Photorhabdus é um gênero de enterobactérias simbiontes de Heterorhabditis, um gênero de nematoides entomopatogênicos. Dentre as enzimas secretadas por P. luminescens TTO1, destaca-se PrtA, uma metaloprotease que pertence a subfamília das serralisinas. PrtS, uma protease capaz de induzir uma forte resposta de melanização no inseto, foi identificada em P. temperata Az29 mas não em P. luminescens TTO1. Neste trabalho foram detectadas e caracterizadas bioquimicamente algumas proteases secretadas pelo isolado MN7 de P. luminescens luminescens. Foram detectadas duas atividades mais proeminentes: uma de 50 kDa, e outra de 38 kDa. Com o sequenciamento do genoma desta bactéria, pudemos confirmar a presença no genoma de genes codificando proteínas de alta identidade com as descritas PrtA e PrtS, de massas similares às detectadas nas nossas zimografias. As proteases são inibidas por inibidores específicos de metaloproteases. P. luminescens MN7 apresenta secreção, portanto, de uma protease já descrita algumas vezes, e de outra presente apenas em P. temperata Az29. / Photorhabdus is a genus of Enterobacteriaceae, symbionts of Heterorhabditis, a genus of entomopathogenic nematodes. Among the enzymes secreted by P. luminescens TTO1 stands out PrtA, a metalloprotease that belongs to the subfamily of serralysins. PrtS, a protease capable of inducing a strong melanotic response from the insect, was identified in P. temperata Az29 but not in P. luminescens TTO1. In this work were detected and characterized biochemically few isolated proteases secreted by P. luminescens luminescens MN7. Two most prominent activities were detected: one with 50 kDa and one with 38 kDa. With the sequencing of the genome of MN7, we could confirm the presence in the genome of genes encoding proteins with high identity to PrtA and PrtS already described, with similar masses to those detected in our zimographies. These proteases are inhibited by specific inhibitors of metalloproteases. P. luminescens MN7 secretes a protease already described a few times, and other present only in P. temperata Az29.

Hypothenemus hampei apresenta aspectos bioecológicos e comportamentais que dificulta o seu controle, como a sua natureza críptica, ficando dentro da semente de café a maior parte de seu ciclo de vida, por apresentar várias gerações por ano. Uma grande quantidade de frutos com H. hampei cai ao solo, constituindo uma excelente forma para sobrevivência do inseto na entressafra e como fonte para novas infestações. O controle de H. hampei deve então ser efetuado no período em que as fêmeas deixam o fruto onde nasceram até o momento em que colonizam novos frutos para reproduzirem. Biopesticida a base de Beauveria bassiana é uma opção disponível para o controle de H. hampei, no entanto, existem poucas evidências de sua eficiência em campo. Objetivou-se com está pesquisa avaliar estratégias para utilização de B. bassiana para manejo de populações de H. hampei por: i) pulverização aquosa com adjuvantes, ii) armadilha atrativa para auto-autocontaminação e iii) incorporação do patógeno no solo com fertilizantes quimícos. Pulverização direta de suspensões de conídios com o adjuvante Tween 80 resultou em menor mortalidade de H. hampei do que suspensões com os demais adjuvantes testados em laboratório. A eficácia dos adjuvantes com o fungo variou com o método de inoculação. As pulverizações diretas dos insetos resultaram em mortalidades reduzidas (23 - 53%), enquanto que a imersão e os métodos que permitiram que os insetos ficassem em contato com os conídios no substrato (fruto ou papel de filtro) após a pulverização resultaram em maiores mortalidades (63 - 98%). As imagens ultramorfológicas de H. hampei inoculados por diferentes métodos sugerem que a região ventral do abdome é o principal sítio de infecção do fungo, visto que, diferente dos outros métodos, na pulverização direta que resultou em mortalidades reduzidas, grande quantidade de conídios aderidos e germinados foram observados no élitro em comparação com a região ventral. Três modelos de armadilha de auto-inoculação foram comparadas em cafezal sombreado e a pleno sol e a captura de H. hampei foi superior em ESALQHh2. O manejo de H. hampei com a armadilha ESALQ-Hh2 foi avaliado em cafezal a pleno sol desde a fase de formação dos frutos até a colheita. Foi constatado em média 6,6% de H. hampei infectados por Beauveria sp. nas plantas distante 4 e 8 m das armadilhas e nenhum inseto infectado nas parcelas com as mesmas armadilhas, mas sem o fungo. Observou-se redução na concentração e viabilidade do patógeno nas armadilhas ao longo do tempo, porém as mortalidades de H. hampei expostos ao fungo foram elevadas (73 - 100%) durante os 148 dias de avaliação. Estudos conduzidos em laboratório revelaram que a capacidade de voo de H. hampei não é afetada pela carga de conídios aderidos ao seu corpo quando comparados aos insetos sem exposição ao fungo. Além disso, apenas 5% dos insetos expostos ao fungo conseguiram penetrar na semente de café, indicando baixo potencial de danos. A mistura de conídios de B. bassiana com fertilizantes químicos granulados em solo de cafezal resultou em reduções (34 e 50%) da infestação de H. hampei quando comparadas às parcelas somente com aplicação dos fertilizantes. Sugere-se que o manejo desta praga com B. bassiana apresenta maior potencial a curto prazo por pulverizações apenas no período de trânsito das fêmeas colonizadoras, e, à médio e longo prazo, pela aplicação do patógeno no solo conjuntamente com fertilizantes e com o uso de armadilha de auto-inoculação. / Hypothenemus hampei, presents bioecological and behavioral aspects that hinders its control, such as its cryptic nature, remaining inside the coffee bean most of its life cycle and for presenting several generations per year. A large number of coffee beans carrying H. hampei drop to the ground, providing an excellent way for insect survival in the off season and as a source for new infestations of berries. The control of H. hampei must thus be made in the period when the females leave the beans where they were born until the moment they colonize new fruits to reproduce. Biopesticide based with Beauveria bassiana is an option available for the control of H. hampei; however, there is little evidence of its effectiveness in the field. The objective of this study was to evaluate strategies to use B. bassiana in the management of H. hampei in three ways: i) aqueous spray with adjuvants, ii) attractive trap of autoinoculation and iv) inoculation of the pathogen into the soil with chemical fertilazers. Direct spraying of suspensions of fungal conidia with adjuvant Tween 80 resulted in lower mortality of H. hampei than suspensions with the other adjuvants tested in the laboratory. The effectiveness of the adjuvant with the fungus varied with the inoculation method. Direct sprays on the insects reduced mortalities (23 - 53%), while immersion and the methods that allowed the insects to have contact with the conidia in the substrate (fruit or filter paper) after spraying, resulted in greater mortality (63 - 98%). Ultramorphological images of H. hampei, inoculated by different methods, suggest that the ventral region of the abdomen is the primary site of infection of the fungus since, unlike the other methods, the direct spray that resulted in reduced mortality, large quantity of conidia adhered and germinated were observed in the elytron compared to the ventral region. Three models of autoinoculation traps were compared in a shaded coffee plantation and in the full sun. Capture of H. hampei was superior in ESALQHh2. The management of H. hampei with trap ESALQ-Hh2 was assessed at a coffee plantation under full sun from fruit formation until harvest. On average, 6.6% of H. hampei was infected by Beauveria sp. in plants 4 and 8 m distant from the traps and no insect was infected in the plots with the same traps, but without the fungus. There was a reduction in concentration and viability of the pathogen in the traps over time; however, mortality of H. hampei exposed to the fungus were high (73 - 100%) during the 148 days of evaluation. Studies conducted in laboratory revealed that the flight capacity of H. hampei was not affected by the load of conidia adhered to its body when compared to insects without exposure to the fungus. Furthermore, only 5% of insects exposed to the fungus managed to penetrate the coffee bean, indicating low potential damage. Inoculation of conidia of B. bassiana, along with granulated chemical fertilizers in the soil of the coffee plantation, reduced (34 and 50%) the infestation of H. hampei compared the plots with only the application of fertilizers. It is suggested that the management of this pest with B. bassiana presents greater potential in the short term by spraying only during the period of transit of colonizing females and in the medium and long term through the application of the pathogen to the soil together with fertilizers and autoinoculation traps.

Heterorhabditis é um gênero de nematoides entomopatogênicos, simbiontes de bactérias do gênero Photorhabdus. Juntos, infectam e matam artrópodes. A linhagem LPP7 de H. baujardi foi isolada na cidade de Monte Negro (RO). A vitelogênese compreende o acúmulo de reservas dentro do ovócito em crescimento. A vitelogenina é uma lipoproteína transportadora de lipídeos para o ovócito, formando o vitelo. Sequenciamos um fragmento de 800pb do gene vit-6 de LPP7, codificante do fim do polipeptídeo homólogo ao VT3 de O. tipulae ou ao YP88 de C. elegans. Seu transcrito possui 61% de identidade com VIT-6 de O. tipulae CEW1 e 46% de identidade com VIT-6 de C. elegans. As vitelogeninas purificadas de LPP7 mostram três bandas com pesos moleculares próximos às vitelogeninas de O. tipulae (VT1, VT2 e VT3). Mas, ao contrário do que foi mostrado em O. tipulae, onde a banda VT1 é apresenta um polipeptídeo, VT1 de LPP7 aparentemente contém um par de bandas com massas moleculares quase idênticas, como ocorre com a proteína YP170 de C. elegans. / Heterorhabditis is a genus of entomopathogenic nematodes that are associated with bacteria of the genus Photorhabdus. Together, they infect and kill arthropods. Heterorhabditis baujardi strain LPP7 was isolated in Monte Negro (RO). The yolk reserves are transported to the growing oocyte by a lipoprotein called vitellogenin. We have cloned and partially sequenced a fragment of 800pb of the vit-6 gene from LPP7. This fragment contains a portion of a homologous to those coding for the vitellins VT3 of O. tipulae and the YP88 C. elegans polypeptides. The polypeptide coded by the sequenced fragment showed that it has 61% identity to VIT-6 protein of O. tipulae CEW1 and 46% of identity to VIT-6 of C. elegans. The purified proteins of LPP7 show three bands with migrations close to the vitellins of O. tipulae (VT1, VT2 and VT3). However, unlike what was shown in O. tipulae where the VT1 band is comprised of a single polypeptide, LPP7 VT1 apparently contains a pair of bands with almost identical molecular masses as occurs with the homologous vitellin of C. elegans YP170.

O ácaro-vermelho do tomateiro, Tetranychus evansi Baker e Pritchard, tornou-se a praga mais importante do tomateiro, e de outras solanáceas na África, após a sua introdução naquele continente. Não se conhece nenhum inimigo natural nativo efetivo em associação com a praga na África, tornando necessária a busca de inimigos naturais em sua região de origem. T. evansi não é uma importante praga em grande parte da na América do Sul, sugerindo que este ácaro provavelmente tenha se originado nesta região. Buscas por inimigos naturais realizadas nesta região resultaram na coleta de diversos isolados de Neozygites floridana Weiser e Muma e do ácaro predador Phytoseiulus longipes Evans com potencial para introdução na África. Como parte das etapas preliminares, para introdução deste fungo patogênico na África, estudos foram conduzidos para determinar a compatibilidade de N. floridana com P. longipes, pois é desejável que estes dois inimigos naturais se complementem. Foi demonstrado que o fungo não é patogênico a P. longipes. O único efeito do fungo observado em P. longipes foi o incremento do comportamento de auto-limpeza (grooming) para remoção de capiloconídios do fungo aderidos ao corpo do ácaro. Alguns agrotóxicos empregados na produção de tomate foram testados quanto aos seus efeitos sobre N. floridana, a fim de determinar a seletividade e a adequação destes para uso em programas de MIP em tomateiro. Dois inseticidas, dois acaricidas e dois fungicidas foram testados em duas concentrações: a dosagem comercial recomendada (TC) e metade da dosagem comercial (TC / 2). Os fungicidas captana and mancozebe afetaram a esporulação e a germinação de N. floridana em ambas as concentrações, enquanto propargito não teve efeito sobre a esporulação, mas afetou a germinação dos conídios primários. Metomil e abamectina foram os produtos com menores efeitos sobre N. floridana. Adicionalmente, o efeito de plantas hospedeiras de T. evansi sobre N. floridana foi determinado em relação à contaminação, infecção, mortalidade e mumificação. A oviposição de T. evansi foi usada para determinar a adequação dos ácaros às plantas hospedeiras e esta foi correlacionada com a suscetibilidade dos ácaros ao fungo e subseqüente mumificação. O efeito dos aleloquímicos acumulados pelos ácaros sobre o fungo foi avaliado acompanhando-se o desenvolvimento da doença em ácaros que haviam sido criados nas diferentes plantas hospedeiras, mas que foram infectados e mantidos até a morte em tomate. Houve uma associação direta entre a oviposição, adequação de T. evansi às plantas hospedeiras medido pela taxa de oviposição e os parâmetros de desempenho avaliados do fungo, exceto para T. evansi sobre maria-preta e T. urticae sobre pimenta e algodão. A oviposição foi baixa onde, também, a esporulação foi baixa, sugerindo que a antibiose da planta pode afetar tanto a reprodução do ácaro como a atividade do fungo. A mortalidade e a mumificação variaram com a espécie de planta, provavelmente, indicando que estes processos são modulados pela composição química da planta. O efeito da temperatura sobre a esporulação, infecção e mumificação dos ácaros foi comparado entre três isolados de N. floridana, dois do Brasil (de Recife e de Piracicaba) e um da Argentina (Vipos-Tucumán) objetivando selecionar isolados potenciais para liberar em diferentes locais na África. Estes parâmetros foram avaliados sob vários regimes de temperatura constantes entre 13ºC e 33ºC. Também foi avaliado o efeito de seis regimes de temperaturas alternadas, 17-13°C, 21-13°C, 29-13°C, 33-13°C, 33-23°C, 33-29°C, sob fotoperíodo de 12:12h, luz e escuro, respectivamente, sobre a virulência dos três isolados contra T. evansi. Os perfis de temperatura em conjunto com os dados de infectividade podem ser úteis na seleção de isolados apropriados para uma determinada região com características térmicas particulares. / The tomato red spider mite, Tetranychus evansi Baker and Pritchard, became one of the most important pests of tomatoes and other solanaceous plants in Africa after its introduction in this continent. No native natural enemies are known to be associated with the pest in Africa making search for natural enemies necessary. T. evansi is not an important pest in South America suggesting that this mite probably originated from this region. Searches for natural enemy in this region yielded several isolates of Neozygites floridana Weiser and Muma and one potential predatory mite for introduction in Africa. As part of the preliminary steps for introduction of this fungal pathogen in Africa, studies were conducted to determine the compatibility of N. floridana with the predatory mite Phytoseiulus longipes Evans, because the two natural enemies are expected to complement each other. It was demonstrated that the fungus is not pathogenic to P. longipes. However, the presence of fungal capilliconidia on the leaf may alter the behavior of P. longipes by increasing grooming. Several pesticides used in tomato production were tested for their effect on N. floridana in order to determine their selectivity and adequacy for use in IPM programs for pest management in tomato. Two insecticides, two acaricides, and two fungicides were tested in two concentrations: the mean commercial rate (CR) and 50% of the mean commercial rate (CR/2). The fungicides Captan and Mancozeb affected sporulation and germination at both concentrations while Propargite had no effect on sporulation but affected germination of primary conidia. Methomyl and Abamectin had minimal effects on N. floridana. In addition, the effect of host plants of T. evansi on N. floridana was determined in relation to contamination, infection, mortality and mummification. Oviposition was used to determine host plant suitability to the mites and this was correlated to their susceptibility and subsequent mummification after infection by the fungus. Host-switching was used to determine the in vivo effect of accumulated allelochemicals to the fungus. There was a direct association of oviposition, plant suitability and the measured fungal parameters on all host plants with the exception of nightshade and pepper for T. evansi and cotton for T. urticae. Oviposition was also low on plants where sporulation was low suggesting that antibiosis may affect both mite reproduction and fungal activity. Mortality and mummification varied with plant species probably indicating that this processes are modulated by plant chemistry. The effects of temperature on sporulation, infection and mummification of mites was compared among three isolates of N. floridana, two from Brazil (from Recife and Piracicaba) and one from Argentina (Vipos-Tucumán) aiming to select potential isolates for release in different places of Africa. These parameters were measured at various constant temperature regimes from 13°C to 33°C. Six alternating temperature regimes of 17-13°C, 21-13°C, 29-13°C, 33-13°C, 33-23°C, 33-29°C at a photoperiod of 12:12h light and dark, respectively were also used to test their effect on the virulence of the three isolates against T. evansi. Temperature profiles in conjunction with infectivity assays can be useful in selecting appropriate isolates for a particular thermal environment.

Microrganismos formam associações com a maioria das espécies animais e um exemplo fascinante são as múltiplas interações nas colônias de formigas-cortadeiras. Os efeitos dessas interações (positivos e negativos) se manifestam na sanidade e desenvolvimento das colônias. Sendo assim, a compreensão das interações que ocorrem entre os microrganismos das colônias de formigas-cortadeiras A. sexdens é importante para fundamentar o controle biológico desta praga. Esse presente trabalho foi dividido em três capítulos. O primeiro capítulo objetivou comparar o desenvolvimento de colônias de Atta sexdens (Linnaeus) em contato com dois solos: (i) de área com ninhos e (ii) de área sem ninhos de formigas-cortadeiras. Foram conduzidos dois experimentos em laboratório. No experimento I, fêmeas recémfecundadas fundaram a colônia em pote com gesso e, após 106 dias, entraram em contato com solo. No experimento II, as fêmeas recém-fecundadas fundaram suas colônias diretamente no solo. A taxa de mortalidade de colônias, após 106 dias da revoada e se desenvolvendo em pote com gesso, foi de 28,6%. Quando se desenvolveram desde o início em contato com o solo, a taxa de mortalidade elevouse a 67,2 %. Os resultados confirmam que as colônias incipientes de A. sexdens sofrem forte pressão seletiva de microrganismos do solo no momento da fundação. No entanto, após o surgimento da força operária, mecanismos de defesa imune social, provavelmente, garantem o desenvolvimento da colônia a despeito da presença de microrganismos patogênicos no solo dos ninhos. O segundo capítulo objetivou isolar e identificar actinobactérias de solos de câmaras de jardim de fungos de A. sexdens e avaliar o efeito inibitório desses isolados sobre fungos associados às colônias de formigas-cortadeiras. Foram sequenciados o gene 16S rRNA de nove actinobactérias, sendo seis do gênero Streptomyces, duas do gênero Nocardia e uma do gênero Kitasatospora. Foi verificado que dois isolados de Streptomyces e um de Kitasatospora inibiram não só o fungo Escovopsis sp., como também o fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae e o fungo antagonista do cultivar simbionte de cortadeiras Trichoderma aff. strigosellum. Uma vez que não existem evidências de cultivo de actinobactérias na cutícula de operárias do gênero Atta, é possível hipotetizar que essas operárias estabeleçam simbiose temporária adaptativa com microrganismos do solo produtores de substâncias antifúngicas e antibióticas e que vivem em alguma parte de seu ninho ou mesmo no interior do seu corpo. Além disso, 10 os fungos patogênicos para colônias de formigas-cortadeiras presentes no solo adjacente ao ninho, apesar de constituírem um risco, podem ser controlados pelas secreções produzidas pelas operárias, bem como pelos metabólitos de algumas actinobactérias. O terceiro capítulo teve como objetivo verificar a aceitação e incorporação de iscas contendo micélio de Escovopsis sp. em colônias jovens de Atta sexdens. Verificou-se o transporte de iscas em todas as colônias do teste. Houve redução no peso do jardim de fungos das colônias que receberam iscas com Escovopsis sp., e aumento no peso do jardim de fungos de colônias que receberam tratamento controle. Conclui-se que a utilização de iscas com micélio de Escovopsis sp. foi satisfatória para introduzir o fungo parasita no jardim de fungos de colônias de Atta sexdens. / Microorganisms form associations with most animal species, and a fascinating example is the multiple interactions in the colonies of leaf-cutting ants. The effects of these interactions (positive and negative) are exhibited in the health and development of the colonies. Therefore, the understanding of the interactions that occur among the microorganisms into leaf-cutting ants colonies is important to support of biological control of this pest. This work was divided into three chapters. The first chapter aimed to compare the development of colonies of Atta sexdens (Linnaeus) in contact with two types of soil: (i) from an area used for nesting and (ii) from an area not used for nesting of leaf-cutting ants. Two experiments were conducted in the laboratory. In experiment I, newly fertilized females founded the colony in a plastic pot with gypsum and, after 106 days were transferred to a plastic pot with soil. In experiment II, newly fertilized females founded their colonies directly on the soil. Colony mortality rate 106 days after nuptial flight and founding in a plastic pot with gypsum was 28.6%. When they developed directly in contact with the soil, mortality rate increased to 67.2%. The results support that incipient colonies of A. sexdens undergo strong selective pressure from soil microorganisms at the time of foundation. However, after the emergence of the worker force, social immune defense mechanisms likely guarantee the development of the colony, despite the presence of pathogenic microorganisms in the soil of the nests. The second chapter aimed to isolate and identify actinobacteria from soils of fungi garden chambers of A. sexdens and to evaluate the inhibitory effect of these isolates on fungi associated with leaf-cutting colonies. To identify the isolates, the 16S rRNA gene was sequenced from nine actinobacteria: six of Streptomyces genus, two of Nocardia genus and one of Kitasatospora genus. Two Streptomyces and one Kitasatospora isolates inhibited not only the fungus Escovopsis sp., but also the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae and the antagonistic fungus of the cultivar symbiont of leaf-cutting ant Trichoderma aff. strigosellum. Since there is no evidence of cultivation of actinobacteria on the Atta worker cuticle, it is possible that these workers establish temporary adaptive symbiosis with soil microorganisms producing antifungal and antibiotic substances and living in some part of their nest or even in the interior of their body. It can be hypothesized that pathogenic fungi present in the soil adjacent to the leaf-cutting ant nest, despite the risk they represent, are controlled by the secretions produced by the workers, as well as by the metabolites of some actinobacteria. The third chapter had the objective of verifying the acceptance and incorporation of baits containing mycelium of Escovopsis sp. by young colonies of A. sexdens. We verified the transport of baits in all tested colonies. There was a reduction in the weight of the fungus garden of the colonies that received baits with Escovopsis sp., and an increase in the weight of the fungus garden of colonies that received control treatment. It is concluded that the use of baits with mycelium of Escovopsis sp. was satisfactory to introduce the fungus parasite in the fungus garden of A. sexdens colonies.

Avaliou-se em laboratório a patogenicidade de 52 isolados de fungos entomopatogênicos a Brevipalpus phoenicis e a produção, em meio sólido, de quatro isolados de Hirsutella spp.. Utilizando-se microscópio eletrônico de varredura, estudou-se as etapas do ciclo biológico de Hirsutella sp. (isolado 1269) em adultos de B. phoenicis, além da ocorrência de transmissão horizontal deste patógeno para adultos do ácaro a partir de cadáveres esporulados e de substrato contaminado. Todos os isolados de Hirsutella sp. foram patogênicos para o ácaro causando mortalidade de adultos superiores a 90% após seis dias da inoculação. Comprovou-se também que em meio de cultura completo (M.C.) que o isolado 1269 foi o que apresentou maior crescimento vegetativo e esporulação, sendo selecionado como o mais promissor. O ciclo biológico completo de Hirsutella sp., desde a adesão dos conídios ao ácaro até sua extrusão, ocorreu em 120 horas após a aplicação. A transmissão horizontal do patógeno a partir de cadáveres e do substrato contaminado ocasionou mortalidade superior a 50% em ambas as situações, comprovando que o fungo foi capaz de infectar novos hospedeiros. Contatou-se que Hirsutella sp. é um patógeno eficiente no controle de B. phoenicis podendo ser utilizado em campo em estratégias de introdução inoculativa, inundativa, incremento e conservação. / In this research, the patogenicity of 52 isolates of entomopathogenic fungi against Brevipalpus phoenicis and the production of four isolates of Hirsutella spp. in solid medium (M.C.) were evalueted under laboratory condition. The stages of the biological cycle of Hirsutella sp. (isolated 1269) on adults of B. phoenicis were evalueted with the use of an electron scan microscope, besides the occurrence of horizontal transmission of this fungi from cadavers and from an inoculate substract to new hosts. The isolates of Hirsutella sp. tested were pathogenic to the mite, with high mortality (>90%) after six days of the inoculation. The isolate 1269 showed high levels of vegetative growth and sporulation and was selected as the most promising one. The complete biological cycle of Hirsutella sp. ocurred after 120 hours of the inoculation, from adhesion to extrusion processes. The horizontal transmission of fungi from cadavers and inoculate substract ocurred by causing levels mortality superior to 50% in both cases, showing that the fungi was capable to infect new hosts in these situations. Hirsutella sp. was an efficient pathogen in the control of B. phoenicis and could be exploited in field control strategies through an inoculative introduction, increment or conservation.

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They have high reproductive capacity, and egg masses are laid on submerged substrates on the banks of breeding sites exposed to desiccation and pathogens like fungi. Virtually nothing is known about the viability of egg masses in breeding and transient sites and their pathogens. This information is important to control this intermediate host of Schistosoma mansoni, which causes schistosomiasis. This study describes the feasibility of egg masses in water films and susceptibility infection with to Beauveria bassiana and Metarhizium ansiopliae. Egg masses were exposed to water film formed in two different devices, one with a stone clay in a cup with water and another one with water agar at different concentrations of agar (0.3% - 3%) in Petri dishes in different relative humidity (RH > 98% and 75%). Conidia or blastospores of B. bassiana (ARSEF 9588) or M. anisopliae (IP 46) (2 x 107 conidia or blastospores/egg mass) were inoculated in egg masses exposed in the water film in stone clay or submerged (2 x 107 conidia/ml or blastospores/ml). Egg masses exposed in the water film in stone clay or in water agar (agar < 1%) at RH > 98% were viable. The eclosion and the displacement of juveniles in the films were observed regardless of the tested device (RH > 98%, agar < 1%), except at 75% RH and glass without water film. Mycelium and conidia developed on egg masses treated with conidia or blastospores of M. anisopliae in the water film in stone clay (RH > 98%), and there was no eclosion of juveniles from egg masses treated with blastospores of M. anisopliae. In egg masses submerged treated with blastospores of M. anisopliae or B. bassiana no eclosion of juveniles and egg masses treated with conidia accumulated average onset was < 52.5%. The feasibility of egg masses and the displacement of juveniles in both devices on RH > 98% was due to the formation of stable water film. Blastospores may have released toxic metabolites that inhibited the eclosion of juvenile B. glabrata. Both devices are promising for testing egg masses in the water film. The feasibility of egg masses in water under laboratory conditions film should be considered to control B. glabrata. Blastospores of M. anisopliae and B. bassiana are promising against B. glabrata. / Biomphalaria glabrata são caramujos aquáticos e habitam coleções hídricas frequentemente efêmeras. Possuem alta capacidade reprodutiva, e massas ovígeras são postas em substratos submersos nas margens dos criadouros expostas ao ressecamento e a patógenos como fungos. Praticamente nada é sabido sobre a viabilidade de massas ovígeras em criadouros transitórios e a sua susceptibilidade a fungos. Estas informações são importantes para o controle desse caramujo hospedeiro intermediário de Schistosoma mansoni, causador de esquistossomose. O presente trabalho relata a viabilidade de massas ovígeras em filme de água e a susceptibilidade a Metarhizium ansiopliae e Beauveria bassiana. Massas ovígeras foram expostas em filme de água formado em dois dispositivos diferentes confeccionados, um com pedra de argila em copo com água e outro com meio ágar água com diferentes concentrações de ágar (0,3% - 3%) em placas de Petri em diferentes umidades relativas (UR > 98% e 75%). Conídios ou blastosporos de B. bassiana (ARSEF 9588) ou M. anisopliae (IP 46) (2 x 107 conídios ou blastosporos/massa ovígera) foram inoculados em massas ovígeras expostas em filme de água em pedra de argila ou submersas (2 x 107 conídios/ml ou blastosporos/ml). As massas ovígeras expostas em filme de água em pedra de argila ou em meio ágar água (ágar < 1%) em UR > 98% foram viáveis. A eclosão e o deslocamento de juvenis nos filmes foram observados independentemente do dispositivo testado (UR > 98%, ágar < 1%), exceto em UR 75% e em vidro sem filme de água. Micélio e conídios desenvolveram sobre massas ovígeras tratadas com conídios ou blastosporos de M. anisopliae em filme de água em pedra de argila (UR > 98%), e não houve eclosão de juvenis a partir de massas ovígeras tratadas com blastosporos de M. anisopliae. Em massas ovígeras submersas tratadas com blastosporos de M. anisopliae ou B. bassiana não houve eclosão de juvenis e em massas ovígeras tratadas com conídios a eclosão média acumulada foi < 52,5%. A viabilidade de massas ovígeras e o deslocamento de juvenis em ambos os dispositivos em UR > 98% foi devido à formação de filme de água estável. Blastosporos podem ter liberado metabólitos tóxicos que inibiram a eclosão de juvenis de B. glabrata. Ambos os dispositivos são promissores para testes com massas ovígeras em filme de água. A viabilidade de massas ovígeras em filme de água em condições laboratoriais deve ser considerada no controle de B. glabrata. Blastosporos de M. anisopliae e B. bassiana são promissores contra B. glabrata.

Heterorhabditis é um gênero de nematoides entomopatogênicos, simbiontes de bactérias do gênero Photorhabdus. Juntos, infectam e matam artrópodes. A linhagem LPP7 de H. baujardi foi isolada na cidade de Monte Negro (RO). A vitelogênese compreende o acúmulo de reservas dentro do ovócito em crescimento. A vitelogenina é uma lipoproteína transportadora de lipídeos para o ovócito, formando o vitelo. Sequenciamos um fragmento de 800pb do gene vit-6 de LPP7, codificante do fim do polipeptídeo homólogo ao VT3 de O. tipulae ou ao YP88 de C. elegans. Seu transcrito possui 61% de identidade com VIT-6 de O. tipulae CEW1 e 46% de identidade com VIT-6 de C. elegans. As vitelogeninas purificadas de LPP7 mostram três bandas com pesos moleculares próximos às vitelogeninas de O. tipulae (VT1, VT2 e VT3). Mas, ao contrário do que foi mostrado em O. tipulae, onde a banda VT1 é apresenta um polipeptídeo, VT1 de LPP7 aparentemente contém um par de bandas com massas moleculares quase idênticas, como ocorre com a proteína YP170 de C. elegans. / Heterorhabditis is a genus of entomopathogenic nematodes that are associated with bacteria of the genus Photorhabdus. Together, they infect and kill arthropods. Heterorhabditis baujardi strain LPP7 was isolated in Monte Negro (RO). The yolk reserves are transported to the growing oocyte by a lipoprotein called vitellogenin. We have cloned and partially sequenced a fragment of 800pb of the vit-6 gene from LPP7. This fragment contains a portion of a homologous to those coding for the vitellins VT3 of O. tipulae and the YP88 C. elegans polypeptides. The polypeptide coded by the sequenced fragment showed that it has 61% identity to VIT-6 protein of O. tipulae CEW1 and 46% of identity to VIT-6 of C. elegans. The purified proteins of LPP7 show three bands with migrations close to the vitellins of O. tipulae (VT1, VT2 and VT3). However, unlike what was shown in O. tipulae where the VT1 band is comprised of a single polypeptide, LPP7 VT1 apparently contains a pair of bands with almost identical molecular masses as occurs with the homologous vitellin of C. elegans YP170.

O Brasil é o país líder no uso do fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae para o controle pragas agrícolas. Pouco se conhece sobre a diversidade e o impacto dos micovírus em M. anisopliae sensu stricto. Este trabalho mostra a riqueza dos micovírus associados a isolados de M. anisopliae da coleção de entomopatógenos da Universidade de São Paulo, usinas sucroalcooleiras e produtos microbianos à base do entomopatógeno. RNAfd foram encontrados em 55% dos 36 isolados de Metarhizium e apresentaram 16 diferentes padrões eletroforéticos consistindo de 3 a 18 bandas de RNAfd em gel de poliacrilamida. RNAfd não foram detectados em nenhum dos produtos comerciais utilizados no presente estudo. Os diferentes padrões de vírus encontrados nos isolados aqui estudados, aparentemente, não têm relação com os locais onde foram coletados. O inibidor de síntese protéica ciclohexamida não foi eficiente na eliminação dos vírus de RNAfd em nenhum dos isolados de fungos testados. Colônias dos isolados de M. anisopliae ESALQ 866, M. anisopliae ESALQ 1256 e M. anisopliae CTC F8 foram curadas por meio do cultivo monoconidial ou isolamento de ponta de hifas. Alguns segmentos do isolado M. anisopliae PL26 foram perdidos após o subcultivo de ponta das hifas. Colônias de M. anisopliae ESALQ PL26 obtidas por meio do cultivo monoconidial ou subcultivo de ponta de hifas apresentaram grande variabilidade morfológica, no entanto, essa variação não foi correlacionada com a presença de micovírus. Colônias isogênicas de M. anisopliae ESALQ 1256 mostraram diferenças no crescimento, na produção de conídios e na virulência, no entanto, essas diferenças não foram associadas à presença de RNAfd. Não foram observadas diferenças na tolerância aos raios ultravioleta e ao calor entre as colônias de M. anisopliae ESALQ 1256, com e sem vírus de RNAfd. Colônias oriundas de setores formados no isolado M. anisopliae PL26 produziram menor quantidade de conídios e apresentaram menor quantidade de vírus RNAfd em comparação com as colônias oriundas de outras regiões da colônias originais com características normais. A repicagem sucessiva dos isolados de M. anisopliae ESALQ PL26, ESALQ 1256, CTC F8 e CTC F15, infectados por diferentes vírus de RNAfd, nos meios de cultura BDA, SDAY e meio de arroz, bem como a passagem dos fungos em larvas de Tenebrio molitor, em geral, não afetaram a replicação dos micovírus. / Brazil is the leading country in the use of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae against agricultural pests. Little is known about the diversity and the impact of mycovirus in M. anisopliae sensu stricto. This study shows the richness of mycovirus associated with M. anisopliae isolates from the collections of entomopathogens of the University of São Paulo, from sugar-alcohol factories and microbial based products. dsRNA were found in 55% of the 36 Metarhizium isolates and showed 16 different electrophoretic patterns consisting of 3 to 18 dsRNA bands in polyacrylamide gels. dsRNA was not detected in any of the commercial products used in this study. The different viral patterns found in the isolates studied here apparently have no relation to the locations where they were collected. The inhibitor of protein synthesis cycloheximide culture was efficient in eradicating dsRNA virus from fungi. Colonies of isolates of M. anisopliae ESALQ 866, M. anisopliae ESALQ 1256 and M. anisopliae F8 were cured by monoconidial or by hyphal tip isolation of. Some segments of the M. anisopliae PL26 isolate were lost following hyphal tip subculture. Colonies both from monoconidial culture and hyphal tip subculture of M. anisopliae ESALQ PL26 showed great morphological variability; however, this variation was not correlated with the presence of mycoviruses. Isogenic colonies of M. anisopliae ESALQ 1256 showed differences in growth, conidia production and virulence; however, these differences were not associated to the presence of the dsRNA. No difference was observed regarding tolerance to ultraviolet rays and heat among the colonies of M. anisopliae ESALQ 1256, with and without the dsRNA virus. Sectors formed in the isolate M. anisopliae PL26 produced a smaller number of conidia and fewer dsRNA virus in comparison to the original colonies with normal characteristics. The repeated subculture of isolates of M. anisopliae ESALQ PL26, ESALQ 1256, CTC F8 and CTC F15, infected by different virus of dsRNA, in the PDA, SDAY culture media and in rice, as well as the fungi passage in larvae of Tenebrio molitor, in general, did not affect the replication of the mycovirus.

Photorhabdus é um gênero de enterobactérias simbiontes de Heterorhabditis, um gênero de nematoides entomopatogênicos. Dentre as enzimas secretadas por P. luminescens TTO1, destaca-se PrtA, uma metaloprotease que pertence a subfamília das serralisinas. PrtS, uma protease capaz de induzir uma forte resposta de melanização no inseto, foi identificada em P. temperata Az29 mas não em P. luminescens TTO1. Neste trabalho foram detectadas e caracterizadas bioquimicamente algumas proteases secretadas pelo isolado MN7 de P. luminescens luminescens. Foram detectadas duas atividades mais proeminentes: uma de 50 kDa, e outra de 38 kDa. Com o sequenciamento do genoma desta bactéria, pudemos confirmar a presença no genoma de genes codificando proteínas de alta identidade com as descritas PrtA e PrtS, de massas similares às detectadas nas nossas zimografias. As proteases são inibidas por inibidores específicos de metaloproteases. P. luminescens MN7 apresenta secreção, portanto, de uma protease já descrita algumas vezes, e de outra presente apenas em P. temperata Az29. / Photorhabdus is a genus of Enterobacteriaceae, symbionts of Heterorhabditis, a genus of entomopathogenic nematodes. Among the enzymes secreted by P. luminescens TTO1 stands out PrtA, a metalloprotease that belongs to the subfamily of serralysins. PrtS, a protease capable of inducing a strong melanotic response from the insect, was identified in P. temperata Az29 but not in P. luminescens TTO1. In this work were detected and characterized biochemically few isolated proteases secreted by P. luminescens luminescens MN7. Two most prominent activities were detected: one with 50 kDa and one with 38 kDa. With the sequencing of the genome of MN7, we could confirm the presence in the genome of genes encoding proteins with high identity to PrtA and PrtS already described, with similar masses to those detected in our zimographies. These proteases are inhibited by specific inhibitors of metalloproteases. P. luminescens MN7 secretes a protease already described a few times, and other present only in P. temperata Az29.