Made available in DSpace on 2014-06-12T15:06:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4623_1.pdf: 4005280 bytes, checksum: 1e7bad4aa278938925381ecdcffd8d62 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Zaprionus indianus é conhecida como a mosca do figo. Vem se disseminando por todo Brasil, devido às condições ambientais favoráveis. Por ser recém-introduzida não há medidas eficazes para seu controle. Uma alternativa viável poderá ser o uso de fungos entomopatogênicos, como Beauveria bassiana. Este trabalho foi conduzido em condições de laboratório, para avaliar a suscetibilidade de Z. indianus à B. bassiana. As larvas foram submersas e os adultos foram pulverizados com diferentes concentrações fúngicas (104 a 108 conídios/mL) e em seguida colocados em recipiente contendo meio específico, para análise dos parâmetros biológicos. O período de pré-pupa não sofreu alteração em relação ao grupo controle, já o estágio pupal foi aumentado em três dias. O percentual de emergência no grupo controle foi de 97,33%, enquanto na maior concentração (108) foi de 10,60 e de 13,33% para B. bassiana URM2916 e B. bassiana URM3447, respectivamente. No bioensaio com adultos foi observada morte a partir do 2º dias após a inoculação. O percentual de mortalidade variou de 37,00% a 98,66%. Os valores da CL50 foram de 1,09 x 105 e de 3,8 x 106 conídios/mL, e os do TL50 variaram de 5,3 e 7 dias. O fungo reisolado de Z. indianus não apresentou diferenças morfológicas, contudo o seu desenvolvimento foi acelerado. Os dados demonstraram que B. bassiana URM2916 foi a mais eficiente, contudo as duas linhagens analisadas foram potencialmente patogênicas à Z. indianus e mostraram ser promissores agentes biocontroladores

Estudos recentes têm demonstrado que os fungos entomopatogênicos podem ter efeitos benéficos para as plantas como promotores de crescimento, antagonistas de fitopatógenos e agentes de proteção contra herbivoria. O potencial da associação dos fungos entomopatogênicos com a cultura da soja ainda não foi revelado. Nesse sentido, objetivou-se com este estudo, determinar a efeitos de fungos entomopatogênicos no desenvolvimento de pragas importantes da soja inoculados durante o plantio desta cultura. Avaliou-se os efeitos de três fungos entomopatogênicos, Metarhizium sp. indet. 1 ESALQ-1638, Beauveria bassiana ESALQ-3399 e Isaria fumosorosea ESALQ-3422, no desenvolvimento e preferência alimentar de lagartas de Chrysodeixis includens e Helicoverpa armigera, e adultos e ninfas da mosca-branca Bemisia tabaci, após a inoculação em plantas de soja BRS 232 em casa-de-vegetação. A mortalidade e os parâmetros biológicos das pragas foram avaliados nos indivíduos alimentados com discos de folhas e em plantas inteiras de soja que foram inoculadas com os fungos. Além disto, foi investigado a persistência dos fungos entomopatogênicos nas plantas de soja e no substrato, e o diagnóstico nutricional realizado através da análise foliar das plantas. As mortalidades observadas em lagartas de C. includens que se alimentaram de discos de folhas das plantas inoculadas com os fungos entomopatogênicos foram significativamente maiores (33% - 65%) do que no controle (12% - 13%). Os resultados de mortalidade no experimento com plantas inteiras foram semelhantes aos de discos de folhas, mas as diferenças foram estatisticamente significativas em apenas um dos dois experimentos. As mortalidades de H. armigera nas plantas inoculadas com fungos variaram de 36% a 60% enquanto no controle foi inferior a 16%, tanto com folhas quanto em plantas inteiras, mas estas diferenças não foram estatisticamente significativas. Em geral, as lagartas que se alimentaram de plantas inoculadas com fungos apresentaram menor consumo foliar e tanto as lagartas quanto as pupas atingiram pesos menores do que aquelas criadas em plantas não inoculadas. O período de lagartas a pupa foi igual ou maior nos tratamentos com os fungos. Nos testes de múltipla escolha as lagartas C. includens e H. armigera, em geral, preferiram se alimentar de folhas inoculadas com os fungos especialmente B. bassiana. Por outro lado, B. tabaci preferiu as plantas não inoculadas, onde foram observados maiores números de ninfas geradas. A inoculação das plantas de soja com os fungos não alterou o conteúdo nutricional das folhas em relação as plantas não inoculadas. Os fungos permaneceram em elevadas concentrações no substrato por 45 dias, e após 60 dias a densidade de Metarhizium sp. indet. 1 ESALQ-1638 era superior aos dos demais fungos. Estes resultados revelam que os fungos entomopatogênicos apresentam potencial para serem utilizados via inoculação no substrato durante o plantio. / Recent studies have shown that entomopathogenic fungi may have beneficial effects on plants such as growth promoters, phytopathogen antagonists and herbivory protection agents. The potential of the association of entomopathogenic fungi with soybean cultivation has not been revealed. In this sense, the objective of this study was to determine the effects of entomopathogenic fungi on the development of important soybean pests inoculated during planting of this crop. The effects of three entomopathogenic fungi, Metarhizium sp. indet. 1 ESALQ-1638, Beauveria bassiana ESALQ-3399 and Isaria fumosorosea ESALQ-3422, in the development and feeding preference of caterpillars Chrysodeixis includens and Helicoverpa armigera, and whitefly Bemisia tabaci adults and nymphs, after inoculation in soybean plants BRS 232 in a greenhouse. Mortality and biological parameters of the pests were evaluated in individuals fed on leaf discs and in whole soybean plants that were inoculated with the fungi. In addition, we investigated the persistence of entomopathogenic fungi in soybean plants and substrate, and the nutritional status carried out through leaf analysis of plants. The mortalities observed in C. includens caterpillars that fed leaf discs of the plants inoculated with the entomopathogenic fungi were significantly higher (33% - 65%) than in the control (12% - 13%). Mortality results in the whole plant experiment were similar to leaf discs, but the differences were statistically significant in only one of the two experiments. The H. armigera mortalities in fungi-inoculated plants varied from 36% to 60% while in the control it was less than 16%, both with leaves and whole plants, but these differences were not statistically significant. In general, caterpillars that fed on fungus inoculated plants had lower leaf consumption and both caterpillars or pupae reached lower weights than those reared on uninoculated plants. The period of caterpillars to pupae was equal to or greater in treatments with fungi. In the multiple choice tests, C. includens and H. armigera larvae, in general, preferred to feed on leaves inoculated with the fungi, especially with B. bassiana. On the other hand, B. tabaci preferred the uninoculated plants, where larger numbers of nymphs were observed. The inoculation of the soybean plants with the fungi did not alter the nutritional content of the leaves in relation to the uninoculated plants. The fungi remained in high concentrations in the substrate for 45 days, and after 60 days the density of Metarhizium sp. indet. 1 ESALQ-1638 was superior to the other fungi. These results reveal that the entomopathogenic fungi present potential to be used via substrate inoculation during planting.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-16T11:55:33Z No. of bitstreams: 2 Dissertação RenanLeles-2009.pdf: 2556894 bytes, checksum: be2adcc63b3f7ae1e5aa645d4cd4bbf2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-16T13:47:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação RenanLeles-2009.pdf: 2556894 bytes, checksum: be2adcc63b3f7ae1e5aa645d4cd4bbf2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-16T13:47:39Z (GMT). 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The present study evaluated the pathogenicity of nineteen fungal species of the Hypocreales order against A. aegypti adults, and investigated new methods for fungal application to control these mosquitoes and for detection and isolation of fungi and oomycetes from A. aegypti larvae and adults. The results clearly showed the potential of fungi, especially form the Metarhizium genus, for the combat of eggs and adult mosquitoes. The present study proposes a new pratical method for the detection and isolation of entomopathogenic fungi from infected mosquitoes collected in the field.</dcvalue><dcvalue element="description" qualifier="abstract" language="eng">Aedes aegypti is the main vector of dengue fever in tropical and subtropical countries in the world. Due to the absence of a vaccine for dengue fever, the vector´s combat is fundamental fot the disease control. The spread of mosquito populations resistant to chemical insecticides shows the necessity to establish integrate vector control programs. Entomopathogenic fungi have potential for biological control of A. aegypti; however, only tow fungal species. Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana, have been stutied more intensely for this purpose. The present study evaluated the pathogenicity of nineteen fungal species of the Hypocreales order against A. aegypti adults, and investigated new methods for fungal application to control these mosquitoes and for detection and isolation of fungi and oomycetes from A. aegypti larvae and adults. The results clearly showed the potential of fungi, especially form the Metarhizium genus, for the combat of eggs and adult mosquitoes. The present study proposes a new pratical method for the detection and isolation of entomopathogenic fungi from infected mosquitoes collected in the field. / O interesse em fungos entomopatogênicos para controle integrado de mosquitos é grande. Entretanto pouco se sabe sobre o efeito de fungos em adultos e transmissão de micoses em Aedes aegypti. No presente trabalho, estudaram-se, em condições de laboratório, a atividade adulticida e a propagação da infecção para ovos postos por fêmeas tratadas com três isolados de Paecilomyces spp, dois Isaria spp, um Penicillium sp e um Metarhizium anisopliae. Foram realizados dois experimentos: Com conídios secos de M. anisopliae IP 46 a 5x104 conídios/cm3 (Teste 1) e com conídios dos outros fungos formulados em óleo-água, a 10% do óleo, a 106 conídios/cm2 (Teste 2). As fêmeas foram alimentadas com sangue de camundongo em dias alternados e, para ambos os sexos, solução açucarada (5%) foi ofertada ad libitum. Os adultos foram mantidos a 25ºC, umidade relativa (UR) de 70% e fotofase de 12 h até 10 d póstratamento (p.t.). Indivíduos mortos e ovos postos foram retirados, contados e incubados em UR > 98% e 25ºC por 15 d. Os ovos foram em seguida submersos em água e a eclosão de larvas avaliada diariamente até 5 d para todos os testes. Primeiros ovos postos foram encontrados em até 48 horas após a primeira hematofagia das fêmeas. O número médio de ovos/fêmea/dia (o/f/d) no teste 1 foi de 2,5 e no teste 2 variou entre 0,15 (Paecilomyces carneus CG 525) e 1,3 o/f/d (Isaria fumoserosea CG 325). Apenas IP 46 formou hifas e novos conídios sobre ovos e reduziu significativamente a eclosão quantitativa de larvas (39,2%), comparado com o grupo controle (68,6%; t = 2,3; P = 0,04). Nos demais testes a eclosão foi acima de 40%. Primeiros adultos geralmente morreram a partir de 48 h p.t. e o maior número de mortos foi encontrado 2 a 4 d depois, independentemente do teste realizado. A maior mortalidade, 10 d p.t. foi 39% (IP 46), seguido por 28% (Isaria farinosa CG 195), 16,4% (Paecilomyces marquandii CG 190), 8% (Penicillium sp IP 182), 6,8% (P. carneus CG 525), 4,7% (Paecilomyces lilacinus CG 362) e 4,6% (I. fumoserosea CG 325). A mortalidade encontrada para os controles foi ≤ 12% no mesmo momento. Mosquitos tratados com CG 195, CG 525, IP 46, CG 325 e CG 190 tiveram desenvolvimento de fungo em cadáveres. Mosquitos mortos pertencentes aos grupos tratados com os isolados IP 182, CG362 e controle não tiveram desenvolvimento de micélio. Os resultados mostraram que, de acordo com o tipo de aplicação utilizada, fêmeas de A. aegypti contaminaram ovos e assim propagaram a micose. Tratamento com conídios secos levou a uma maior contaminação das fêmeas e assim também dos ovos postos, comparada com a aplicação indireta utilizada para os demais fungos, no qual provavelmente a contaminação ficou restrita às partes do corpo em contato com a superfície tratada. A mortalidade reduzida encontrada para todos os fungos e para ambas técnicas pode estar relacionada à umidade subotima na qual foram mantidos os mosquitos e também ao tempo curto de observação dos adultos póstratamento. Os fungos testados têm atividade reduzida em adultos de A. aegypti e fêmeas desse mosquito podem transmitir a micose durante a oviposição. Mais estudos precisam ser feitos para selecionar linhagens mais virulentas e entender melhor mecanismos de infecção e transmissão horizontal de fungos em A. aegypti.</dcvalue><dcvalue element="description" qualifier="resumo" language="por">O interesse em fungos entomopatogênicos para controle integrado de mosquitos é grande. Entretanto pouco se sabe sobre o efeito de fungos em adultos e transmissão de micoses em Aedes aegypti. No presente trabalho, estudaram-se, em condições de laboratório, a atividade adulticida e a propagação da infecção para ovos postos por fêmeas tratadas com três isolados de Paecilomyces spp, dois Isaria spp, um Penicillium sp e um Metarhizium anisopliae. Foram realizados dois experimentos: Com conídios secos de M. anisopliae IP 46 a 5x104 conídios/cm3 (Teste 1) e com conídios dos outros fungos formulados em óleo-água, a 10% do óleo, a 106 conídios/cm2 (Teste 2). As fêmeas foram alimentadas com sangue de camundongo em dias alternados e, para ambos os sexos, solução açucarada (5%) foi ofertada ad libitum. Os adultos foram mantidos a 25ºC, umidade relativa (UR) de 70% e fotofase de 12 h até 10 d póstratamento (p.t.). Indivíduos mortos e ovos postos foram retirados, contados e incubados em UR > 98% e 25ºC por 15 d. Os ovos foram em seguida submersos em água e a eclosão de larvas avaliada diariamente até 5 d para todos os testes. Primeiros ovos postos foram encontrados em até 48 horas após a primeira hematofagia das fêmeas. O número médio de ovos/fêmea/dia (o/f/d) no teste 1 foi de 2,5 e no teste 2 variou entre 0,15 (Paecilomyces carneus CG 525) e 1,3 o/f/d (Isaria fumoserosea CG 325). Apenas IP 46 formou hifas e novos conídios sobre ovos e reduziu significativamente a eclosão quantitativa de larvas (39,2%), comparado com o grupo controle (68,6%; t = 2,3; P = 0,04). Nos demais testes a eclosão foi acima de 40%. Primeiros adultos geralmente morreram a partir de 48 h p.t. e o maior número de mortos foi encontrado 2 a 4 d depois, independentemente do teste realizado. A maior mortalidade, 10 d p.t. foi 39% (IP 46), seguido por 28% (Isaria farinosa CG 195), 16,4% (Paecilomyces marquandii CG 190), 8% (Penicillium sp IP 182), 6,8% (P. carneus CG 525), 4,7% (Paecilomyces lilacinus CG 362) e 4,6% (I. fumoserosea CG 325). A mortalidade encontrada para os controles foi ≤ 12% no mesmo momento. Mosquitos tratados com CG 195, CG 525, IP 46, CG 325 e CG 190 tiveram desenvolvimento de fungo em cadáveres. Mosquitos mortos pertencentes aos grupos tratados com os isolados IP 182, CG362 e controle não tiveram desenvolvimento de micélio. Os resultados mostraram que, de acordo com o tipo de aplicação utilizada, fêmeas de A. aegypti contaminaram ovos e assim propagaram a micose. Tratamento com conídios secos levou a uma maior contaminação das fêmeas e assim também dos ovos postos, comparada com a aplicação indireta utilizada para os demais fungos, no qual provavelmente a contaminação ficou restrita às partes do corpo em contato com a superfície tratada. A mortalidade reduzida encontrada para todos os fungos e para ambas técnicas pode estar relacionada à umidade subotima na qual foram mantidos os mosquitos e também ao tempo curto de observação dos adultos póstratamento. Os fungos testados têm atividade reduzida em adultos de A. aegypti e fêmeas desse mosquito podem transmitir a micose durante a oviposição. Mais estudos precisam ser feitos para selecionar linhagens mais virulentas e entender melhor mecanismos de infecção e transmissão horizontal de fungos em A. aegypti

Uma das principais espécies de ácaro praga é o ácaro rajado, Tetranychus urticae. Um dos inimigos naturais mais importantes deste ácaro é o patógeno Neozygites floridana. Para viabilizar o uso deste patógeno através de liberações inoculativas, ainda são necessárias informações básicas para subsidiar o desenvolvimento de uma metodologia de produção em escala e para liberações do fungo em campo. Para tanto, foi determinado em laboratório, a exigência de umidade e temperatura para a esporulação do fungo, colocando-se ácaros mumificados em folhas de feijão-de-porco. A 80 e 85% de umidade, em nenhuma das temperaturas (13, 17, 21 e 25°C) ocorreu esporulação. O fungo esporulou pouco a 90% UR em todas as temperaturas. As melhores condições para formação de capiloconídios foram a 95% e 100% UR a 21°C e 25°C. Ácaros mumificados foram colocados para esporular em feijão-de-porco em telados em diferentes épocas do ano e a temperatura e umidade monitorada. Notou-se que acima de 13°C o fungo conseguiu produzir um número considerável de conídios primários (>130) mesmo a 90% UR. Entretanto, nesta UR somente a 25°C a produção de capiloconídios foi significativa (>389). Determinou-se o efeito da exposição de duas intensidades luminosas (2.960 Lux e 15.392 Lux), três fotoperíodos (24h de luz, 12:12h(L:E) e 24h de escuro) e duas temperaturas (18°C e 23°C), na produção de conídios primários e de capiloconídios de isolados da Noruega e do Brasil. Ácaros mumificados foram expostos aos diferentes tratamentos em BOD. Não foram encontradas diferenças entre os dois isolados nas duas temperaturas testadas. Os resultados para o fotoperíodo de 12:12h(L:E) foram similares aos encontrados para 24h de escuro. A inibição da luz na formação de capiloconídios foi maior no isolado Norueguês. Baixa intensidade de luz por 24h teve efeito moderado na esporulação dos dois isolados, mas inibiu fortemente a formação de capiloconídios no isolado Norueguês. Foram realizados estudos para avaliar o efeito de agrotóxicos utilizados na produção de morango no Brasil e na Noruega sobre a esporulação e produção de capiloconídios de N. floridana em laboratório. Os resultados revelaram que Tebuconazol, Fenpropatrina na concentração recomendada e Abamectina na metade da concentração recomendada, foram os menos agressivos a N. floridana. Foram também realizadas tentativas de produção em escala deste fungo. Através de inoculações experimentais em telado foi possível induzir epizootias em populações de T. urticae em plantas de feijão de porco em vasos nos telados. Liberações de quatro ácaros mumificados por vaso foi a forma mais prática de inoculação. Maiores quantidades de ácaros mumificados foram produzidos quando as condições climáticas foram caracterizadas por alta UR e 20°C, sendo que durante o inverno a produção não foi eficiente. O uso de lâmpadas e ventiladores durante o período noturno ao final da epizootia, foi eficiente em inibir a esporulação e garantir a qualidade dos ácaros mumificados para o armazenamento. Embora tenha sido possível produzir um grande número de ácaros mumificados, vários estudos ainda são necessários para desenvolver uma metodologia de produção em escala para que seja economicamente viável a sua utilização em campo. / One of the main pest mite species is the Twospotted Spider Mite, Tetranychus urticae. The most important natural enemy of this mite is the pathogen Neozygites floridana. To enabling the use of this pathogen through inoculative releases, basic information is still needed to support the large scale methodology development for fungus production and release in the field. It was determined in the laboratory, the humidity and temperature requirements for fungus sporulation, by placing mummified mites on Jack-bean leaves. There was no sporulation at any of the temperatures tested (13, 17, 21 and 25°C) at 80% and 85% RH. The fungus had low sporulation at 90% RH at all temperatures. The best conditions for the capilloconidia development were 95% and 100%RH at 21°C and 25°C. Mummified mites were placed to sporulate in Jack-bean plants inside screenhouses at different times of year and temperature and humidity were monitored. It was noted that above 13°C the fungus can produce a considerable number of primary conidia (> 130) even at 90%RH. However, only at 90%RH and 25°C the capilloconidia production is significant (> 389). It was determined the effect of exposure of two light intensities (2.960 Lux and 15.392 Lux), three photoperiods (24h of light, 12:12h(L:D) and 24h of darkness) and two temperatures (18°C and 23°C), on the production of primary conidia and capilloconidia of N. floridana isolates from Norway and Brazil. Fungus-killed cadavers by each of the isolates were exposed to different treatments in BOD. No differences were found between the two isolates in the two temperatures tested. The results for the 12:12h(L:D) were similar to those found for 24h of darkness. Light inhibition of capilloconidia formation was greater on Norwegian isolate. Low light intensity for 24h had a mild effect on sporulation of the two isolates, but strongly inhibited the formation of capilloconidia of the Norwegian isolate. Studies were carried out to evaluate the effect of pesticides used in production of strawberries in both countries on sporulation and capilloconidia production of N. floridana in the laboratory. The results showed that Tebuconazole and Fenpropatrin in the recommended concentration and Abamectin in half of the recommended concentration were the less aggressive to N. floridana. Attempts to scale production of this fungus were also made. Through experimental inoculations it was possible to induce epizootics of the fungus in T. urticae populations on Jack-beans, planted in pots in screenhouses. The most convenient way for inoculation of the fungus was to release four mummified mites per pot. Larger quantities of mummified mites by N. floridana were produced when climatic conditions were characterized by high RH and 20°C, during the winter production was inefficient. The use of light and fans at night during the end of the epizootic phase, was effective in inhibiting the sporulation of the fungus and ensure the quality of mummified mites for storage. Although it was possible to produce a large number of mummified mites, several studies are still needed to develop an economically viable methodology for large scale production for field use.

Os fungos entomopatogênicos do gênero Metarhizium e Beauveria compreendem um importante grupo de patógenos de artrópodes-praga. A seleção de isolados de fungos promissores é a primeira e uma das mais importantes etapas no desenvolvimento de um biopesticida, pois alguns isolados podem apresentar alta virulência e não necessariamente boa produção em substrato e vice-versa, sendo interessante a combinação desses dois parâmetros para a viabilidade comercial de um produto. A dificuldade de criação ou manutenção de algumas espécies de pragas em laboratório é um limitante para a condução de testes de virulência, tornando-se interessante a utilização de espécies modelo, de fácil criação, nas etapas preliminares de seleção. Nesse sentido, este estudo objetivou selecionar isolados com alta produção de conídios e virulência, comparando a eficiência de controle de M. anisopliae e B. bassiana às pragas alvo Mahanarva fimbriolata e Bemisia tabaci Biótipo B, respectivamente, com a mortalidade em Tenebrio molitor. Inicialmente, foram selecionados 50 isolados a partir de 100 isolados de cada gênero, baseado em avaliações visuais do crescimento e esporulação em meio de cultivo em placas de Petri. Estes isolados selecionados foram cultivados em arroz parboilizado para quantificação do rendimento produtivo de conídios. Os 25 isolados mais produtivos de cada espécie de fungo foram utilizados nos bioensaios com T. molitor. Posteriormente, os cinco isolados que causaram maior e menor mortalidade de cada gênero, foram utilizados nos bioensaios com as respectivas pragas-alvo. A variação no rendimento de conídios de Beauveria spp., foi de 0,3 a 7,7 x 109 conídios.grama de arroz-1 e de Metarhizium spp. foi de 0,1 a 2,5 x 109 conídios.grama de arroz-1. A mortalidade confirmada de larvas de T. molitor por Beauveria spp., variou de 5,5 a 96,4% e por M. anisopliae variou de 29,1 a 89,1%. Alguns isolados causaram mortalidade elevada tanto no inseto modelo quanto na praga-alvo, porém, não foi verificada uma relação entre a virulência para as duas espécies. Da mesma forma, não foi observada associação entre os parâmetros produção de conídios e virulência. O isolado ESALQ 4958 de B. bassiana se destacou nos dois bioensaios apresentando mortalidades elevadas de ninfas de B. tabaci Biótipo B. Nos bioensaios utilizando ninfas de M. fimbriolata, ESALQ 1641 foi o isolado que apresentou os maiores percentuais de mortalidade nos dois bioensaios. Analisando conjuntamente as variáveis produção de conídios e virulência a T. molitor e a espécie alvo, os isolados ESALQ 540 (B. bassiana) e ESALQ 1116 (M. anisopliae) se destacaram por apresentarem valores elevados para todas as variáveis de interesse. Os resultados reforçam a necessidade de uma análise conjunta destas variáveis com um peso diferenciado para cada variável na seleção de isolados para utilização em produtos microbianos para o controle de pragas. / The genus Metarhizium spp. and Beauveria spp. are important entomopathogenic fungi used to control arthropod pests. The selection of promising fungal isolates is the first and one of the most important steps on the development of a biopesticide, since some isolates may present high virulence and not necessarily good production in substrate and vice-versa, being the combination of these two parameters important for the commercial viability. Difficulties of rearing or maintaining some species of pests in laboratory are limitations for the conduction of virulence tests, justifying the use of easy to breed model species on the preliminary steps of selection. Therefore, this study aimed to select isolates with high conidia production and virulence, comparing the control efficiency of M. anisopliae and B. bassiana to the target pests, Mahanarva fimbriolata and Bemisia tabaci biotype B, respectively, with mortality in Tenebrio molitor. At first, 50 isolates were selected from 100 isolates of each genus, based on growth and sporulation in culture medium on Petri dishes. These isolates were grown in parboiled rice to quantify the yield of conidia. The 25 most productive isolates of each fungus species were used in the bioassays with T. molitor. After, the five isolates that caused higher and lower mortality of each genus were used in the bioassays with the respective target pests. Beauveria spp. conidia yield ranged from 0.3 to 7.7 x 109 conidia.grams of rice-1 and Metarhizium spp. from 0.1 to 2.5 x 109 conidia.gram of rice-1. The confirmed mortality of T. molitor larvae by Beauveria spp. varied from 5.5 to 96.4% and M. anisopliae varied from 29.1 to 89.1%. Some isolates caused high mortality in both, model insect and the target pest; however, no relationship between the virulence of both species was observed. Similarly, there was no association between the parameters conidia production and virulence. The B. bassiana isolate ESALQ 4958 in both bioassays presented high mortalities of B. tabaci Biotype B. In bioassays using M. fimbriolata nymphs, ESALQ 1641 was the isolate that presented the highest mortalities in both bioassays. Analyzing the variables, conidia production and virulence to T. molitor and the target species, the isolates ESALQ 540 (B. bassiana) and ESALQ 1116 (M. anisopliae) showed high values for all variables of interest. The results reinforce the necessity of a joint analysis of these variables with different weight for each one in the selection of isolates, aiming to use them in microbial products for pest control.

Avaliou-se a patogenicidade de 50 isolados de 8 espécies de fungos entomopatogênicos e o produto comercial Boverilâ, formulado com isolado ESALQ-447 de B. bassiana para ninfas de 2 e 3 ínstar de Orthezia praelonga. Em outro experimento avalio-se a produção do isolado selecionado em dois sistemas de produção. Nos ensaios de seleção foram usados tubetes de citros infestados pela cochonilha. O patógeno foi inoculado pulverizando-se 5mL de suspensão conidial por muda, na concentração de 1 x 108 conídios/mL, utilizando-se um pulverizador com pressão constante de 0,5 libras/segundo. As mudas foram mantidas em estufas B.O.D. (25±0,5°C, 70±10% UR e 12 horas de fotofase). Dos isolados testados, 30 foram patogênicos para cochonilha causando mortalidade corrigida que variaram de 1,0 % a 46,6%, sendo que os melhores resultados foram obtidos com os isolados ESALQ-972 e ESALQ-1300 de V. lecanii que proporcionaram 46,6 % e 40,5%, respectivamente, após 12 dias da aplicação. Para os testes de produção foram utilizados dois métodos. O método da bandeja no qual se utilizou o arroz pré-cozido, esterilizado e inoculado com fungo em bandejas de plástico, com ciclo de produção de 15 dias. No outro método, utilizou-se de uma caixa plástica, contendo uma lâmina d’água no fundo do recipiente e um sistema de aeração constante para fornecer pressão positiva e manter o ambiente com umidade acima de 90 %. O isolado testado foi o ESALQ-972, e os métodos da bandeja e da caixa proporcionaram produção de 1,8 x 109 e 1,0 x 109 conídios/grama de arroz, respectivamente. / The pathogenicity was evaluated for 50 isolates of 8 species of entomopathogenic fungi and the commercial product Boverilâ, composed by the isolate ESALQ-447 of B. bassiana for nymphs of 2 and 3 instar of Orthezia praelonga. In another experiment the production of the isolated was selected in two production systems. In the selection tests, seedlings of citrus infested by the scale were used. The pathogen was inoculated pulverizing 5 ml of conidial suspension by seedlings, with a concentration of 1 x 108 conidia/ml, using a pulverizer with constant pressure of 0.5 lbs/second. The seedlings were kept in B.O.D. (25±0,5°C, 70±10% UR and 12 hours of photophase). From the isolates tested, 30 were pathogenic to the scale causing corrected mortality that varied from 1.0% to 46.6%, while the best results were obtained with the isolates ESALQ-972 and ESALQ-1300 of V. lecanii which generated 46.6% e 40.5%, respectively, after 12 days of aplication. For the production tests two methods were utilized. The tray method, which used the pre-cocked rice, sterilized and inoculated with fungus in plastic trays, with a production cicle of 15 days. In the other method, a plastic box was used, containing a water blade in the bottom and a constant ventilation system to provide positive pressure and keep the environment with humidity above 90%. The isolate tested was the ESALQ-972, resulting that the tray and the plastic box methods produced 1.88 x 109 and 1.0 x 109 conidia/gram of rice, respectively.

Avaliou-se a patogenicidade de diversas espécies de fungos entomopatogênicos a ninfas de 2&#186; a 4&#186; ínstares do psilídeo Diaphorina citri. Assim foram feitos bioensaios com Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, Lecanicillium muscarum, L. longisporum, Paecilomyces fumosoroseus, P. farinosus, Syngliocladium sp. na concentração de 5x107 conídios/mL para cada patógeno, com exceção de Hirsutella thompsonii que foi aplicado na concentração de 2,8x107 conídios/mL. Utilizou-se mudas de murta, Murraya paniculata, infestadas com ninfas do inseto que foram pulverizadas com as suspensões conidiais. Os fungos B. bassiana, M. anisopliae, H. thompsonii, L. muscarum e P. fumosorosus foram patogênicos para as ninfas do psilídeo. O isolado mais promissor foi o Esalq-PL63, de B. bassiana, que causou mortalidade de aproximadamente 72% das ninfas, sete dias após a inoculação. Esse fungo também afetou o processo de metamorfose das ninfas. A concentração letal média (CL50) foi calculada em 2,3 x 107 conídios/mL. O ciclo de infecção de B. bassiana sobre as ninfas do psilídeo foi estudado pulverizando-se a suspensão de 3x108 conídios/mL do fungo e, em seguida, observado em microscopia de luz e microscopia eletrônica de varredura, nos intervalos de tempo de 0, 24, 48, 72 e 168 horas após a inoculação. Constatou-se que o referido patógeno não conseguiu completar o desenvolvimento no corpo do hospedeiro, uma vez que a fase de conidiogênese é inibida, provavelmente, pela presença no interior do inseto de bactérias antagônicas ao seu desenvolvimento. O isolado Esalq-PL63 é um promissor agente de controle microbiano de ninfas de D. citri por afetar sua fisiologia e causar em altos índices de mortalidade. / It was evalueted the patogenicity of several species of entomopathogenic fungi against 2nd to 4th instar of Diaphorina citri. For the bioassays with Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, Lecanicillium muscarum, L. longisporum, Paecilomyces fumosoroseus, P. farinosus, Syngliocladium sp. a concentration of 5x107 conidia.mL-1 was used. For the Hirsutella thompsonii strain the concentration used was 2.8x107 conidia.mL-1. Seedlings of orange jasmine, Murraya paniculata, infested with nymphs of the insect were sprayed with the conidia suspensions. The fungi B. bassiana, M. anisopliae, H. thompsonii, L. longisporum and P. fumosoroseus were pathogenic to nymphs. The strain of B. bassiana (Esalq-PL63) was the most pathogenic causing 72% mortality after seven days of inoculation. This fungus also affected the process of nymph molting. The letal concentration (LC50) calculated was 2.3x107 conidia.mL-1. To prove mortality the pathogen was reisolated in media culture (AN, MC and BDA) and besides, observed under microscope examination. The infection cycle of B. bassiana in nymphs was studied after inoculation of 3x108 conidia.mL-1. This process were evaluated with the use of a light microscope and an electron scan microscope, after 0, 24, 48, 72 and 168 hours of conidia sprayed. This strain did not complete the development in the host because the conidiogenesis was inhibited, probably because it was found antagonistic bacteria into the host. However, this isolate is a potencial microbial control agent of nymphs of D. citri, affecting its physiology and causing high mortality.

Orientador: Silvia Renata Siciliano Wilcken / Banca: Maria José Marchi Garcia / Banca: Luis Garrigóis Leite / Resumo: Nos últimos anos, tem-se estudado o uso de nematóides entomopatogênicos (NEPs) como estratégia de controle de nematoides parasitas de plantas. No entanto, são necessários estudos que comprovem em quais fases do desenvolvimento dos nematoides fitoparasitas ocorre o efeito dos NEPs e os mecanismos envolvidos. Para verificar a influência Steinernema brazilense IBCB 06, S. feltiae (Filipjev) IBCB 47, S. rarum (Doucet) IB (Rhabditida: Steinernematidae), Heterorhabditis amazonensis IBCB 24 e H. bacteriophora (Poinar) IB (Rhabditida: Heterorhabditidae) na eclosão do fitonematoide M. enterolobii, 500 ovos e 1.000 juvenis infectantes de cada espécie de nematoide entomopatogênico foram colocados em um recipiente de plástico totalizando 25 mL de suspensão e mantidos em câmara incubadora a 25ºC. O número de juvenis eclodido na suspensão foi contado a cada dois dias totalizando 10 dias. Para contagem, foi retirado um mL de suspensão e o nematoide contado na câmara de Peters sob microscópio de luz. Para avaliar o efeito dos NEPs sobre a mortalidade de juvenis infectantes de M. enterolobii, 500 juvenis infectantes de e 1.000 juvenis de cada espécie de nematoide entomopatogênico foram colocados em um recipiente de plástico totalizando 25 mL de suspensão. A mortalidade foi avaliada a cada dois dias por um tempo de 10 dias. A avaliação da mortalidade de M. enterolobii foi realizada pela contagem dos nematoides móveis e imóveis adicionando-se duas gotas de NaOH 1N à suspensão de nematoides. A c... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In recent years, the use of entomopathogenic nematodes (EPNs) has been studied as a strategy to control plant parasitic nematodes. However, studies are needed to prove in which phases of development of plant-parasitic-nematodes occurs the effect of EPNs and the mechanisms involved. To verify the influence of Steinernema brazilense IBCB 06, S. feltiae (Filipjev) IBCB 47, S. rarum (Doucet) IB (Rhabditida: Steinernematidae), Heterorhabditis amazonensis IBCB 24 e H. bacteriophora (Poinar) IB (Rhabditida: Heterorhabditidae) in the hatching of M. enterolobii, 500 eggs and 1.000 infective juveniles of each entomopathogenic nematode species were placed in a plastic container totaling 25 ml of suspension and kept in an incubator chamber at 25 °C. The number of juveniles hatched in the suspension was counted every two days totaling 10 days. For counting, one mL of suspension was withdrawn and the nematode counted in a Peters's chamber under light microscope. To evaluate the effect of EPNs on the mortality of M. enterolobii infective juveniles, 500 juvenile infective of 1000 juveniles of each entomopathogenic nematode species were placed in a plastic container totaling 25 mL of suspension. Mortality was assessed every two days for a time of 10 days. The evaluation of M. enterolobii mortality was performed by counting the mobile and immobile nematodes by adding two drops of 1N NaOH to the nematode suspension followed by counting, considering the dead straight and immobile nematodes, and, alive, the twisted ones. The experiments were conducted in a completely randomized experimental design, in a subdivided plots scheme with six replications. The data were submitted to analysis of variance, comparing the means by the Scott-Knott test to 5% probability in the R Development Core Team program.To evaluate the effect of EPNs on M. enterolobii infection, tomato seedlings were inoculated with 500 eggs and infective ... / Mestre

A cultura dos citros é considerada de muita importância para a economia brasileira. Atualmente, o inseto Diaphorina citri tem sido considerado como o principal problema dessa cultura, por ser vetor da bactéria Candidatus Liberibacter asiaticus (?-Proteobacteria) causadora da doença conhecida como Greening. Além de D. citri, a cultura dos citros apresenta inúmeras espécies de insetos e ácaros pragas que reduzem a qualidade e a produção dos frutos e requerem medidas de controle. O controle das espécies pragas tem sido realizado quase exclusivamente por aplicações frequentes de pesticidas químicos. Recentemente, isolados dos fungos entomopatogênicos Isaria fumosorosea e Beauveria bassiana foram selecionados para o controle de D. citri. Nesse estudo investigou-se a patogenicidade destes isolados associados a adjuvantes no controle de ninfas e adultos dos insetos Diaphorina citri, Toxoptera citricida, Aleurocanthus woglumi, Praelongorthezia praelonga e adultos dos ácaros Brevipalpus phoenicis e Panonychus citri em condições de laboratório. Notou-se que os fungos estudados foram patogênicos para quase todas as espécies de pragas, com a execção do fungo B. bassiana para ninfas e adultos de P. praelonga. As maiores mortalidade provocadas pelos fungos entomopatogênicos foram obtidas para ninfas e adultos de D. citri (>86% e 55,7%, respectivamente) e T. citricida (>90% e 90,8%, respectivamente), onde também foi encontrado o maior nível de esporulação por indivíduo. Essas duas espécies pragas foram selecionadas para os ensaios de transmissão horizontal, onde foi avaliada a transferência de conídios dos fungos entomopatogênicos entre indivíduos esporulados e não infectados. Nos experimentos de laboratório foi observado que I. fumosorosea e B. basssiana apresentaram transmissão horizontal entre cadáveres e adultos não infectados de D. citri (intra-específica) e adultos de T. citricida para D. citri (inter-específica). Os mesmos resultados foram obtidos nos experimentos em semi-campo com adultos de D. citri. Podemos concluir que os fungos entomopatogênicos I. fumosorosea e B. bassiana apresentam potencial como agentes de controle de D. citri, T. citricida, A. woglumi, B. phoenicis, P. citri. A transmissão horizontal dos fungos apartir de T. citricida e D. citri infectados para adultos sadios de D. citri pode contribuir para o controle desta praga em campo. / The citrus crops are considered of great importance to the Brazilian economy. Currently, the insect Diaphorina citri is considered as the major pest of this crop, as a vector of the bacterium Candidatus Liberibacter asiaticus (? - Proteobacteria) causing the disease known as Greening. Besides D. citri, the orange crop has numerous species of insect and mites pests that reduce the quality and yield of fruits and require control. The control of pest species is carried out almost exclusively by frequent applications of chemical pesticides. Recently, isolates of the entomopathogenic fungi Isaria fumosorosea and Beauveria bassiana were selected for the control of D. citri. This study investigated the pathogenicity of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana and Isaria fumosorosea associated adjuvants on nymphs and adults of the insects Diaphorina citri, Toxoptera citricida, Aleurocanthus woglumi, Praelongorthezia praelonga and adult mites and B. phoenicis, Panonychus citri in laboratory conditions. The fungi studied were pathogenic to almost all pests species, with exception of the fungus B. bassiana against nymphs and adults of P. praelonga. The highest mortality caused by the entomopathogenic fungi were obtained for nymphs and adults of D. citri (> 86% and 55.7%, respectively) and T. citricida (> 90% and 90.8%, respectively), where we also found the highest level of sporulation per individual. These two pest species were selected to test horizontal transmission, which evaluated the transmission of disease between sporulated and healthy individuals. In the laboratory experiments, we observed that I. fumosorosea and B. basssiana showed horizontal transmission between cadavers and healthy adults of D. citri (intraspecific) and adults of T. citricida to D. citri (interspecific). Similar results were obtained in experiments in semi-field conditions with adults of D. citri. The results show that the potential of the entomopathogenic fungi I. fumosorosea and B. bassiana to control D. citri, T. citricida, A. woglumi, B. phoenicis, P. citri. Horizontal transmission of the disease from infected T. citricida and D. citri to health adults of D. citri may improve the control of D. citri in fields.

Dentre 45 isolados de Hyphomycetes testados, oito de Beauveria bassiana e quatro de Metarhizium anisopliae causaram em Tetranychus urticae, mortalidades superiores a 80 e 90%, respectivamente, cinco dias após a inoculação na concentração de 5x10 7 conídios/mL. Hirsutella sp. atingiu 73% de mortalidade na concentração de 1,7x10 7 conídios/mL. Entre 80 a 100% dos cadáveres de ácaros colonizados pelos isolados de B. bassiana e M. anisopliae apresentavam, internamente, cristais de cálcio. Conídio aéreo, blastósporo e célula de levedura de cinco isolados B. bassiana foram patogênicos a esta praga. Diferenças significativas (P ³ 0,05) para CL50 e coeficiente angular entre os isolados e entre as estruturas infectivas foram observadas. Os valores da CL50 variaram de 4,95x10 6 a 8,21x10 7 estruturas infectivas/mL. Não houve diferença significativa entre as estruturas infectivas para os dois parâmetros avaliados, contudo, houve diferenças significativas para a CL50 entre as estruturas infectivas em um mesmo isolado de B. bassiana. Três formulações de fungicidas, 24 de inseticidas e/ou acaricidas foram compatíveis com B. bassiana, sendo formulados com as seguintes moléculas: propamocarb hidrocloreto, enxofre, abamectin, acefato, acetamiprid, betacyflutrin, bifentrina, ciromazina, deltametrina, diafentiuron, diflubenzuron, dimetoato, fenpropatrina, fenpyroximate, fenvalerate, imidacloprid, metamidofós, propargite, tebufenozide e triclorfon. Houve grande variação na toxicidade dos produtos dentro de cada grupo químico e produtos formulados com a mesma molécula química. B. bassiana foi eficiente no controle de T. urticae em crisântemo (Dendranthema grandiflora) cultivado em estufa, quando pulverizado na concentração de 2x10 8 conídios/mL. O controle microbiano foi superior ao proporcionado pelo controle químico utilizado na propriedade agrícola. Efetuando-se quatro pulverizações do fungo em um período de 14 dias, a densidade reduziu de 1,8 para 0,1 ácaro/folha. Na cultura do morango (Fragaria spp.) a eficiência de B. bassiana foi inferior ao crisântemo, com densidade média de ácaros ao longo de 21 dias de avaliação para as concentrações 1x10 8 e 5x10 7 conídios/mL de 13 ácaros/folíolo, contra 43 ácaros/folíolo nas parcelas não tratadas. As variedades de morango Campinas e Princesa Isabel foram as que apresentaram as menores densidades do ácaro, contudo, não houve evidência de que estas variedades interferiram na eficiência de controle da praga por B. bassiana. Assim, M. anisopliae, B. bassiana e Hirsutella sp. foram os fungos mais promissores para serem formulados como micoacaricidas para o controle de T. urticae. / Among 45 isolates of hyphomycetes tested against Tetranychus urticae, 8 Beauveria bassiana and 4 Metarhizium anisopliae isolates caused mortality > 80 and 90%, respectively, 5 days after inoculation with 5x10 7 conidia/mL. Hirsutella sp. caused 73% mortality at a concentration of 1.7x10 7 conidia/mL. Eighty to 100% of cadavers infected by B. bassiana or M. anisopliae isolates had calcium crystals inside their bodies. Conidia, blastospores and yeastlike cells of five B. bassiana isolates were pathogenic against this pest. Significant differences (P ³ 0.05) were observed among the LC50's and slopes of dose-mortality lines for the different isolates and infective structures. LC50 values ranged from 4.95x10 6 to 8.21x10 7 cells/mL. There were no significant differences among the infective structures in the two tested variables. However, there were significant differences among the LC50's with different infective structures within the same B. bassiana isolate. Three fungicide formulations and 24 insecticides and/or mitecides were compatible with B. bassiana including those with the following active ingredients: propamocarb hydrochloride, sulphur, abamectin, acephate,acetamiprid, betacyfluthrin, bifenthrin, cyromazine, deltamethrin, diafentiuron, diflubenzuron, dimethoate, fenpropathrin, fenpyroximate, fenvalerate, imidacloprid, methamidophos, propargite, tebufenozide and trichlorfon. There was large variability in the toxicity of products withing a chemical group and products containing the same active ingredient. B. bassiana was an efficient T. urticae mite control in chrysanthemum (Dendranthema grandiflora), when applied at a concentration of 2x10 8 conidia/mL. Microbial control was better than that provided by chemical pesticides normally used in the greenhouses. With four fungal sprays within 14 days, the mite density was reduced from 1.8 to 0.1 mite/leaf. In strawberry (Fragaria sp.), T. urticae control was lower than in chrysanthemum, with mean density of mites for 21 days after application of 1x10 8 or 5x10 7 conidia/mL at 13 mites/leaflet, compared to 43 mites/leaflet in control plots. The strawberry varieties 'Campinas' and 'Princesa Isabel' had the lowest mite densities, however, these varieties did not affect the efficacy of mite control by B. bassiana. Thus, M. anisopliae, B. bassiana and Hirsutella sp. were the most promissing fungi to be formulated as mycomiticides for T. urticae control.