
samples with reactive serology for HCV, HIV
and Treponema pallidum
. In conclusion,
the rapid tests for HBsAg detection can be employed for
the diagnosis of infection in
serum, while RT for detection of anti-HBe and anti-HB
s exhibit poor performance for
diagnostic use.
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Estudo complementar da glicose-6-fosfato desidrogenase eritrocitária do marsupial brasileiro Didelphis marsupialis / Complementary study of glucose-6-phosphate dehydrogenase erythrocyte of brazilian marsupial Didelphis marsupialisPinto, Sheila Serra Vieira 18 February 2009 (has links)
Sabe-se que a atividade da glicose-6-fosfato desidrogenase eritrocitária do marsupial brasileiro Didelphis marsupialis é cerca de 15 a 20 vezes a encontrada nos eritrócitos humanos. Pretendendo-se investigar se esta hiperatividade também se encontra ou não aumentada nas outras enzimas eritrocitárias, levou-se a efeito a dosagem das atividades das enzimas glicolíticas bem de outras enzimas relacionadas ao metabolismo óxido-redutor do eritrócito do marsupial. Alguns dados bioquímicos sorológicos, hematológicos e imunológicos foram também obtidos. Assim sendo, as seguintes enzimas eritrocitárias foram estudadas: hexoquinase, glicose fosfato isomerase, fosfofrutoquinase, aldolase, triose fosfato isomerase, gliceraldeido-3-fosfato desidrogenase, fosfogliceratoquinase, difosfoglicerato mutase, monofosfoglicerato mutase, enolase, piruvato quinase, lactato desidrogenase, glicose-6-fosfato desidrogenase, 6-fosfogliconato desidrogenase, glutationa redutase, glutationa peroxidase, glutationa S-transferase, nicotinamida adenina dinucleotideo fosfato diaforase, nicotinamida adenina dinucleotideo meta-hemoglobina redutase, superóxido dismutase, aspartato aminotransferase, adenilato quinase, adenosina desaminase e acetilcolinesterase. Embora a maioria das enzimas estudadas tenham revelado atividades semelhantes às encontradas nos eritrócitos humanos, foram observados aumentos significativos da hexoquinase, piruvato quinase e glutationa S-transferase. Entretanto, a atividade da glutationa peroxidase apresentou grande aumento de atividade, cerca de dez a doze vezes a encontrada nos eritrócitos humanos, talvez agindo em conjunto com a hiperatividade da glicose-6-fosfato desidrogenase da ordem de dez a quinze vezes já descrita nos eritrócitos humanos / It is known that erythrocyte glucose-6-phosphate dehydrogenase specific activity of Didelphis marsupialis is about 15-20 times higher than human red cells. In order to investigate whether this hyperactivity is extended or not to other red cell enzymes, it was proposed to ascertain the activity of the glycolytic enzymes as well as other related to the redox metabolism of the opossum erythrocyte. Some biochemical, hematological and immunological data were also assayed as well. That being so, the following red cell enzymes were assayed: hexokinase, glucose phosphate isomerase, phosphofructokinase, aldolase, triose phosphate isomerase, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, phosphoglycerate kinase, diphosphoglycerate mutase, monophosphoglycerate mutase, enolase, pyruvate kinase, lactate dehydrogenase, glucose-6-phosphate dehydrogenase, 6-phosphogluconate dehydrogenase, glutathione reductase, glutathione peroxidase, glutathione S-transferase, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate diaphorase, nicotinamide adenine dinucleotide metahemoglobin reductase, superoxide dismutase, aspartate amino-transferase, adenylate kinase, adenosine deaminase and acetylcholinesterase . Although most of the enzymatic activities disclosed to be similar to humans, some enzymes exhibited high activities as the hexokinase, pyruvate kinase and glutathione-S-transferase, about three to four times in relation to human. However the glutathione peroxidase presented overwhelming activity, at the order of ten-twelve times the human enzyme, perhaps working together the glucose-6-phosphate dehydrogenase hyperactivity at the order of ten-fifteen times already described in the marsupial erythrocytes
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Avaliação da ocorrência de tripanosomatídeos (protozoa: kinetoplastida) em morcegos no estado do Rio de JaneiroBarros, Juliana Helena da Silva January 2009 (has links)
Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-09-28T14:29:18Z
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juliana_h_s_barros_ipec_pesquisaclinicadi_0006_2009.pdf: 1430332 bytes, checksum: 636da38d82df84b03291443dfdf250b2 (MD5)
Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os morcegos são mamíferos pertencentes à ordem dos Quirópteros. São animais que
possuem hábitos alimentares bastante diversificados, apresentando espécies importantes
no equilíbrio e diversidade biológica das espécies vegetais, como também atuantes na
transmissão de doenças para o homem e para os animais. No município do Rio de Janei-
ro, pouco se conhece sobre a ocorrência de tripanosomatídeos, nem tampouco sobre a
possibilidade da participação desses animais no ciclo de transmissão de certos tripano-
somas. Este trabalho objetivou avaliar, por hemocultura, a infecção natural por flagela-
dos tripanosomatídeos em morcegos capturados em diferentes municípios do Estado do
Rio de Janeiro e caracterizar os isolados obtidos quanto à sensibilidade ao sistema com-
plemento; potencial infectivo para macrófagos murinos “in vitro”; potencial infectivo
para Triatoma infestans e análise do perfil isoenzimático (MLEE). Durante o estudo,
flagelados tripanosomatídeos foram encontrados em 29 (30,2%) dos 96 morcegos avali-
ados, dos quais 28 possuíam hábitos hematófagos (D. rotundus) e 1 hábito insetívoro
(Lonchorhina aurita), capturados em diferentes municípios do estado do Rio de Janeiro.
Das amostras isoladas, 12 foram selecionadas para estudos de caracterização, todas,
apresentando padrões biológicos semelhantes, todas sendo sensíveis ao sistema com-
plemento, apresentando 100% de lise das formas epimastigotas; não foram capazes de
infectar macrófagos murinos “in vitro” nem tampouco puderam infectar e colonizar
glândulas salivares, hemolinfa e o trato intestinal de Triatoma infestans. Na análise iso-
enzimática, avaliado por 9 loci, três zimodemas foram observados, todos, diferentes das
amostras de referências Trypanosoma cruzi, Trypansoma rangeli e Trypanosoma des-
terrrensis, empregadas nesta análise. Os resultados obtidos neste estudo demonstraram
que flagelados do gênero Trypanosoma podem ser isolados de morcegos com diferentes
hábitos alimentares no estado do Rio de Janeiro e embora nenhuma amostra tenha sido
identificada como Trypanosoma cruzi, Trypanosoma rangeli ou Trypanosoma dester-
rensis, observou-se três padrões fenotípicos distintos entre as doze amostras estudadas.
Espera-se, dessa forma, contribuir para as ações de vigilância a partir do conhecimento
das espécies de tripanosomatideos circulantes em morcegos do Estado do Rio de Janei-
ro. / Bats are mammals belonging to the order Chiroptera. These animals have very different
alimentary habits, several species being important in the balance and biological diver-
sity of plant species, as well as being active in the transmission of diseases to man and
to animals. In the state of Rio de Janeiro, little is known about the occurrence of try-
panosomatids, neither the possibility of participation of these animals in the cycle of
transmission of certain trypanosomes. This study aimed at the evaluation of the natural
infection by flagellates trypanosomatids in bats captured in different municipalities in
the state of Rio de Janeiro, by blood culture, and characterizing the obtained isolates in
relation to their sensitivity to the complement system; their infecting potential to in vitro
murine macrophages; their infecting potencial to Triatoma infestans and the analysis of
the isoenzymatic profile (MLEE). During the study, flagellated tripanosomatids were
identified in 29 (30,2%) of the 96 specimens examined, being 28 of the samples origi-
nated from bats of hematophagous habits (Desmdus rotundus) and 1 insectivorous habit
(Lonchorhina aurita), caught in different municipalities of the state of Rio de Janeiro.
From the isolated samples, 12 were selected for studies of characterization, all present-
ing similar biological standards, all were sensitive to complement, presenting 100%
lysis of epimastigote forms; they neither were capable of infecting murine macrophages
in vitro neither being able to infect and colonize salivary glands, hemolymph and the
intestinal tract of Triatoma infestans. In isoenzyme analyses, assessed for 9 loci, three
zimodemes were observed, all different of the samples of reference Trypanosoma cruzi,
Trypansoma rangeli and Trypanosoma desterrrensis, used in this study. The results of
this study showed that flagellates of the genus Trypanosoma can be isolated from bats
with different alimentary habits in the state of Rio de Janeiro and although no samples
was identified as Trypanosoma cruzi, Trypanosoma rangeli or Trypanosoma desterren-
sis, three distinct phenotypic pattern among the twelve samples were observed. It is ex-
pected that these results contribute to the surveillance activities towards the knowledge
of the occurrence of trypanosomatids in bats in the state of Rio de Janeiro.
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Estudo complementar da glicose-6-fosfato desidrogenase eritrocitária do marsupial brasileiro Didelphis marsupialis / Complementary study of glucose-6-phosphate dehydrogenase erythrocyte of brazilian marsupial Didelphis marsupialisSheila Serra Vieira Pinto 18 February 2009 (has links)
Sabe-se que a atividade da glicose-6-fosfato desidrogenase eritrocitária do marsupial brasileiro Didelphis marsupialis é cerca de 15 a 20 vezes a encontrada nos eritrócitos humanos. Pretendendo-se investigar se esta hiperatividade também se encontra ou não aumentada nas outras enzimas eritrocitárias, levou-se a efeito a dosagem das atividades das enzimas glicolíticas bem de outras enzimas relacionadas ao metabolismo óxido-redutor do eritrócito do marsupial. Alguns dados bioquímicos sorológicos, hematológicos e imunológicos foram também obtidos. Assim sendo, as seguintes enzimas eritrocitárias foram estudadas: hexoquinase, glicose fosfato isomerase, fosfofrutoquinase, aldolase, triose fosfato isomerase, gliceraldeido-3-fosfato desidrogenase, fosfogliceratoquinase, difosfoglicerato mutase, monofosfoglicerato mutase, enolase, piruvato quinase, lactato desidrogenase, glicose-6-fosfato desidrogenase, 6-fosfogliconato desidrogenase, glutationa redutase, glutationa peroxidase, glutationa S-transferase, nicotinamida adenina dinucleotideo fosfato diaforase, nicotinamida adenina dinucleotideo meta-hemoglobina redutase, superóxido dismutase, aspartato aminotransferase, adenilato quinase, adenosina desaminase e acetilcolinesterase. Embora a maioria das enzimas estudadas tenham revelado atividades semelhantes às encontradas nos eritrócitos humanos, foram observados aumentos significativos da hexoquinase, piruvato quinase e glutationa S-transferase. Entretanto, a atividade da glutationa peroxidase apresentou grande aumento de atividade, cerca de dez a doze vezes a encontrada nos eritrócitos humanos, talvez agindo em conjunto com a hiperatividade da glicose-6-fosfato desidrogenase da ordem de dez a quinze vezes já descrita nos eritrócitos humanos / It is known that erythrocyte glucose-6-phosphate dehydrogenase specific activity of Didelphis marsupialis is about 15-20 times higher than human red cells. In order to investigate whether this hyperactivity is extended or not to other red cell enzymes, it was proposed to ascertain the activity of the glycolytic enzymes as well as other related to the redox metabolism of the opossum erythrocyte. Some biochemical, hematological and immunological data were also assayed as well. That being so, the following red cell enzymes were assayed: hexokinase, glucose phosphate isomerase, phosphofructokinase, aldolase, triose phosphate isomerase, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, phosphoglycerate kinase, diphosphoglycerate mutase, monophosphoglycerate mutase, enolase, pyruvate kinase, lactate dehydrogenase, glucose-6-phosphate dehydrogenase, 6-phosphogluconate dehydrogenase, glutathione reductase, glutathione peroxidase, glutathione S-transferase, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate diaphorase, nicotinamide adenine dinucleotide metahemoglobin reductase, superoxide dismutase, aspartate amino-transferase, adenylate kinase, adenosine deaminase and acetylcholinesterase . Although most of the enzymatic activities disclosed to be similar to humans, some enzymes exhibited high activities as the hexokinase, pyruvate kinase and glutathione-S-transferase, about three to four times in relation to human. However the glutathione peroxidase presented overwhelming activity, at the order of ten-twelve times the human enzyme, perhaps working together the glucose-6-phosphate dehydrogenase hyperactivity at the order of ten-fifteen times already described in the marsupial erythrocytes
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Macacos Cynomolgus (macaca fascicularis) como modelo experimental para Infecção com Vírus da Hepatite E (genótipo 3)Carvalho, Lilian Gonçalves de January 2011 (has links)
Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-09-25T11:49:38Z
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Previous issue date: 2011 / Instituto Oswaldo Cruz, Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e
Tecnológico (CNPq), Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro
(Faperj) / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Criação de Animais de Laboratório. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Evidências sorológicas e moleculares da infecção pelo vírus da hepatite E (HEV) em diferentes
espécies animais de regiões endêmicas e não endêmicas, apontam para a possível transmissão
zoonótica desse vírus. O conteúdo da presente dissertação é o resultado do estudo da infecção
experimental em macacos cynomolgus (Macaca fascicularis) com o HEV, genótipo 3. A pesquisa
baseou-se na avaliação da infecção com inóculos de diferentes origens geográficas, no estadiamento
clínico da infecção do hospedeiro de origem bem como o emprego de um ensaio imunoenzimático
para detecção de IgA anti-HEV como um teste confirmatório adicional. Tal ensaio foi utilizado uma
vez que ainda não existe um “padrão ouro” de diagnóstico para identificação de casos agudos de
infecções causadas pelo vírus da hepatite E. Um total de 12 animais foram divididos em grupos e
inoculados com diferentes amostras de HEV pertencentes ao genótipo 3 provenientes de suínos do
Brasil e da Holanda, de casos humanos da Argentina e um do Brasil, incluindo dois controles
negativos. Os animais foram acompanhados por 67 dias, durante os quais foram coletados amostras
semanais de sangue, saliva, fezes e tecido hepático por biópsia. A detecção do genoma viral foi
realizada pela técnica de PCR em tempo real nas amostras de soro e fezes. As amostras de soro foram
também avaliadas para quantificação bioquímica (método enzimático colorimétrico) de ALT, AST,
GGT e bilirrubina total, e para sorologia de IgG, IgM e IgA anti-HEV. As amostras de saliva foram
coletadas utilizando o coletor OraSure® e testadas para detecção de IgA anti-HEV. Seis animais dos
dez inoculados tiveram o genoma detectado nas fezes e dentre estes, quatro também tiveram o genoma
detectado no soro, o que ocorreu na ausência de evidências bioquímicas correspondentes as lesões
hepáticas, que foram discretas a moderadas. A replicação viral precoce sem hepatite clínica seguida de
soroconversão e início da hepatite histológica com infiltrados linfocíticos no fígado com baixa
alteração de ALT indicam o caráter imunomediado da doença, não relacionado ao efeito direto da
replicação viral. O estudo demonstra também que o vírus circulante em granjas suínas brasileiras foi
capaz de desenvolver infecção em primatas não humanos reforçando a hipótese do potencial zoonótico
do vírus da Hepatite E. / Evidences of infection of hepatitis E virus in different animal species of endemic and non endemic
areas, point towards a possible zoonotic transmission of this virus. This study investigated
experimental infection of HEV in cynomolgus monkeys (genotype 3) to assessing the course of
infection with inocula from different geographical origins and clinical manifestations in the host of
origin. Since there is still no gold standard for diagnosis to identify cases of acute hepatitis E, an
enzyme immunoassay for detection of anti-HEV IgA was evaluated as an additional confirmatory test.
A total of twelve animals were divided into groups and inoculated with different samples of HEV
belonging to genotype 3 from pigs from Brazil and Holland, human cases from Argentina and Brazil,
including two negative controls. The animals were monitored for 67 days, during which samples of
blood, saliva, feces and liver biopsy were collected weekly. The detection of viral genome was
performed by real-time PCR in serum and feces. Serum samples were evaluated to quantify
biochemical (enzymatic colorimetric method) of ALT, AST, GGT and total bilirubin, and serology for
anti-HEV IgG, IgM and IgA. Saliva samples were collected using the OraSure collector and tested for
anti-HEV IgA. A total of six of the ten animals inoculated had the viral genome detected in the feces
and of these, four also had the genome detected in the serum, which occurred in the absence of the
corresponding biochemical evidence of liver injury, which were mild to moderate. The elimination of
the virus in feces and viremia characterize infection and low ALT change confirms the status of an
immune-mediated disease. The study also shows that the virus circulating in swine herds in Brazil was
able to develop infection in nonhuman primates, suggesting that human acute cases of hepatitis E
infection can occur in Brazil.
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