Avaliou-se a patogenicidade de 50 isolados de 8 espécies de fungos entomopatogênicos e o produto comercial Boverilâ, formulado com isolado ESALQ-447 de B. bassiana para ninfas de 2 e 3 ínstar de Orthezia praelonga. Em outro experimento avalio-se a produção do isolado selecionado em dois sistemas de produção. Nos ensaios de seleção foram usados tubetes de citros infestados pela cochonilha. O patógeno foi inoculado pulverizando-se 5mL de suspensão conidial por muda, na concentração de 1 x 108 conídios/mL, utilizando-se um pulverizador com pressão constante de 0,5 libras/segundo. As mudas foram mantidas em estufas B.O.D. (25±0,5°C, 70±10% UR e 12 horas de fotofase). Dos isolados testados, 30 foram patogênicos para cochonilha causando mortalidade corrigida que variaram de 1,0 % a 46,6%, sendo que os melhores resultados foram obtidos com os isolados ESALQ-972 e ESALQ-1300 de V. lecanii que proporcionaram 46,6 % e 40,5%, respectivamente, após 12 dias da aplicação. Para os testes de produção foram utilizados dois métodos. O método da bandeja no qual se utilizou o arroz pré-cozido, esterilizado e inoculado com fungo em bandejas de plástico, com ciclo de produção de 15 dias. No outro método, utilizou-se de uma caixa plástica, contendo uma lâmina d’água no fundo do recipiente e um sistema de aeração constante para fornecer pressão positiva e manter o ambiente com umidade acima de 90 %. O isolado testado foi o ESALQ-972, e os métodos da bandeja e da caixa proporcionaram produção de 1,8 x 109 e 1,0 x 109 conídios/grama de arroz, respectivamente. / The pathogenicity was evaluated for 50 isolates of 8 species of entomopathogenic fungi and the commercial product Boverilâ, composed by the isolate ESALQ-447 of B. bassiana for nymphs of 2 and 3 instar of Orthezia praelonga. In another experiment the production of the isolated was selected in two production systems. In the selection tests, seedlings of citrus infested by the scale were used. The pathogen was inoculated pulverizing 5 ml of conidial suspension by seedlings, with a concentration of 1 x 108 conidia/ml, using a pulverizer with constant pressure of 0.5 lbs/second. The seedlings were kept in B.O.D. (25±0,5°C, 70±10% UR and 12 hours of photophase). From the isolates tested, 30 were pathogenic to the scale causing corrected mortality that varied from 1.0% to 46.6%, while the best results were obtained with the isolates ESALQ-972 and ESALQ-1300 of V. lecanii which generated 46.6% e 40.5%, respectively, after 12 days of aplication. For the production tests two methods were utilized. The tray method, which used the pre-cocked rice, sterilized and inoculated with fungus in plastic trays, with a production cicle of 15 days. In the other method, a plastic box was used, containing a water blade in the bottom and a constant ventilation system to provide positive pressure and keep the environment with humidity above 90%. The isolate tested was the ESALQ-972, resulting that the tray and the plastic box methods produced 1.88 x 109 and 1.0 x 109 conidia/gram of rice, respectively.

Este trabalho teve o objetivo de avaliar, em condições de laboratório, a influência da temperatura e do tempo de exposição na viabilidade e virulência dos fungos Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae em suspensões preparadas com produtos à base de Conídios puros, Arroz+fungo e nas formulações Pó molhável e Suspensão concentrada em óleo emulsionável. Inicialmente foi necessário o desenvolvimento de um método eficiente e econômico para avaliação da viabilidade, especialmente para produtos formulados em óleo emulsionável misturados em água (suspensão de aplicação). Durante o desenvolvimento do método de avaliação foram definidos parâmetros e condições adequadas para cada formulação, como o meio de cultura, e também a influência de antibióticos e fungistáticos. O protocolo estabelecido baseiase resumidamente no plaqueamento de 150 µL de uma suspensão contendo entre 0,7 e 1×106 conídios/mL em placas tipo Rodac® com 5 mL de meio de cultura Batata-Dextrose-Ágar + 5 mg/L de Pentabiótico® e 10 µL/L de Derosal® (Carbendazim), efetuando-se posteriormente a contagem dos conídios germinados. Este método foi comparado com outra técnica de viabilidade direta (VD) e com as técnicas de Unidade Formadoras de Colônia (UFC) e viabilidade por fluorescência, confrontando-se a precisão obtida pelo coeficiente de variação (CV) das análises de cada método. Os resultados demonstraram que além da facilidade de execução, o método desenvolvido apresentou maior precisão que as demais técnicas (com CV até 7 vezes menor em relação à VD, e até 32 vezes menor que UFC). Foi constatado que a técnica de UFC não é adequada para avaliações de produtos formulados, visto que em relação à quantificação inicial subestimou a concentração viável na maioria das formas dos fungos testadas, sendo que nos produtos em óleo emulsionável estes valores foram 54% menores para B. bassiana, e 73% menores para M. anisopliae. A técnica para avaliação da viabilidade da suspensão preparada com produtos formulados em óleo se mostrou eficaz, após a retirada do óleo da suspensão e outras adaptações. Suspensões de produtos e formulações a base de B. bassiana e M. anisopliae foram mantidas a 26°C, 36°C e 46°C por 1h, 4h e 6h e os efeito destes tratamentos foram medidos na viabilidade e virulência dos fungos contra lagartas de Diatraea saccharalis. Verificou-se que quanto maior o tempo de exposição e maior a temperatura, maior é a influência negativa nos parâmetros dos fungos. Entretanto, a formulação em óleo emulsionável foi a que apresentou melhor proteção aos efeitos detrimentais da temperatura. Mesmo após 6h de exposição a temperatura de 36°C a viabilidade se manteve acima dos 85% para ambos os fungos avaliados. Esta formulação também apresentou os melhores resultados de mortalidade dos insetos, e mesmo após 4h de exposição a 46°C atingiu 39% e 50% de eficiência para B. bassiana e M. anisopliae, respectivamente, sendo recomendável para o controle de D. saccharalis. O protocolo para avaliação da viabilidade de conídios de fungos entomopatogênicos proposto constitui-se como uma ferramenta importante para estudos da influência de fatores bióticos e abióticos durante o período de pré-aplicação na eficiência de micoinseticidas. / This study aimed to evaluate, under laboratory conditions, the influence of temperature and exposure time on the viability and virulence of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae in suspensions prepared with pure conidia, rice plus fungus and in formulations of wettable powder and concentrated suspension in emulsifiable oil. Initially, an efficient and economical methodology was developed to evaluate conidia viability for each formulation, especially for products formulated in emulsifiable oil mixed in water (suspension of application). During the development of the methodology, the influence of culture media, antibiotics and fungistatics and appropriate conditions were defined for each formulation. Briefly, the established protocol was based on plating 150 L of suspensions containing between 0.7 and 1×106 conidia/mL on a plate type Rodac® with 5 ml of Potato Dextrose Agar culture medium plus 5 mg/L pentabiotic® and 10mg/L and 10 µL/L Derosal® (Carbendazim) and the subsequent counting of germinated conidia. This method was compared to a direct counting (DC) technique, the technique of colony-forming unit (CFU) and viability through fluorescence. The precision of each methodology was measured by their coefficient of variability (CV). Besides its easiness of execution, the new developed methodology was the most precise of all methods (with CV up to 7 times lower compared to the DC, and up to 32 times lower than the UFC). Our results showed that the technique of UFC is not appropriate for evaluation of formulated products, as compared to the conidial quantification by hemacytometer, this technique underestimated the viable concentration in most forms of fungi tested, and for the products in emulsifiable oil these values were 54% lower for B. bassiana, and up to 73% lower for M. anisopliae. The technique for assessing the viability of the suspension prepared with products formulated in emulsifiable oil was effective, after the removal of oil from the suspension and others adaptations. The effect of temperature and period of time on conidia viability of B. bassiana and M. anisopliae-based products and formulations and their virulence against larvae of Diatraea saccharalis was measured at 26°C, 36°C and 46°C for 1h, 4h and 6h. The longer the time of heat exposure and the higher the temperature, the greater the negative influence on vital parameters of the fungi. However, the emulsifiable oil formulation was the least affected by the detrimental effects of heat for both fungi. Even after 6 hours of exposure to temperature of 36°C, the viability remained above 85% for both species evaluated. This formulation also showed the best results of insect mortality, and even after 4h of exposure to 46°C the efficiency was 39% (for B. bassiana) and 50% (for M. anisopliae), and therefore can be useful for control of D. saccharalis. The proposed protocol of evaluation of entomopathogenic fungi viability is a valuable tool for studies of biotic and abiotic factors effect on efficiency of micoinsecticides during the pre-application period.

Uma das principais espécies de ácaro praga é o ácaro rajado, Tetranychus urticae. Um dos inimigos naturais mais importantes deste ácaro é o patógeno Neozygites floridana. Para viabilizar o uso deste patógeno através de liberações inoculativas, ainda são necessárias informações básicas para subsidiar o desenvolvimento de uma metodologia de produção em escala e para liberações do fungo em campo. Para tanto, foi determinado em laboratório, a exigência de umidade e temperatura para a esporulação do fungo, colocando-se ácaros mumificados em folhas de feijão-de-porco. A 80 e 85% de umidade, em nenhuma das temperaturas (13, 17, 21 e 25°C) ocorreu esporulação. O fungo esporulou pouco a 90% UR em todas as temperaturas. As melhores condições para formação de capiloconídios foram a 95% e 100% UR a 21°C e 25°C. Ácaros mumificados foram colocados para esporular em feijão-de-porco em telados em diferentes épocas do ano e a temperatura e umidade monitorada. Notou-se que acima de 13°C o fungo conseguiu produzir um número considerável de conídios primários (>130) mesmo a 90% UR. Entretanto, nesta UR somente a 25°C a produção de capiloconídios foi significativa (>389). Determinou-se o efeito da exposição de duas intensidades luminosas (2.960 Lux e 15.392 Lux), três fotoperíodos (24h de luz, 12:12h(L:E) e 24h de escuro) e duas temperaturas (18°C e 23°C), na produção de conídios primários e de capiloconídios de isolados da Noruega e do Brasil. Ácaros mumificados foram expostos aos diferentes tratamentos em BOD. Não foram encontradas diferenças entre os dois isolados nas duas temperaturas testadas. Os resultados para o fotoperíodo de 12:12h(L:E) foram similares aos encontrados para 24h de escuro. A inibição da luz na formação de capiloconídios foi maior no isolado Norueguês. Baixa intensidade de luz por 24h teve efeito moderado na esporulação dos dois isolados, mas inibiu fortemente a formação de capiloconídios no isolado Norueguês. Foram realizados estudos para avaliar o efeito de agrotóxicos utilizados na produção de morango no Brasil e na Noruega sobre a esporulação e produção de capiloconídios de N. floridana em laboratório. Os resultados revelaram que Tebuconazol, Fenpropatrina na concentração recomendada e Abamectina na metade da concentração recomendada, foram os menos agressivos a N. floridana. Foram também realizadas tentativas de produção em escala deste fungo. Através de inoculações experimentais em telado foi possível induzir epizootias em populações de T. urticae em plantas de feijão de porco em vasos nos telados. Liberações de quatro ácaros mumificados por vaso foi a forma mais prática de inoculação. Maiores quantidades de ácaros mumificados foram produzidos quando as condições climáticas foram caracterizadas por alta UR e 20°C, sendo que durante o inverno a produção não foi eficiente. O uso de lâmpadas e ventiladores durante o período noturno ao final da epizootia, foi eficiente em inibir a esporulação e garantir a qualidade dos ácaros mumificados para o armazenamento. Embora tenha sido possível produzir um grande número de ácaros mumificados, vários estudos ainda são necessários para desenvolver uma metodologia de produção em escala para que seja economicamente viável a sua utilização em campo. / One of the main pest mite species is the Twospotted Spider Mite, Tetranychus urticae. The most important natural enemy of this mite is the pathogen Neozygites floridana. To enabling the use of this pathogen through inoculative releases, basic information is still needed to support the large scale methodology development for fungus production and release in the field. It was determined in the laboratory, the humidity and temperature requirements for fungus sporulation, by placing mummified mites on Jack-bean leaves. There was no sporulation at any of the temperatures tested (13, 17, 21 and 25°C) at 80% and 85% RH. The fungus had low sporulation at 90% RH at all temperatures. The best conditions for the capilloconidia development were 95% and 100%RH at 21°C and 25°C. Mummified mites were placed to sporulate in Jack-bean plants inside screenhouses at different times of year and temperature and humidity were monitored. It was noted that above 13°C the fungus can produce a considerable number of primary conidia (> 130) even at 90%RH. However, only at 90%RH and 25°C the capilloconidia production is significant (> 389). It was determined the effect of exposure of two light intensities (2.960 Lux and 15.392 Lux), three photoperiods (24h of light, 12:12h(L:D) and 24h of darkness) and two temperatures (18°C and 23°C), on the production of primary conidia and capilloconidia of N. floridana isolates from Norway and Brazil. Fungus-killed cadavers by each of the isolates were exposed to different treatments in BOD. No differences were found between the two isolates in the two temperatures tested. The results for the 12:12h(L:D) were similar to those found for 24h of darkness. Light inhibition of capilloconidia formation was greater on Norwegian isolate. Low light intensity for 24h had a mild effect on sporulation of the two isolates, but strongly inhibited the formation of capilloconidia of the Norwegian isolate. Studies were carried out to evaluate the effect of pesticides used in production of strawberries in both countries on sporulation and capilloconidia production of N. floridana in the laboratory. The results showed that Tebuconazole and Fenpropatrin in the recommended concentration and Abamectin in half of the recommended concentration were the less aggressive to N. floridana. Attempts to scale production of this fungus were also made. Through experimental inoculations it was possible to induce epizootics of the fungus in T. urticae populations on Jack-beans, planted in pots in screenhouses. The most convenient way for inoculation of the fungus was to release four mummified mites per pot. Larger quantities of mummified mites by N. floridana were produced when climatic conditions were characterized by high RH and 20°C, during the winter production was inefficient. The use of light and fans at night during the end of the epizootic phase, was effective in inhibiting the sporulation of the fungus and ensure the quality of mummified mites for storage. Although it was possible to produce a large number of mummified mites, several studies are still needed to develop an economically viable methodology for large scale production for field use.

Submitted by Natalia de Souza Gonçalves (natalia.goncalves@ufpe.br) on 2015-05-08T13:54:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese -Rosineide da Silva Lopes.pdf: 4920575 bytes, checksum: a0e8dab8cc071cbe13e83260ec708550 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-08T13:54:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese -Rosineide da Silva Lopes.pdf: 4920575 bytes, checksum: a0e8dab8cc071cbe13e83260ec708550 (MD5) Previous issue date: 2013-07-31 / FACEPE / A utilização de inseticidas químicos no controle de insetos-praga causa danos ao meio ambiente devido à contaminação do solo, água (lençois freáticos, rios e lagoas), fauna, flora e o próprio homem. Assim, o uso de fungos entomopatogênicos e extratos vegetais são considerados métodos eficientes e seguros, com baixo impacto ambiental. A cochonilha-do-carmim (Dactylopius opuntiae) parasita os cladódios da palma forrageira (Opuntia ficus-indica) causando perdas na produção do vegetal. Nasutitermes corniger é uma espécie de cupim arborícola considerada praga nas áreas urbanas, causando muitos prejuízos econômicos. Em função disso, o trabalho teve por objetivo avaliar a ação de três espécies de Isaria, dos extratos de folhas e vagens de Libidibia ferrea var. ferrea (= Caesalpinia ferrea var. ferrea) e da folha de Agave sisalana sobre D. opuntiae e N. corniger; o efeito dos inseticidas Clorpirifós, Acetamiprid, Thiamethoxan e Lambacyhalothrin sobre a D. opuntiae,. bem como a ação sinergética dos extratos e dos inseticidas sobre o crescimento micelial, esporulação e germinação dos conídios dos fungos. Neste estudo foram realizados bioensaios usando suspensões de 1x108 conídios/mL de linhagens de Isaria farinosa, I. javanica e I. fumosorosea. Foram testados extratos aquoso e metanólico de folhas (EAFLf e EMFLf) e vagens (EAVLf, e EMVLf) de L. ferrea var. ferrea e extratos aquoso e hidroetílico de A. sisalana (EAAs e EHEAs), nas concentrações de 10 mg/mL, 25 mg/mL, 50 mg/mL, 100 mg/mL e 200 mg/mL, bem como os inseticidas nas concentrações mínima, média e máxima recomendadas pelos fabricantes dos produtos. Os resultados demonstraram que os fungos não foram patogênicos sobre ninfas e fêmeas adultas de D. opuntiae, mas afetaram significativamente N. corniger tendo sido observado que a linhagem I. farinosa ESALQ1355 foi a mais eficiente, causando a morte de 95% dos operários (CL50 6,66x104conídios/mL) e 85% dos soldados (CL50 6,81x104conídios/mL) após o 4º dia da aplicação dos tratamentos. Atividade inseticida sobre ambas as espécies de insetos foi obtida com extratos vegetais. Para D. opuntiae o EAFLf foi mais eficiente sobre as fêmeas adultas causando a morte de 97% (CL50 4,60 mg/mL), enquanto o EMVLf promoveu a mortalidade de 82% das ninfas. Adicionalmente, para N. corniger o EAFLf foi o que apresentou maior atividade termicita, causando a morte de 100% dos operários (CL50 6,10 mg/mL) e dos soldados (CL50 14,10mg/mL) após três dias do tratamento. Todos os inseticidas comerciais testados foram eficientes sobre a cochonilha-do-carmim. Os resultados com o Clorpirifós demonstraram ser esse inseticida o mais efetivo, por induzir a morte de 90% dos insetos na concentração mínima. Além do mais, foi observado que os extratos e os inseticidas Acetamiprid e Thiamethoxan foram compatíveis com os fungos, por não haver inibido o crescimento, esporulação e germinação das linhagens fúngicas. A associação entre os extratos e as três linhagens mais eficientes demonstrou que I. farinosa ESALQ1355 foi a mais efetiva no controle dos operários. Por outro lado, a associação dos extratos com todos os inseticidas demonstrou eficiência sobre ninfas e fêmeas adultas da cochonilha, sendo o maior percentual de mortalidade (90%) obtido pela associação de extratos com o inseticida Clorpirifós. Os resultados demonstram o potencial dos extratos de L. ferrea var. ferrea e de A. sisalana no controle de D. opuntiae e N. corniger, bem como das três espécies de Isaria, em especial de I. farinosa ESALQ1355, no controle do cupim. Portanto, esses agentes entomopatogênicos representam uma alternativa viável para o controle e o manejo integrado de D. opuntiae e N. corniger em plantações de palma e em áreas urbanas, respectivamente, no Nordeste brasileiro.

Made available in DSpace on 2016-12-23T14:37:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 412060 bytes, checksum: 4f6e2489a627abd31089b425ac87ef6f (MD5) Previous issue date: 2007-08-24 / The effect of isolates of Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin.: CCAE-7 and ESALQ 447; Metarhizium anisopliae (Mestchnikoff) Sorokin: PL43 and Boveril Organic® and Metarril Organic® was assessed for the control of Diaphania hyalinata Linnaeus, in 2°, 3°, 4° and 5° larval instar.The experiments were carried out in climatized chamber using temperature of 25 + 1°C, relative humidity of 70%, and photofase of 12 hours, in the laboratory. The experiments were arranged in a completely randomized desing with 5 treataments and 4 repetitions. Patogenicity bioassays in the concentrations of 1x103, 1x104, 1x105, 1x106, 1x107 and 1x108 conidia/ mL + Tween® 80 for the isolate CCAE-7, ESALQ 447 and PL43 and, concentrations of 0.10; 0.15; 0.25; 0.40; 0.63 and 1.00 g/ mL + Tween® 80 for Boveril Organic® and Metarril Organic®. The mortality was assessed every day. The mortality indexes was calculated using the Abbott equation for each treatment. The CCAE-7 was the most efficient isolate for the control of Diaphania hyalinata L., with the highest correct mortality (69,27 %) in the concentration of 1x108 in the 2° larval instar. / Avaliou-se o efeito de dois isolados de Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin (CCAE-7 e ESALQ 447), o isolado de Metarhizium anisopliae (Mestchnikoff) Sorokin: (PL43) e dois formulados comerciais (Boveril Organic ® e Metarril Organic®) no controle de Diaphania hyalinata (Linnaeus) no 2º, 3º, 4º e 5º ínstares. Os experimentos foram mantidos em condições laboratoriais, em câmara climatizada à temperatura de 25 + 1ºC, umidade relativa de 70 + 10%, e fotofase de 12 horas, conduzidos em delineamentos inteiramente casualizados, com 5 tratamentos e 4 repetições. Foram realizados bioensaios de patogenicidade nas concentrações 1x103; 1x104; 1x105; 1x106; 1x107 e 1x108 conídios/ mL + Tween® 80 para o isolado CCAE-7, ESALQ 447 e PL43 e, nas concentrações 0,10; 0,15; 0,25; 0,40; 0,63; 1,00 g/ mL + Tween® 80 para Boveril Organic® e Metarril Organic®. A mortalidade foi avaliada diariamente, calculando-se os índices de mortalidade corrigida pela fórmula de Abbott para cada tratamento. O isolado CCAE-7 apresentou melhor eficiência no controle, com maior mortalidade corrigida (69,27 %) na concentração 1x108 no 2° ínstar.

A macieira é depreciada por muitos insetos, principalmente pela lagarta-enroladeira-da-macieira Bonagota salubricola (Lepidoptera: Tortricidae). Até o momento seu controle nos pomares comerciais é feito quase exclusivamente com inseticidas químicos. Alternativamente, este trabalho teve por objetivo verificar a mortalidade in vitro de larvas de segundo instar de B. salubricola frente a ação de isolados dos fungos Nomuraea, Beauveria e Metarhizium. Cada grupo foi tratado com suspensões de 2x105 a 2x109 con/mL, exceto para o grupo controle, tratado com solução Tween-80 0,1%. Também avaliou-se a sobrevivência pupal, expressão de proteases e a compatibilidade com inseticidas químicos. Uma das linhagens de Beauveria e as três de Metarhizium foram patogênicas a B. salubricola, sendo que os níveis de virulência aumentaram em função da concentração de conídios. A linhagem E6 de M. anisopliae destacou-se por proporcionar um controle de até 88% com TL50 de 1,66 dias; a maior virulência relacionou-se positivamente com o aumento da produção enzimática, sendo esta linhagem também compatível com tebufenozide. Esses resultados evidenciam o potencial dos fungos entomopatogênicos no controle de B. salubricola, visando sua aplicação principalmente nos pomares MIP. / The apple tree is deprecated by many insects, especially by leaf-roller-apple Bonagota salubricola (Lepidoptera: Tortricidae). Its control in commercial orchards is done almost exclusively with chemical insecticides. Alternatively, this work aimed at the evaluation of the in vitro susceptibility of larvae of the second ínstar of Bonagota salubricola to isolates of Nomuraea, Beauveria and Metarhizium fungus. Each group was treated with suspensions ranged of 2x105 con/mL a 2x109 con/mL, except for the control group, treated with solution Tween-80 0.1%. Also was evaluated the pupal survival, expression of proteases and compatibility with chemical insecticides. One strain of Beauveria and three strain of Metarhizium were pathogenic to B. salubricola, and the levels of virulence increased depending of conidia concentration. The strain E6 of M. anisopliae stood out for marking a control up to 88% with LT50 of 1.66 days, the largest virulence related positively to the increased production enzyme, and this strain was also compatible with tebufenozide. Those results demonstrate the potential of entomopathogenic fungi in control of B. salubricola, principally on the orchards IPM.

Nomuraea rileyi é um entomofungo que infecta principalmente lepidópteros representantes da superfamília Noctuoidea, que inclui pragas-chave de diversas culturas de grande importância econômica. No entanto, a susceptibilidade das espécies a este agente é variável, mesmo entre representantes da mesma família e até de mesmo gênero. Um dos fatores responsáveis por esta susceptibilidade diferenciada pode ser a composição lipídica da cutícula larval. O objetivo deste estudo foi avaliar a estrutura e composição cuticular de larvas de lepidópteros e sua relação com a susceptibilidade a N. rileyi. Foram utilizadas as espécies Anticarsia gemmatalis, Mythimna sequax, Rachiplusia nu e Spodoptera cosmioides e duas linhagens do fungo (CH87551 e UB93150). Larvas de segundo instar foram obtidas a partir da criação massal no Laboratório de Controle de Pragas da Universidade de Caxias do Sul e submetidas a suspensões de 107, 108 e 109 conídios/mL por 24 horas e após, transferidas para recipientes de 200mL contendo dietas artificiais específicas. Os bioensaios foram mantidos em condições controladas e avaliados diariamente por 14 dias. Para análise da composição lipídica cuticular, exúvias oriundas da metamorfose larval-pupal foram submetidas à extração com hexano e posteriormente à diclorometano-metanol. Para obtenção das exúvias de M. sequax, as larvas foram alimentadas com Lolium multiflorum. Os extratos obtidos foram analisados por cromatografia de camada delgada e seus componentes separados por cromatografia em coluna aberta, cujas frações resultantes foram analisadas por cromatografia gasosa acoplada a detector de massas (GCMS). Imagens de microscopia eletrônica de varredura (MEV) foram obtidas de larvas de segundo ínstar de cada espécie, submetidas uma suspensão de 108 conídios/mL e analisadas 24, 48 e 72 horas após a exposição ao patógeno. Os resultados demonstraram que as espécies avaliadas foram diferentemente afetadas por N. rileyi e, mesmo pelas diferentes linhagens avaliadas. A CL50 (log dose) obtida com as linhagens CH e UB foi de 6,73 e 7,97 para A. gemmatalis e 8,26 e 9,16 para R. nu respectivamente. S. cosmioides foi susceptível apenas à linhagem UB, porém a taxa de mortalidade foi de apenas 11,5% na maior concentração e M. sequax não foi susceptível a nenhuma das linhagens avaliadas. A composição lipídica cuticular apresentou diferenças quali-quantitativas entre as larvas. Os principais componentes identificados em A gemmatalis, M. sequax e R nu foram hidrocarbonetos, respondendo por 72,3, 74,5 e 83,6% respectivamente, com menor diversidade de compostos para M. sequax. Ácidos graxos lineares e ramificados (C14 a C20) foram identificados, com diferentes composições em cada uma das espécies. Identificou-se um aldeído e um álcool graxo em A. gemmatalis e outro aldeído graxo em R. nu. Em S. cosmioides, o componente majoritário identificado foi vitamina E, com mais de 70%. Nas imagens de MEV foi possível observar conídios de N. rileyi aderidos à superfície cuticular das quatro espécies avaliadas, especialmente na região abdominal e nos pseudopodes, mesmo depois de 48 horas após contato, sobretudo em S. cosmioides e M. sequax, espécies nas quais muitos dos conídios visualizados apresentaram tubo germinativo crescendo paralelamente à superfície. As espécies que se mostraram mais susceptíveis nestes bioensaios foram as que apresentaram, além de grandes quantidades de alcanos, as maiores diversidades destes compostos. As espécies menos susceptíveis apresentaram pouca quantidade e/ou variedade de alcanos ou ainda algum composto antioxidante, como no caso da vitamina E. Os resultados obtidos sugerem que, além das diferenças na composição lipídica e na estrutura cuticular das larvas, a variabilidade de N. rileyi pode estar relacionada à susceptibilidade diferenciada observada nas espécies, no entanto o potencial de uso deste agente como ferramenta no manejo integrado de pragas é considerável e precisa ser mais bem compreendido e explorado. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Nomuraea rileyi is an entomofungus that mainly infects lepidopteran representatives of the Noctuoidea superfamily, which includes key-pests of various crops of large economic importance. Nevertheless, the susceptibility of species in relation to this agent is variable, even among representatives of the same family or genus. One of the factors responsible for this differentiated susceptibility might be the lipid composition of the larval cuticle. The aim of this study was to assess the cuticular structure and composition of lepidopteran larvae and their relationship with the susceptibility to N. rileyi fungi. The species Anticarsia gemmatalis, Mythimna sequax, Rachiplusia nu and Spodoptera cosmioides and two strains of the fungus (CH87551 and UB93150) were used. Second instar larvae were obtained from the mass creation of the Pest Control Laboratory at the University of Caxias do Sul and subjected to suspensions of 107, 108 and 109 conidia/mL for 24 hours and subsequently transferred to 200mL containers containing specific artificial diets. The bioassays were maintained in controlled conditions and assessed daily for 14 days. In order to perform an analysis of the cuticular lipid composition, exuviae derived from the larval-pupal metamorphosis were subjected to extraction with hexane and with dichloromethane-methanol afterwards. For obtaining the M. sequax exuviae, the larvae were fed with Lolium multiflorum. The obtained extracts were analyzed by means of slender layer chromatography and their components were separated using open column chromatography components, whose resulting fractions were analyzed through gas chromatography attached to mass detector (GCMS). Images of scanning electron microscopy (SEM) were obtained from second instar larvae of each species, subjected to a suspension of 108 conidia/mL and analyzed 24, 48 and 72 hours after exposure to the pathogen. The results showed that the assessed species were differently affected by N. rileyi fungi or even by different assessed strains. The LC50 (log dose) obtained with the CH and UB strains was 6,73 and 7,97 for A. gemmatalis and 8,26 and 9,16 for R. nu respectively. S. cosmioides was susceptible only to the UB strain, but the mortality was limited to 11.5% in the highest concentration and M. sequax was not susceptible to any of the assessed strains. The cuticular lipid composition showed qualitative and quantitative differences between the larvae. The main components identified in A. gemmatalis, M. sequax and R. nu were hydrocarbons, accounting for 72,3, 74,5 and 83,6% respectively, with lower diversity of compounds for M. sequax. Linear and branched fatty acids (C14 to C20) have been identified, with different compositions in each one of the species. It was found an aldehyde and a fatty alcohol in A. gemmatalis and other fatty aldehyde in R. nu. In S. cosmioides, the major identified component was vitamin E, with more than 70%. In the SEM images, it was possible to observe conidia of N. rileyi attached to the cuticular surface of the four assessed species, especially in the abdominal region and in pseudopods, even after 48 hours of contact, mainly in S. cosmioides and M. sequax, species in which many observed conidia showed germ tube growing in tandem with the surface. The species that were more likely in these bioassays were the ones that presented, in addition to large amounts of alkanes, the greatest diversities of these compounds. The less susceptible species showed little quantity and/or variety of alkanes or even some antioxidant compound, as in the case of the vitamin E. The obtained results suggest that, besides differences in the lipid composition and cuticular structure of the larvae, the variability of N. rileyi might be related to the differentiated susceptibility observed in species, however, the potential usage of this agent as a tool for holding an integrated pest management is sizeable and needs to be better understood and explored.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:02:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os objetivos do trabalho foram analisar os aspectos morfológicos e moleculares de isolados de Metarhizium anisopliae e identificá-los ao nível de variedade, utilizando iniciadores específicos, selecionar isolados com alta patogenicidade para ninfas de Mahanarva fimbriolata, verificar a persistência no solo do isolado mais eficiente em condições de laboratório e o efeito da introdução deste fungo na estrutura da comunidade fúngica, por meio do perfil de bandas de PCR-DGGE. Foram utilizadas as seguintes metodologias: técnica de cultura sob lamínula, PCR, bioensaios, contagem de colônias em placa e PCR-DGGE. A amplificação com os iniciadores ITSmet/ITS4 confirmou que os isolados são M. anisopliae var. anisopliae. As análises morfológicas e moleculares demonstraram a grande variabilidade intraespecífica entre os 37 isolados estudados e serviram de base para a diferenciação destes isolados que apresentam mesma origem geográfica e o mesmo hospedeiro. Os iniciadores (GACA)4 e (GTG)5 forneceram DNA fingerprints para um maior número de isolados. Baseada na curva de mortalidade confirmada, entre nove isolados, URM5946, URM5951 e URM6033 foram considerados os melhores para serem utilizados em um programa de controle biológico de M. fimbriolata. Entre estes isolados, o URM5951 foi avaliado quanto a sua persistência e efeito na comunidade fúngica após sua aplicação no solo. Este isolado permaneceu viável até 60 dias do experimento e demonstrou não interferir na comunidade fúngica do solo em que foi introduzido. Todas as características estudadas são desejáveis no processo de seleção de isolados de M. anisopliae e os resultados obtidos reforçam a importância da utilização destes fungos como agentes de controle biológico da cigarrinha-da-raiz da cana-de-açúcar, M. fimbriolata

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to evaluate the occurrence and diversity of entomopathogenic fungi at Sergipe state, considering the factors that affect their distribution. The analysis was done using soil samples collected in the three mesoregions of the state in two periods of collection, comprising a wet and a dry season, and in two different habitats (agricultural and natural). Parameters such as pH, organic matter and argil soil were considered in the analyzes. For the soil fungi isolation, two methods were used, the soil solution in culture medium and selective insect bait. In a total of 48 soil samples, 41.7% were positive for the presence of entomopathogenic fungi. The isolates were belonging to the genera Beauveria, Metarhizium and Isaria, from order Hypocreales. It was found that the factors related to soil sampling location (region, period, and habitat) showed no significant difference in their variables for the presence of entomopathogenic fungi, however other soil factors (pH, amount of organic matter and argil) showed significance. The isolates were submitted to genetic variability analysis by RAPD markers, where 15 primers were selected, producing a total of 179 bands (Beauveria) and 131 bands (Metarhizium) and the similarity matrices were made using the Jaccard coefficient, which generated dendrogram by the UPGMA method, for each fungus. There was low genetic similarity among isolates of both genders. In this work, the entomopathogenic fungi isolated can be useful for biological control in agriculture once these isolates show certain persistence in adverse conditions of temperature, humidity and UV radiation. / Esse estudo objetivou avaliar a ocorrência e diversidade de fungos entomopatogênicos em Sergipe, considerando os fatores que afetam a sua distribuição. A análise foi realizada através de amostras de solos obtidas nas três mesorregiões que dividem o estado, em dois períodos de coleta, compreendendo uma estação seca e uma úmida, e em dois diferentes habitats (agrícola e natural). Parâmetros como pH, matéria orgânica e argila do solo foram considerados nas análises. Para o isolamento do fungo do solo foram utilizados dois métodos, solução de solo em meio de cultura seletivo e inseto-isca. Em um total de 48 amostras de solo, 41,7% foram consideradas positivas quanto a presença de fungos entomopatogênicos. Os fungos isolados foram pertencentes aos gêneros Beauveria, Metarhizium e Isaria, da ordem Hypocreales. Verificou-se que os fatores referentes ao local de amostragem do solo (região, período e habitat) não mostraram diferenças significantes quanto as suas variáveis em relação à presença de fungos entomopatogênicos, diferente dos fatores do solo (pH, quantidade de matéria orgânica e argila) que mostraram significância. Os isolados foram submetidos a uma análise da variabilidade genética através da técnica molecular RAPD, foram selecionados 15 primers que produziram um total de 179 bandas (Beauveria) e 131 bandas (Metarhizium) e foram construídas matrizes de similaridade utilizando o coeficiente de Jaccard, que geraram dendrogramas através do método de agrupamento UPGMA, para cada fungo. Observou-se baixa similaridade genética entre os isolados de ambos os gêneros. Nesse trabalho, isolou-se fungos entomopatogênicos que podem ser úteis para o controle biológico na agricultura por tratar-se de isolados que apresentam certa persistência em condições adversas de temperatura, umidade e radiação UV.

Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2017-08-24T18:58:04Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marcos Daniel Filgueiras Gomes - 2017.pdf: 1627510 bytes, checksum: 4f9bbc1cf7e9457ee3eb0b398bfffc42 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Rejected by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com), reason: subtituir PDF on 2017-09-01T17:18:15Z (GMT) / Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2017-09-05T14:58:59Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marcos Daniel Filgueiras Gomes - 2017.pdf: 1627510 bytes, checksum: 4f9bbc1cf7e9457ee3eb0b398bfffc42 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Rejected by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com), reason: on 2017-09-05T17:01:40Z (GMT) / Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2017-09-05T17:03:46Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marcos Daniel Filgueiras Gomes - 2017.pdf: 1628086 bytes, checksum: 7ab87fcdc18cfc95d88131b8b9272ecc (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-09-15T15:11:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marcos Daniel Filgueiras Gomes - 2017.pdf: 1628086 bytes, checksum: 7ab87fcdc18cfc95d88131b8b9272ecc (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-15T15:11:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marcos Daniel Filgueiras Gomes - 2017.pdf: 1628086 bytes, checksum: 7ab87fcdc18cfc95d88131b8b9272ecc (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-03-09 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The current study investigated the virulence of Metarhizium spp., Beauveria bassiana and Isaria javanica against Musca domestica larva; it also compared the virulence of different propagules, and evaluated the efficacy of matrine, a plant alkaloid, and the association of matrine and entomopathogenic fungi against larvae of Musca domestica. In addition, the study reports the conidial viability and radial growth of different fungal isolates in culture medium supplemented or not with matrine. Conidia produced on BDAL medium were suspended in Tween 80 0.01% and adjusted to 1 × 108 conidia / mL, and spread on filter paper for indirect treatment of third-instar larvae of M. domestica. The efficacy of treatment ranged from 77,44% (IP 119) to 87,35% (IP 146) among Metarhizium spp. isolates. The efficacy of treatment ranged from 39,37% (ARSEF 9588) to 70,60% (IP 361) among the isolates of B.bassiana; variations between 26,75% (CG 1316) and 53,28% (CG 1283) was reported in groups treated with isolates of I. javanica. Conidia and blastospores of fungi were produced on Adamek medium, and suspensions were prepared and adjusted to 1 × 108 propagules/mL. Aliquots were used in indirect treatments by spreading the suspension to sterile filter paper or to comminuted ration to evaluate virulence in third or second instar larvae, respectively. Only the treatment with IP 146 blastospores in ration was effective against M. domestica larva. Larvae were immersed on matrine solutions (direct treatment) or exposed to sterile-filter paper treated with matrine (indirect treatment) in different concentrations (1, 5, 10 and 20 mg/mL). Ten larvae were assayed in each treatment and control group. Matrine concentrations higher than 1 mg/mL were effective against M. domestica larva in both treatments. Germination of conidia of Metarhizium spp., B. bassiana and I. javanica isolates was assessed at 24 and 48 honto BDAL medium plus chloramphenicol and benomyl, supplemented or not (control) with matrine. All isolates had germination around 100%, in both incubation times evaluated. In addition, the radial growth of isolates was evaluated on BDAL medium supplemented or not (control) with matrine. The isolates of Metarhizium spp. and B. bassiana, with the exception of CG 138, had a reduced radial growth on medium containing matrine. Isolates of I. javanica did not reduce their growth when exposed to matrine. The association of entomopathogenic fungi [IP 119 (Metarhizium anisopliae s.s.), CG 307 (Beauveria bassiana) or CG 1285 (Isaria javanica)] with matrine (1; 0,5; 0,1; 0,05; 0,01 mg/mL), was investigated against larva of M. domestica in indirect tests on sterile filter paper. The association of fungal conidia and matrine was more efficient against M. domestica larva than conidia, and the association was more efficient than matrine alone. All experiments were incubated at 27 ± 1 oC and RH ≥ 80%. In conclusion, Metarhizium sp. is indicated as a promising microbial agent to control larva of M. domestica; also, IP 146 blastospores applied to ration were effective in the control of second instar larvae. In addition, the alkaloid matrine was effective to control M. domestica larva; it did not affect the viability of the conidia of the fungi investigated in this study, but it slowed down the growth of most of the Metarhizium and Beauveria isolates tested. Radial growth of isolates of Isaria sp. was not affected by supplementation of medium with matrine. No increased efficiency against M. domestica larva was detected when fungi was associated with matrine. / O presente estudo investigou a virulência de Metarhizium spp., Beauveria bassiana e Isaria javanica contra larvas de Musca domestica; comparou também a virulência de diferentes propágulos fúngicos, e avaliou a eficácia de matrine, um alcaloide vegetal, e sua associação com fungos entomopatogênicos contra larvas de M. domestica. Além disso, o estudo relata a viabilidade conidial e o crescimento radial de diferentes isolados fúngicos em meio de cultura suplementado ou não com matrine. Nesse sentido, conídios produzidos em meio BDAL foram suspensos em Tween 80 a 0,01% e ajustados a 1 × 108 conídios/mL e espalhados em papel filtro para o tratamento indireto de larvas de terceiro ínstar de M. domestica. A eficácia do tratamento dos isolados de Metarhizium spp. variou entre 77,44% (IP 119) e 87,35% (IP 146). A eficácia do tratamento variou de 39,37%(ARSEF 9588) e 70,60% (IP 361) entre os isolados de B.bassiana, e variações entre 26,75% (CG 1316) e 53,28% (CG 1283) foram observadas em grupos tratados com isolados de I. javanica. Conídios e blastosporos de IP 146 (Metarhizium robertsii) e IP 361(Beauveria bassiana) foram produzidos em meio Ádamek, em seguida foram preparadas suspensões e estas ajustadas para 1 × 108 propágulos/mL. Tratamentos indiretos foram conduzidos espalhando-se a suspensão em papel filtro estéril ou em rações para avaliar a virulência em larvas de terceiro ou segundo ínstar de M. domestica, respectivamente. Apenas o tratamento com blastosporos IP 146 em ração foi eficaz contra larva de M. domestica. Larvas de M. domestica também foram imersas em soluções contendo matrine (tratamento direto) ou expostas a papel filtro estéril tratado com matrine (tratamento indireto) em diferentes concentrações (1, 5, 10 e 20 mg / mL); dez larvas foram utilizadas em cada tratamento e grupo de controle. Para ambos tratamentos concentrações de matrine superiores a 1 mg/mL foram eficazes contra larvas de M. domestica. A germinação de conídios dos isolados de Metarhizium spp., B. bassiana e I. javanica foi avaliada em 24 e 48 horas sobre meio BDAL acrescido de cloranfenicol e benomil, e suplementado ou não (controle) com matrine (2%). Todos os isolados tiveram germinação em torno de 100%, em ambos os tempos de incubação avaliados. O crescimento radial de isolados também foi avaliado em meio BDAL suplementado ou não (controle) com matrine. Nesse estudo, os isolados de Metarhizium spp. e B. bassiana, com exceção de CG 138, tiveram crescimento radial reduzido em meio contendo matrine. Os isolados de I. javanica, no entanto, não reduziram seu crescimento quando expostos à matrine em meio de cultura. Foi investigada a associação de fungos entomopatogênicos [IP 119 (Metarhizium anisopliae s.s.), CG 307 (Beauveria bassiana) ou CG 1285 (Isaria javanica)] com matrine (1; 0,5; 0,1; 0,05; 0,01 mg/mL) contra larvas de M. domestica. Em testes indiretos em papel filtro estéril, a associação de conídios fúngicos e matrine foi mais eficaz contra larva de M. domestica do que conídios apenas, e a associação foi mais eficiente do que matrine sozinho. Todos os experimentos foram incubados a 27 ± 1 oC e UR ≥ 80%. Concluindo, Metarhizium sp. é indicado como um agente microbiano promissor para controlar larvas de M. domestica; também, blastosporos do isolado IP 146 aplicados à ração foram eficazes no controle de larvas de segundo instar. Além disso, o alcaloide matrine foi eficaz para controlar larvas de M. domestica; não afetou a viabilidade dos conídios dos fungos investigados neste estudo, mas retardou o crescimento da maioria dos isolados de Metarhizium e Beauveria testados. O crescimento radial de isolados de Isaria sp. não foi afetado pela suplementação de meio com matrine. Não houve aumento da eficácia contra larva de M. domestica quando fungos foram associados ao matrine.