ARAÚJO. I. V. Anemia falciforme: crises vaso-oclusivas parecem estar relacionadas à redução da concentração de proteínas na membrana eritrocitária. 2015. 75 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2015. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-29T14:39:18Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_ivaraujo.pdf: 2013061 bytes, checksum: 46f0a4a730017e6a50ea1794feb4d555 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-06-29T14:42:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_ivaraujo.pdf: 2013061 bytes, checksum: 46f0a4a730017e6a50ea1794feb4d555 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T14:42:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_ivaraujo.pdf: 2013061 bytes, checksum: 46f0a4a730017e6a50ea1794feb4d555 (MD5) Previous issue date: 2015 / Sickle cell anemia is a common genetic disorder resulting from a specific change in position six of the hemoglobin gene, which results in different alleles, which when transcribed, codes for hemoglobin S which leads to the formation of sickle erythrocytes. Red blood cells containing hemoglobin S acquire in hypoxic conditions, the sickle-shaped, causing vaso-occlusive crisis in patients. This study aimed to isolate erythrocyte membrane proteins of patients with sickle cell anemia (in symptomatic and asymptomatic stages) and to correlate changes identified in these periods, using High Performance Liquid Chromatography (HPLC - ion exchange), SDS-PAGE (1D and 2D) and Mass Spectrometry (MS-ESI)). Was performed proteomic analysis in erythrocyte membrane proteins obtained from peripheral blood samples from three patients, collected over two years, and separated according to the presence (PC) or absence of vaso-occlusive crisis (PSC) at the time of collection. The control group consisted of two individuals with no diagnosis of hemoglobinopathies. We identified the presence of a higher concentration of membrane proteins in sickle cell erythrocytes, particularly in CSP patients and showed that during attacks the amount of protein present in the erythrocyte membrane of patients undergoes reduction (20.7% -PC1; 34 2% - PC3 and 45.2% - PC2). Among the 159 membrane proteins extracted from sickle cell erythrocytes, 148 were identified and 11 were not identified, using as parameter the database ExPASy TagIdent. Among the proteins not identified, six were extracted from the plasma membrane of PC patients and five PSC patients. The identification of PRDX2 protein (peroxiredoxin with an apparent molecular mass of 41 kDa) with an apparent molecular weight below 30 kDa, suggesting the structural change of this protein. Failure to identify 11 proteins extracted membrane of sickle cell erythrocytes suggests quantitative changes in protein expression of these patients. Our results also suggest that the vaso-occlusive crises may be related to a reduction in total protein concentration of the erythrocyte membrane in patients. / A anemia falciforme é uma doença genética frequente, decorrente de uma modificação pontual na posição seis do gene da hemoglobina, que resulta em alelos diferentes, que quando transcrito, codifica a hemoglobina S, que leva a formação das hemácias falcêmicas. As hemácias contendo hemoglobina S adquirem, em condições de hipóxia, a forma de foice, causando crise vaso oclusiva nos portadores. O presente trabalho teve como objetivo isolar proteínas da membrana eritrocitária de pacientes com anemia falciforme (nas fases sintomática e assintomática) e correlacionar alterações identificadas nestes períodos, utilizando Cromatografia Líquida de Alta Pressão (HPLC)-Troca iônica, SDS-PAGE 1D e 2D e Espectrometria de Massa (MS). Foi realizada análise proteômica em proteínas de membrana eritrocitária obtidas de amostras de sangue periférico de três pacientes, colhidas ao longo de dois anos, e separadas de acordo com a presença (PC) ou ausência de crise vaso oclusiva (PSC) no momento da coleta. O grupo controle foi formado por dois indivíduos sem diagnóstico de hemoglobinopatia. Foi identificada a presença de maior concentração de proteínas na membrana de eritrócitos falcêmicos, em especial nos pacientes PSC e evidenciou-se que durante as crises a quantidade de proteína presente na membrana do eritrócito dos pacientes sofre redução (20,7% - PC1; 34,2% - PC3 e 45,2% - PC2). Dentre as 159 proteínas extraídas da membrana de eritrócitos falcêmicos, 148 foram identificadas, e 11 não foram identificadas, usando-se como parâmetro a base de dados TagIdent ExPASy. Dentre as proteínas não identificadas, seis foram extraídas da membrana eritrocitária de pacientes PC e cinco de pacientes PSC. A identificação da proteína PRDX2 (uma peroxirredoxina com massa molecular aparente de 41 kDa) com massa molecular aparente inferior a 30 kDa sugere a alteração estrutural desta proteína. A não identificação de 11 proteínas extraídas da membrana de eritrócitos falcêmicos sugere alteração quantitativa na expressão proteica destes pacientes. Nossos resultados sugerem ainda que as crises vaso-oclusivas podem estar relacionadas a uma redução na concentração total de proteínas da membrana eritrocitária nos pacientes.

A deformabilidade é a característica que permite ao eritrócito normal de 7 a 8 micrômetros (m) circular por capilares de até 3m de diâmetro. Esse fenômeno depende da geometria celular, da viscosidade interna e das propriedades visco-elásticas da membrana eritrocitária. Dentre as várias técnicas de estudo da deformabilidade eritrocitária (DE), como: a aspiração por micropipeta, a filtração e a reoscopia, destaca-se a ectacitometria. Essa técnica utiliza um viscosímetro de fluxo laminar onde as modificações de forma dos eritrócitos são monitoradas continuamente por um feixe de raio LASER, processadas por microcomputador e inseridas em gráfico para posterior análise. A ectacitometria fornece o Índice de Deformabilidade (ID), o qual proporciona a medida da eliptocitogênese dos eritrócitos quando submetidos a uma força denominada shear stress. A anemia ferropriva é uma patologia muito freqüente na prática médica. Apresenta anormalidades morfológicas expressivas como: microcitose, hipocromia, ovalócitos, eliptócitos e hemácias em alvo. Alterações de deformabilidade eritrocitária foram descritas em diversas situações como na esferocitose hereditária, eliptocitose hereditária e anemias hemolíticas auto-imune. Na anemia ferropriva os trabalhos de deformabilidade eritrocitária são controversos. O presente estudo avalia a DE, utilizando a técnica da ectacitometria, em 21 pacientes portadores de anemia ferropriva documentada, antes e depois do tratamento com sais de ferro. Embora o tratamento da anemia tenha sido eficaz (Hb antes- 8,52 g/dl e Hb depois -12,74 g/dl), alguns pacientes persistiram com morfologia eritrocitária alterada. Os resultados demonstram DE diminuída em pacientes portadores de anemia ferropriva, quando comparada ao grupo controle (p< 0,0007). A ausência de normalização e manutenção da diferença estatística após a terapêutica (p< 0,03), em baixos valores de shear stress, pode ser atribuida à manutenção das alterações morfológicas eritrocitárias. Não foi verificada correlação entre o grau da anemia e a redução da DE. A diminuição da DE apresenta maior correlação com a microcitose, sendo que a hipocromia parece não interferir de maneira importante. A concomitância dos dois fatores pode somar ou anular os seus efeitos sobre a DE. O presente estudo sugere que o fator responsável pela diminuição da DE na anemia ferropriva é a microcitose. Recentemente, relatos de anemia ferropriva associada a fenômenos trombóticos aumentaram o interesse no estudo da DE para melhor compreensão desses casos. / The deformability allows the 7 to 8 cm red cell to circulate through capillaries of 3 cm. This phenomenon depends on cellular geometry, internal viscosity and viscoelastic properties of the membrane. Among the various techniques of erytrocyte deformability (ED) analysis such as: micropipette aspiration, filtration and reoscopy, we chose ektacytometry. This technique uses a laminar flow viscometry, where red cell shape changes are continuously monitorated by LASER, processed by a computer and inserted in a graphic for further analysis. Ektacytometry measures the Deformability Index (DI), which shows the size of eliptocytogenesis of the eritrocyte under shear stress force. Iron deficiency anemia is a very frequent disease in medical practice. It presents expressive morphologic alterations such as microcytosis, hypocromy, ovalocytosis, eliptocytosis and target cells. Erytrocyte deformability has been described in a number of situations like hereditary spherocytosis, hereditary elitptocytosis and autoimmune hemolytic anemia. Concerning iron deficiency anemia, authors are controversial. The present study evaluates erytrocyte deformability, using ectacytometry in 21 patients carrying documented iron deficiency before and after therapeutics with iron components. Although the anemia treatment proved to be efficient (before Hb- 8,52 g/dl and after Hb- 12,74 g/dl), some patients persisted with erytrocyte alteration morfology. Results demonstrate diminished erytrocyte deformability in people with iron deficiency anemia, when compared with the control group (p< 0,0007). The absence of regularization and maintenance of statistical difference after treatment (p< 0,03) in low shear stress can be attributed to the persistence of red cell anomalies. There is no relation between the level of anemia and reduced ED. The erytrocyte deformability diminished is greatly related to microcitosys, even if hipocromy seems to not interefere importantly. The two factors altogether can either sum or nulify the effects over erytrocyte deformability. The present study suggests that the responsible factor for diminished erytrocyte deformability is microcitosys. Recently, iron deficiency anemia has been associated to thrombotic phenomenon has raised interest in the studying of erytrocyte deformability, in order to understand such cases.

A aloimunização contra antígenos eritrocitários decorre normalmente de gestações ou transfusões prévias e torna-se um problema mais frequente entre pacientes submetidos à transfusão, até mesmo entre pacientes transfundidos de forma esporádica, como nos casos de pacientes com câncer de mama. A detecção de anticorpos irregulares deve ser realizada com técnica sensível, capaz de detectar os anticorpos de maior relevância clínica. A falha na detecção de um aloanticorpo pode levar a reação transfusional hemolítica aguda ou tardia de intensidade variável que podem agravar ainda mais a condição clínica do receptor. Atualmente no Hospital do Câncer III, a detecção de anticorpo irregular é realizada na técnica em gel-teste na fase de antiglobulina humana. O presente trabalho teve como objetivos avaliar o impacto da implantação da técnica enzimática na pesquisa de anticorpos irregulares (P.A.I) na rotina pré-transfusional em associação à técnica utilizada na rotina, e estudar o perfil de aloimunização em portadores do câncer de mama atendidos nesse serviço. Entre junho de 2015 e maio de 2016, 429 amostras de sangue de pacientes com câncer de mama coletadas para testes pré-transfusionais foram submetidas à P.A.I pelas metodologias em Liss\\AGH e Nacl\\Enzima. Quando a P.A.I resultava positiva, a identificação do anticorpo era realizada utilizando a técnica correspondente. A frequência de aloimunização encontrada pela técnica de Liss/AGH foi de 1,86% (8/429), enquanto a técnica enzimática revelou uma taxa de aloimunização de 7,6% (32/421) e com associação dos resultados de ambas técnicas obtivemos 9,32% (40/429). . Assim como na literatura, os anticorpos dos sistemas Rh foram os mais frequentes. A rotina institucional apresentou o Anti-D como predominante em 5 amostras (41,6%), seguido por 2 Anti-E (16,6%), 2 Anti-C (16,6%), 1 Anti-Lea (8,4%) , 1 Anti-Jka (8,4%) e 1 Anti-S (8,40). Enquanto que em enzima, o Anti-E foi o mais predominante em 13 amostras (35%), seguido por 9 (24%) autoanticorpos públicos quentes, 7 Anti-Lea (19%), 4 Anti-D (11%), 1 Anti-C (2,75%), 1 Anti-Cw (2,75%), 1 Anti-K (2,75%) e 1 Anti- Dia (2,75%). Para comparar proporções do perfil de aloimunização desses pacientes, foram utilizados os testes Qui-quadrado e Teste G, com valores de p<0,10 considerados significantes. Foram observadas diferenças significantes entre aloimunizados e não aloimunizados quanto à cor da pele, classificação RhD, histórico transfusional e tempo de incidência de aloanticorpo. Observamos que a aloimunização não está correlacionada ao número de transfusões de concentrados de hemácias na Instituição e sim pelo histórico transfusional. Antecedentes transfusionais foram identificados em 27,5% dos aloimunizados e 14% dos não aloimunizados (p) = 0.0398. O predomínio de RhD 7 positivo foi verificado tanto nos aloimunizados quanto nos grupos dos não aloimunizados com percentuais de 75% e 90%, respectivamente (p) = 0.0147. De acordo com a estimativa do tempo para geração de aloanticorpos, todas as aloimunizadas (100%) apresentaram resultado considerado longo, sendo superior a 72 horas. Dentre as não aloimunizadas o mesmo tempo apresentouse em 41 (82%) das pacientes (p) = 0.0583, demonstrando que a técnica enzimática pode ser utilizada com o intuito de se detectar aloanticorpos em reduzido intervalo de tempo pós-exposição a antígenos eritrocitários. Diante desses fatos, propomos a aplicação da fenotipagem eritrocitária para os antígenos dos sistemas Kell e Rh, para os indivíduos portadores do câncer de mama. Também propomos a ampliação deste projeto na rotina pré- transfusional sobre os demais grupos de pacientes oncológicos tratados pelo INCA. Tal medida certamente contribuirá para reduzir o risco de transfusões fenótipo imcompatíveis que poderiam acarretar reações transfusionais hemolíticas ou transfusões ineficazes. / The alloimmunization from erythrocyte antigens usually happens from previous pregnancies or transfusions and becomes a frequent problem among patients undergoing transfusion, even among those transfused sporadically, as in the cases of patients with breast cancer. The detection of irregular antibodies should be performed with sensitive technique capable of detecting the most clinically relevant antibodies. The failure of detecting an alloantibody can provoke acute or delayed hemolytic transfusion reaction of varying intensity that can further worsen the clinical condition of the recipient. Currently in the Cancer Hospital III, irregular antibody detection is performed in the gel-test technique at the stage of human antiglobulin. This study aimed to evaluate the impact of enzymatic technique implementation in irregular antibody screening (PAI) in the pre-transfusion routine in association with the technique used in routine, and study the alloimmunization profile in patients with breast cancer treated in this service. Between June 2015 and May 2016 XXX blood samples (serum? Plasma?) Of patients with breast cancer collected for pre-transfusion tests were submitted to the P.A.I methodologies Liss \\ AGH and NaCl \\ enzyme. When P.A.I resulted positive, identification of the antibody was carried out using the corresponding technique. The frequency of alloimmunization found by the technique Liss / AGH was 1.86% (8/429), whereas the enzymatic technique revealed an alloimmunization rate of 7.6% (32/421) and association of the results of both techniques was 9.32% (40/429). As found in literature, the antibodies of the Rh systems were the most frequent. The institutional routine presented anti-D as prevalent in 5 samples (41.6%), followed by anti-E 2 (16.6%) 2 Anti-C (16.6%) 1 Anti-Lea (8, 4%), anti-Jka 1 (8.4%) and anti-S 1 (8.40). While in enzyme technique, Anti-E was the most predominant in 13 samples (35%), followed by 9 (24%) hot public autoantibodies 7 Anti-Lea (19%) 4 Anti-D (11%), 1 Anti-C (2.75%), Anti-Cw 1 (2.75%) 1 Anti-K (2.75%) and Anti Day 1 (2.75%). To compare alloimmunization profile proportions of these patients, the Chi-square test and test G were used, with p <0.10 considered significant. Significant differences were observed between alloimmunized and not alloimmunized as ethnicity, RhD classification, transfusional historic and time of incidence of alloantibodies. We note that alloimmunization is not correlated to the number of red cell concentrate transfusions in the institution but by transfusional historic. Past transfusions have been identified in 27.5% of alloimmunized and 14% of non-alloimmunized (p) = 0.0398 patients. The prevalence of RhD positive was observed in both groups alloimmunized and non-alloimmunized with 75% and 90%, respectively (p) = 0.0147. According to the estimated time for the generation of alloantibodies, all isoimmunized (100%) had 9 results considered long, and more than 72 hours. Among the non-alloimmunized, 41 (82%) patients (p) = 0.0583 presented the same time, indicating that the enzymatic technique can be used in order to detect alloantibodies in a reduced post-exposure interval to erythrocyte antigens. Given these facts, we propose the application of phenotyping erythrocyte to the antigens of the Kell and Rh systems, for all individuals of breast cancer. We also propose the extension of this project in the pre-transfusion routine on other groups of cancer patients treated by INCA. This measure will certainly help to reduce the risk of transfusion incompatible phenotype that could cause hemolytic transfusion reactions or ineffective transfusions.

A deformabilidade é a característica que permite ao eritrócito normal de 7 a 8 micrômetros (m) circular por capilares de até 3m de diâmetro. Esse fenômeno depende da geometria celular, da viscosidade interna e das propriedades visco-elásticas da membrana eritrocitária. Dentre as várias técnicas de estudo da deformabilidade eritrocitária (DE), como: a aspiração por micropipeta, a filtração e a reoscopia, destaca-se a ectacitometria. Essa técnica utiliza um viscosímetro de fluxo laminar onde as modificações de forma dos eritrócitos são monitoradas continuamente por um feixe de raio LASER, processadas por microcomputador e inseridas em gráfico para posterior análise. A ectacitometria fornece o Índice de Deformabilidade (ID), o qual proporciona a medida da eliptocitogênese dos eritrócitos quando submetidos a uma força denominada shear stress. A anemia ferropriva é uma patologia muito freqüente na prática médica. Apresenta anormalidades morfológicas expressivas como: microcitose, hipocromia, ovalócitos, eliptócitos e hemácias em alvo. Alterações de deformabilidade eritrocitária foram descritas em diversas situações como na esferocitose hereditária, eliptocitose hereditária e anemias hemolíticas auto-imune. Na anemia ferropriva os trabalhos de deformabilidade eritrocitária são controversos. O presente estudo avalia a DE, utilizando a técnica da ectacitometria, em 21 pacientes portadores de anemia ferropriva documentada, antes e depois do tratamento com sais de ferro. Embora o tratamento da anemia tenha sido eficaz (Hb antes- 8,52 g/dl e Hb depois -12,74 g/dl), alguns pacientes persistiram com morfologia eritrocitária alterada. Os resultados demonstram DE diminuída em pacientes portadores de anemia ferropriva, quando comparada ao grupo controle (p< 0,0007). A ausência de normalização e manutenção da diferença estatística após a terapêutica (p< 0,03), em baixos valores de shear stress, pode ser atribuida à manutenção das alterações morfológicas eritrocitárias. Não foi verificada correlação entre o grau da anemia e a redução da DE. A diminuição da DE apresenta maior correlação com a microcitose, sendo que a hipocromia parece não interferir de maneira importante. A concomitância dos dois fatores pode somar ou anular os seus efeitos sobre a DE. O presente estudo sugere que o fator responsável pela diminuição da DE na anemia ferropriva é a microcitose. Recentemente, relatos de anemia ferropriva associada a fenômenos trombóticos aumentaram o interesse no estudo da DE para melhor compreensão desses casos. / The deformability allows the 7 to 8 cm red cell to circulate through capillaries of 3 cm. This phenomenon depends on cellular geometry, internal viscosity and viscoelastic properties of the membrane. Among the various techniques of erytrocyte deformability (ED) analysis such as: micropipette aspiration, filtration and reoscopy, we chose ektacytometry. This technique uses a laminar flow viscometry, where red cell shape changes are continuously monitorated by LASER, processed by a computer and inserted in a graphic for further analysis. Ektacytometry measures the Deformability Index (DI), which shows the size of eliptocytogenesis of the eritrocyte under shear stress force. Iron deficiency anemia is a very frequent disease in medical practice. It presents expressive morphologic alterations such as microcytosis, hypocromy, ovalocytosis, eliptocytosis and target cells. Erytrocyte deformability has been described in a number of situations like hereditary spherocytosis, hereditary elitptocytosis and autoimmune hemolytic anemia. Concerning iron deficiency anemia, authors are controversial. The present study evaluates erytrocyte deformability, using ectacytometry in 21 patients carrying documented iron deficiency before and after therapeutics with iron components. Although the anemia treatment proved to be efficient (before Hb- 8,52 g/dl and after Hb- 12,74 g/dl), some patients persisted with erytrocyte alteration morfology. Results demonstrate diminished erytrocyte deformability in people with iron deficiency anemia, when compared with the control group (p< 0,0007). The absence of regularization and maintenance of statistical difference after treatment (p< 0,03) in low shear stress can be attributed to the persistence of red cell anomalies. There is no relation between the level of anemia and reduced ED. The erytrocyte deformability diminished is greatly related to microcitosys, even if hipocromy seems to not interefere importantly. The two factors altogether can either sum or nulify the effects over erytrocyte deformability. The present study suggests that the responsible factor for diminished erytrocyte deformability is microcitosys. Recently, iron deficiency anemia has been associated to thrombotic phenomenon has raised interest in the studying of erytrocyte deformability, in order to understand such cases.

A aloimunização contra antígenos eritrocitários decorre normalmente de gestações ou transfusões prévias e torna-se um problema mais frequente entre pacientes submetidos à transfusão, até mesmo entre pacientes transfundidos de forma esporádica, como nos casos de pacientes com câncer de mama. A detecção de anticorpos irregulares deve ser realizada com técnica sensível, capaz de detectar os anticorpos de maior relevância clínica. A falha na detecção de um aloanticorpo pode levar a reação transfusional hemolítica aguda ou tardia de intensidade variável que podem agravar ainda mais a condição clínica do receptor. Atualmente no Hospital do Câncer III, a detecção de anticorpo irregular é realizada na técnica em gel-teste na fase de antiglobulina humana. O presente trabalho teve como objetivos avaliar o impacto da implantação da técnica enzimática na pesquisa de anticorpos irregulares (P.A.I) na rotina pré-transfusional em associação à técnica utilizada na rotina, e estudar o perfil de aloimunização em portadores do câncer de mama atendidos nesse serviço. Entre junho de 2015 e maio de 2016, 429 amostras de sangue de pacientes com câncer de mama coletadas para testes pré-transfusionais foram submetidas à P.A.I pelas metodologias em Liss\\AGH e Nacl\\Enzima. Quando a P.A.I resultava positiva, a identificação do anticorpo era realizada utilizando a técnica correspondente. A frequência de aloimunização encontrada pela técnica de Liss/AGH foi de 1,86% (8/429), enquanto a técnica enzimática revelou uma taxa de aloimunização de 7,6% (32/421) e com associação dos resultados de ambas técnicas obtivemos 9,32% (40/429). . Assim como na literatura, os anticorpos dos sistemas Rh foram os mais frequentes. A rotina institucional apresentou o Anti-D como predominante em 5 amostras (41,6%), seguido por 2 Anti-E (16,6%), 2 Anti-C (16,6%), 1 Anti-Lea (8,4%) , 1 Anti-Jka (8,4%) e 1 Anti-S (8,40). Enquanto que em enzima, o Anti-E foi o mais predominante em 13 amostras (35%), seguido por 9 (24%) autoanticorpos públicos quentes, 7 Anti-Lea (19%), 4 Anti-D (11%), 1 Anti-C (2,75%), 1 Anti-Cw (2,75%), 1 Anti-K (2,75%) e 1 Anti- Dia (2,75%). Para comparar proporções do perfil de aloimunização desses pacientes, foram utilizados os testes Qui-quadrado e Teste G, com valores de p<0,10 considerados significantes. Foram observadas diferenças significantes entre aloimunizados e não aloimunizados quanto à cor da pele, classificação RhD, histórico transfusional e tempo de incidência de aloanticorpo. Observamos que a aloimunização não está correlacionada ao número de transfusões de concentrados de hemácias na Instituição e sim pelo histórico transfusional. Antecedentes transfusionais foram identificados em 27,5% dos aloimunizados e 14% dos não aloimunizados (p) = 0.0398. O predomínio de RhD 7 positivo foi verificado tanto nos aloimunizados quanto nos grupos dos não aloimunizados com percentuais de 75% e 90%, respectivamente (p) = 0.0147. De acordo com a estimativa do tempo para geração de aloanticorpos, todas as aloimunizadas (100%) apresentaram resultado considerado longo, sendo superior a 72 horas. Dentre as não aloimunizadas o mesmo tempo apresentouse em 41 (82%) das pacientes (p) = 0.0583, demonstrando que a técnica enzimática pode ser utilizada com o intuito de se detectar aloanticorpos em reduzido intervalo de tempo pós-exposição a antígenos eritrocitários. Diante desses fatos, propomos a aplicação da fenotipagem eritrocitária para os antígenos dos sistemas Kell e Rh, para os indivíduos portadores do câncer de mama. Também propomos a ampliação deste projeto na rotina pré- transfusional sobre os demais grupos de pacientes oncológicos tratados pelo INCA. Tal medida certamente contribuirá para reduzir o risco de transfusões fenótipo imcompatíveis que poderiam acarretar reações transfusionais hemolíticas ou transfusões ineficazes. / The alloimmunization from erythrocyte antigens usually happens from previous pregnancies or transfusions and becomes a frequent problem among patients undergoing transfusion, even among those transfused sporadically, as in the cases of patients with breast cancer. The detection of irregular antibodies should be performed with sensitive technique capable of detecting the most clinically relevant antibodies. The failure of detecting an alloantibody can provoke acute or delayed hemolytic transfusion reaction of varying intensity that can further worsen the clinical condition of the recipient. Currently in the Cancer Hospital III, irregular antibody detection is performed in the gel-test technique at the stage of human antiglobulin. This study aimed to evaluate the impact of enzymatic technique implementation in irregular antibody screening (PAI) in the pre-transfusion routine in association with the technique used in routine, and study the alloimmunization profile in patients with breast cancer treated in this service. Between June 2015 and May 2016 XXX blood samples (serum? Plasma?) Of patients with breast cancer collected for pre-transfusion tests were submitted to the P.A.I methodologies Liss \\ AGH and NaCl \\ enzyme. When P.A.I resulted positive, identification of the antibody was carried out using the corresponding technique. The frequency of alloimmunization found by the technique Liss / AGH was 1.86% (8/429), whereas the enzymatic technique revealed an alloimmunization rate of 7.6% (32/421) and association of the results of both techniques was 9.32% (40/429). As found in literature, the antibodies of the Rh systems were the most frequent. The institutional routine presented anti-D as prevalent in 5 samples (41.6%), followed by anti-E 2 (16.6%) 2 Anti-C (16.6%) 1 Anti-Lea (8, 4%), anti-Jka 1 (8.4%) and anti-S 1 (8.40). While in enzyme technique, Anti-E was the most predominant in 13 samples (35%), followed by 9 (24%) hot public autoantibodies 7 Anti-Lea (19%) 4 Anti-D (11%), 1 Anti-C (2.75%), Anti-Cw 1 (2.75%) 1 Anti-K (2.75%) and Anti Day 1 (2.75%). To compare alloimmunization profile proportions of these patients, the Chi-square test and test G were used, with p <0.10 considered significant. Significant differences were observed between alloimmunized and not alloimmunized as ethnicity, RhD classification, transfusional historic and time of incidence of alloantibodies. We note that alloimmunization is not correlated to the number of red cell concentrate transfusions in the institution but by transfusional historic. Past transfusions have been identified in 27.5% of alloimmunized and 14% of non-alloimmunized (p) = 0.0398 patients. The prevalence of RhD positive was observed in both groups alloimmunized and non-alloimmunized with 75% and 90%, respectively (p) = 0.0147. According to the estimated time for the generation of alloantibodies, all isoimmunized (100%) had 9 results considered long, and more than 72 hours. Among the non-alloimmunized, 41 (82%) patients (p) = 0.0583 presented the same time, indicating that the enzymatic technique can be used in order to detect alloantibodies in a reduced post-exposure interval to erythrocyte antigens. Given these facts, we propose the application of phenotyping erythrocyte to the antigens of the Kell and Rh systems, for all individuals of breast cancer. We also propose the extension of this project in the pre-transfusion routine on other groups of cancer patients treated by INCA. This measure will certainly help to reduce the risk of transfusion incompatible phenotype that could cause hemolytic transfusion reactions or ineffective transfusions.

Submitted by Vasti Diniz (vastijpa@hotmail.com) on 2017-09-05T14:55:06Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 6265632 bytes, checksum: b400bacf85cbecabd2bc0a3fd0a7f19c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-05T14:55:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 6265632 bytes, checksum: b400bacf85cbecabd2bc0a3fd0a7f19c (MD5) Previous issue date: 2017-04-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Snakebite or snakebite is the chart of poisoning from the inoculation of toxins through the snake inoculation apparatus. The objective of this study was to evaluate and in vitro the cytotoxic, oxidative and homeostasis effects (on erythrocytes, hemoglobins and human plasma, respectively) caused by the presence of the crude venoms of Bothrops jararacussu and Bothrops moojeni snakes. The protein profile of each venom was characterized by reverse phase chromatography and SDS-PAGE. The venom compositions of both species showed similar protein profiles. The amounts of the crude venoms from B. jararacussu and B. moojeni induced significant indirect hemolysis in the presence of fatty acid and fatty acid plus calcium chloride. The crude venom of B. jararacussu presented a higher cytotoxic potential. The venoms of B. jararacussu and B. moojeni, showed no anti-hemolytic effect. The venom of B. jararacussu presented a haemagglutinating effect in the analyzed amounts of 100 and 1000μg and did not present an oxidizing effect. The B. moojeni venom presented an oxidizing effect only in the amount of 1000μg. Venoms of both species showed no anti-oxidant effect. The crude venom of B. moojeni had a higher coagulant potential compared to B. jararacussu venom and all plasma clots formed were turbid, rigid and stable. The clot formation time was inversely proportional to the amount of venom evaluated. Therefore, the information obtained from the comparisons of the biological effects caused by the venoms, showed that B. jararacussu showed indirect hemolytic activity, hemagglutinating and coagulant, and B. moojeni presented indirect hemolytic activity, oxidant and coagulant. / Acidente ofídico ou ofidismo é o quadro de envenenamento decorrente da inoculação de toxinas através do aparelho inoculador de serpentes. O objetivo desse estudo foi avaliar e comparar, in vitro, os efeitos citotóxico, oxidativo e na homeostase (sobre eritrócitos, hemoglobinas e plasma humano, respectivamente), causados pela presença das peçonhas brutas das serpentes Bothrops jararacussu e Bothrops moojeni. O perfil proteico de cada peçonha foi caraterizado por cromatografia de fase reversa e SDS-PAGE. As composições das peçonhas de ambas as espécies mostraram perfis proteicos similares. As quantidades das peçonhas brutas de B. jararacussu e B. moojeni induziram hemólise indireta significativa na presença de ácido graxo e de ácido graxo mais cloreto de cálcio. A peçonha bruta de B. jararacussu apresentou maior potencial citotóxico. As peçonhas de B. jararacussu e B. moojeni, não exibiram efeito anti-hemolítico. A peçonha de B. jararacussu apresentou efeito hemaglutinante nas quantidades analisadas de 100 e 1000μg e não apresentou efeito oxidante. A peçonha de B. moojeni apresentou efeito oxidante somente na quantidade de 1000μg. As peçonhas de ambas as espécies não mostraram efeito anti-oxidante. A peçonha de B. moojeni apresentou maior potencial coagulante em relação a peçonha de B. jararacussu e todos coágulos plasmáticos formados eram turvos, rígidos e estáveis. O tempo para formação dos coágulos foi inversamente proporcional à quantidade de peçonha avaliada. Portanto, as informações obtidas das comparações dos efeitos biológicos provocados pelas peçonhas, mostraram que B. jararacussu apresentou atividade hemolítica indireta, hemaglutinante e coagulante, e B. moojeni apresentou atividade hemolítica indireta, oxidante e coagulante.

Submitted by Claudia Rocha (claudia.rocha@udesc.br) on 2018-03-16T13:58:06Z No. of bitstreams: 1 PGCA17MA220.pdf: 918895 bytes, checksum: 7bd16289da82c230fdc69d3a30554771 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-16T13:58:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA17MA220.pdf: 918895 bytes, checksum: 7bd16289da82c230fdc69d3a30554771 (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / Capes / Promop / Laboratory tests in veterinary medicine are of particular importance with regard to the establishment of an efficient diagnosis. In the practice of the equine clinic a veterinary clinical pathology facilitates an interpretation of disturbances that damages the fetus and a pregnant female. In the pregnancy period, there is greater oxygen consumption and consequent changes in energy consumption and greater exposure to oxidative stress, which may cause embryonic reabsorption and abortions. The objective of this research was to evaluate the main hematological and biochemical alterations of the oxidative metabolism in Crioula mares in the gestation period. Blood samples were collected from 44 mares arranged in four different gestational groups, with eleven mares in each group (G0 = empty mares, G3 = 3 months gestation, G6 = 6 months gestation and G10 = 10 months gestation). The gestation of these animals was confirmed by means of sonographic examinations and palpation. The mares were evaluated by physical examination, blood count and biochemical evaluation. The samples were collected in mares from the same property, submitted to the same nutritional and sanitary management. The hemogram and clinical biochemistry were evaluated, in which was dosed urea, creatinine, total serum protein (PST), albumin, globulins, alkaline phosphatase (AF), gamma glutamyltransferase (GGT), alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), Creatine kinase (CK), calcium, phosphorus, magnesium, total, diretct and indirect bilirubin, lactate, cholesterol, triglycerides, glucose, and iron dosage. In addition, the iron binding capacity (CTLF) was measured and the transferrin saturation index (SIT) was calculated. For the evaluation of oxidative metabolism, two parameters were used: concentrations of plasma malondialdehyde (MDA) and erythrocyte reduced glutathione (GSH). For of erythrocyte osmotic fragility evaluation, were used concentrations of 0.85% to 0.00% of sodium chloride (NaCl) and hemolysis was calculated in 50% of the samples. The hemogram showed a significant difference (P = 0.001) in erythrocytes, hemoglobin, globular volume (GV), mean globular hemoglobin concentration (MGHC), platelets and monocytes. The concentration of total plasma protein (PST) and fibrinogen did not show significant differences (P> 0.05). In the clinical biochemistry, a significant difference (P = 0.001) was observed in the concentration of glucose, magnesium, iron and SIT. In the concentrations of oxidative stress markers, a statistical difference was observed in the MDA dosage (P = 0.001). The EOS evaluation did not present statistical differences. The MDA indicated the presence of oxidative stress stimulus, as well as the discrete increase of GSH indicated a response to the production of antioxidants during the gestation period. During pregnancy, erythrocyte fragility and reduction in the number of circulating cells occurred, and the initial third of gestation requires a greater care / Os exames laboratoriais na medicina veterinária têm especial importância no que diz respeito à instituição de um diagnóstico eficiente. Na prática da clínica equina a patologia clínica veterinária facilita a interpretação de distúrbios que possam prejudicar o feto e a fêmea gestante. No período de prenhez ocorre maior consumo de oxigênio e consequentes alterações no consumo de energia e maior exposição ao estresse oxidativo, podendo causar reabsorção embrionária e abortamentos. O objetivo dessa pesquisa foi avaliar as principais alterações hematológicas, bioquímicas e do metabolismo oxidativo em éguas da raça Crioula no período da gestação. Foram colhidas amostras de sangue de 44 éguas dispostas em quatro diferentes grupos gestacionais, sendo onze éguas em cada um dos grupos (G0 = éguas vazias, G3 = 3 meses de gestação, G6 = 6 meses de gestação e G10 = 10 meses de gestação). A comprovação da gestação desses animais foi por meio de exames ultrassonográficos e palpação. As éguas foram avaliadas por meio de exame físico, hemograma e avaliação bioquímica. As éguas eram da mesma propriedade, submetidas ao mesmo manejo nutricional e sanitário. Foram avaliados o hemograma, a bioquímica clínica, no qual foram dosados ureia, creatinina, proteína sérica total (PST), albumina, globulinas, fosfatase alcalina (FA), gama glutamiltransferase (GGT), alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), creatinaquinase (CK), cálcio, fósforo, magnésio, bilirrubina total, direta e indireta, lactato, colesterol, triglicérides, glicose, e a dosagem de ferro. Além da capacidade de ligação do ferro (CTLF) e calculado o índice de saturação de transferrina (IST). Para avaliação do metabolismo oxidativo foram utilizados dois parâmetros, as concentrações de malondialdeído plasmático (MDA) e glutationa reduzida eritrocitária (GSH). Para avaliação da fragilidade osmótica eritrocitária foram utilizadas concentrações de 0,85% a 0,00% de cloreto de sódio (NaCl) e foi calculado a hemólise em 50% das amostras. No hemograma foi observada diferença significativa (P=0,001) em eritrócitos, hemoglobina, volume globular (VG), concentração de hemoglobina globular média (CHGM), plaquetas e monócitos. A concentração de proteína plasmática total (PST) e fibrinogênio, não apresentaram diferenças significativas (P>0,05). Na bioquímica clínica observou-se diferença significativa (P=0,001) na concentração de glicose, magnésio, ferro e IST. Nas concentrações dos marcadores de estresse oxidativo se observou diferença estatística na dosagem de MDA (P=0,001). Já a avaliação da FOE não apresentou diferenças estatísticas. O MDA indicou a presença de estímulo ao estresse oxidativo, bem como o aumento discreto de GSH indicou uma resposta à produção de antioxidantes no período da gestação. Ocorreu maior fragilidade eritrocitária e redução no número de células circulantes, sendo que o terço incial da gestação requer maiores cuidados

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-24T18:26:43Z No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-24T18:26:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-02-24T18:27:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-24T18:27:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2014-09-30 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Introduction The SLC4A1 gene responsible for the expression of the Band 3 (anion exchanger AE1 1), has the exons 4,5,6 involved in the expression of the band 3 Memphis and exons 18:19 linked to expression system erythrocyte polymorphisms presenting Diego very important anthropological and transfusion. Polymorphisms in this gene have also been described associated with changes in erythrocyte membrane as spherocytosis, hereditary and ovalocitose elliptocytosis. Given these associations, and the few studies in the Brazilian population, we studied associations between polymorphisms of SLC4A1 gene changes in erythrocyte membrane in hematological patients of the Hematology Foundation of Amazonas (FHEMOAM). Objective: To investigate polymorphism in exon 4, 5, 6, 18 and 19 of the SLC4A1 gene in patients with and without changes in the erythrocyte membrane. Materials and Methods: We performed AS-PCR and gene sequencing in 385 patients for hematological diagnosis. clinical and laboratory tests where associations were established with polymorphisms in the SLC4A1 gene were considered. Results: We collected 385 samples from patients and trainees 4 groups: Group A. anemic patients with poikilocytosis and / or anisocytosis Group B. anemic patients without poikilocytosis and / or anisocytosis Group C patients without anemia with poikilocytosis and / or anisocytosis and group D. healthy individuals who, on the various polymorphisms observed in our study, the SLC4A1 gene may be considered polymorphic, among them more than 5 nucleotide changes that cause changes in the sequence of amino acids that contituem protein band 3. in our studies They were also found through statistical correlations, two SNPs that are possibly associated with protection factor will anemia and 2 SNPs that are probably associated with the anemia risk factor. For exon 19 were sequenced, 302 samples, we found that the allele DI*A an incidence of 5.30%, and B*DI allele with a frequency of 94.70% and correlate the A166G (Band 3-Memphis) . Given the results, the allele was found DI * The correlated with 166A (Band 3 -Normal), so found a new variant of allele DI*A. / Introdução O gene SLC4A1, responsável pela expressão da Banda 3 (anion exchanger 1- AE1), tem os exons 4,5,6 envolvidos na expressão da banda 3 Memphis e os exons 18 e 19 ligados a expressão do sistema eritrocitário Diego apresentando polimorfismos de grande importância antropológica e transfusional. Polimorfismos envolvendo este gene já foram descritos também associados às alterações na membrana eritrocitária como esferocitose, ovalocitose e eliptocitose hereditária. Diante dessas associações, além dos poucos estudos realizados na população brasileira, estudamos associações entre polimorfismos do gene SLC4A1 com alterações da membrana eritrocitária em pacientes hematológicos da Fundação de Hematologia e Hemoterapia do Amazonas (FHEMOAM). Objetivo: Investigar polimorfismo nos exon 4, 5, 6, 18 e 19 do gene SLC4A1, em pacientes com e sem alterações na membrana eritrocitária. Materiais e Métodos: Foram realizadas técnicas de AS-PCR e sequenciamento gênico em 385 pacientes hematológicos para esclarecimento diagnóstico. Foram consideradas as análises clínicas e laboratoriais onde foram estabelecidas as associações com os polimorfismos no gene SLC4A1. Resultados: Foram coletadas 385 amostras de pacientes sendo formandos 4 grupos: Grupo A. pacientes anêmicos com poiquilocitose e/ou anisocitose, Grupo B. pacientes anêmicos sem poiquilocitose e/ou anisocitose, Grupo C. pacientes sem anemia com poiquilocitose e/ou anisocitose e Grupo D. indivíduos saudáveis, que, diante dos vários polimorfismos observados em nosso estudo, o gene SLC4A1 pode ser considerado polimórfico, dentre eles, mais de 5 alterações nucleotídicas que causam alteração na sequencia de aminoácidos que contituem a proteína banda 3. Em nossos estudos foram encontrados também, através de correlações estatísticas, dois SNPs que possivelmente estejam associados ao fator de proteção á anemia e 2 SNPs que provavelmente estejam associados ao fator de risco da anemia. Para o exon 19 foram sequenciadas, 302 amostras, constatamos que o alelo DI* A ocorre numa incidência de 5,30% e o alelo DI*B com uma frequência de 94,70% e que correlacionamos o A166G (Banda 3-Memphis). Diante dos resultados, foi encontrado o alelo DI*A correlacionada com a 166A (Banda 3 –Normal),sendo assim constatado uma nova variante do alelo DI*A.

Submitted by Vasti Diniz (vastijpa@hotmail.com) on 2017-09-04T12:47:50Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3356476 bytes, checksum: 04bc24e3e4cfbdf2557866eb0f6e7739 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-04T12:47:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3356476 bytes, checksum: 04bc24e3e4cfbdf2557866eb0f6e7739 (MD5) Previous issue date: 2017-04-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Snake venoms are complex mixtures of components that act upon the disturbance of various physiological mechanisms. The composition and biological activities of the venom may vary in snakes according to age, sex and geographic region. The present work aimed to evaluate the protein composition and biological activities triggered, in vitro, by male and female venoms of the Bothrops leucurus snake. The protein profile was obtained by high performance liquid chromatography (HPLC) and one-dimensional electrophoresis under denaturing conditions (SDS-PAGE). The biological effects evaluated were oxidative stress, antioxidant, coagulant and hemolytic (direct and indirect) activities. A chromatographic and electrophoretic analysis presented similarities between the protein profiles of males and females venoms. The evaluated venoms did not present hemolytic effect (direct or indirect) on erythrocytes. Significant erythrocyte haemagglutination was observed, it was caused by all the measurements of the venoms evaluated. B. leucurus venoms did not present oxidative effect on hemoglobin. In the presence of both venoms studied, were observed a reduction of the oxidative effect on hemoglobin caused by phenylhydrazine; suggesting the presence of antioxidant components in the composition of the venoms. The evaluation of coagulating effect of B. leucurus venoms were performed on citrated human plasma and clotting times were shorter in the presence of female venom and, both venoms presented clot formation time inversely proportional to the quantities evaluated. However, both protein profile and hemolytic (direct and indirect), oxidant and antioxidant effects observed in B. leucurus venom were similar for male and female venoms. Otherwise, the sexual variation linked to the coagulant effect may justify the differences in type and/or intensity of symptoms observed in ophidian accidents. / As peçonhas ofídicas são complexas misturas de componentes que atuam na perturbação de diversos mecanismos fisiológicos. A composição e atividades biológicas das peçonhas podem variar entre serpentes da mesma espécie de acordo com fatores como idade, sexo e região geográfica. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a composição proteica e atividades biológicas desencadeadas, in vitro, pelas peçonhas de machos e fêmeas da serpente Bothrops leucurus. O perfil proteico foi obtido por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e eletroforese unidimensional em condições desnaturantes (SDS-PAGE). Os efeitos biológicos avaliados foram o estresse oxidativo, atividades antioxidante, coagulante e hemolíticas direta e indireta. A análise cromatográfica e eletroforética apresentaram semelhanças entre os perfis proteicos das peçonhas de machos e fêmeas. As peçonhas avaliadas não apresentaram efeito hemolítico (direto ou indireto) sobre eritrócitos. Foi observada uma expressiva hemaglutinação eritrocitária causada por todas as quantidades das peçonhas avaliadas. As peçonhas de machos e fêmeas de B. leucurus não apresentaram efeito oxidativo sobre hemoglobinas. Na presença de ambas as peçonhas estudadas, observou-se redução do efeito oxidativo sobre hemoglobinas provocado pela fenilhidrazina, sugerindo a presença de componentes antioxidantes na composição das peçonhas. A avaliação do efeito coagulante das peçonhas de B. leucurus foi realizada sobre o plasma humano citratado e os tempos de obtenção dos coágulos foram menores na presença da peçonha de fêmeas e, ambas as peçonhas apresentaram o tempo de formação dos coágulos inversamente proporcional às quantidades avaliadas. Contudo, tanto o perfil proteico como os efeitos hemolíticos (direto e indireto), oxidantes e antioxidantes observados nas peçonhas de machos e fêmeas de B. leucurus foram semelhantes. No entanto, a variação sexual obtida pela análise do efeito coagulante pode justificar as diferenças no tipo e/ou intensidade dos sintomas observados nos acidentes ofídicos.