Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2018. / Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP-DF). / INTRODUÇÃO: Vários aspectos relacionados à osteonecrose por medicação ainda não foram completamente esclarecidos, inclusive a patogênese da doença. Muitos modelos animais foram desenvolvidos para estudar essa condição, que tem potencial de provocar significativa morbidade aos pacientes. Nesse contexto, diante da complexidade dessa doença, há necessidade de maior compreensão a respeito dos mecanismos envolvidos na etiopatogenia da osteonecrose. OBJETIVO: Caracterizar histopatologicamente possíveis alterações provocadas pelo ácido zoledrônico em hemimandíbulas de ratos na ausência de trauma. MÉTODO: 40 ratos Wistar foram divididos em dois grupos: experimental, composto por 20 animais, receberam 66μg/kg de ácido zoledrônico, três vezes por semana, durante três semanas; e controle, composto por 20 animais, que receberam soro fisiológico em dosagem análoga à administrada no grupo experimental. Os animais foram submetidos à exodontia do primeiro molar inferior esquerdo e eutanasiados após seis semanas. As hemimandíbulas contralaterais ao trauma, do lado direito, foram submetidas a processamento histológico e analisadas histopatologicamente e por meio de histoenzimologia TRAP e histomorfometria. RESULTADOS: Durante o experimento, houve a perda de 4 animais e a exclusão de mais 4. Assim, foram analisadas 32 hemimandíbulas, sendo que 18 pertenciam ao grupo experimental e 14 ao controle. Não foram constatadas extensas áreas necróticas, tampouco infiltrado inflamatório e colônias bacterianas. Reação periosteal estava presente nas hemimandíbulas de apenas três animais do grupo experimental. Entretanto, foi observado aumento da densidade óssea volumétrica, do número de osteoclastos morfologicamente alterados e de focos de necrose no grupo experimental em relação ao controle. Também houve redução da infiltração gordurosa da medula óssea no grupo experimental em relação ao controle. CONCLUSÃO: A administração de ácido zoledrônico foi suficiente para induzir alterações histopatológicas em hemimandíbulas de ratos. Os achados sugerem que o fármaco promove alteração na fisiologia e remodelação óssea, antes da manifestação clínica da doença (caracterizada por osso exposto) e mesmo na ausência de trauma (que é considerada o principal fator de risco para estimular a manifestação da osteonecrose). / INTRODUCTION: Several aspects related to medication-related osteonecrosis have not yet been fully understood, including the pathogenesis of the disease. Many animal models have been developed to study this condition, which has the potential to cause significant morbidity in patients. In this context, in view of the complexity of this disease, there is a need for greater understanding of the mechanisms involved in the pathogenesis of osteonecrosis. PURPOSE: To characterize histopathologically possible alterations caused by zoledronic acid in hemimandíbulas of rats in the absence of trauma. METHODS: 40 Wistar rats were divided into two groups: experimental, composed by 20 animals which received 66 μg / kg zoledronic acid three times a week for three weeks; and control, composed by 20 animals which received saline solution in a dose analogous to that administered in the experimental group. The animals were submitted to the first lower left molar extraction and euthanized after six weeks. The hemimandibula contralateral to the trauma, on the right side, were submitted to histological processing and analyzed histopathologically and by histoenzimologia TRAP and histomorphometry. RESULTS: During the experiment, 4 animals died and 4 were excluded. Thus, 32 hemimandibulae were analyzed, 18 of which belonged to the experimental group and 14 to the control group. No extensive necrotic areas, no inflammatory infiltrate, and no bacterial colonies were found. Periosteal reaction was present in the hemimandibula of only three animals in the experimental group. However, there was an increase in volume bone density, number of morphologically altered osteoclasts and foci of necrosis in the experimental group in relation to the control group. There was also a reduction of fatty infiltration of the bone marrow in the experimental group in relation to the control. CONCLUSION: The administration of zoledronic acid was able to induce histopathological changes in the hemimandibula of rats. The findings suggest that the drug promotes changes in bone physiology and remodeling, prior to the clinical manifestation of the disease (characterized by exposed bone) and even in the absence of trauma (which is considered the main risk factor for stimulating the manifestation of osteonecrosis).

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-25T20:45:34Z No. of bitstreams: 1 Cleiton Silva Santos Desfecho da infecao experimental....pdf: 2262422 bytes, checksum: b3abf43dd8996e46ce0c116bfc304bf2 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-25T20:45:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cleiton Silva Santos Desfecho da infecao experimental....pdf: 2262422 bytes, checksum: b3abf43dd8996e46ce0c116bfc304bf2 (MD5) Previous issue date: 2011 / Universidade Federal da Bahia. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / O modelo murino oferece múltiplas ferramentas para estudos imunológicos e genéticos. Alguns estudos avaliando a infecção por leptospiras patogênicas em camundongos mutantes ou transgênicos vêem sendo relatados, no entanto, o uso mais amplo desses modelos experimentais é limitado por nossa pouca compreensão sobre o desfecho da infecção por leptospiras patogênicas em linhagens murinas selvagens. Neste estudo, relatamos o desfecho da infecção por Leptospira interrogans sorovar Copenhageni cepa Cop em quatro linhagens murinas selvagens amplamente usadas em pesquisa básica: A, CBA, BALB/c e C57BL/6. Os desfechos avaliados foram sobrevida, presença de lesões renais, carga de leptospiras nos rins, títulos de anticorpos aglutinantes séricos e níveis séricos de IgG específica anti-Leptospira. Como esperado, nenhuma linhagem mostrou-se susceptível à doença aguda letal. As linhagens A e C57BL/6 apresentaram maior carga renal de leptospiras, enquanto os camundongos CBA e C57BL/6 apresentaram lesões renais mais graves. Por outro lado, camundongos BALB/c demonstraram notável resistência inclusive à leptospirose subclínica. / The mouse disease model has the advantage of a broad array of immunological and genetic tools available for basic research. Some studies on transgenic and/or mutant mouse strains as models for experimental leptospirosis have been reported; however, the wider use of such models is hampered by our poor understanding of the outcome of experimental leptospiral infection among the different mouse strains available. We studied the outcome of infection by a virulent strain of Leptospira interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae strain Cop in four commonly used wildtype mouse strains: A, CBA, BALB/c and C57BL/6. The endpoints evaluated in this study were survival, presence of kidney lesions, leptospiral load in kidney samples, microscopic agglutination test (MAT) titre and anti-leptospiral IgG antibody levels. As expected, none of the mouse strains were susceptible to lethal leptospirosis. However, these strains developed specific pathologies associated with sub-lethal leptospirosis. The A and C57BL/6 strains exhibited a high leptospiral load in kidney samples, the CBA and C57BL/6 strains developed severe inflammatory lesions, while the BALB/c strain proved to be the most resistant to sub-clinical leptospirosis.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-07-03T18:12:55Z No. of bitstreams: 1 michelecristineribeirodefreitas.pdf: 3934181 bytes, checksum: f5f6a1d475abc70500055be8358b14c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-08T13:14:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 michelecristineribeirodefreitas.pdf: 3934181 bytes, checksum: f5f6a1d475abc70500055be8358b14c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-08T13:14:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 michelecristineribeirodefreitas.pdf: 3934181 bytes, checksum: f5f6a1d475abc70500055be8358b14c7 (MD5) Previous issue date: 2015-04-10 / Bastonetes Gram negativos anaeróbicos da espécie Bacteroides fragilis são membros da microbiota residente intestinal, e frequentemente associados a infecções endógenas. Para o tratamento destas infecções, o metronidazol persiste como um dos principais fármacos disponíveis. Como outros microrganismos, B. fragils são susceptíveis a perturbações ecológicas, muitas vezes resultantes de concentrações subinibitórias de antimicrobianos, que podem que podem desencadear alterações na biologia bacteriana com reflexo no seu potencial agressor. Considerando-se que, geralmente, os estudos de interação droga-bactéria utilizam ensaios in vitro, permanecem, assim, questionamentos sobre a real extensão do fenômeno considerando-se uma situação real de infecção e exposição a antimicrobianos em concentração subinibitória. Neste sentido, foi proposto o estudo de um modelo experimental de interação droga-bactéria-hospedeiro. Ratos Wistar foram submetidos à laparotomia para inserção de um corpo de prova na cavidade peritoneal, e posterior desafio percutâneo com B. fragilis ATCC 43859. Os animais foram divididos em três grupos experimentais: grupo controle negativo (CN) (n=18) sem inoculação bacteriana, apenas com o veículo; grupo controle positivo (CP) (n=30) animais infectados com a linhagem bacteriana parental; grupo experimental (GE) (n=24) animais infectados com a linhagem bacteriana parental, tratados com concentração subinibitória de metronidazol (1µg/mL - via percutânea) por um período de oito dias em intervalos de 48 horas. Foram avaliados em dois momentos durante o processo infeccioso: Após 8 dias o tratamento com o MTZ e 8 dias após o término do tratamento (16 dias). Experimentos com cultura bacteriana in vitro foram realizados considerando-se o mesmo desenho experimental para comparação. A dinâmica da colonização microbiana nos corpos de prova foi avaliada por cultura microbiana, PCR simples, PCR quantitativo e coloração de Gram. No hospedeiro, foram avaliados parâmetros histológicos e imunológicos, pela avaliação transcricional da expressão de citocinas. Características morfo-fisiológicas, bioquímicas e moleculares de bactérias selecionadas in vivo e in vitro foram avaliadas, ainda, pela coloração de Gram, Kit API20, formação de biofilme experimental, tolerância ao estresse oxidativo (H2O2), e genotipagem por AP-PCR. Os resultados mostram que a infecção in vivo por Bacteroides fragilis se manteve como monoinfecção durante todo o período experimental avaliado, com viabilidade bacteriana mesmo após tratamento com concentração subinibitória de metronidazol. Análise histológica do tecido formado no corpo de prova mostrou um infiltrado inflamatório exacerbado após os 8 dias de tratamento em ambos os grupos infectados. No entanto, após 16 dias o infiltrado inflamatório diminuiu no GE. Os níveis de expressão de citocinas mostraram-se alterados quando os grupos infectados foram comparados, principalmente relacionados aos níveis de IL-10. Embora alterações no perfil bioquímico bacteriano não tenham sido observadas, morfologia aberrante, aumento na formação de biofilme e diminuição da sensibilidade ao estresse oxidativo foram observadas nas linhagens selecionadas in vitro. Polimorfismo genético não foi detectado por AP-PCR. Nossos resultados sugerem que metronidazol em baixas concentrações interfere na relação bactéria-hospedeiro, o que pode ter implicações no processo infeccioso, sem, no entanto, resultar em alterações evidentes nas células bacterianas, como observado in vitro. Percebe-se, assim, a complexidade das interações droga-bacteria-hospedeiro em situação real de infecção e suas implicações na biologia microbiana e na patogênese. / Bacteroides fragilis, a member of the resident intestinal microbiota is the most important pathogen associated to endogenous infections. Meanwhile, metronidazole persists as the main drug available for treating these diseases. As other resident microorganisms, these bacteria are exposed to ecological disturbances, often resulting from subinhibitory concentrations of antimicrobial agents that can trigger changes in microbial biology and which may affect potential aggressor. Considering that the studies of drug-bacteria interactions usually uses in vitro assays, questions about the true extension of the phenomenon in a real situation of microbial infection and exposure to antimicrobials in subinhibitory concentrations remains. Thus, for a better understanding of drug-bacteria-host relationship in real situation of infection, an in vivo model of interaction has been proposed. Wistar rats were subjected to laparotomy to insert a perforated table tenis ball into the peritoneal cavity, followed by percutaneous challenge with B. fragilis ATCC 43859. The animals were divided into three experimental groups: negative control (NC) (n = 18) animals without bacterial inoculation using the vehicle only; positive control (PC) (n = 30) animals infected with the parental bacterial strain; experimental group (EG) (n = 24) animals infected with the parental bacterial strain, treated with subinhibitory concentration of metronidazole (1µg/mL percutaneous) for a period of eight days in 48 hour intervals. To evaluate the impact of metronidazole in the bacteria-host relationship the experimental infections were evaluated two times during the infectious process; first, 8 days after the treatment with MTZ and 8 days after the end of the treatment (16 days). The dynamics of the microbial colonization into the tissue cage was evaluated by conventional PCR, real time PCR and Gram stain. In the host, histological and transcriptional analysis of cytokine expression was performed. Morpho-physiological, biochemical and molecular characteristics of bacteria selected in vivo and in vitro were evaluated by Gram stain, kit API20, experimental biofilm formation, tolerance to oxidative stress (H2O2), and genotyping by AP-PCR. The results show that in vivo infection by Bacteroides fragilis remained as monoinfection throughout the experimental period with bacterial viability even after the treatment with sub inhibitory concentration of metronidazole. Histological analysis of the tissue formed into the tissue cage showed exacerbated inflammatory infiltrate after 8 days of treatment in both infected groups. However, after 16 days the inflammatory infiltrate decreased in the EG group. Increased cytokine expression was observed when infected groups were compared, mainly related to interleukin 10. Although changes in the bacterial biochemical profile were not observed, aberrant morphology, increased biofilm formation and decreased sensitivity to oxidative stress were observed in the in vitro selected strains. Genetic polymorphism was not detected by AP-PCR. Our results suggest that low concentrations of metronidazole interfere in the bacteria-host relationship, which could have implications in the infection process even without showing obvious alterations in the bacterial cells as demonstrated in vitro. Therefore, the complexity of drug-bacteria-host interactions in real infection situations and its consequences in microbial biology and pathogenesis is clear.

En este trabajo de tesis se estudió la fisiología y fisiopatología del metabolismo del hierro. En células hepáticas, duodenales, renales, pancreáticas, pulmonares y neuronales se evaluaron proteínas que movilizan hierro a través de las membranas celulares en estados de balance de hierro y sus cambios regulatorios en la dishomeostasis del biometal. Se utilizaron Modelos Animales de Sobrecarga y de Deficiencia de Hierro y una línea celular de neuroblastoma humano para el estudio de las proteínas importadoras de hierro Transportador de Metales Divalentes 1 (DMT1), ZIP14 (SLC39A14) y Receptor de Transferrina 1 (RTf1); las proteínas reguladoras Proteína de la Hemocromatosis (HFE), Proteína Reguladora del Hierro 1 (IRP1) y Prohepcidina; la proteína exportadora Ferroportina (FPN) y la proteína de depósito Ferritina. Metodologías: histoquímica, inmunohistoquímica y técnicas de biología molecular (EMSA, Western blot y RT-PCR). Se desarrollaron: 1) Modelos Animales Murinos (ratones CF1; n=6/grupo): a) Sobrecarga de Hierro: hierro sacarato; control (solución fisiológica); b) Deficiencia de Hierro: flebotomía; control (operación simulada); 2) Células SH-SY5Y con/sin N-acetilcisteína y células SH-SY5Y knockdown para IRP1 fueron tratadas con IL-6, TNF-α, LPS y solución salina. Deficiencia de Hierro: la expresión apical de DMT1 en enterocitos y su débil expresión en hepatocitos mostraron un mecanismo que estimula la absorción de hierro de la dieta y disminuye la captación hepática. La expresión apical de DMT1 y RTf1 y la débil expresión de Prohepcidina en células tubulares proximales renales evidencian aumento de la captación renal de hierro en coordinación con duodeno. El aumento de RTf1 y la localización apical de DMT1, HFE y FPN en las células bronquiales les adjudican a estas proteínas funciones en la captación y en el control de hierro para suministrar hierro al pulmón. Prohepcidina pulmonar no regularía la movilización del hierro en pulmón en deficiencia. Sobrecarga de hierro: la localización perinuclear de DMT1 en enterocitos y su intensa expresión en hepatocitos mostraron un mecanismo regulatorio que limita la absorción de hierro de la dieta y aumenta su captación hepática. El aumento de ZIP14 y su localización apical en células proximales evidencian una mayor reabsorción renal de hierro que produce sobrecarga de hierro en el riñón, mecanismo que predomina sobre la función de DMT1 y RTf1. El aumento de ZIP14 y FPN y la localización apical de DMT1 y Ferritina en las células bronquiales les adjudican a estas proteínas funciones en la captación, exportación y almacenamiento de hierro para detoxificar el exceso de hierro. Prohepcidina pulmonar no regularía la movilización del exceso de hierro en pulmón. La disminución de DMT1 y Ferritina y el aumento de Prohepcidina en las células del islote de Langerhans mostraron un mecanismo que limitaría la acumulación del hierro en las células endocrinas, siendo las células de reserva de hierro las del acino y del tejido conectivo. Modelo de Inflamación: el aumento de DMT1 en las células SH-SY5Y inducido por citoquinas y LPS le adjudica a DMT1 una función en la captación de hierro. El aumento de DMT1 sería controlado principalmente por una regulación transcripcional mediada por ROS. La activación de IRP1 independiente de ROS no sería un mecanismo regulatorio predominante sobre el aumento de DMT1 en inflamación. El empleo del antioxidante NAC revierte el efecto de la inflamación sobre el aumento de DMT1, por lo que NAC podría disminuir la captación de hierro en células de neuroblastoma. Finalmente podemos concluir que en Deficiencia de Hierro existen mecanismos regulatorios de las proteínas del hierro en duodeno, hígado, riñón y pulmón que suministran el hierro tisular o sistémico requerido en alta demanda. En Sobrecarga de Hierro, la regulación de las proteínas en duodeno e hígado disminuiría el hierro biodisponible. En pulmón y páncreas, las proteínas del hierro participarían de un mecanismo beneficioso para limitar el daño oxidativo de las células del pulmón y del páncreas endocrino en Sobrecarga de Hierro. En cambio, en el riñón, la regulación de ZIP14 originaría la sobrecarga de hierro en los túbulos proximales que induciría daño celular. En Inflamación DMT1 contribuiría a la captación de hierro libre en las células neuronales a través de una regulación principalmente transcripcional mediada por ROS, siendo esta función de DMT1 revertida por el agregado de antioxidantes. En conclusión, la relación entre las proteínas del hierro en diferentes células en modelos animales puede ayudar a comprender mejor los mecanismos implicados en la fisiología y fisiopatología del metabolismo del hierro. / The purpose of this Ph. D. thesis was to study the physiology and physiopathology of iron metabolism. To this end, proteins that mobilize iron across cell membranes in states of iron balance as well as their regulatory changes in the dishomeostasis of this biometal were analyzed in liver, duodenal, kidney, pancreatic, lung and neural cells. Animal Models of Iron Overload and of Iron Deficiency as well as a human neuroblastoma cell line were used to study iron import proteins Divalent Metal Transporter 1 (DMT1), ZIP14 (SLC39A14) and Transferrin Receptor 1 (RTf1); regulators proteins Hemochromatosis Protein (HFE), Iron Regulatory Protein 1 (IRP1) and Prohepcidin; export protein Ferroportin (FPN) and storage protein Ferritin. Methodologies: histochemistry, immunohistochemistry and molecular biology techniques (EMSA, Western blot and RT-PCR). The following were developed: 1) Murine Animal Models (CF1 mice; n=6/group): a) Iron Overload: iron saccharate, control (physiological solution), b) Iron Deficiency: phlebotomy, control (sham-operated); 2) SH-SY5Y cells with/without N-acetylcysteine and SH-SY5Y knockdown cells for IRP1 were treated with IL-6, TNF-α, LPS and saline solution. Iron Deficiency: the apical expression of DMT1 in enterocytes and its weak expression in hepatocytes revealed a mechanism which stimulates iron absorption from the diet and reduces liver uptake. The apical expression of DMT1 and RTf1 as well as the weak expression of Prohepcidin in renal proximal tubular cells were observed to evidence an iron uptake increase in coordination with the duodenum. The increase in RTf1 as well as the apical localization of DMT1, HFE and FPN in bronchial cells were found to be indicative of proper functions of these proteins of iron uptake and control to supply iron to the lungs. Pulmonary Prohepcidin seemed not regulate iron mobilization in the lung under deficiency conditions. Iron overload: perinuclear DMT1 localization in enterocytes as well as its intense expression in hepatocytes were found to be indicative of a regulatory mechanism that restricts dietary iron absorption but increases its hepatic uptake. ZIP14 increase and its apical localization in proximal cells were observed to show a higher renal iron reabsorption producing, in turn, iron overload in the kidney, this being a mechanism that predominates over DMT1 and RTf1 function. ZIP14 and FPN increase and DMT1 and Ferritin apical localization in bronchial cells were observed to confer these proteins functions in iron uptake, export and storage for iron excess detoxification. Pulmonary Prohepcidin seemed not to regulate iron excess mobilization in the lung. DMT1 and Ferritin decrease and Prohepcidin increase in the islet of Langerhans cells revealed a mechanism which appeared to restrict iron accumulation in endocrine cells, iron reserve cells being those of the acinus and connective tissue. Model of Inflammation: cytokine- and LPS-induced increase of DMT1 in SH-SY5Y cells was found to confer DMT1 an iron uptake function. DMT1 increase could be controled mainly by a ROS-mediated transcriptional regulatory mechanism. ROS-independent IRP1 activation seemed not to behave as a predominant regulatory mechanism over DMT1 increase under inflammation conditions. The use of NAC antioxidant was found to reverse the effect of inflammation on DMT1 increase, this being the reason why NAC could reduce iron uptake in neuroblastoma cells. Taken together, results from this Ph. D. thesis lead us to conclude that under Iron Deficiency conditions iron-protein regulatory mechanisms supply highly required tissular or systemic iron in duodenum, liver, kidney and lung. Under Iron Overload conditions, protein regulation seems to reduce bioavailable iron in duodenum and liver. In the lung and pancreas, iron proteins may be part of a beneficial mechanism to reduce the oxidative damage of lung cells and endocrine pancreas under Iron Overload conditions. In contrast, in the kidney, ZIP14 regulation seems to give rise to Iron Overload in proximal tubules, thus inducing cell damage. Under Inflammation conditions, DMT1 appears to contribute to the uptake of iron-free in neuronal cells mainly through a ROS-mediated transcriptional regulatory mechanism, this particular function of DMT1 being reversed by the addition of antioxidants. In conclusion, the relationship between the iron proteins in different cells in animal models may help to better understand the mechanisms involved in the physiology and physiopathology of iron metabolism.

Com o aumento da expectativa de vida, surgem indagações em relação à qualidade desses anos que serão vividos a mais. Durante o processo de envelhecimento, ocorrem alterações naturais que podem resultar em disfunções fisiológicas. Da mesma forma, o cérebro se altera e se adapta ao longo desse processo, podendo ocorrer danos à funcionalidade desse órgão. Entre os agravos mais comuns ao sistema nervoso central está a doença de Alzheimer (DA), que compromete a função cognitiva, aprendizado e memória. A abordagem terapêutica utilizada no tratamento da DA até o momento não é capaz de reverter as perdas funcionais no cérebro, além de causar alguns efeitos colaterais indesejados. Diante disso, uma alternativa ou adjuvante no tratamento da perda de memória na DA faz-se necessário. Nosso grupo de pesquisa demonstrou o efeito do carbonato de lítio em microdose na estabilização da memória em estudos prévios. No entanto, ainda existe muito a ser avaliado a respeito de aspectos moleculares relacionados ao tratamento com esse íon. O presente estudo buscou avaliar os aspectos comportamentais do efeito da microdose desse íon na memória e ansiedade de camundongos com envelhecimento acelerado (SAMP-8). Foram utilizados camundongos fêmeas da linhagem SAMP-8 (\"senescence-accelerated mouse prone\") que possuem envelhecimento acelerado. Os animais SAMP-8 foram divididos em 2 grupos: um grupo que recebeu somente água filtrada por via oral durante todo o processo de envelhecimento (n = 12) e um grupo que recebeu carbonato de lítio na dose de 0,25 mg/kg por via oral (n = 12). Como controle dos animais SAMP-8, foram utilizados os animais resistentes ao envelhecimento acelerado SAMR-1 (\"senescence-accelerated mice-resistant\", n = 10). Foram aplicados testes de comportamento para avaliar a memória espacial e aversiva, bem como o comportamento de ansiedade desses animais. Foi verificado que tratamento com lítio em microdose promoveu a manutenção da memória espacial e aversiva ao longo do envelhecimento. Os testes de avaliação de ansiedade mostraram um efeito positivo da microdose do lítio na redução do estado ansioso / Due to an increase in life expectancy, questions arise about the quality of those years people will live more. During the aging process, natural changes occur that can result in physiological dysfunctions. The brain can change and adapt during this process and that can compromise its effectiveness. Among the most common dysfunction to the central nervous system is Alzheimer\'s disease (AD), which compromises cognitive function, learning and memory. The current therapeutic approach used in the treatment of AD is not able to reverse functional losses in the brain. Besides, it can cause some unwanted side effects. Therefore, an alternative or adjuvant in the treatment of memory loss in AD is necessary. Our research group demonstrated the effect of microdose lithium carbonate in stabilizing memory in previous studies. However, there is still much to be discover regarding molecular aspects related to treatment with this ion. The present study aimed to evaluate the behavioral aspects of the microdose lithium effect on memory and anxiety in Senescence accelerated mouse prone (SAMP-8). For that purpose, we used female SAMP-8 mice (senescence-accelerated mouse prone). SAMP-8 mice were divided into 2 groups: one group that received only oral filtered water during the whole aging process (n = 12) and one group that received 0.25 mg / kg lithium carbonate (n = 12). SAMR-1 (senescence-accelerated mice-resistant, n = 10) were used as a control. Behavior tests were applied to evaluate the aversive and spatial memory, as well as animals\' anxiety behavior. Treatment with microdose lithium promoted the maintenance of the spatial and aversive memory in SAMP-8 MICE along the aging process. Anxiety testing showed a positive effect of microdose lithium on reducing anxiety in SAMP-8

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-09-28T16:05:29Z No. of bitstreams: 1 Tese_ODONTO_Maria do Rosário Santos Freire.pdf: 2163692 bytes, checksum: 3ed60e03fbdf28fea9477809a4b31df3 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2016-10-07T12:28:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_ODONTO_Maria do Rosário Santos Freire.pdf: 2163692 bytes, checksum: 3ed60e03fbdf28fea9477809a4b31df3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-07T12:28:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ODONTO_Maria do Rosário Santos Freire.pdf: 2163692 bytes, checksum: 3ed60e03fbdf28fea9477809a4b31df3 (MD5) / À CAPES / A mucosite bucal (MB) é um efeito adverso muito doloroso e frequentemente relacionado aos tratamentos de radioterapia (RxT) em cabeça e pescoço e quimioterapia (QT) oncológica. Formas de preveni-la, novos métodos terapêuticos são amplamente investigados visando melhor qualidade de vida para esta população, impedir a interrupção do tratamento, o que poderia comprometer a cura e sobrevida do paciente. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito da fotobiomodulação com luz laser nos espectros vermelho (V) e infravermelho (IV) (P=40mW, irradiações de 30” em quatro pontos na fluência de 1,2J/cm2) e LED (P=150mW e tempo de 16”, DE=4,8J/cm2), na prevenção e tratamento da MB, secundária ao tratamento quimioterápico. Para tal, hamsters da linhagem Sirius dourados, foram submetidos à QT à base de 5-Fluorouracil (5-FU) e indução da MB, e posteriormente suas mucosas jugais foram tratadas com lasers V (670nm) e IV (780nm) e LEDs V (680nm) e IV (850nm). As irradiações foram realizadas a cada 48 horas e nos grupos preventivos iniciaram tratamento com luz um dia antes do protocolo de QT d(-1), enquanto os terapêuticos em d(+3). Os animais foram mortos aos sete e 14 dias e a mucosa jugal removida, preparada e avaliada histologicamente. Os animais ainda foram analisados de forma objetiva clinicamente, quanto ao grau de MB e massa corporal, mensurada no início e ao final dos dias experimentais; subjetivamente foi observada xerostomia, alopecia e injesta alimentar. Os resultados revelaram uma perda de massa corporal nos controles-positivos (QT e mucosite-indução) e em todos os grupos experimentais, sendo esta significante (teste t de Student; p< 0,05) principalmente nos animais mortos após sete dias, tanto nos grupos tratados com lasers quanto com LEDs. Histologicamente, apresentaram discreta inflamação predominantemente linfo-plasmocitária que tendeu a diminuir com o decorrer do experimento. Nos grupos lasers, tanto de forma preventiva quanto terapêutica, essa intensidade de inflamação foi mantida, a não ser quando do uso do laser V de forma preventiva (após sete dias). Em alguns espécimes tratados com LED V de forma terapêutica, o grau de inflamação chegou a ser moderado. A congestão vascular, ausente nos grupos controles-positivos, foi observada de intensidade discreta a severa, principalmente nos animais submetidos à fotobiomodulação com laser. Necrose tecidual foi um achado relativamente comum nos animais tratados com LED IV de forma terapêutica, mesmo grupo no qual a perda da integridade epitelial foi frequente e a fibrose tecidual foi encontrada em todos os grupos avaliados. A análise estatística (Qui-quadrado; α= 5%) revelou que os achados histológicos dos animais testados diferiram significativamente daqueles encontrados nos grupos controles-positivos (p< 0,05). Concluiu-se que a fotobiomodulação das luzes usadas neste estudo podem significar melhora para prevenção e tratamento dos quadros de MB pós-quimioterapia.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-12-01T09:43:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2355258 bytes, checksum: 9605911a14a218da7f730d18bd11546d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-01T09:43:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2355258 bytes, checksum: 9605911a14a218da7f730d18bd11546d (MD5) Previous issue date: 2017-08-04 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O Vírus Mayaro (MAYV) pertence ao gênero Alphavirus e a família Togaviridae. Ele está incluído no grupo dos alfavírus artritogênicos, que também compreende o Vírus Ross River (RRV), Vírus Chicungunya (CHIKV) Vírus Sindbis (SINV), Vírus O’nyong-nyong (ONNV), os quais são responsáveis por causar surtos de poliartralgia ou poliartrite muitas vezes crônicas e debilitantes. O MAYV é responsável por surtos esporádicos de doença febril aguda em comunidades rurais de países da América do Sul. A febre Mayaro é uma doença autolimitante que pode variar de leve a moderadamente severa. Os sinais clínicos incluem dor de cabeça, febre, erupção cutânea, fotofobia, mialgia e artralgia, que pode ser persistente. Os casos de febre Mayaro afetam principalmente pessoas que trabalham ou residem próximas as áreas de florestas, pois o MAYV é um patógeno zoonótico, mantido na natureza em ciclos silvestres e rurais. Esses ciclos envolvem o mosquito Haemogogus janthinomys como vetor e vertebrados como hospedeiros. No Brasil os casos de febre Mayaro são comumente relatados em áreas rurais das Regiões Norte e Centro Oeste do país, embora, casos recentes têm sido descritos em áreas urbanas de Manaus e Mato Grosso. Esses relatos destacam a preocupação com o potencial de emergência e urbanização do MAYV no Brasil e outros países, uma vez que a artrite e miosite induzidas pelo MAYV podem ser debilitantes e com considerável impacto na qualidade de vida das pessoas sendo, além disso, pouco compreendida. Por isso, o objetivo deste trabalho foi estabelecer um modelo animal para estudo da patogênese induzida pelo MAYV. No experimento foram utilizados camundongos Balb/c com 15 dias de idade, os quais foram infectados por duas vias distintas: abaixo do membro torácico e na almofada da pata do membro pélvico. Os animais foram avaliados em intervalos de 24 horas por 21 dias, para aparecimento de sinais clínicos, quanto ao ganho de peso, e perda de forca pelo teste físico Wire-hang. Também foram realizadas analises histológicas do músculo e articulação do tornozelo. A resposta imune foi acessada pela quantificação de citocinas no soro e tecido por citometria de fluxo, e além disso também foi realizado o teste de dor. Os resultados demonstraram que o MAYV induziu doença aguda nos animais, os quais apresentaram piloereção, postura encurvada, irritação no olho e leve alteração da marcha. No teste físico ambos os grupos tiveram perda de resistência, o que estava associado aos danos histopatológicos, que incluiu miosite, artrite, tenossinovite e periostite. A resposta imune foi caracterizada por uma forte resposta inflamatória mediada pelas citocinas TNF-α, IL-6 e INF-γ e quimiocina MCP-1, seguida pela ação das citocinas IL-10 e IL-4. Portanto, os camundongos Balb/c representam um modelo promissor para estudo dos mecanismos envolvidos na patogênese, resposta imune e futuramente como plataformas para testes de antivirais e vacinas. / Virus Mayaro (MAYV) belongs to the genus Alphavirus and the Togaviridae family. It is included in the arthritogenic alphavirus group, which also comprises Ross River Virus (RRV), Chicungunya Virus (CHIKV), Sindbis Virus (SINV), O'nyong-nyong Virus (ONNV), which are responsible for causing polyarthralgia or polyarthritis outbreaks often chronic and debilitating. The MAYV is responsible for sporadic outbreaks of acute febrile illness in rural communities in South American. Mayaro fever is a self-limiting disease that can range from mild to moderately severe. Clinical signs include headache, fever, rash, photophobia, myalgia, and arthralgia that may be persistent. Cases of Mayaro fever mainly affect people who work or reside near to forest areas, because the zoonotic pathogen MAYV is maintained in nature in wild and rural cycles. These cycles involve the mosquito Haemogogus janthinomys as vector and vertebrates as hosts. In Brazil cases of Mayaro fever are commonly reported in rural areas of North and Midwest regions of the country, however, recent cases have been described in urban areas of Manaus and Mato Grosso. These reports highlight the concern about the potential for emergency and urbanization of the MAYV in Brazil and other countries, since the arthritis and myositis induced by the MAYV can be debilitating and have considerable impact on the quality of life of people, and it is not well understood. Therefore, the objective of this work was to establish an animal model to study the pathogenesis induced by the MAYV. In the experiment, 15-day-old Balb / c mice were infected by two distinct pathways, below forelimb and in the in the rear footpad. The animals were evaluated at 24-hour intervals for 21 days, for appearance of clinical signs, regarding weight gain, and loss of strength by the physical test Wire-hang. Histological analyzes of muscle and ankle join were also performed. The immune response was accessed by the quantification of cytokines in serum and tissue by flow cytometry, and the pain test was also performed. The results demonstrated that the MAYV induced acute disease in the animals, which showed ruffled fur, hunched posture, eye irritation and slight gait alteration. In the physical test, both groups had loss of resistance, which was associated with histopathological damage, including myositis, arthritis, tenosynovitis and periostitis. The immune response was characterized by a strong inflammatory response mediated by cytokines TNF-α, IL-6 and INF-γ and chemokine MCP-1, followed by the action of IL-10 and IL-4 cytokines. The results show that Balb / c mice represent a promising model for studying the mechanisms involved in the pathogenesis and for future tests of antivirals and vaccines.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-06-05T22:12:46Z No. of bitstreams: 1 TESE Wilson Viana de Castro Melo.pdf: 5394290 bytes, checksum: ec9f8de7a7593b5bedb21a944a92fe04 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-05T22:12:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Wilson Viana de Castro Melo.pdf: 5394290 bytes, checksum: ec9f8de7a7593b5bedb21a944a92fe04 (MD5) Previous issue date: 2016-10-31 / Utilizando modelo animal, esta pesquisa buscou avaliar os efeitos a longo prazo da radiação ionizante sobre as proteínas contráteis (actina e miosina) de dois diferentes músculos esqueléticos, Sóleo e Extensor Longo dos Dedos (EDL), em ratos submetidos à desnutrição precoce. Para tanto, ratos da linhagem Wistar foram divididos em quatro grupos experimentais: Normonutrido; Desnutrido; Normonutrido-irradiado e Desnutrido-irradiados, compostos por 9 animais cada. De acordo com o grupo a que pertenciam, para a simulação de desnutrição perinatal foi empregada dieta a 8% de caseína, enquanto que em relação aos grupos de animais a serem irradiados de corpo inteiro (Total Body Irradiation – TBI), o protocolo utilizado foi o de exposição, aos 28 dias, a uma única dose de 2,5 Gy, a partir de uma fonte de cobalto-60 (taxa de dose 75 cGy/min). Aos 90 dias de idade, todos os animais foram eutanasiados por decapitação, seguido de coleta de sangue e remoção dos músculos. As proteínas séricas foram quantificadas pelo Método do Biureto e Verde de Bromocrezol, enquanto que expressão das proteínas contráteis musculares foram mensuradas pela técnica de Western Blotting. Os dados foram submetidos a testes de homogeneidade e normalidade, teste t de Student e análise de variância bidimensional (ANOVA 2-fatores) seguida de teste de comparação múltiplas de Tukey. Os resultados demonstraram que: a TBI e a desnutrição, conjuntamente, provocaram perda de massa corporal; isoladamente, a TBI levou à uma redução na concentração das proteínas séricas; a desnutrição provocou aumento na expressão de miosina I nos músculos Sóleo e EDL; a TBI provocou aumento na expressão de miosina IIB nos músculos Sóleo e EDL; a desnutrição e a TBI agindo conjuntamente provocaram aumento na expressão de miosina IIB no músculo EDL. A presente investigação aponta para a necessidade de mais estudos abrangendo diferentes doses e idades distintas, permitindo extrapolar para crianças e jovens que são submetidos a tratamento envolvendo TBI, no sentido de prevenir condições patológicas na idade adulta e minimizar os efeitos deletérios da radiação ionizante sobre a função muscular. / Using an animal model, this study was designed to evaluate long-term effects of ionizing radiation to the contractile proteins (actin and myosin) of two different skeletal muscles, Soleus and Extensor Digitorum Longus (EDL) in rats with early malnutrition. For this, Wistar rats were divided into four groups: Normal nourished; Malnourished; Irradiated-Normal nourished and Irradiated-Malnourished, composed of nine animals each group. According to the group to which they belonged, for the simulation of perinatal malnutrition was employed diet to 8% casein, while in relation to the groups of animals that were submitted to TBI (Total Body Irradiation) the protocol used was the exposure, after 28 days, with a single dose of 2.5 Gy, from a cobalt-60 source (dose rate: 75 cGy / min). At 90 days of age, all animals were sacrificed by decapitation, followed by blood collection and removal of the muscles. Serum proteins were quantified by Biuret method and Bromocrezol Green, while expression of muscle contractile proteins were measured by the technique of Western blotting. The data were subjected to homogeneity and normality tests, Student's t-test and analysis of two-dimensional variance (ANOVA two-ways) followed by Tukey's multiple comparison test. The results showed that: both TBI and malnutrition caused loss of body weight; isolatedly, TBI led to a reduction in the concentration of serum proteins; malnutrition caused an increase in myosin-I expression in Soleus and EDL muscles; TBI caused an increase in myosin-IIB expression in Soleus and EDL muscles; malnutrition and TBI acting together provoked an increase in myosin-IIB expression in EDL muscle. This research points to the need for more detailed studies with different doses at different ages, in order thus, extrapolate for children and young people who are submitted to treatment involving TBI, in the sense to prevent pathological conditions in adulthood and minimize the deleterious effects of ionizing radiation on muscle function.

Submitted by Marta Toyoda (1144061@mackenzie.br) on 2017-01-06T16:21:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Ana Miriã Pacifico.pdf: 777682 bytes, checksum: 45b0329e3b048868550b9ecf6fd57735 (MD5) / Approved for entry into archive by Paola Damato (repositorio@mackenzie.br) on 2017-01-06T19:01:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Ana Miriã Pacifico.pdf: 777682 bytes, checksum: 45b0329e3b048868550b9ecf6fd57735 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-06T19:01:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Ana Miriã Pacifico.pdf: 777682 bytes, checksum: 45b0329e3b048868550b9ecf6fd57735 (MD5) Previous issue date: 2016-08-18 / Fundo Mackenzie de Pesquisa / Experimental studies show evidence that rats subjected to neonatal seizures have morphological and cognitive changes, also exhibiting autistic behavior characterized by low preference for social novelty, social discrimination deficits and behavior type anxious. However, the mechanisms that account for these changes are not yet known. Several lines of evidence show that Oxytocin (OT) is present in key regions for social recognition, such as the medial amygdala and the hippocampus. We postulate that the deficiency in signaling mediated by OT on neural network related to the social brain responds by impaired sociability and increased emotionality subsequent neonatal seizure. This study aims to assess the social recognition memory and gene expression of OT and its receptor (OTR) in animals with neonatal status epilepticus. Wistar rats were adult males submitted to status epilepticus on the ninth day of life (P9) the administration of pilocarpine (350 mg / kg, ip) and the controls received saline 0.9% (0.1 ml / 10 g). In P90 social memory was evaluated by habituation/deshabituation paradigm. At the end of behavioral testing, the animals were anesthetized and decapitated to remove the structures of study (amygdala, hippocampus, and hypothalamus). Thereafter it was performed gene expression analysis of oxytocin and its receptor in the aforementioned tissues by real-time PCR. In social memory test experimental animals had shorter social research, injury indicative of the motivation system / reward and loss of habituation / deshabituation, suggesting impairment in social recognition memory. The gene expression of oxytocin did not differ between the groups in the analyzed structures, but there was a small decrease in gene expression of oxytocin receptor in the hippocampus. Thus concludes the neonatal status epilepticus in rats produces memory deficits in social recognition and motivation /mesolímibic reward systems. This work demonstrated that animals subjected to neonatal status epilepticus have reduced exploration of social novelty, suggesting impairment in motivation system / mesolimbic reward and social recognition memory that may be related to reduced expression of oxytocin receptors in the hippocampus. / Estudos experimentais mostram evidências de que ratos adultos submetidos às convulsões neonatais apresentam mudanças morfológicas e cognitivas, exibindo também comportamento autista caracterizado pela baixa preferência pela novidade social, déficit de discriminação social e comportamento tipo ansioso. Porém, os mecanismos que respondem por estas alterações ainda não são conhecidos. Várias evidências demonstram que a ocitocina (OT) está presente em regiões importantes para reconhecimento social, tais como a amígdala medial e o hipocampo. Postulamos que a deficiência na sinalização mediada pela OT na rede neural relacionada com o cérebro social responda pelo prejuízo na sociabilidade e pelo aumento da emocionalidade subsequente à convulsão neonatal. Este trabalho tem como objetivo avaliar a memória de reconhecimento social e a expressão gênica da OT e do seu receptor (OTR) em animais submetidos ao status epilepticus neonatal. Foram utilizados ratos Wistar machos adultos submetidos ao status epilepticus no nono dia de vida (P9) pela administração da pilocarpina (350 mg/kg, ip) e os controles receberam salina 0.9% (0,1 mL/10 g). Em P90 foi avaliada a memória social pelo paradigma de habituação/desabituação. Ao fim dos testes comportamentais, os animais foram anestesiados e decapitados para a retirada das estruturas de estudo (amígdala, hipocampo, e hipotálamo). Posteriormente foi realizada a análise da expressão gênica da ocitocina e seu receptor nos tecidos citados, por meio da PCR em tempo real. No teste de memória social os animais experimentais apresentaram menor tempo de investigação social, indicativo de prejuízo no sistema de motivação/recompensa e prejuízo de habituação/desabituação, sugestivo de prejuízo na memória de reconhecimento social. A expressão gênica da ocitocina não diferiu entre os grupos nas estruturas analisadas, mas observou-se uma pequena redução na expressão gênica do receptor de ocitocina no hipocampo. Com isso conclui-se o status epilepticus neonatal em ratos produz déficit na memória de reconhecimento social e do sistema de motivação / recompensa mesolímibico. O presente trabalho mostrou que animais submetidos ao status epilepticus neonatal apresentam redução da exploração da novidade social, sugestivo de prejuízo no sistema de motivação/recompensa mesolímbico e da memória de reconhecimento social que pode estar relacionada a redução da expressão dos receptores da ocitocina no hipocampo.

Orientador: Mariza Akemi Matsumoto / Resumo: O processo de senescência acarreta uma série de modificações fisiológicas com declínio das funções das atividades celulares e sistêmicas que se manifestam de maneira mais importante na população feminina pelo evento da menopausa, como a osteoporose. A fim de se minimizar tais efeitos, há a possibilidade de se utilizar medicamentos que diminuem o processo de remodelação óssea como os bifosfonatos nitrogenados (BF). Entretanto, o uso dessas drogas está intimamente relacionado ao desenvolvimento de osteonecrose dos maxilares (OM), principalmente quando associado a outros fatores de risco como as cirurgias bucais. Sabe-se que fisiologicamente a dinâmica do tecido ósseo depende também de eicosanóides derivados do metabolismo do ácido araquidônico (AA), como as enzimas cicloxigenase (COX) e 5 lipoxigenase (5LO). Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi analisar o efeito BF ácido zoledrônico (ZL) e sua relação com o desenvolvimento da OM em camundongos fêmeas senescentes 129/Sv com e sem modificação genética para a enzima 5LO. Para tanto, foram utilizados 40 camundongos fêmeas senescentes 129/Sv, sendo 20 WT e 20 com alteração no gene 5LO (129 Alox5tm1Fun/J) (5LOKO), divididas em grupos: WT, tratadas com 0,01 ml de solução salina 0,9% estéril (SS) via intraperitoneal (IP) e ZL, tratadas com 250µg/Kg de ácido zoledrônico (ZL) IP diluído em solução salina estéril, ambas administradas 1 vez/semana por 7 semanas. Os grupos foram compostos por 5 animais cada (WT Controle – 7 e 21d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Senescence brings a number of physiological modifications with the decrease of cell and systemic activities and function that manifest in an important way in female population due to the event of menopause, as osteoporosis. In order to diminish these effects, there is the possibility of taking medication that decrease bone remodeling process, as the bisphosphonates containing nitrogen (BF). However, the use of these drugs is intimate related with the development of the osteonecrosis of the jaws (ON), especially when associated to other risk factors as oral surgery. It is known that physiologically, the dynamics of bone tissue also depends on the eicosanoids derivate from the arachidonic acid metabolism (AA), such as cyclooxygenase (COX) and 5 lipoxygenase (5LO) enzymes. In this way, the aim of the present study was to analyze the effects of the BF zoledrônico acid (ZL) and its relation with de development of ON in 129/SV old female mice with or without genetic modification for 5LO. Forty animals, 20 WT and 20 with 5LO gene alteration (129 Alox5tm1Fun/J) (5LOKO) were divided in groups: WT, treated with 0.01 ml of sterile 0.9% saline solution (SS) intraperitoneal (IP), and ZL, treated with 250μg/Kg of ZL IP diluted in SS, both administered once a week for 7 weeks. Groups contained 5 animals each (WT Control – 7 and 21 days, WT ZL ,7 and 21 days, 5LOKO Control, 7 and 21 days, and 5LOKO ZL, 7 and 21 days), and the maxillae removed for microCT, histopathology, birefringence, immun... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre