No presente trabalho estudou-se a performance da linhagem E9 durante um processo de armazenamento, no qual conídios foram mantidos à -20°C com glicerol e sem glicerol. Esta linhagem foi alvo desse estudo por ser amplamente utilizada em nosso laboratório e por diversos laboratórios brasileiros, servindo como referência em estudos sobre entomopatógenos. Nestas condições os objetivos foram estimar as características do fungo quanto à evolução de O2, a variação na viabilidade determinada pela capacidade germinativa dos conídios, e a expressão de virulência, durante o processo. Na avaliação da evolução de O2, testes de respirometria foram realizados, utilizando-se a glicose como única fonte de carbono em um meio de cultivo simplificado. A virulência foi testada em bioensaios realizados com ninfas de 3 e 4 estágios do vetor da doença de Chagas Panstrongylus megistus; e a viabilidade foi obtida comparando-se conídios germinados e não germinados. Os resultados obtidos mostraram a necessidade de uma melhor compreensão, para que estes testes realizados se interajam mais efetivamente, pois foi observado que os dados relativos a viabilidade e o quociente de oxigênio (Q O2) do fungo isoladamente, não fornecem subsídios suficientes para se avaliar a capacidade entomopatogênica de uma dada linhagem. A ação do glicerol como crioprotetor, não foi eficiente no sentido de se representar diferenças significativas com relação à performance do entomopatógeno, uma vez que os valores de LT50 não foram muito divergentes. / not available

No presente trabalho estudou-se a performance da linhagem E9 durante um processo de armazenamento, no qual conídios foram mantidos à -20°C com glicerol e sem glicerol. Esta linhagem foi alvo desse estudo por ser amplamente utilizada em nosso laboratório e por diversos laboratórios brasileiros, servindo como referência em estudos sobre entomopatógenos. Nestas condições os objetivos foram estimar as características do fungo quanto à evolução de O2, a variação na viabilidade determinada pela capacidade germinativa dos conídios, e a expressão de virulência, durante o processo. Na avaliação da evolução de O2, testes de respirometria foram realizados, utilizando-se a glicose como única fonte de carbono em um meio de cultivo simplificado. A virulência foi testada em bioensaios realizados com ninfas de 3 e 4 estágios do vetor da doença de Chagas Panstrongylus megistus; e a viabilidade foi obtida comparando-se conídios germinados e não germinados. Os resultados obtidos mostraram a necessidade de uma melhor compreensão, para que estes testes realizados se interajam mais efetivamente, pois foi observado que os dados relativos a viabilidade e o quociente de oxigênio (Q O2) do fungo isoladamente, não fornecem subsídios suficientes para se avaliar a capacidade entomopatogênica de uma dada linhagem. A ação do glicerol como crioprotetor, não foi eficiente no sentido de se representar diferenças significativas com relação à performance do entomopatógeno, uma vez que os valores de LT50 não foram muito divergentes. / not available

Com o objetivo de verificar o fenômeno da parameiose em Metarhizium anisopliae, mutantes das linhagens E6, E9 e RJ, com duas marcas auxotróficas e uma marca morfológica, foram utilizados para a realização de cruzamentos via fusão de protoplastos. Através da análise genética dos produtos de fusão detectou-se a ocorrência de recombinantes auxotróficos, com evidências de recombinação mitótica, não recuperando - se o diplóide. Este fato demonstra a alta instabilidade da fase diplóide e comprova a ocorrência de parameiose nesta espécie. Prováveis aneuplóides foram isolados, os que poderiam ter sido originados pelo desarranjo cromossômico dos diplóides em processo de haploidização. Por outro lado, descreveu-se o método de produção de protoplastos de conídios. A obtenção dos mesmos, abre a possibilidade de sua utilização em futuros estudos de transformação genética, uma vez que estes protoplastos são mais adequados para essa finalidade. / Aiming to study parameiosis in Metarhizium anisopriae, mutants of the strains E6 , E9 and RJ, with two auxotrophic marks and a morphological one, were crossed by protoplast fusion. Through the genetical analysis of the fusion products it was detected auxotrophic mutants, evidencing mitotic recombination and the diploid was not recovered. This fact shows the high instability of the diploid phase and confirms the occurrence of parameiosis in this species. Some supposed to be aneuploids were isolated ant it might, be possible they were originated by cromossomic disarrengements during haploidization. A protoplasting method from conidia was described as well. It might be used in future genetic transformation experiments since this kind of protoplasts suit better the process

Submitted by Gizele Lima (gizele.lima@inpa.gov.br) on 2018-03-07T19:05:24Z No. of bitstreams: 2 Tese JOELMA 25 01 18-1.pdf: 2217088 bytes, checksum: 4076fe5d3e54507c6b7c0ba6a34ae6e0 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-07T19:05:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese JOELMA 25 01 18-1.pdf: 2217088 bytes, checksum: 4076fe5d3e54507c6b7c0ba6a34ae6e0 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-12-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The diversity of Bacillus thuringiensis obtained from three Brazilian biomes with pathogenic action for Ae. aegypti, An. darlingi and Cx. quinquefasciatus. Aspects as characterization of the active strains and the importance of the cyt1Aa gene also were analyzed. / Estudou-se a diversidade de Bacillus thuringiensis obtidos de três biomas brasileiros com ação patogênica para larvas de Ae. aegypti, An. darlingi e Cx. quinquefasciatus. Aspectos como caracterização molecular das linhagens ativas e a importância do gene cyt1Aa também foram analisados.

Submitted by RAPHAEL VACCHI TRAVAGLINI null (raphatrava86@ig.com.br) on 2017-12-07T19:28:06Z No. of bitstreams: 1 RAPHAEL VACCHI TRAVAGLINI (1).pdf: 3425184 bytes, checksum: 732c0234a70c06bd049339e979dadab5 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Lucia Martins Frederico null (mlucia@fca.unesp.br) on 2017-12-08T11:14:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 travaglini_rv_bot_int.pdf: 3425184 bytes, checksum: 732c0234a70c06bd049339e979dadab5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-08T11:14:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 travaglini_rv_bot_int.pdf: 3425184 bytes, checksum: 732c0234a70c06bd049339e979dadab5 (MD5) Previous issue date: 2017-11-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O controle biológico tem recebido atenção dos pesquisadores, principalmente devido aos movimentos, de preservação do ambiente. Têm sido amplamente aplicado em espécies consideradas importantes pragas agrícolas, porém não indicado para as formigas cortadeiras. Tais formigas apresentam um conjunto de estratégias físicas, químicas e comportamentais que as operárias realizam a fim de evitar a própria contaminação e da colônia. Entretanto alguns microorganismos conseguem causar mortalidade de alguns membros da colônia, como os fungos entomopatogênicos. Pretende-se fornecer conhecimentos básicos para desenvolvimento de novas estratégias de controle microbiano das formigas cortadeiras em um futuro próximo. Para tanto estudamos quatro fungos com grande potencial patogênico, Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana, Aspergillus flavus e Trichoderma asperellus. Primeiramente foram estudados a patogenicidade dos fungos (entomopatogeno e oportunista) em operarias isoladas da colônia. Estudou-se a susceptibilidade de larvas e adultos de formigas cortadeiras Atta sexdens rubropilosa a conídios de B. bassiana, por meio de técnicas histológicas e de microscopia. Finalmente encapsulados com conídios foram veiculados para o jardim de fungo simbionte visando o controle de mini colônias em laboratório. Propomos a elaboração de novas alternativas aos manejos existentes.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-20T18:39:59Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Bruno Augusto de Alencar Velez.pdf: 713789 bytes, checksum: 18946c2030c20d036ce4990d705a1c75 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T18:39:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Bruno Augusto de Alencar Velez.pdf: 713789 bytes, checksum: 18946c2030c20d036ce4990d705a1c75 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / CAPES / A palma forrageira (Opuntia ficus-indica) é uma planta originária do México, porém, se encontra bem adaptada e distribuída na região semiárida brasileira e é uma das principais espécies utilizadas na alimentação de bovinos, caprinos e ovinos. Essa cultura tem sido comprometida pela proliferação exacerbada da cochonilha do carmim (Dactylopius opuntiae), chegando a perdas de 100% de produtividade em alguns casos, logo, se faz necessário à elaboração de métodos que controle a praga. O controle microbiano por fungos entomopatogênicos e extratos vegetais tem se mostrado importante nesse sentido. O presente trabalho objetivou avaliar a eficiência da associação de extrato de mastruz e de isolados do complexo de espécies Fusarium incarnatum-equiseti (FIESC) no controle da cochonilha do carmim in vitro e em casa de vegetação. Foi avaliada a compatibilidade entre os isolados FIESC 20-b com os extratos aquoso e hidroetanólico de mastruz através do Indice Biológico. Os bioensaios in vitro e em casa de vegetação foram realizados através de palmas infestadas com fêmeas adultas crescidas após 30 dias, a mortalidade corrigida foi determinada através da fórmula de Abbott (1925) e a confirmação do agente causal foi baseada no crescimento fúngico sobre os insetos em placas de Petri. A compatibilidade entre os fungos e os extratos revelou que os isolados URM6778, URM6779 e URM6782 foram os selecionados para bioensaios contra a cochonilha combinado ao extrato aquoso e os isolados URM6777, URM6778 e URM6779 foram os mais indicados para a porção hidroetanólica. Os melhores resultados dos bioensaios realizados em laboratório foram registrados pelo isolado URM6779 e seu uso combinado com os extratos aquoso (10%) e hidroetanólico (5%), tanto para a mortalidade corrigida quanto para a confirmada. Já para o bioensaio em casa de vegetação os tratamentos envolvendo o extrato aquoso (10%) e o isolado URM6779 em conjunto com este extrato apresentaram os melhores resultados para estudos em campo, 66,25 e 44,5 respectivamente. / The prickly pear (Opuntia ficus-indica) is native plant from Mexico, but it is well adapted and distributed in the Brazilian semiarid region and is one of the main species used to feed cattle, goats and sheep, being directly related to life and income source of local people. On the other hand, this culture has been compromised by excessive proliferation of cochineal carmine (Dactylopius opuntiae), reaching losses of 100% productivity in some cases. Therefore, the development of methods that control the pest and does not compromise the environment and people are necessary. The microbial control by entomopathogenic fungi and plant extracts have shown to be important in this regard. Thus, this study aimed to evaluate the efficiency of mastruz extract association and isolates of Fusarium incarnatum-equiseti (FIESC) in control of cochineal scale in vitro and in the greenhouse. Compatibility between isolated FIESC 20-b with aqueous extracts and hydroethanol of mastruz through the Biological Index was evaluated. The laboratory bioassays and greenhouse were carried through infested palms with grown adult females after 30 days, the corrected mortality was determined by Abbott's formula (1925) and confirmation of the causative agent was based on fungal growth on insects in Petri dishes. Compatibility between fungi and extracts revealed that the isolated URM6778, URM6779 and URM6782 were selected for bioassay against cochineal combined with the aqueous extract and isolated URM6777, URM6778 and URM6779 were the most suitable for the portion hydroethanol. The best results of the laboratory bioassays were recorded by the 6779 URM isolated and with its combination with aqueous (10%) and hydroethanolic (5%), both for corrected and established mortality. As for the bioassay in greenhouse treatments involving the aqueous extract (10%) and isolated URM6779 together with this extract showed the best results for field studies.

Marcadores genéticos foram obtidos na linhagem MT, utilizando-se a luz UV como mutagênico. Os mutantes foram isolados pelos métodos de isolamento total e enriquecimento por filtração. Foram obtidos mutantes simples, duplos e triplos. Também foram obtidos segregantes, pelo mecanismo parassexual, envolvendo mutantes da linhagem MT e E6. Os recombinantes foram analisados por auxonografia, alguns deles aquilatados quanto à estabilidade e grau de ploidia com a avaliação do crescimento em meio contendo Benlate (Benomil), determinação da quantidade de DNA e análise citológica dos conídios. Embora um possível diplóide tenha setorizado (onde um setor combinava marcas de ambos parentais) não foi confirmada sua diploidia. Provavelmente estaríamos diante de um diplóide altamente instável em que tenha sido analisado um recombinante prototrófico do mesmo. A eletroforese de esterases das linhagens selvagens, mutantes e recombinantes do heterocário E6.7 + MT12 mostrou uma grande homologia entre as linhagens MT e E6. Os recombinantes não apresentaram diploidia. / Genetic markers were obtained in the MT strain, using U.V. light as mutagenic. The mutants were isolated with the methods of total isolation by the filtration enrichment technique. It was obtained simple, double and triple mutants. It was obtained segregants as well, from the parasexual mecanism, envolving mutants from the MT strain and MT and E6 strains. The recombinants were analysed by auxonography, some of them evaluated for the stability and ploidy levels with evaluation of growth in Benlate (Benomyl) medium, determination of DNA quantity and citological analysis of the conidia. Although a possible diploid was setorized (where a setor combinated markers from both parent), its diploid condition was not confirmed. Probably we might have a highly unstable diploid train, in wich have been analysed a prototrophic recombinant from the same strain. The sterase electrophoreses from wild, mutant and recombinant strains from the heterokaryons E6.7 + MT12 showed a wide homology between the MT and E6 strains. The recombinants did not presented a diploid state.

Os objetivos deste estudo foram determinar as dosagens e selecionar isolados de Beauveria spp. e Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin, 1883, assim como desenvolver uma metodologia visando ao controle do Sphenophorus levis Vaurie, 1978. A pesquisa foi realizada no Laboratório de Patologia de Insetos do Departamento de Entomologia da ESALQ/USP e na Fazenda Retiro da Usina Santa Helena, em Piracicaba, SP. Foram testadas 4 dosagens do isolado 447 de B. bassiana (Bals.) Vuill. Para a realização deste bioensaio, os insetos adultos foram colocados juntamente com cada uma das dosagens do patógeno em um frasco de vidro de 500 ml e agitados por 2 minutos, sendo posteriormente retirados e mantidos em estufa incubadora, sob a temperatura de 26 ± 0,5°C e fotofase de 12 horas. Determinou-se a dose letal (DL50) de 8,8 x 10 conídios/frasco. Todavia a dosagem de 8 x 1011 conídios/frasco, foi utilizada nos bioensaios, visando selecionar os melhores isolados. Utilizando esta metodologia avaliaram-se 7 isolados de Beauveria spp. e 7 de M. anisopliae. Os 3 melhores isolados, de cada gênero do patógeno, foram submetidos a outro bioensaio, no qual utilizaram-se pedaços de cana-de-açúcar (iscas) tratadas com os fungos. A seleção dos isolados foi feita utilizando-se as seguintes variáveis: porcentagem de mortalidade, número de conídios produzidos por inseto, tempo letal (TL 50) e Potência Relativa para matar o hospedeiro. Os isolados 447 de B. bassiana e 259 de M. anisopliae foram selecionados para os testes de campo, por apresentarem as melhores características epizootiológicas. Nestas condições, na dosagem de 4,9 x 1011 conídios de B. bassiana e M. anisopliae por pedaço de cana-de-açúcar tratado (25 cm de comprimento), obtiveram-se respectivamente, 92,3 e 46,5% de mortalidade dos adultos de S. levis. As iscas de cana-de-açúcar, inoculadas com B. bassiana e M. anisopliae foram eficientes para o controle de adultos de S. levis e a sua atratividade não foi afetada pelos patógenos. / The objectives of this study were to determine dosages and select isolates of Beauveria spp. and Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin, 1883, and develop a methodology for control of Sphenophorus levis, Vaurie, 1978. The research was conducted in the Insect Pathology Laboratory in the Department of Entomology of ESALQ/USP and in the Farmer Retiro of the Usina Santa Helena in Piracicaba, SP, Brazil. Four dosages of Beauveria bassiana (Bals.)Vuill. isolate 447 were tested. For the bioassay, the adult insects were placed together in a 500 ml flask, the dosage of pathogen spores was added and the mixture was agitated for 2 minutes. Afterwards the insects were removed and maintained in chambers with a constant temperature of 26.0 ± 0.5°C and 12 hours photophase. It was determined that the lethal dose (LD50) 11 was 8.8 x 109 conidia/flask. However, a dosage of 8.0 x 1011conidia/flask was used for other bioassay to select the best isolates. Using this methodology 7 isolates of spp. and 7 of M. anisopliae were evaluated. The 3 best isolates of each genus of pathogen were subjected to another bioassay in which pieces of sugar cane baits treated with fungi were used. The selection of isolates was made using the following parameters: percent mortality, number of conidia produced per insect, lethal time (LT50) and relative potential to kill the host. The isolates of B. bassiana 447 and M. anisopliae 259 were selected for field tests because they showed the best epizootiological characteristics. Under these conditions a dos age of 4.9 x 1011 conidia of B. bassiana and M. anisopliae per piece of treated sugar cane (25 cm in length) yielded 92.3 and 46.5% of S. levis adult mortality respectively. The baits of pieces of sugar cane inoculated with B. bassiana and M. anisopliae were efficient for the control of adult S. levis and their attractiveness was not affected by the pathogens.

No presente trabalho foram quantificadas as atividades proteolíticas contra caseína e elastina de 16 linhagens de Metarhizium anisopliae, crescidas em meio de cultura líquido, tendo a caseína como única fonte de carbono e nitrogênio. Os objetivos foram estimar parâmetros genéticos como a variância genética, a herdabilidade e o ganho esperado na seleção, bem como as correlações entre os caracteres avaliados e a possibilidade de se utilizar a seleção indireta, em programas de melhoramento genético para a espécie. Os resultados mostraram que existe uma grande variabilidade genotípica em todos os caracteres estudados entre as 16 linhagens, permitindo sua exploração no melhoramento. Os altos coeficientes de herdabilidade permitem que sejam esperados progressos substanciais na seleção fenotípica, seguida de reprodução por via clonal. Os altos coeficientes de correlação observados entre a atividade elastolítica determinada a 280 e a 450 nm, mostraram que a elastina pode ser usada em substituição a elastina "Congo-Red", como substrato para determinação da atividade elastolítica. Os coeficientes de correlação, bem como as estimativas de ganho na seleção indireta, mostraram que podem ser obtidos altos progressos na atividade elastolítica, através da seleção de linhagens com altas atividades proteolíticas contra caseína. / not available

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia de Fungos, Algas e Plantas, Florianópolis, 2015 / Made available in DSpace on 2016-02-09T03:15:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337161.pdf: 1491998 bytes, checksum: 63fd33c3720b988200a0202995d42f61 (MD5) Previous issue date: 2015 / Os fungos entomopatógenos (Hypocreales, Ascomycota), conhecidos de modo geral como Cordyceps s.l., utilizam diferentes espécies de artrópodes como hospedeiros, onde desenvolvem parte do seu ciclo de vida. São responsáveis pelo equilíbrio de populações de insetos, contaminam os insetos hospedeiros e utilizam seus corpos como substrato para a produção de estruturas reprodutivas sexuais e ou assexuais. Os estudos sobre Cordyceps s.l. no Brasil são antigos ou escassos para uma diversidade potencialmente grande. Com o objetivo de contribuir para o conhecimento desses fungos no Brasil e na região Neotropical, foram estudados aspectos sobre ecologia, morfologia e molecular de Cordyceps s.l. com foco em um táxon em especial, pertencente ao gênero Ophiocordyceps. Ophiocordyceps nutans (Pat.) G.H. Sung, J.M. Sung, Hywel-Jones & Spatafora é morfologicamente caracterizado por apresentar estipe filiforme, preto, com a região fértil bem delimitada, intumescida, vermelha. Foi descrita a partir de espécimes do Japão e é comumente encontrado na Coréia em meio à serapilheira, parasitando obrigatoriamente insetos da ordem Hemiptera. No Brasil espécimes morfologicamente relacionados vêm sendo coletados, parasitando a mesma ordem de insetos, e sendo assim previamente determinados como o táxon asiático, O. nutans. A fim de confirmar se o táxon que ocorre no Brasil representa a mesma espécie coletada no Japão foram coletados mais de 100 espécimes com morfologia semelhante a O. nutans. Foram realizadas análises morfológicas e moleculares, bem como a obtenção de culturas, os dados ecológicos também foram considerados neste estudo. No capítulo 1, são apresentadas evidências de que o táxon corresponda a um complexo de espécies crípticas, composto por duas linhagens Asiáticas e uma linhagem Neotropical. No capítulo 2, com base na filogenia gerada a partir de sequências ITS de DNA ribossomal, provenientes de espécimes Asiáticos e Brasileiros, foram observadas as três linhagens mencionadas, sendo, por tanto, proposta a espécie nova, Ophiocordyceps neonutans sp. nov. ad int. No capítulo 3 é apresentada uma possível nova espécie de Ophiocordyceps, que parasita insetos da ordem Hemiptera, no entanto da subordem Homoptera. Os peritécios ovoides e os esporos fusoides são as principais características diagnósticas desta espécie. Por fim, considerando o apresentado, os registros de O. nutans para o resto do mundo precisam ser revisados. Além disso, novas coletas e análises moleculares (multiloci) deste complexo se fazem necessárias, principalmente considerando as evidências ecológicas (hospedeiro e distribuição geográfica) para o entendimento das linhagens como espécies a serem descritas.<br> / Abstract : The entomopathogenic fungi (Hypocreales, Ascomycota), broadly known as Cordyceps s.l, use different arthropod species as hosts, where they develop part of their life cycle. Responsible for the balance of insect populations, they infect specific hosts contaminating their bodies using it as a substrate for production of sexual or asexual reproductive structures. Under the research project MICOLAB / UFSC which aims to contribute to the knowledge of these fungi in Brazil and in the Neotropics were studied aspects of ecology, morphology and molecular in Cordyceps s.l. focusing on a taxon in particular belonging to Ophiocordyceps genre. Ophiocordyceps nutans (Pat.) G.H. Sung, J.M. Sung, Hywel-Jones & Spatafora 2007 is morphologically characterized by having threadlike stipe, black, with a fertile region well delimited swollen, red. It was described from Japan specimens and is commonly found in Korea amid the leaf litter, necessarily parasite insects of the order Hemiptera. In Brazil morphologically related specimens have been collected, parasitizing the same order of insects, so they were predetermined as the Asian taxon, O. nutans. In order to confirm if the taxon that occurs in Brazil is the same species collected in Japan, were collected in Brazilian field expeditions more than 100 specimens with similar morphology to O. nutans. Morphological and molecular analyzes were performed, as well as obtaining cultures, ecological data were also considered in this study. In Chapter 1, evidence were presented that the taxon corresponds to a complex of cryptic species, composed of 2 Asian lineages and one geographically distinct Neotropical lineage of Ophiocordyceps nutans. In chapter 2, based on the phylogeny generated from ribosomal DNA ITS sequences, from Asian and Brazilian specimens. Three distinct lineages were observed, and was proposed a new species. Ophiocordyceps neonutans sp. nov. Ad int. parasitizing Pentatomidae (Hemiptera) in Brazilian territory. Chapter 3 presents a possible new species of Ophiocordyceps that parasitizes insects of the Hemiptera order, however in the suborder Homoptera. Perithecia ovoid and fusiform spores are the main diagnostic features of this species. Finally, considering the presented, O. nutans records for the rest of the world need to be reviewed. In addition, new collections and molecular analyzes (multiloci) of this complex are necessary, especially considering the ecological evidence (Host and geographical distribution) to understand the lineages as species to be described.