A bactéria Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da pneumonia enzoótica suína e se adere às células do epitélio ciliar pulmonar do hospedeiro para a colonização. Essa doença é responsável por perdas econômicas em muitos países devido à morbidade dos rebanhos. A bactéria Mycoplasma flocculare é encontrada principalmente na mucosa traqueal de suínos, como M. hyopneumoniae, mas é uma bactéria comensal. Ambas apresentam similaridades genéticas, como o compartilhamento de 90% das proteínas de superfície preditas e o perfil transcritômico dos genes que codificam adesinas, proteínas que proporcionam a aderência do micro-organismo, altamente semelhante. Contudo, análises genômicas e transcritômicas não foram capazes de explicar a diferença fenotípica entre M. hyopneumoniae e M. flocculare no hospedeiro. Considerando estudos realizados previamente, se hipotetiza que parte dessa diferença ocorra devido a discrepâncias na sequência de aminoácidos de proteínas de superfície ortólogas, uma vez que 85% dos pares de proteínas ortólogas destas espécies apresentam, pelo menos, um domínio diferencial. Tais domínios diferenciais podem determinar variação funcional e/ou variação na resposta imune induzida no suíno. Para caracterizar imunologicamente um par de proteínas ortólogas de superfície de M. hyopneumoniae e M. flocculare, MHP556 e MF306, respectivamente, as versões recombinantes dessas foram expressas em Escherichia coli BL21 pLysE. Os produtos recombinantes, MHP556-GST e MF306-GST, foram purificados e utilizados em ensaios de avaliação de imunogenicidade e antigenicidade. Foram demonstradas a antigenicidade das proteínas nativas MHP556 e MF306, além da imunogenicidade da proteína recombinante MF306-GST. A comparação desses resultados contribuirá para a elucidação da função dessas proteínas de superfície na interação patógeno-hospedeiro e da importância da presença de domínios diferenciais entre proteínas ortólogas na resposta imune desencadeada pelo hospedeiro. / The bacteria Mycoplasma hyopneumoniae is the etiological agent of swine enzootic pneumonia and attaches to the cilliary tracheal cells to colonize the host. This disease is responsible for economic losses in many countries due to the morbidity of pig herds. The bacteria Mycoplasma flocculare is also found mainly in the tracheal mucosal, as M. hyopneumoniae, but it is a commensal species. Both species have genetic similarities as they share 90% of their predicted surface proteins and the transcriptomic profiles of the genes encoding adhesins, proteins that enable the attachment in host tissue, very similar. Yet, genomic and transcriptional analysis does not explain the phenotypic difference between M. hyopneumoniae and M. flocculare within its host. Considering these previous studies, it was hypothesized that the difference in pathogenicity may be due, in part, tothe amino acid sequence of the orthologous surface proteins, once that 85% of all orthologous surface proteins of both species show, at least, one differential domain. These differential domains may trigger functional modifications and/or immunological modifications by the host. To immunologically characterize a pair of orthologous surface proteins MHP556 and MF306, from M. hyopneumoniae and M. flocculare, respectively, recombinant versions were expressed in Escherichia coli BL21 pLysE. The recombinant products, MHP556-GST and MF306-GST, were purified and used in immunological and antigenicity assay. The antigenicity of the native proteins MHP556 and MF306 were established, and the immunogenicity of the recombinant protein MF306-GST as well. The comparison of the results of this study may help to elucidate the different functions of both surface proteins in the host-pathogen interaction and shed light about the importance of the presence of differential domains in orthologous proteins in the host immune response.

Mycoplasma hyopneumoniae é a bactéria causadora da pneumonia micoplásmica suína, que afeta o rebanho suíno em nível mundial. Durante o processo de infecção, o sistema imune de organismos afetados produz espécies reativas de oxigênio (ERO), conhecidas por causarem uma variedade de lesões celulares, como uma das estratégias para neutralização do patógeno. Embora a presença de enzimas antioxidantes clássicas seja esperada em M. hyopneumoniae, genes importantes relacionados à proteção contra ERO como superóxido-dismutase, catalases e glutationa-peroxidase não foram identificados por homologia na anotação de seqüências genômicas. Entre os poucos genes de M. hyopneumoniae codificando proteínas possivelmente envolvidas na supressão da resposta do hospedeiro através da produção de ERO, foi identificado um codificando uma peroxirredoxina. Análises de seqüência e filogenéticas mostram que a peroxirredoxina de M. hyopneumoniae (MhPrx) está relacionada com a subfamília das peroxirredoxinas 2-Cys atípica, embora ela tenha apenas uma cisteína em sua seqüência. A seqüência de DNA codificadora (CDS) da MhPrx foi clonada e expressa em Escherichia coli para a produção de uma MhPrx recombinante (rMhPrx), a qual foi purificada e usada para a imunização de camundongos para produzir um anti-soro policlonal anti-MhPx. Este anti-soro foi utilizado para investigar extratos protéicos de M. hyopneumoniae e demonstrou a expressão de MhPrx nas três cepas testas (J, 7422 e 7448). A atividade da rMhPrx foi determinada com uso de um sistema de oxidação catalisado por metais, que mostrou que esta enzima pode proteger moléculas de DNA do dano causado por ERO e deve ter uma função essencial durante a infecção. / Mycoplasma hyopneumoniae is the causative agent of the porcine enzootic pneumonia, which affects swineherds worldwide causing heavy economical losses. In the infection process, the host generates reactive oxygen species (ROS) as one of the strategies used to neutralize the pathogen. Although the presence of classical antioxidant enzymes would be expected in M. hyopneumoniae, important genes directly related to protection against ROS, like superoxide-dismutase, catalases and glutathione-peroxidase were not identified by sequence homology in the genome sequence annotation. Among the few identified M. hyopneumoniae genes coding for proteins possibly involved with suppression of the host ROS-mediated response, one coding for a peroxiredoxin was recognized. Sequence and phylogenetic analysis indicate that M. hyopneumoniae peroxiredoxin (MhPrx) is closely related to the atypical 2-Cys peroxiredoxin subfamily, although it has only one cysteine in its sequence. The MhPrx coding DNA sequence was cloned and expressed in Escherichia coli to produce a recombinant MhPrx (rMhPrx), which was purified and used to immunize mice and produce an anti-MhPrx polyclonal antiserum. This antiserum was used to probe M. hyopneumoniae extracts and demonstrated that MhPrx is expressed in all three tested strains (J, 7422 and 7448). A metal catalyzed oxidation system was used to assay the activity of rMhPrx, showing that it can protect DNA from ROSmediated damage and may play an essential role during infection.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-09T12:48:58Z No. of bitstreams: 1 Gislaine Raquel dos Santos.pdf: 1237145 bytes, checksum: 1d84eb25ea90c4c2359acf5c66e01410 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-09T12:48:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gislaine Raquel dos Santos.pdf: 1237145 bytes, checksum: 1d84eb25ea90c4c2359acf5c66e01410 (MD5) Previous issue date: 2011-02-09 / The objective of this thesis was to conduct a epidemiological study about the Enzootic Bovine Leukosis virus infection in dairy cattle originating from farms in the micro region of Garanhuns, State of Pernambuco. Four hundred forty five blood samples were collected on 19 dairy herds distributed in 15 towns. Samples were submitted to the Agar Gel Immunodiffusion (AGID) technique to detect anti-VLB serum antibodies. To identify the risk factors associated with infection was performed an univariate statistical analysis for those variables of interest using the chi-square test and later was made a logistic regression analysis considering as dependent variable serology (reagent or no reagent). There was a prevalence of 20.7% (95% CI; 17.1 - 82.9). Prevalence of infection at the studied properties ranged from 0.1% to 77.9%. There was at least one infected animal in 63.2% of farms. After logistic regression analysis were observed as risk factors: intensive farming (OR 19.1, CI 6.9 - 52.6), performance of palpation (OR 2.1, CI 1.3 - 3.4); management of handlers (OR 2.8, CI 1.2 - 6.5) and as a protective factor fly control (OR 0.2, CI 0, 1 - 0.4), heat treatment of colostrum (OR 0.7, CI 0.5 - 0.9); replacement animal import (OR 0.5, CI 0.3 - 0.9). According to the results, BLV infection is widespread in the studied region and control management should be implemented to prevent the spread of the virus to other properties in the region and other states. / Objetivou-se realizar um estudo epidemiológico sobre a infecção pelo vírus da Leucose Enzoótica em bovinos leiteiros procedentes de propriedades rurais na Microrregião de Garanhuns, Estado de Pernambuco. Foram coletadas 449 amostras de sangue em 19 rebanhos leiteiros distribuídos em 15 municípios. As amostras foram submetidas à técnica de Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA) para detecção de anticorpos séricos contra o VLB. Para a identificação dos fatores de risco associados à infecção foi realizada uma análise estatística univariada para aquelas variáveis de interesse através do teste quiquadrado de Pearson e posteriormente realizou-se a regressão logística, considerando como variável dependente o exame sorológico (reagente ou não reagente). Observou-se uma prevalência de 20,7% (IC 95%; 17,1 - 82,9). A prevalência da infecção nas propriedades estudadas variou de 0,1 a 77,9%. Observou-se que 63,2% das propriedades possuíam ao menos um animal infectado. Na análise de regressão logística observou-se como fator de risco: sistema de criação intensivo (OR 19,1; IC 6,9 – 52,6); realização de exame de palpação (OR 2,1; IC 1,3 - 3,4); manejo dos tratadores (OR 2,8; IC 1,2 – 6,5) e como fator de proteção o controle de mosca (OR 0,2; IC 0,1-0,4); tratamento térmico do colostro (OR 0,7; IC 0,5 – 0,9); importação de animais para reposição (OR 0,5; IC 0,3 – 0,9). Diante os resultados obtidos constata-se que a infecção pelo VLB está distribuída na região estudada e que medidas de controle devem ser implementadas para impedir a propagação do vírus para as demais propriedades da região e outros estados brasileiros.

Se realizó el estudio anátomo-histopatológico de muestras de vejiga urinaria, así como hígado, riñón y bazo, de 41 vacunos con cuadros lesionales de una enfermedad conocida en la provincia de Oxapampa (Pasco) como “Hematuria“ o “Intoxicación por Machicura“. Estos fueron obtenidos a partir de la inspección de 173 animales en el camal municipal de esta provincia, buscando correlacionar esta enfermedad local con la Hematuria Vesical Enzoótica Bovina (HVEB), enfermedad del ganado vacuno de distribución mundial. En el presente trabajo, se reporta que las lesiones halladas en la vejiga urinaria fueron multifocales en el 85.37% (35/41), siendo las más frecuentes las formaciones nódulo-vasculares ulceradas, en 82.93% (34/41). En el diagnóstico histopatológico se empleó las tinciones Hematoxilina - Eosina (H.E.), e histoquímicas de Hale para mucopolisacáridos ácidos y tricrómico de Masson para tejido conectivo fibroso y/o muscular, con presencia de colágeno. Las lesiones microscópicas reportadas, corresponden a diversos procesos, tales como: los proliferativos donde destacaron los polipoides con 58.54% (24/41); entre los procesos circulatorios, resaltaron los hemorrágicos con 68.29% (28/41) y las yemas de proliferación vascular o “nidos angioblásticos” en el 46.34% (19/41); en los procesos inflamatorios fue importante la cistitis no supurativa con 70.73% (29/41). Por otro lado, los procesos neoplásicos se presentaron en el 68.30% (28/41), siendo el 41.70% de tipo epitelial y 58.30% no epitelial. Los epiteliales fueron representados por carcinomas in situ con 26.83% (11/41) y papilomas mucosos 9.76% (4/41) al igual que los carcinomas transicionales de Grado I, mientras que los no epiteliales, el hemangiosarcoma fue la neoplasia más frecuente con 34.15% (14/41), hemangiomas con 24.39% (10/41) y mixosarcoma con 14.63% (6/41). Finalmente, en una sola oportunidad se registraron: papiloma racemoso, rabdomiosarcoma, leiomiosarcoma, hemangiopericitosarcoma, carcinoma tubular, carcinoma escamoso, linfoma y una metástasis linfoide. El presente trabajo concluye que el proceso conocido como “Hematuria“ en Oxapampa, es realmente la HVEB, haciéndose el reporte oficial de esta enfermedad en nuestro país, basados en el estudio anátomo-histopatológico, asimismo se amplían los procesos reportados hasta el momento en las investigaciones sobre esta enfermedad. Esta gran variedad de lesiones vesicales, vienen a ser indicadores de una marcada alteración de los procesos celulares fisiológicos, los cuales estarían siendo originados por una o varias sustancias carcinogénicas como el Ptaquilósido (Pq), que ha sido aislado en diversos estudios del Pteridium aquilinum (Pa), helecho presente en la región del problema, pero que necesita de investigación toxicológica futura. / Anatomo-histopathologic study of urinary bladder, liver, kidney and spleen samples from 41 zebu and crossbreeding cattle with different lesions of a disease commonly named as “hematuria“ or Machicura´s intoxication in the Oxapampa province (Pasco) were done. Samples from 173 necropsied animals of abbatoir from the Municipality of this province in order to correlate Machicura´s intoxication with Bovine Enzootic Vesical Haematuria ( BEVH ), a world wide disease were obtained. It was found that the urinary bladder lesions were multifocal in 85.37% (35/41). The histopathologic diagnosis with Hematoxiline – Eosine (HE) stain, Hale´s histochemical stain for acid mucopolysaccharide and Masson trichromic for fibrous connective tissue with collagen or muscular was done. The most important microscopic lesions were proliferative polips ( 58.54% ); the circulatory process were hemorragia ( 68.29% ) and vascular proliferation or “angioblastic nests” ( 46.34% ); in the inflammatory process, the non suppurative cystitis ( 70.73% ) was the most important finding. On the other side, 68.30% were of neoplastic process and 41.70% of epithelial origen compared to 58.30% of non epithelial type. The epithelial type were composed of in situ carcinoma (26.83% ) and mucous papilomas ( 9.76 % ) the same as transitional cell carcinoma of Grade I; the non epithelial neoplastic type were distributed as follow: 34.45% by hemangiosarcoma, the most frecuent neoplasia, 24.39% by hemangioma and 14.63% by mixosarcoma. Finally, a racemous papiloma, squamous cell carcinoma, tubular carcinoma, rhabdomyosarcoma, leiomyosarcoma, hemangiopericytosarcoma, lymphoma and a lymphoid metastasis were observed in one opportunity. The conclusion was that the well known process of hematuria that occured in Oxapampa was the same as BEVH and the official report of this disease in our country based on anatomo-histopathologic study was done. The great variety of vesical lesions were the indicators of the marked alterations of the normal biological cell process that could be originated by one or various carcinogenic sustances as the ptaquiloside ( Pq ) which was isolated from the Pteridium aquilinum ( Pa ) a bracken fern presented in the studied region, but a lot of toxicologic studies need to be done.

Dentre as enfermidades que causam alterações hematológicas em bovinos podemos citar a leucose enzoótica bovina (LEB). Podendo em alguns animais, determinar formações tumorais por infiltração de células mononucleares (linfócitos, pró-linfócitos e linfócitos atípicos), em diferentes tecidos. A doença possui quadro sintomático pleomórfico e alterações hematológicas, evidenciadas por leucocitose e linfocitose persistente, com aumento de formas linfocitárias atípicas. Desta forma o presente estudo tem como objetivo avaliar a atipia linfocitária em bovinos da raça Holandesa Preto e Branco em animais soropositivos com ou sem a presença de linfocitose persistente e animais soronegativos para LEB e correlacioná-la com a apoptose de células CD5+ e a proliferação linfocitária. Assim, foram selecionados 56 animais, divididos de acordo com o leucograma e o sorodiagnóstico da LEB pela imunodifusão em ágar gel e pelo ensaio imunoenzimático em: negativos (n = 25), alinfocitóticos (AL, n= 12) e com linfocitose persistente (LP, n=19). Destes, 15 animais tiveram suas amostras sanguíneas avaliadas quanto a proliferação de linfócitos e apoptose. Os resultados deste estudo mostraram que, a contagem de leucócitos totais e os valores absolutos e relativos de linfócitos atípicos foram maiores no grupo LP. Em relação aos linfócitos atípicos, os linfócitos sombra de Gümprecht, linfócito monocitóide e linfócito com núcleo duplo, foram encontrados nos três grupos de estudo, porém mais comumente em animais infectados pelo VLEB, predominantemente no grupo manifestando linfocitose persistente. Este trabalho demonstrou uma menor proliferação de linfócitos nos animais infectados pelo VLEB manifestando LP, associado a uma menor apoptose de células CD5+. Na análise da correlação entre a apoptose de células CD5+ e a porcentagem das populações linfocitárias entre os 15 animais, observou-se que a apoptose tem uma correlação positiva com os linfócitos com núcleo duplo, o que não ocorreu nas demais populações celulares. Na correlação entre a proliferação, foi observado nos 15 animais, que quanto maior a porcentagem de linfócitos menor é a proliferação e quanto maior a porcentagem de linfócitos monocitóides menor a proliferação, o que não ocorreu nas demais populações celulares. Portanto, a manifestação da LP em animais naturalmente infectados pelo VLEB, pode ser associada ao aumento de linfócitos atípicos do tipo sombra de Gümprecht, linfócito monocitóide e linfócito núcleo duplo e da menor apoptose das células CD5 + e da menor proliferação de linfócitos / Among the diseases that cause hematological changes in cattle can cite the enzootic bovine leukemia (EBL). And in some animals, to determine tumor formations by infiltration of mononuclear cells (lymphocytes, pro-lymphocytes and atypical lymphocytes) in different tissues. The disease has symptoms very pleomorphic and hematological changes, evidenced by leukocytosis, and persistent lymphocytosis, an increase of atypical lymphocyte forms. Thus this study aims to evaluate the atypical lymphocyte in Holstein Black and White in seropositive animals with or without the presence of persistent lymphocytosis and animals seronegative LEB and correlate them with apoptosis of cells CD5 + and lymphocyte proliferation. Thus, we selected 56 animals, divided according to the WBC and serodiagnosis of LEB by agar gel immunodiffusion and by enzyme immunoassay in: negative (n = 25), non- lymphocytic (AL, n = 12) and with persistent lymphocytosis (PL, n = 19). Of these, 15 animals had their blood samples evaluated for lymphocyte proliferation and apoptosis. The results of this study showed that in total leukocytes and absolute and relative values of atypical lymphocytes were higher in group LP. Regarding atypical lymphocytes, lymphocytes Gumprecht shadow, lymphocyte and monocytoid lymphocytes with dual core, were found in the three study groups, but more commonly in animals infected VLEB, predominantly in the group with persistent lymphocytosis. This study demonstrated a reduced proliferation of lymphocytes in animals infected VLEB expressing LP, associated with lower apoptosis of CD5 + cells. In analyzing the correlation between apoptosis of cells and the percentage of CD5 + lymphocyte populations among the 15 animals, we observed that apoptosis has a positive correlation with lymphocytes with dual core, which did not occur in other cell populations. Correlation between proliferation, was observed in 15 animals, the higher the percentage of lymphocyte proliferation and lower the higher the percentage of monocytoid lymphocytes less proliferation, which did not occur in other cell populations. Therefore, the expression of LP in animals naturally infected VLEB may be associated with increased atypical lymphocytes of the type of shadow Gumprecht, lymphocyte and lymphocyte monocytoid dual-core and reduced apoptosis of CD5 + cells and reduced lymphocyte proliferation

Dentre as enfermidades que causam alterações hematológicas em bovinos podemos citar a leucose enzoótica bovina (LEB). Podendo em alguns animais, determinar formações tumorais por infiltração de células mononucleares (linfócitos, pró-linfócitos e linfócitos atípicos), em diferentes tecidos. A doença possui quadro sintomático pleomórfico e alterações hematológicas, evidenciadas por leucocitose e linfocitose persistente, com aumento de formas linfocitárias atípicas. Desta forma o presente estudo tem como objetivo avaliar a atipia linfocitária em bovinos da raça Holandesa Preto e Branco em animais soropositivos com ou sem a presença de linfocitose persistente e animais soronegativos para LEB e correlacioná-la com a apoptose de células CD5+ e a proliferação linfocitária. Assim, foram selecionados 56 animais, divididos de acordo com o leucograma e o sorodiagnóstico da LEB pela imunodifusão em ágar gel e pelo ensaio imunoenzimático em: negativos (n = 25), alinfocitóticos (AL, n= 12) e com linfocitose persistente (LP, n=19). Destes, 15 animais tiveram suas amostras sanguíneas avaliadas quanto a proliferação de linfócitos e apoptose. Os resultados deste estudo mostraram que, a contagem de leucócitos totais e os valores absolutos e relativos de linfócitos atípicos foram maiores no grupo LP. Em relação aos linfócitos atípicos, os linfócitos sombra de Gümprecht, linfócito monocitóide e linfócito com núcleo duplo, foram encontrados nos três grupos de estudo, porém mais comumente em animais infectados pelo VLEB, predominantemente no grupo manifestando linfocitose persistente. Este trabalho demonstrou uma menor proliferação de linfócitos nos animais infectados pelo VLEB manifestando LP, associado a uma menor apoptose de células CD5+. Na análise da correlação entre a apoptose de células CD5+ e a porcentagem das populações linfocitárias entre os 15 animais, observou-se que a apoptose tem uma correlação positiva com os linfócitos com núcleo duplo, o que não ocorreu nas demais populações celulares. Na correlação entre a proliferação, foi observado nos 15 animais, que quanto maior a porcentagem de linfócitos menor é a proliferação e quanto maior a porcentagem de linfócitos monocitóides menor a proliferação, o que não ocorreu nas demais populações celulares. Portanto, a manifestação da LP em animais naturalmente infectados pelo VLEB, pode ser associada ao aumento de linfócitos atípicos do tipo sombra de Gümprecht, linfócito monocitóide e linfócito núcleo duplo e da menor apoptose das células CD5 + e da menor proliferação de linfócitos / Among the diseases that cause hematological changes in cattle can cite the enzootic bovine leukemia (EBL). And in some animals, to determine tumor formations by infiltration of mononuclear cells (lymphocytes, pro-lymphocytes and atypical lymphocytes) in different tissues. The disease has symptoms very pleomorphic and hematological changes, evidenced by leukocytosis, and persistent lymphocytosis, an increase of atypical lymphocyte forms. Thus this study aims to evaluate the atypical lymphocyte in Holstein Black and White in seropositive animals with or without the presence of persistent lymphocytosis and animals seronegative LEB and correlate them with apoptosis of cells CD5 + and lymphocyte proliferation. Thus, we selected 56 animals, divided according to the WBC and serodiagnosis of LEB by agar gel immunodiffusion and by enzyme immunoassay in: negative (n = 25), non- lymphocytic (AL, n = 12) and with persistent lymphocytosis (PL, n = 19). Of these, 15 animals had their blood samples evaluated for lymphocyte proliferation and apoptosis. The results of this study showed that in total leukocytes and absolute and relative values of atypical lymphocytes were higher in group LP. Regarding atypical lymphocytes, lymphocytes Gumprecht shadow, lymphocyte and monocytoid lymphocytes with dual core, were found in the three study groups, but more commonly in animals infected VLEB, predominantly in the group with persistent lymphocytosis. This study demonstrated a reduced proliferation of lymphocytes in animals infected VLEB expressing LP, associated with lower apoptosis of CD5 + cells. In analyzing the correlation between apoptosis of cells and the percentage of CD5 + lymphocyte populations among the 15 animals, we observed that apoptosis has a positive correlation with lymphocytes with dual core, which did not occur in other cell populations. Correlation between proliferation, was observed in 15 animals, the higher the percentage of lymphocyte proliferation and lower the higher the percentage of monocytoid lymphocytes less proliferation, which did not occur in other cell populations. Therefore, the expression of LP in animals naturally infected VLEB may be associated with increased atypical lymphocytes of the type of shadow Gumprecht, lymphocyte and lymphocyte monocytoid dual-core and reduced apoptosis of CD5 + cells and reduced lymphocyte proliferation

Dentre os vários fatores que podem influenciar a polarização das respostas imunológicas nos animais destacam-se o tipo do agente agressor envolvido, as células apresentadoras de antígenos atuantes no processo e o microambiente formado pelas citocinas. Diferentes perfis de citocinas podem determinar o curso da doença, uma vez que distúrbios no equilíbrio da produção e liberação destes polipeptídeos têm papel significativo no desencadeamento e agravamento de diversas enfermidades. Vírus podem interferir com as funções das citocinas em vários níveis, influenciando na natureza da resposta imune do hospedeiro. Este desequilíbrio entre a produção de citocinas do tipo Th1 e Th2 é geralmente considerado como uma das causas da cronificação das infecções por retrovírus. O VLB, assim como outros retrovírus, também possui esta capacidade de manipular a resposta imune do hospedeiro a fim de direcionar os estágios alinfocitóticos (AL) e de linfocitose persistente (LP). No entanto, seu efeito diretamente sobre as citocinas no sangue e leite dos animais infectados ainda não foi completamente elucidado. Desta forma, o presente estudo objetivou a avaliação da resposta imune contra o VLB em vacas naturalmente infectadas por meio da quantificação de um perfil abrangente de citocinas presentes tanto no soro sanguíneo como no lácteo minimizados outros aspectos de estimulação que não fossem a presença do próprio vírus in vivo. Para tanto foram coletadas amostras de sangue e leite de 11 animais divididos em seus respectivos grupos experimentais (4, 3 e 4 animais para os grupos negativo, AL e LP, respectivamente) e determinadas as concentrações séricas e lácteas de IL-1β, IL-4, IL-10, TNF-α e IFN-γ. Para as comparações entre os grupos utilizou-se o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis e quando estes apresentaramse significativos aplicou-se \"pós-teste\" para verificar onde tal diferença ocorreu. O nível de significância aplicado nos testes foi de 5 % (P≤0,05), sempre considerando hipóteses alternativas bicaudais. Verificou-se que não houve diferença nas concentrações das citocinas IL-1β, IL-4, IFN-γ e TNF-α no sangue dos animais pertencentes aos diferentes grupos experimentais. Quanto às concentrações das citocinas no soro lácteo dos bovinos testados nos diferentes grupos, os resultados demonstraram comportamentos semelhantes aos habitualmente descritos na literatura científica para o sangue periférico, sugerindo que a atuação do VLB sobre a glândula mamária promova interações análogas às observadas sistemicamente. Os resultados obtidos apontam para um envolvimento do VLB sobre o perfil de citocinas da glândula mamária nos animais sororreagentes. / Among the many factors that can influence the polarization of immune responses in animals include the type of the offending agent involved, the antigen-presenting cells active in the process and the microenvironment formed by the cytokine. Different profiles of cytokines may determine the course of the disease, since disturbances in the balance of production and release of these polypeptides play a significant role in triggering and worsening of many diseases. Viruses can interfere with the functions of cytokines at various levels, influencing the nature of the host immune response. This imbalance in cytokine production from Th1 and Th2 is generally regarded as a cause of chronic infections by retroviruses. The BLV, like other retroviruses, also possess this ability to manipulate the host immune response in order to drive the stages non-lymphocytotic and persistent lymphocytosis. However, its effect directly on cytokines in blood and milk of infected animals has not been fully elucidated. Thus, this study aimed at evaluating the immune response against the BLV in cows naturally infected by quantifying a comprehensive profile of cytokines present in both the serum and in whey minimized others aspects of stimulation that was not the presence of the virus itself in vivo. For this purpose, samples of blood and milk of 11 animals divided into their respective experimental groups (4, 3 and 4 animals for groups negative, PL- and PL+, respectively) and certain whey and serum concentrations of IL-1β, IL- 4, IL-10, TNF-α and IFN-γ. For comparisons between groups used the nonparametric Kruskal-Wallis test and when they showed up was applied to significant \"post test\" to see where this difference occurred. The level of significance in the tests was 5 % (P≤ 0.05), when considering two-tailed alternative hypotheses. There was no difference in the concentrations of IL-1β, IL-4, IFN-γ and TNF-α in the blood of animals belonging to the different experimental groups. The concentrations of cytokines in the whey of cattle in different groups, the results showed behaviors similar to those usually described in scientific literature to the peripheral blood, suggesting that the action of BLV on the mammary gland promotes interactions similar to those seen systemically. The results indicate an involvement of BLV on the cytokine profile of the mammary gland in animals seropositive.

Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da pneumonia enzoótica, enfermidade distribuída mundialmente em rebanhos suínos nas fases de crescimento e terminação. A pneumonia enzoótica tem sido considerada uma das mais importantes causas de perdas econômicas na suinocultura mundial. Tendo em vista a disponibilidade dos genomas completos de três linhagens diferentes de M. pneumoniae, sendo duas patogênicas (linhagens 7448 e 232) e outra não patogênica (linhagem J) e a ausência de sistemas genéticos adequados para o estudo destes genomas, é necessidade emergente o desenvolvimento de ferramentas genéticas funcionais neste organismo. Atualmente, cinco espécies de micoplasmas possuem vetores replicativos disponíveis para transformação. No entanto nenhum deles possui a oriC de M. hyopneumoniae, e estudos sugerem que estes vetores são espécie-específicos e não seriam replicados em M. hyopneumoniae. Este trabalho teve como objetivos a construção de um vetor replicativo e o desenvolvimento de um sistema para transformação de M. hyopneumoniae. Os resultados alcançados constituem uma etapa prévia e imprescindível para o estudo de supostas regiões promotoras nesta espécie. O plasmídio replicativo pOSTM construído neste trabalho foi obtido a partir do vetor pUC18, adicionando-se a origem de replicação de M. hyopneumoniae e o cassete de expressão do gene de resistência à tetraciclina (tetM), controlado pelo promotor do gene da espiralina de Spiroplasma citri. A transformação foi realizada através de eletroporação e as células transformantes foram selecionadas pelo fenótipo de resistência à tetraciclina. Os transformantes resistentes à tetraciclina foram confirmados através da amplificação por PCR de porção do vetor inserido nas células. Tal comprovação permite concluir que o M. hyopneumoniae é um organismo susceptível à transformação e que o determinante tetM heterólogo é funcional neste patógeno. / Mycoplasma hyopneumoniae is the etiological agent of enzootic pneumonia of pigs.The disease has a worldwide distribution in growing and finishing pigs. The enzootic pneumonia has been considered one of the most important causes of economic losses in the worldwide swine breeding. The now available complete sequences of the genomes of two pathogenic (7448 and 232) and one non-pathogenic strain (J) of M. hyopneumoniae and the lack of suitable genetic systems to study these genomes points to the emergent need for the development of functional genetic tools for this organism. Currently, there are replicating vectors available for five species of mycoplasmas. However none of them posses oriC of M. hyopneumoniae, and studies suggest that these vectors are species-specific and they would not be functional in M. hyopneumoniae. The aim of the present study was to construct a replicating vector and the development of a system for transformation of M. hyopneumoniae. These constitute a previous and essential stage for the study of putative promoter regions in this species. To construct the replicating plasmid pOSTM the oriC of M. hyopneumoniae and the expression cassette containing the gene for tetracycline resistance (tetM), controlled by spiralin gene promoter of Spiroplasma citri, were introduced into the vector pUC18. The transformation was achieved by electroporation and transformants were selected for tetracycline resistance. Tetracycline resistance transformants were confirmed through PCR amplification of portion of the inserted vector. Such evidence allows the conclusion that M. hyopneumoniae is amenable to transformation and heterologous tetM determinant is functional in this pathogen.

A Pasteurella multocida é o agente causador da pasteurelose pulmonar dos suínos, sendo comum a ocorrência dessa infecção associada com o Mycoplasma hyopneumoniae no curso da pneumonia enzoótica. O agente é encontrado em pulmões de várias espécies animais e no homem. A infecção de suínos com o circovírus suíno tipo 2 (PCV2) causa uma forma de infecção sistêmica com profundos efeitos no sistema linfóide, causando prejuízos aos processos normais de defesa e facilitando a instalação de infecções secundárias, incluindo a pneumonia enzoótica complicada pela Pasteurella multocida. O objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar amostras de P. multocida obtidas de suínos com sinais clínicos compatíveis com os da circovirose e de animais de frigorífico quanto ao seu perfil bioquímico, capsular e sensibilidade a antimicrobianos. Foram utilizados 453 materiais (pulmões e suabes das lesões pulmonares), resultando em 115 isolados bacterianos de 79 pulmões. Paralelamente, procurou-se avaliar a eficiência do isolamento da bactéria a partir de dois sítios de amostragem no pulmão: do exsudato bronquial e da superfície de corte pulmonar. Numa amostragem dos casos, procurou-se estabelecer a relação entre a infecção com PCV2 e as lesões pulmonares induzidas pela P. multocida. Numa análise do grau de pneumonia foram classificadas 38 lesões como leves, 19 como médias e 15 graves. Na análise bacteriológica, todas as amostras foram positivas para o teste da catalase e oxidase e negativas para o citrato e H2S, e 11,3% foram negativas ao teste do indol. Utilizando-se os substratos sorbitol, manitol, trealose, maltose e arabinose foram observados seis perfis distintos. O tipo capsular A esteve presente em 93,91% das amostras e o tipo D em 6,09%. Nenhuma das amostras possuía o gene codificador da toxina dermonecrótica (toxA) e a resistência antimicrobiana foi baixa e a oxitetraciclina o princípio ativo com maior resistência 15,65%. / Pasteurella multocida is the etiologic agent of swine respiratory pasteurellosis and the infection occurs specially associated with Mycoplasma hyopneumoniae in the course of enzootic pneumonia. The agent can be isolated from the lung of several animal species and man. Infection of pigs with porcine circovirus (PCV2) causes a systemic infection with deep effects on the lymphoid system (porcine multisystemic wasting syndrome, PMWS), resulting in impairment of the normal defense processes and facilitating secondary infections, including enzootic pneumonia complicated with Pasteurella multocida. The objective of the present work was to isolate and characterize strains of P. multocida obtained from pigs with clinical signs compatible with PMWS and from slaughter pigs, considering biochemical profile, capsular typing and antibiotic sensitivity testing. A total of 453 materials (lungs and swabs from lung lesions) were used, resulting in 115 bacterial isolates from 79 lungs. At the same time, the efficiency of the isolation of the bacteria from two different sites in the lung was assessed: bronchial exudate and the cut surface of the lung. In a sample of the cases it was tried to establish the relationship between PCV2 infection and lung lesions induced by P. multocida. Analyzing degrees of pneumonia, 38 lesions were classified as mild, 19 as intermediate and 15 as severe. In the bacteriological analysis, all strains were positive for catalase and oxidase, and negative for citrate and H2S, and 11.3 were negative in the indole test. Using sugar fermentation (sorbitol, manitol, trealose, maltose and arabinose) six different profiles were established. Capsular type A was diagnosed in 93.91% of the samples and type D in 6.09%. All strains were negative for the gene codifying dermonecrotic toxin (toxA). Antimicrobial resistance was low, and tetracycline was the product showing higher resistance (15.65%).

Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da pneumonia enzoótica, enfermidade distribuída mundialmente em rebanhos suínos nas fases de crescimento e terminação. A pneumonia enzoótica tem sido considerada uma das mais importantes causas de perdas econômicas na suinocultura mundial. Tendo em vista a disponibilidade dos genomas completos de três linhagens diferentes de M. pneumoniae, sendo duas patogênicas (linhagens 7448 e 232) e outra não patogênica (linhagem J) e a ausência de sistemas genéticos adequados para o estudo destes genomas, é necessidade emergente o desenvolvimento de ferramentas genéticas funcionais neste organismo. Atualmente, cinco espécies de micoplasmas possuem vetores replicativos disponíveis para transformação. No entanto nenhum deles possui a oriC de M. hyopneumoniae, e estudos sugerem que estes vetores são espécie-específicos e não seriam replicados em M. hyopneumoniae. Este trabalho teve como objetivos a construção de um vetor replicativo e o desenvolvimento de um sistema para transformação de M. hyopneumoniae. Os resultados alcançados constituem uma etapa prévia e imprescindível para o estudo de supostas regiões promotoras nesta espécie. O plasmídio replicativo pOSTM construído neste trabalho foi obtido a partir do vetor pUC18, adicionando-se a origem de replicação de M. hyopneumoniae e o cassete de expressão do gene de resistência à tetraciclina (tetM), controlado pelo promotor do gene da espiralina de Spiroplasma citri. A transformação foi realizada através de eletroporação e as células transformantes foram selecionadas pelo fenótipo de resistência à tetraciclina. Os transformantes resistentes à tetraciclina foram confirmados através da amplificação por PCR de porção do vetor inserido nas células. Tal comprovação permite concluir que o M. hyopneumoniae é um organismo susceptível à transformação e que o determinante tetM heterólogo é funcional neste patógeno. / Mycoplasma hyopneumoniae is the etiological agent of enzootic pneumonia of pigs.The disease has a worldwide distribution in growing and finishing pigs. The enzootic pneumonia has been considered one of the most important causes of economic losses in the worldwide swine breeding. The now available complete sequences of the genomes of two pathogenic (7448 and 232) and one non-pathogenic strain (J) of M. hyopneumoniae and the lack of suitable genetic systems to study these genomes points to the emergent need for the development of functional genetic tools for this organism. Currently, there are replicating vectors available for five species of mycoplasmas. However none of them posses oriC of M. hyopneumoniae, and studies suggest that these vectors are species-specific and they would not be functional in M. hyopneumoniae. The aim of the present study was to construct a replicating vector and the development of a system for transformation of M. hyopneumoniae. These constitute a previous and essential stage for the study of putative promoter regions in this species. To construct the replicating plasmid pOSTM the oriC of M. hyopneumoniae and the expression cassette containing the gene for tetracycline resistance (tetM), controlled by spiralin gene promoter of Spiroplasma citri, were introduced into the vector pUC18. The transformation was achieved by electroporation and transformants were selected for tetracycline resistance. Tetracycline resistance transformants were confirmed through PCR amplification of portion of the inserted vector. Such evidence allows the conclusion that M. hyopneumoniae is amenable to transformation and heterologous tetM determinant is functional in this pathogen.