Recientemente ha comenzado a surgir evidencia que relaciona a p300 con el cáncer. Sin embargo, aún no está claro cuál es el rol de la proteína en esta patología ya que hay evidencia que indica que puede funcionar como un supresor tumoral o como una oncoproteína. La información disponible sobre la relación entre p300 y el carcinoma mamario está basada generalmente en estudios en líneas celulares siendo escasos los trabajos en modelos animales o utilizando biopsias humanas. En este trabajo de tesis se pudo demostrar que la inhibición de la actividad acetilasa de p300 disminuye la supervivencia celular de las líneas LM3 y MDA-MB-231 e induce apoptosis en la línea celular LM3. Además se demostró que dicha inhibición disminuye la migración celular de las líneas LM3 y MDA-MB-231 y disminuye la invasión celular y la formación de lamelipodios en la línea celular LM3. En el modelo murino de trasplante singeneico de células LM3 se demostró que la inhibición de p300 reduce la carga tumoral, la invasión a la cavidad abdominal y el número de metástasis pulmonares. La reducción del tamaño tumoral fue acompañada de una disminución del índice mitótico y de los niveles de Ki-67 y de un incremento de la expresión de Bax. Al estudiar la expresión de p300 en el modelo murino transgénico MMTV-PymT y en el de carcinogénesis inducida con DMBA en rata se observó que p300 se encuentra altamente expresado y en una localización citoplasmática en las células del tumor comparado con las de la glándula mamaria normal. Además se observó que parte del p300 citoplasmático se encuentra en estructuras con características de agresomas en las células tumorales de un cultivo primario derivado de este último modelo animal, pero no en las células normales del mismo cultivo. En biopsias humanas de carcinomas mamarios se ha podido demostrar una mayor expresión de p300 en tejidos tumorales que en las zonas histológicamente normales adyacentes al tumor y que en el tejido mamario no maligno. También se detectó la inusual localización citoplasmática de p300 en los tejidos malignos y se pudo demostrar que esta localización se asocia con un menor tamaño tumoral, menor tasa de recaída y mayor sobrevida global de las pacientes y en los tumores triple negativos también con menor estadio tumoral. En conjunto, los resultados de esta tesis sugieren que la acción oncogénica de p300 se realiza en el núcleo a través de su acción sobre la regulación de la transcripción génica y que al ser trasladado al citoplasma esta acción no puede realizarse porque está fuera del núcleo, porque además en el citoplasma es degradado y/o secuestrado en agresomas y posiblemente también por que ejerce nuevas funciones específicas de su ubicación citoplasmática que pueden tener efectos antitumorales. También indican que la localización de p300 puede ser de potencial interés como factor pronóstico y señalan la necesidad de continuar investigando los mecanismos celulares y moleculares que la desregulación de esta proteína podría estar afectando, contribuyendo así al desarrollo del cáncer de mama. / Recently, an increasing body of evidence indicates that p300 could play a role in cancer. Nonetheless, the role of the protein in this disease remains unclear, since there is evidence indicating that it can function both as a tumor suppressor and as an oncoprotein. The available information about the relationship between p300 and breast carcinoma is usually based on studies in cell lines although there have been few studies using animal models or human biopsies. In this thesis we demonstrated that the inhibition of the p300 acetyltransferase activity decreases cellular viability in LM3 and MDA-MB-231 cell lines and induces apoptosis in LM3 cell line. Furthermore, we demonstrated that p300 inhibition reduces cellular invasion in LM3 and MDA-MB-231 cell lines and decreases the invasiveness and lamellipodium formation in LM3 cells. In a syngeneic murine model of subcutaneous transplantation of LM3 cells, we demonstrated that inhibition of p300 reduces tumor burden, tumor invasion into the abdominal cavity and lung metastases. This reduction in tumor burden was accompanied by a decrease in the mitotic index and Ki-67 levels and an increase in Bax expression. When we have studied the expression of p300 in the MMTV-PymT transgenic murine model and in the DMBA-induced rat model, we observed stronger expression and a cytoplasmic localization in the tumor cells in comparison with normal mammary glands. In addition, we have observed that cytoplasmic p300 is partially localized in aggresome-like structures in tumor- but not in normal mammary gland-derived primary cell cultures from the rat animal model. Moreover, the analysis of p300 expression in human breast cancer samples showed that p300 immunoreactivity is significantly higher in the cancerous tissues than in the non-malignant mammary tissues and in the histologically normal adjacent tissues. Interestingly, p300 was observed in the cytoplasm, and María Eugenia Fermento Página 9 the rate of cytoplasmic p300 was higher in breast cancer than in non-tumor tissues. Importantly, we found that cytoplasmic localization of p300 is associated with a reduced tumor size, lower recurrence rates and an increase in the overall survival time of patients. Furthermore, in triple negative breast cancer cytoplasmic p300 is also associated with lower tumor stage. Together, the results obtained in this thesis suggest that p300 acts as an oncogene when localized in the nucleus through its action upon the regulation of gene transcription. When p300 is translocated to the cytoplasm, its oncogenic action cannot be performed because it is outside of the nucleus, because it is degraded and/or sequestered in aggresomes and probably also because it may exert cytoplasmic specific functions which might have antitumor effects. Also, the results obtained in this thesis suggest that p300 localization could be potentially interesting as a prognostic factor and indicate the necessity to continue studying the cellular and molecular mechanisms in which the p300 is involved and whose deregulation could contribute to breast cancer development.

O modelo de recaída cue-induced é comumente utilizado para o estudo da recaída ao uso de drogas causada pela exposição dos animais à estímulos ambientais previamente associados à droga. Quando o álcool é a droga a ser estudada, um estímulo contextual (S) e um reforçador condicionado (Sr) são os estímulo frequentemente associados ao seu consumo. Embora esse modelo seja consolidado na área, sua validade de constructo vem sendo criticada; entre essas críticas estão o fato de que apenas o Sr adquire controle sobre a resposta de procura pela droga, além de que pouco se sabe sobre os sistemas neurais envolvidos nessa recaída. Portanto, este trabalho teve como objetivo principal avaliar o papel dos processos operantes no procedimento do modelo de recaída ao uso de álcool cue-induced, além de avaliar a participação de sistemas neurais ligados ao estresse nessa recaída. Ainda, este trabalho teve como objetivo melhorar o procedimento desse modelo animal. Os experimentos apresentados no Capítulo 1 tiveram como objetivo melhorar o controle exercido por S sobre a recaída, aprimorando o modelo, além de avaliar processos de aprendizagem associativa que ocorrem nesse modelo. Dois experimentos foram realizados para atingir esses objetivos. No primeiro, dois grupos de ratos foram treinados no modelo cue-induced, porém um grupo foi treinado sob o esquema de razão fixa 1 (FR1) e o outro sob o esquema de razão variável 5 (VR5). No segundo experimento, os ratos foram treinados nesse modelo, porém os estímulos S e Sr foram apresentados separadamente na fase de treino. Os resultados desses experimentos indicaram que o treino separado foi eficaz em melhorar o controle de S sobre a recaída e que a troca de esquema de reforço não foi eficaz para aumentar esse controle. Os resultados também mostraram que quando os estímulo são treinados em conjunto o Sr sombreia o S e quando eles são treinados separadamente e testados como um composto ocorre somação. Os experimentos apresentados no Capítulo 2 tiveram o objetivo de avaliar se eixos neurais ligados à resposta ao estresse estariam envolvidos na recaída mimetizada pelo modelo cue-induced. Ratos Marchigian Sardinian Preferring (msP) e Wistars foram treinados no modelo cue-induced e, na fase de testes, Antalarmin, Metirapona e corticosterona (CORT) foram injetados i.p. nos animais. Os resultados mostraram que o Antalarmin (dose 20 mg/kg) bloqueou a recaída em ambas as cepas, que a Metirapona (doses 50 mg/kg e 100 mg/kg) bloqueou a recaída nos ratos msP e apenas a dose de 100 mg/kg bloqueou a recaída nos ratos Wistars e que a CORT não teve efeito na em nenhuma das cepas. Esses resultados mostraram o procedimento do modelo de recaída cue-induced pode ser aprimorado principalmente no que tange ao controle do S sobre a recaída. Os resultados também mostraram que respostas ao estresse influenciam a recaída observada nesse modelo / The cue-induced relapse model is a model commonly used to study relapse caused by environmental stimuli. In its procedure, the environmental stimuli are usually a contextual stimulus (S) and a conditioned reinforcer (Sr). Although this model is extensively used its construct validity has been criticized. Between these critics are the fact that only the Sr controls the drug seeking responses because this stimulus overshadows the S, in addition to the fact that little is known about the neural systems that are involved in cue-induced relapse. Therefore, this work had as main purpose to evaluate operant process in the alcohol cue-induced relapse and evaluate the role of stress neural systems in this relapse. In adition, this work had also the purpose to improve the animal model procedure. The experiments presented in Chapter 1 had the purpose to increase the control exercised by S over relapse and to evaluate associative learned in this model procedure. Two experiments were conducted to achieve this goal. In the first one two groups of rats were trained in the cue-induced relapse model but one group was trained under the fixed ratio 1 (FR1) and the other under the variable ratio 5 schedule (VR5). In the second experiment, rats were trained in the cue-induced procedure, but the stimuli S and Sr were presented separately during the training phase. The results showed that separate training was effective in increase the S control over relapse and that changing the schedule of reinforcement was not effective in increase this control. Also, results showed that summation occurred when the stimuli are trained separately and tested as a compound. The experiments presented in Chapter 2 had the purpose to evaluate if neural axis related to organic stress responses are involved in cue-induced alcohol relapse. Also, it was investigated if the HPA is involved in relapse. Marchigian Sardinian Preferring (msP) rats and Wistars rats were trained in the cue-induced model and during the test phase Antalarmin, Metyrapone and corticosterone (CORT) were injected i.p. in the animals. The results showed that Antalarmin (dose 20 mg/kg) blocked relapse produced by environmental cues in both rats strains, Metyrapone (doses 50 mg/kg and 100 mg/kg) blocked relapse in msP rats and only dose 100 mg/kg blocked relapse in Wistar rats and CORT had no effect on relapse in both strains. These results showed that the procedure used in the cue-induced model can be improved mainly in regard to the control from S over relapse. The results also showed that stress responses influence relapse in this model

A realização deste estudo teve como objetivo a estimação de componentes de (co) variância e parâmetros genéticos das características: peso (PES18), perímetro escrotal (PE18), precocidade de acabamento (PREC), musculosidade (MUSC) e altura (ALT), mensuradas aos 18 meses de idade, ganho de peso da desmama ao sobreano (GP345) e idade ao primeiro parto (IPP) de bovinos Nelore, utilizando-se modelos multicaracterísticas. Foram avaliados dados de 107.332 mil bovinos criados entre os anos de 1994 e 2009 em fazendas localizadas nos estados de São Paulo, Mato Grosso do Sul e Goiás, e pertencentes ao Programa de Seleção da raça Nelore da Agropecuária CFM Ltda. Utilizaram-se três diferentes modelos: modelo multicaracterísticas padrão, modelo de componentes principais e de análise de fatores, esses dois últimos contemplando os três primeiros componentes e fatores, os quais foram comparados por critérios de informação de Akaike (AIC) e Bayesiano de Schwarz (BIC). O modelo que utilizou a técnica da análise de fatores contemplando os dois primeiros fatores (MFA2) apresentou melhor ajuste, seguido do modelo que contemplou os 3 primeiros fatores (MFA3). Estes possibilitaram estimativas próximas das realizadas pelos modelos multicaracterísticas padrão, às quais se mostraram parecidas com os valores já relatados e estimados no Brasil. / This study was objectified the estimation of (co)variance components and genetics parameters of traits: weight (W18), scrotal circumference (SC18), precocity finishing (PREC), muscularity (MUSC) and height (H), measured at 18 months of age, weight gain from weaning to yearling (WG345) and age at first calving (AFC) from Nellore cattle, using multi trait models, with analysis multi trait standard, analysis of principal components and factor analysis. Were evaluated data from 107,332 bovines, managed between the years of 1994 and 2009 in farms localized on states of São Paulo, Mato Grosso do Sul and Goias, and were participants in Nellore Selection Program from CFM Company Ltda. Was utilized three different models, multi trait model, model of principal components and factor analytic, these two last contemplating the four first principal components and factors analytics and that was compared by information criteria of Akaike (AIC) and Bayesian of Schwarz (BIC). The model that used the factor analysis technique contemplating the first two factors (MFA2) presented better adjustment, followed by the model that contemplated the first 3 factors (MFA3). These allowed close estimates to those performed by the standard multi trait models, which were similar to the values already reported and estimated in Brazil.

A psoríase é uma doença de pele inflamatória crônica, que afeta cerca de 2-4% da população mundial. Se desenvolve ao longo do tempo, principalmente no final da adolescência ou início da idade adulta e depende de uma complexa interação entre fatores genéticos e ambientais. Dados experimentais demostram que a dermatite induzida por imiquimode (IMQ) em camundongos assemelha-se estreitamente às lesões de psoríase humana, tanto nas características fenotípicas e histológicas como no desenvolvimento das lesões na epiderme. O estudo avaliou os efeitos anti-inflamatórios do óleo de semente de maracujá (Passiflora edulis) no tratamento da psoríase, utilizando a análise histológica e imunológica da epiderme. O experimento foi realizado com 36 camundongos Balb/c, os quais foram submetidos à indução da psoríase por imiquimode, por 10 dias consecutivos. O tratamento foi realizado com óleo de semente de maracujá in natura 100%, pomada LECIGEL® 2%, pomada associação de óleo de semente de maracujá 20% e LECIGEL® 2%, por 15 dias. Tanto o óleo da semente do maracujá quanto a associação do mesmo ao LECIGEL® diminuíram o quadro inflamatório induzido por imiquimode nas orelhas tratadas. Através das análises imuno-histoquímicas realizadas na epiderme (PCNA, IL-6, VEGF, CD34), observou-se um aumento na formação de corpos apoptóticos, diminuição a hiperplasia epitelial e redução do infiltrado inflamatório. Os resultados deste experimento demonstraram que o óleo da semente do maracujá desempenha um efeito anti-inflamatório no tratamento da psoríase induzida por imiquimode. / Psoriasis is a chronic inflammatory skin disease that affects about 2-4% of the world\'s population. It develops over time, especially in late adolescence or early adulthood and depends on a complex interaction between genetic and environmental factors. Experimental data show that imiquimode-induced dermatitis (IMQ) in mice closely resembles human psoriasis lesions, both in phenotypic and histological characteristics and in the development of lesions in the epidermis. The study evaluated the anti-inflammatory effects of passion fruit (Passiflora edulis) oil in the treatment of psoriasis, using the histological and immunological analysis of the epidermis. The experiment was performed with 36 Balb / c mice, which were submitted to psoriasis induction by imiquimode, for 10 consecutive days. The treatment was carried out with 100% fresh passion fruit seed oil, LECIGEL ® 2% ointment, 20% passion fruit seed oil ointment and LECIGEL ® 2% for 15 days. Both passionflower seed oil and its association with LECIGEL ® decreased the imiquimod-induced inflammation in the treated ears. Through the immunohistochemical analyzes performed on the epidermis (PCNA, IL-6, VEGF, CD34), an increase in the formation of apoptotic bodies, decrease in epithelial hyperplasia and reduction of inflammatory infiltrate was observed. The results of this experiment suggest that passion fruit seed oil has an anti-inflammatory effect in the treatment of imiquimode-induced psoriasis.

A importância da modulação da inflamação no tratamento de doenças inflamatórias bem como a dificuldade na determinação dos parâmetros de irradiação laser levou-nos a estudar os efeitos de diferentes protocolos de fototerapia com laser em baixa intensidade (potência, energia, local e momento de irradiação) no tratamento e prevenção do processo inflamatório agudo utilizando o modelo experimental de edema de pata induzido por carragenina (CGN) em três linhagens de camundongos (Balb-c, SWISS e C57BL/6). A primeira etapa do trabalho avaliou diferentes combinações de energia (1J e 3J) com diferentes potências (30, 60 e 100mW) em camundongos Balb-c irradiados na pata 1 e 2h após a injeção da CGN. A segunda etapa estudou diferentes combinações de local (pata, linfonodo inguinal e ambos) e momentos de irradiação (2 e 1h antes, 1h e imediatamente antes da CGN, 1 e 2h após e 3,5 e 4,5h após a CGN) utilizando parâmetros de irradiação fixos (1J, 100mW , 35J/cm2, área do spot 0,028cm2). A terceira etapa comparou diferentes linhagens de camundongos (Balb-c e C57Bl/6) nos melhores parâmetros de local e momento encontrados na etapa 2. Em todas as etapas foi avaliada a alteração de volume da pata através da pletismografia e o infiltrado inflamatório por histomorfometria ou análise da mieloperoxidase (MPO). Os resultados mostraram que a fototerapia com laser preveniu e tratou o edema assim como modulou o processo inflamatório com irradiações na pata e no linfonodo inguinal, de acordo com os parâmetros e a linhagem utilizada. / The importance of modulation of inflammation on the treatment of inflammatory diseases and the difficulty in determining the laser irradiation parameters has led us to study the effects of different protocols of phototherapy with low intensity laser (power, energy, time and place of irradiation) in the treatment and prevention of edema in acute inflammatory process using the experimental model of paw edema induced by carrageenan (CGN) in three strains of mice (Balb-c, Swiss and C57BL/6). The first stage of the study evaluated different combinations of energy (1J and 3J) with different powers (30, 60 and 100mW) in Balb-C mice paw irradiated 1 and 2h after injection of CGN. The second stage studied different combinations of location (foot, inguinal lymph nodes and both) and exposure time (2 and 1h before, 1h and immediately before the CGN, 1 and 2h and 3.5 and 4.5h after CGN) using fixed irradiation parameters (1J, 100mW, 35J/cm2, spot area of 0.028 cm2). The third stage compared different strains of mice Balb-c and C57BL/6) in the best local and time parameters found in step 2. At all stages, we evaluated the change in paw volume by plethysmography and inflammatory infiltrate by histomorphometry or analysis of myeloperoxidase (MPO). The results showed that laser phototherapy treated and prevented edema and modulated the inflammatory process with paw and inguinal lymph nodes irradiations accordingly with the parameters and mice strain used.

Foi desenvolvido um modelo experimental de Acidente Vascular Encéfalo Isquêmico (AVE) em suínos utilizando seis animais jovens, oriundos de granjas da região da Grande São Paulo, com 20kg de peso vivo em média, sendo todas fêmeas e hígidas. Estes foram submetidos a sedação com Quetamina (5mg/kg), Midazolan (0,5mg/kg) e Fentanil (0,005mg/kg) por via intramuscular e posteriormente intubados via oro - traqueal. A manutenção anestésica foi realizada utilizando isoflurano (vaporizador calibrado a 1,5%). Puncionou-se uma veia auricular para fluido e medicação de emergência se necessário. Os animais em plano anestésico foram submetidos a uma cateterização da artéria femoral que com auxilio de um fluoroscópio (Philips). Guiouse um cateter até a artéria carótida interna esquerda, local onde foi identificada a rede admirável epidural rostral. Mediante injeção de contraste (Telebrix), constatou-se que a cateterização apresentava-se seletiva na artéria carótida interna em posição ventral à rede admirável. Com esta confirmação fez-se a infusão de 1,0g de micro esferas de vidros que possuíam aproximadamente 0,4mm de diâmetro. Este procedimento de seletivação da artéria carótida interna foi repetido no antímero direito, realizandose a infusão de mesma quantidade de micro esferas, perfazendo um total de 2g de micro esferas de vidros por animal. Após 4 dias (96 horas) estes animais foram submetidos ao exame de ressonância nuclear magnética no Instituto de Física da USP. Para este procedimento os animais eram mantidos anestesiados com propofol (3mg/kg) por infusão continua durante todo o exame. A análise das imagens obtidas pela ressonância nuclear magnética indicou que este procedimento causou pontos de isquemia cerebral principalmente no antímero esquerda do cerebelo dos animais. Este fato confirmou as observações realizadas pela sintomatologia clínica apresentada pelos animais nos dias que antecederam o exame de ressonância nuclear magnética. Com estas lesões podemos afirmar que a metodologia desenvolvida para reprodução de AVE em suínos foi estabelecida. O modelo permite realizar estudos terapêuticos para esta doença que acomete um significativa parcela da população economicamente ativa da sociedade brasileira. / An experimental model of ischemic stroke (AVE) was investigated in healthy young female swine, at 20kg weight, of farms of São Paulo. The animals were sedated using an association of ketamine (5m/kg), midazolam (0.5mg/kg) and Fentanyl (0.005 mg/kg) IM; the maintenance was provided by tracheal entubation and isofluorane (1.5%). Fluid therapy was promoted through a catheter displaced in an auricular vein. Followed the catheterization of the femoral artery with the aid of a fluoroscope (Phillips®), the catheter was directed to the left internal carotid artery being possible the identification of the rete mirabile epidurale rostrale with the application of a radiopaque contratst. After the identification of the rete mirabile epidurale rostrale it was promoted the infusion of 1.0g of glass microsphere (0.4mm diameter); the same procedure was promoted on the right antimere through the right internal carotid artery, therefore, 2.0g of glass microsphere was injected in each animal. The animals were submitted to resonance scanning exam at day 4 (96 hours), after the surgical event, at the Physics Institute - USP. The resonance exam was carried out with the animals under intravenous anesthesia using continuous infusion of propofol (3mg/kg). The scanned images were analyzed and revealed focal cerebral ischemia at some regions mainly in the left antimere of the cerebellum, which can explain the clinical symptoms. We would infer the applied technique is suitable to develop ischemic stroke in swine and the animal modeling allows the investigation of therapeutics for this illness which compromises a significant economically.

A terapia com bisfosfonatos tem sido frequentemente empregada no tratamento de doenças metabólicas do osso e neoplasias malignas. O objetivo deste estudo foi avaliar através de análise histológica e histomorfométrica em cortes não descalcificados, a influência dos bisfosfonatos nitrogenados endovenosos associados ou não a dexametasona sobre a osseointegração de implantes instalados em tíbias de 27 ratos Wistar. Ácido zoledrônico e dexametasona foram administrados por via subcutânea nos animais dos grupos experimentais. Os animais foram acompanhados por 7, 14 e 28 dias. Nossos resultados mostraram que não houve falha na osseointegração em nenhum animal avaliado e que não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre os 3 grupos com relação à quantidade de contato entre osso e implante e presença de osso em áreas pré determinadas, nos tempos observados. No entanto nossas observações histológicas revelaram que nos animais tratados com bisfosfonatos associados ou não com dexametasona, aos 14 e 28 dias após a colocação do implante não ocorreu o fenômeno de remodelação da cortical óssea, ao contrário do grupo controle. Concluímos que a terapia com bisfosfonatos associada ou não com dexametasona não impediu a osseointegração do implante com o osso mas inibiu severamente a remodelação da cortical óssea pré existente. / Bisphosphonate therapy has been often employed in the treatment of metabolic bone diseases and malignancies. The aim of this study was to evaluate through histological and histomorphometric analysis the influence of intravenous nitrogen-containing bisphosphonates alone or combined with dexamethasone on the osseointegration of implants placed in the tibia of 27 male Wistar rats in non decalcified samples. Zoledronic acid and dexamethasone were administered through sub cutaneous injections. The animals were followed through 7, 14, and 28 days. Our results showed that there was no failure in osseointegration in any animal, and that there were no statistically significant differences among the 3 groups regarding the amount of bone-implant contact and peri-implant bone density in predetermined areas. However our histological observations revealed that animals treated with bisphosphonates, associated or not with dexamethasone, at 14 and 28 days after implant placement has not occurred the phenomenon of cortical bone remodeling, unlike control group. We conclude that bisphosphonate therapy associated or not with dexamethasone did not prevent osseointegration of the implants but severely inhibited the remodeling of pre-existing cortical bone.

O agente mutagênico N-ethyl-N-nitrosourea (ENU) é amplamente utilizado para produzir novas mutações em camundongos, dando origem aos mutantes recessivos equilíbrio (eqlb), que possui uma mutação pontual no gene NADPH oxidase 3 (Nox3), cromossomo 17 e mergulhador (mlh), no gene Otopetrin 1 (Otop1), cromossomo 5; sendo que ambos apresentam alterações vestibulares. Devido à semelhança da função do aparelho vestibular humano e do camundongo, a análise comportamental desses modelos pode ser uma valiosa contribuição para identificar alterações no controle do equilíbrio e do movimento. Deste modo, com o objetivo caracterizar o comportamento dos mutantes eqlb e mlh foram realizados os seguintes testes: avaliação da atividade geral por observação direta no campo aberto, coordenação motora na trave elevada, labirinto em cruz elevada (LCE), para avaliar o comportamento do tipo ansioso, labirinto em T e reconhecimento de objetos para avaliar a memória, além do teste de suspensão pela cauda para verificar o comportamento do tipo depressivo. Os resultados mostraram que em comparação aos camundongos BALB/c, os mutantes eqlb e mlh apresentaram redução do reflexo auricular, reflexo de endireitamento, resposta ao toque, na locomoção e na frequência de levantar. A redução do reflexo auricular, da resposta ao toque e do redução do reflexo de endireitamento mostrou um possível prejuízo do sistema psicomotor. A redução da frequência de levantar provavelmente foi consequência da dificuldade motora dos camundongos mutantes. Os resultados do teste da trave elevada indicaram que os mutantes eqlb e mlh apresentaram um prejuízo motor principalmente relacionado à coordenação motora. O tempo de imobilidade aumentado no teste de suspensão pela cauda e a incapacidade de nadar em camundongos eqlb e mlh reforçaram o papel do sistema vestibular na manutenção da percepção de gravidade, movimento e equilíbrio. / The mutagenic agent N-ethyl-N-nitrosourea (ENU) is widely used to produce new mutations in mice, giving origin to the equilíbrio (eqlb) which has a mutation in the NADPH oxidase 3 (Nox3) gene, chromosome 17 and mergulhador (mlh) in the gene Otopetrin 1 (Otop1), chromosome 5; both mutant strain showed vestibular impairment. Due to the similarity of the vestibular apparatus between human and mouse, the behavioral analysis of the mutant can be a valuable contribution to identify alterations involved in the control of balance and movement. This study aimed to characterize the behavior of eqlb and mlh mutant mice using the following behavioral tests: evaluation of the general activity by direct observation in the open field, motor coordination in the balance beam, elevated plus maze to evaluate the behavior of the anxious type, T-maze and recognition of objects to evaluate memory. In addition, tail suspension test was used to verify depressive like behavior. The results showed that in relation to the BALB/c mice, the mutants eqlb and mlh showed reduction of auricular reflex, surface-righting reflex, touch response, locomotion and rearing frequency. The reduction of the auricular reflex and the touch response pointed to the impairment of the psychomotor system, and the reduction of the surface-righting reflex showed a possible impairment of the psychomotor system. The reduction in the rearing frequency was, probably, a consequence of the motor impairment observed in the mutant strains. The results of the elevated plus maze test indicated that the mutants eqlb and mlh showed motor impairment mainly related to motor coordination. The increased immobility time in the tail suspension test and the inability to swim in eqlb and mlh mice reinforced the role of the vestibular system in maintaining the perception of gravity, movement, and balance.

A biomenbrana de látex natural (BLN) da serigueira HEVEA brasiliensis, utilizada como curativo no tratamento de úlceras crônicas em humanos, mostra-se eficaz no desbridamento e no estímulo à granulação, acelerando a cicatrização. Seu mecanismo de ação ainda é desconhecido, tornando-se importante avaliar sua atividade como implante na indução tecidual, comparando-a aos outros implantes e à cicatrização normal (SHAM). Foram utilizados camundongos C57BL/6, constituído de 5 grupos distintos pelo implante subcutâneo dorsal (1cm2): 15 implantados com BLN; 15-LUVA cirúrgica (látex desnaturado); 15-ePTFE (PoliTetraFluorEtileno Expandido - implante sintético) e 15-SHAM. A atividade dos implantes foi avaliada no 2º, 7º e 14º dias, sacrificando 5 animais/grupo/tempo para biópsias (punch-4mm). Toda pele da área implantada foi recortada e fotografada. As amostras foram submetidas a estudos histológicos por HE para contagem das células inflamatórias, fibroplasia e angiogênese, utilizando o plugin \"Cell Counter\" no software ImageJ®; pelo Tricrômio de Gomori para quantificação colagênica pelo \"Threshold\" no ImageJ®, e imunohistoquímica para iNOS, IL-1?, VEGF e TGF-?1. A partir do sobrenadante do macerado das biópsias foram realizadas as dosagens de mieloperoxidase (MPO), IL-1? e de TGF-?1 por ELISA. Macroscopicamente, viu-se maior quantidade de tecido neoformado nos animais implantados com BLN já no 2º dia, diferente dos demais grupos. À histologia (HE), constatou-se que a BLN no 2º dia estimulou denso infiltrado inflamatório, principalmente neutrófilos, seguido de maior produção de MPO e de IL-1?, diferente dos demais tratamentos (P<0,01). Com 7 e 14 dias, a quantidade de IL-1? nos grupos LUVA e SHAM foi maior que a da BLN e do ePTFE, mostrando o equilíbrio no estímulo inicial da atividade inflamatória pela BLN. Quanto a angiogênese, os grupos BLN e LUVA com 7 e 14 dias apresentaram maior formação de vasos que o ePTFE e SHAM. Entretanto, na imunohistoquímica observou-se baixa expressão de VEGF no grupo BLN no 7º e 14º dia. Quanto a fibroplasia, o ePTFE com 7 dias apresentou maior fibroplasia que todos os grupos (P<0,01). No 14º dia, a BLN apresentou maior fibroplasia, embora sem diferença estatística entre os grupos. Quanto à colagênese, pelo ImageJ® (\"Threshold\") por Tricrômio de Gomori, os implantes se comportaram de maneira semelhante, inclusive com o SHAM, exceto no 14º dia que o ePTFE apresentou colagênese maior que a LUVA e BLN (P<0,01). O grupo SHAM apresentou maior concentração de TGF-beta1 que os demais grupos no sétimo dia (P<0,01), semelhante à BLN e à LUVA no 14º, entretanto maior que o ePTFE (P<0,01). Conclui-se que a biomembrana de látex da seringueira Hevea brasiliensis atua significativamente na fase inflamatória da cicatrização, importante no recrutamento neutrofílico para o local, confirmado quantitativamente pela concentração de MPO e IL-beta1 e por imunohistoquímica. Este fato parece influenciar diretamente as fases subseqüentes do processo cicatricial, confirmada pela sua capacidade estimuladora de angiogênese, provavelmente não influenciada por VEGF, e pelo estímulo à fibroplasia independente de TGF-beat1 e sem modificação na produção colagênica. / The natural latex biomembrane (NLB) from Hevea brasiliensis rubber tree, used as dressing in the treatment of human chronic ulcers, has been showed efficient in the debridement and the granulation stimulation, accelerating the healing. Its mechanism of action is still unknown, becoming important to evaluate its activity as implantation in the tissue induction, comparing it with the other implants and with the normal healing (SHAM). Mice C57BL/6, consisting of 5 distinct groups had been used of the dorsal subcutaneous implantation (1cm2): 15 implanted with NLB; 15 with surgical GLOVE (unnatural latex); 15 with ePTFE (expanded polytetrafluorethylene - synthetic implantation) and 15 without implant (SHAM). The activity of the implants was evaluated in 2nd, 7th and 14th days. Five animals for group each time were sacrificed for biopsies with 4mm punch. All skin of the implanted area was cut and photographed. The samples had been submitted to the histology studies for haematoxylin-eosin for counting the inflammatory cells, fibroplasia and angiogenesis, using \"Cell Counter\" plugin in the ImageJ® software; by Gomori\'s thrichrome for collagen quantification using \"Threshold\" in the ImageJ®, and iNOS, IL-beta1, VEGF and TGF-beta1 immunohistochemistry. From the biopsies macerated supernatant, the myeloperoxidase assay had been carried through (MPO), IL-beta1 and of TGF-beta1 by ELISA. Macroscopically, it was observed a big amount of new tissue formed in the NLB implanted animals on 2nd day, different of the other groups. In histological analyze by H&E, it was observed that the NLB in 2nd day stimulated dense inflammatory infiltrated, mainly by neutrophils, followed of bigger production of MPO and IL-beta1, different of the other treatments (P<0,01). After 7 and 14 days, the amount of IL-beta1 in the groups GLOVE and SHAM were greater than the NLB and ePTFE, showing the balance in the initial stimulation of the inflammatory activity by the NLB. About angiogenesis, both groups (NLB and GLOVE) after 7 and 14 days had presented greater formation of vessels than ePTFE and SHAM (P<0,01).However, in the immunohistochemistry was observed a low VEGF expression in the NLB group in 7th and 14th days. Related to fibroplasia, ePTFE after 7 days presented greater fibroplasia than all the groups (P<0,01). In 14th day, the NLB presented an important fibroplasia, even so without statistic difference between the groups. The collagen proliferation evaluated by the ImageJ® (\"Threshold\") applied in Gormori\'s thrichrome stained biopsies, the implants showed similar results, also with the SHAM, except in 14th day that ePTFE presented bigger collagen proliferation than the GLOVE (P<0,01).The SHAM group presented greater concentration of TGF-beta1 than the other groups in the seventh day (P<0,01), equal to the NLB and the GLOVE in 14th, however bigger than ePTFE (P<0,01).In conclusion, natural latex biomembrane (NLB) from Hevea brasiliensis rubber tree acts significantly in the inflammatory phase of the healing process, important in the neutrophilic recruitment to injury local, confirmed quantitatively by MPO and IL-beta1 concentrations and by immuno histochemistry. This fact seems to influence directly the subsequent phases of the healing process, confirmed for its stimulatory capacity of the angiogenesis, probably not influenced by VEGF, and the fibroplasia stimulation independent of TGF-beta1 and without modification in the collagen production.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paula Katherine Vargas.pdf: 5773266 bytes, checksum: a57cf65240bf44b7027306a6aa4921a9 (MD5) Previous issue date: 2015-11-24 / Peridontal research involves the use of animal models to facilitate the understanding of biological processes of periodontal disease (PD), and the potential of new and existing therapies, therefore the induction of periodontal disease is needed. In the literature, the most widely used model for the induction of periodontal disease in rats is ligature. It is an insertion of a cotton yarn around the cervix of the first mandibular molar resulting in the accumulation of a bacterial biofilm, and triggering a local inflammatory response and the consequent alveolar bone loss (ABL). The methods most commonly used to evaluate the ABL are radiographic, histologic and morphometric. Which measure the distance between the cemento-enamel junction and bone crest. Although these methods are widely used, it is unknown the possibility of extrapolating resuts between research groups and the intra-examiner (repeatability) and inter-examiner (reproducibility) agreement. Other parameters usually assessed are leukocyte migration (MPO) and the presence of nitric oxide (NO), which are inflammatory markers. The aim of this study was characterized the kinetics of the ABL, leukocyte migration and nitric oxide at 0, 3, 7, 15, 30 and 60 days after induction of PD by ligature and evaluate the Bland-Altman concordance for the main assessment methodologies of ABL (radiographic, histologic and morphometric). 60 male Wistar rats between 250 and 300 g were randomly divided into 6 experimental groups (n = 10 animals /group) as follows: G0 (not treatment), G3 (ligature for 3 days) G7 (ligature for seven days) , G15 (ligature for 15 days), G30 (ligature for 30 days) and G60 (ligature for 60 days). After 0, 3, 7, 15, 30 and 60 days, animals were sacrificed by anesthetic overdose, and hemimandibles were removed for radiographic analysis, morphometric (linear and area) and histological. Also was collected adjacent gum tissue from mandibular first molar for leukocyte migration analysis and nitric oxide dosage. The results were analyzed with ANOVA followed by Tukey test and Bland Altman test to establish the correlation between the methodologies. In the radiographic analysis was observed a significant ABL after the third day, the intra-examiner and inter-examiner analysis showed a significant difference between the measurements. In linear morphometric analysis, the ABL was significant after the third day, in contrast to measure the area was significant only after the seventh day. The concordance analysis intra and inter-examiner did not show difference between these measurements. In histological measurement, the ABL was significant after the seventh day. The intra and inter-examiner analysis showed no difference between the measurements. The leukocyte migration had significant difference on the seventh day and the nitric oxide showed a peak of activity in the fifteenth day. It is concluded that radiographic analysis and morphometric-linear had a significant ABL on the third day, in contrast to morphometric-area and histological showed a significant ABL after the seventh day of induction. The peak of MPO activity occurs seven days after the induction of disease, for NO the peak occurs on the fifteenth day. In addition it was observed an agreement of Bland Altman intra and inter-examiner for the morphometric and histological methods. But the radiographic method did not show intra- and inter-examiner concordance. / A pesquisa na área da periodontia envolve o uso de modelos animais para facilitar o entendimento de processos biológicos envolvidos na doença periodontal (DP) e o potencial das terapias novas e já existentes. Na literatura, o modelo mais utilizado para a indução da DP em ratos é a ligadura. Nesta metodologia há a inserção de um fio de algodão na região cervical de molares (inferiores e/ou superiores), promovendo assim um acúmulo de um biofilme bacteriano, o qual desencadeia uma resposta inflamatória local e a consequente perda óssea alveolar (POA). As metodologias mais utilizadas para avaliar a POA são: radiográfica, morfométrica e histológica. Embora estas metodologias sejam amplamente utilizadas, não há na literatura a avaliação de sua confiabilidade por meio de testes estatísticos de concordância, dificultando assim a extrapolação dos dados entre diferentes grupos de pesquisas ou até mesmo dentro um mesmo grupo. Em acréscimo, considerando que cada metodologia de avaliação da perda óssea analisa uma região específica (crista mesial e rebordo alveolar) e que o processo inflamatório é dinâmico, torna-se plausível que a perda óssea, bem como os marcadores da inflamação possuam uma cinética peculiar de evolução de acordo com o tempo de indução da DP. Neste sentido, este trabalho teve como objetivo avaliar a concordância de Bland-Altman para as principais metodologias de avaliação da POA (radiográfica, morfométrica e histológica) e caracterizar a cinética da POA,migração leucocitária e do óxido nítrico nos tempos 0, 3, 7, 15, 30 e 60 dias após a indução da DP por meio do método da ligadura. Para isso, 60 ratos Wistar machos entre 250g e 300g foram divididos randomizadamente em 6 grupos experimentais (n=10 animais/grupo), sendo: G0 (sem ligadura), G3 (ligadura por 3 dias), G7 (ligadura por 7 dias), G15 (ligadura por 15 dias), G30 (ligadura por 30 dias) e G60 (ligadura por 60 dias). Após os tempos experimentais, os animais foram sacrificados e as hemimandibulas removidas para determinação da POA por meio das metodologias: (1) radiográfica, (2) morfométrica (através das medidas linear e da área) e (3) histológica. Além disso foi coletado o tecido gengival adjacente à ligadura do primeiro molar inferior para as análises de migração leucocitária e quantificação de óxido nítrico. Concordância de Bland-Altman foi utilizada para a determinação da confiabilidade (intra e inter-examinador) para as diferentes metodologias de análise da POA. ANOVA seguido do teste de Tukey foi empregado para as avaliações de cinética da POA, da migração leucocitária e do óxido nítrico. O nível de significância foi de 5%. Na análise radiográfica foi observada POA estatisticamente significativa (em relação ao tempo 0) após o terceiro dia. A análise de concordância intra e inter-examinador mostrou diferença significativa entre as mensurações. Na análise morfométrica linear, a POA foi significativa após o terceiro dia, enquanto que na mensuração da área foi significativa apenas após o sétimo dia. A análise de concordância intra- e inter-examinador não mostrou diferença entre estas mensurações. Na mensuração histológica, a POA foi significativa após o sétimo dia. A análise intra e inter-examinador não mostrou diferença entre as mensurações. A migração leucocitária teve diferença significativa no sétimo dia, coincidindo neste, o seu pico de migração no tecido gengival. Para o óxido nítrico, embora o primeiro tempo de atividade com diferença significativa tenha sido com 7 dias, o seu pico de quantificação ocorreu no décimo quinto dia. Conclui-se que as análises radiográfica e morfométrica linear, apresentaram uma POA significativa em torno do terceiro dia, em contraste as análises morfométrica da área e histológica que mostraram uma POA significativa somente após o sétimo dia da indução da DP. O pico de migração leucocitária ocorre após sete dias da indução da doença, enquanto que para o pico de dosagem do óxido nítrico ocorre somente no décimo quinto dia. Em acréscimo foi observada uma concordância de Bland Altman intra e inter-examinador para as metodologias morfométricas e histológicas. Porém a metodologia radiográfica não apresentou concordância intra nem inter-examinador.