Submitted by SANDRA MEIRA BORGHI FRASCINO null (sandramborghi@hotmail.com) on 2017-08-02T20:18:13Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado Sandra Meira Borghi Frascino.pdf: 1705864 bytes, checksum: 1badc6d904b07c0e52a3cf15fff215a8 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-08-03T13:31:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 frascino_smb_me_araca.pdf: 1705864 bytes, checksum: 1badc6d904b07c0e52a3cf15fff215a8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-03T13:31:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 frascino_smb_me_araca.pdf: 1705864 bytes, checksum: 1badc6d904b07c0e52a3cf15fff215a8 (MD5) Previous issue date: 2017-06-08 / Objetivo: O objetivo deste estudo clínico, prospectivo, randomizado, duplo-cego, foi avaliar a sensibilidade pós-operatória, o desempenho clínico e os contatos interproximais após a utilização de três diferentes estratégias restauradoras. Materiais e métodos: 159 restaurações de Classe II foram realizadas em pré-molares e molares de 53 pacientes, com idade média de 48 anos (21-78). Cada paciente recebeu ao acaso 3 restaurações, de acordo com os seguintes sistemas restauradores: PA- utilizou resina convencional, inserida pela técnica incremental (Peak Universal + Amelogen Plus, Ultradent); ABF- utilizou uma resina de baixa contração, inserida em incrementos únicos de até 4 mm, seguida da cobertura com resina nanoparticulada (Adper Single Bond+ Filtek Bulk Fill Flow+ Z350XT Body); XST- utilizou uma resina de baixa contração, inserida em incremento único de até 4 mm, seguida da cobertura com resina nanohíbrida, (XP Bond+ SDR+ TPH3). A sensibilidade pós-operatória foi avaliada utilizando uma escala analógica visual modificada (1-6), em 24 h, 7, 30, 90 dias e 6 meses após as restaurações. Dois examinadores avaliaram o desempenho clínico das restaurações utilizando critérios USPHS modificados em Baseline, 6 meses e 1 ano após as restaurações. Os contatos interproximais foram avaliados com uma escala de classificação numérica (0-4) nos mesmos períodos que os critérios USPHS. Resultados: A maior média de sensibilidade foi relatada em 24h, sendo constatada redução significativa da sensibilidade espontânea após 30 dias, em todos os grupos. Quanto à sensibilidade ao frio, o grupo ABF não apresentou redução ao longo do tempo. Não houve diferença estatística quando a sensibilidade ao calor foi avaliada. Em relação ao desempenho clínico, cor, descoloração marginal e manchamento superficial mostraram diferenças entre os grupos. Somente o grupo XST não apresentou manchamento superficial após 1 ano. Não foram observadas diferenças entre os grupos em relação aos contatos interproximais. Conclusões: Os diferentes tipos de sistemas restauradores não influenciam na sensibilidade espontânea; no entanto, mediante ao estímulo frio, o sistema XST obteve a maior redução deste tipo de sensibilidade após 30 dias. Em relação ao desempenho clínico, início de descoloração marginal ocorreu para todos os grupos, sendo mais precocemente no sistema ABF. Um dos sistemas restauradores com resina de baixa tensão de polimerização (XST) apresentou redução do contato interproximal após 1 ano de avaliação. / Objective: The aim of this prospective, randomized, double-blind clinical study was to evaluate postoperative sensitivity, clinical performance and interproximal contacts after using three different restorative strategies. Materials and methods: 159 Class II restorations were performed on premolars and molars of 53 patients, with a mean age of 48 years (21-78). Each patient randomly received 3 restorations, according to the following restorative systems: PAused conventional resin, inserted by the incremental technique (Peak Universal + Amelogen Plus, Ultradent); ABF- used a low- shrinkage resin, inserted in single increments of up to 4 mm, followed by coating with nanoparticulate resin (Adper Single Bond + Filtek Bulk Fill Flow + Z350XT Body); XST- used a low contraction resin, inserted in a single increment up to 4 mm, followed by coating with nanohybrid resin, (XP Bond + SDR + TPH3). Postoperative sensitivity was assessed using a modified visual analogue scale (1-6), at 24 h, 7, 30, 90 days and 6 months after the restorations. Two examiners evaluated the clinical performance of the restorations using modified USPHS criteria at Baseline, 6 months and 1 year after the restorations. The interproximal contacts were evaluated with a numerical classification scale (0-4) in the same periods as the USPHS criteria. Results: The highest mean sensitivity was reported in 24h, with a significant reduction in spontaneous sensitivity for all the groups after 30 days. Regarding the sensitivity to cold, the ABF group remained without reducing the sensitivity over time. There was no statistical difference when the heat sensitivity was evaluated. Regarding clinical performance, color, marginal discoloration and superficial spotting showed differences between the groups. Only the XST group did not show superficial spotting after 1 year. No differences were observed between groups in relation to interproximal contacts. Conclusions: Different types of restorative systems do not influence spontaneous sensitivity; however, when the cold stimulus was applied the XST system obtained the greatest reduction of this type of sensitivity after 30 days. Regarding clinical performance, beginning of marginal discoloration occurred for all groups, being earlier in the ABF system. One of the restorative systems with low-shrinkage stress polymerization resin (XST) showed reduction of interproximal contact after 1 year of evaluation.

No presente estudo, foi investigado o efeito do polimorfismo do gene da apolipoproteína E (APOE) sobre a expressão de RNAm e a resposta a terapia de reposição hormonal combinada ou não com atorvastatina, em 87 mulheres brancas sem vínculo genético em pós-menopausa com hipercolesterolemia. O polimorfismo Hhal (exon 4) do gene APOE foi analisado por PCR-RFLP e a quantificação do RNAm do gene APOE foi medida em células mononucleares do sangue periférico por RT-PCR duplex. As pacientes foram divididas em cinco grupos e tratadas pelo período de três meses com atorvastatina (10 mg/d); estradiol (2 mg/d); atorvastatina e estradiol; e estradiol e acetato de noretisterona (1 mg/d); e atorvastatina, estradiol e acetato de noretisterona. O polimorfismo do gene APOE não foi associado com variações no perfil lipídico sérico e na expressão de RNAm basais. Todos tratamentos reduziram significativamente as concentrações séricas de colesterol total e LDL-colesterol, independentemente do polimorfismo do gene APOE. A expressão do RNAm do gene APOE foi reduzida após os tratamentos com atorvastatina e com atorvastatina e estradiol. Esse efeito foi significativo nas mulheres portadoras de genótipo E3/E3 (p=0,025). Foi observada correlação positiva entre as variações de expressão do RNAm do gene APOE e de concentrações de colesterol total e LDL-colesterol após o tratamento com estradiol. Em conclusão, a expressão de RNAm do gene APOE em células mononucleares do sangue periférico foi reduzida pelo tratamento com atorvastatina e/ou estradiol. Esse efeito foi associado ao polimorfismo do gene APOE e à diminuição do colesterol sérico durante a terapia de reposição hormonal. / In the present study, the effect of the polymorphism at the apolipoprotein E gene (APOE) on mRNA expression and response to hormone replacement therapy (HTR) and atorvastatin was investigated in 87 unrelated postmenopausal women with hypercholesterolemia. The APOE Hhal (exon 4) polymorphism was analyzed by PCR-RFLP and mRNA expression was evaluated in mononuclear leukocytes by duplex RT-PCR. The patients were divided into five groups and treated during three months with atorvastatin (10 mg/day); estradiol (2 mg/day); atorvastatin and estradiol; estradiol and norethisterone acetate (1 mg/day); e atorvastatin, estradiol and norethisterone acetate. The APOE polymorphism was not associated with variations on basal lipids and mRNA expression levels. The treatments reduced significantly serum total and LDL cholesterol levels, without relation to the APOE polymorphism. The APOE mRNA expression was reduced after treatment with atorvastatin and atorvastatin combined with estradiol. This effect was significant in women carrying E3/E3 genotype (p=0,025). There was a positive correlation between the APOE mRNA expression and serum total and LDL cholesterol levels after treatment with estradiol. In conclusion, APOE mRNA expression on mononuclear leukocytes was reduced by atorvastatin and/or estradiol treatments. This effect was associated with the APOE polymorphism and with the reduction of the serum cholesterol during the HRT.

Nas últimas décadas, houve aumento progressivo das infecções hospitalares por leveduras principalmente, do gênero Candida. A fonte de infecção pode ser endógena ou exógena, desde que esporos unicelulares de leveduras, permanecem viáveis por meses sobre superfícies bióticas ou abióticas. Diversas espécies de leveduras são encontradas em pele e mucosas de indivíduos sadios. Em estado saprofítico ainda, as leveduras encontram-se no trato gastrintestinal humano mas, a relação entre a presença desses microorganismos e sua patogenicidade está associada a diversos fatores predisponentes, tais como: número e variedade de sítios topográficos colonizados, uso prolongado de antibióticos, infecções associadas causadas por outros microorganismos e particularmente, distúrbios imunológicos ou metabólicos. Leveduras do trato gastrintestinal podem ser transmitidas, via fecal-oral diretamente ou de modo indireto, de indivíduo para indivíduo. A transmissão de uma cepa em estado saprofítico para um hospedeiro suscetível, pode resultar em colonização seguida de infecção. A gravidade do quadro clínico depende de condições do hospedeiro e características do agente etiológico que engloba fatores de virulência e resistência a antifúngicos. Esses atributos são importantes em Candida albicans na qual, enzimas com atividade de fosfolipase e proteinase são marcadores de virulência. De outro modo, fenótipos de resistência, ocorrem, com maior freqüência, em espécies não-Candida albicans. Dada a possibilidade de instalação de doença endógena e a dispersão de cepas virulentas e resistentes, a partir de colonização gastrintestinal, estudos que contribuam para a determinação desses agentes constituintes da microbiota de pacientes internados, são importantes para o conhecimento da história natural das infecções nosocomiais por leveduras. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o trato intestinal como fonte potencial de infecção hospitalar por leveduras, descrevendo as espécies prevalentes nas primeiras horas de internação e possíveis alterações temporais, quanto a fenótipo de virulência e resistência a antifúngicos. Foram analisadas 281 amostras de leveduras isoladas de 66 crianças internadas em unidades de pediatria e semi-intensiva de hospitais públicos das cidades de São Paulo e Guarulhos, Brasil. As amostras foram isoladas de fezes coletadas nas primeiras horas de internação e durante o período de internação. A identificação das leveduras quanto a gênero e espécie foram realizadas por métodos tradicionais, analisando aspectos morfológicos e fisiológicos. A capacidade de produção de enzimas, fosfolipase e proteinase, foram verificadas conforme proposto por Price et al. 1982 e Ruchël et al., 1982. A sensibilidade aos antifúngicos: anfotericina B (AMB), fluconazol (FZ), itraconazol (IZ), cetoconazol (CZ) e nistatina (NIS) foram analisada pela técnica de difusão por discos (CECON São Paulo, Brasil). Amostras resistentes ou com sensibilidade intermediária, foram re-avaliadas pelo método de microdiluição segundo NCCL (1997) modificado por EUCAST (2002). As espécies isoladas foram: Candida tropicalis (32,7%), C.albicans (29,9%), C.parapsilosis (27, 1%), Trichosporon cutaneum e T.inkin (3,2%), Rhodotorula mucilaginosa e R.glutinis (0,7%), C.krusei (3,6%), C.guilliermondii (2,1%), C.glabrata (0,4%) e C.kefyr (0,4%). A atividade enzimática foi observada na maioria das 84 amostras de C. albicans, sendo 96% de fosfolipase e 95% de proteinase. Entre as espécies não-albicans do gênero Candida foi verificada atividade em 97% de fosfolipase e 67% de proteinase. Amostras menos sensíveis às drogas azólicas, ou seja, amostras resistentes ou com sensibilidade dependente da dose, foram encontradas em 4,3% das 281 amostras de leveduras, sendo maior porcentagem observada em C.krusei (90%). Conclui-se que existem leveduras de diversas espécies em fezes de população pediátrica hospitalizada, com fenótipos de virulência e resistência a antifúngicos. A manutenção desses fenótipos durante o período de internação pode representar fator de risco para infecção hospitalar endógena, ou ainda, fonte de dispersão de patógenos em potencial, no meio ambiente hospitalar. / At the last decades the nosocomial infections caused by yeasts raised significantly especially by Candida yeasts. The infections source can be endogen or exogenous, since spores of unicellular and multicellular are kept viable for months and several yeasts species are found in skin and mucosa of healthy people. In a saprophytic state yeasts are found in the human gastrointestinal tract but the relationship between the presence of these microorganisms and their pathology is associated with several facts such as: number, variety of sites colonized, effective use of antibiotics, associated infections caused by another microorganisms and mainly disturbance in due to lack of immunity and metabolic. Yeasts in the gastrointestinal tract can be transmitted fecal-oral direct or indirectly from an individual to another. The transmission of a strain in a saprophytic state to a host can result in colony followed by infection. The infection can be serious depending on the host conditions and the etiologic agent that includes virulent factor and resistance to antifungal drugs. These attributes are important to Candida albicans in which enzymes with phospholipase activity are responsible for virulent factors. Resistance phenotypes, otherwise it should occur more frequently in non-albicans species. Concerning the possibility of an endogen disease and the spread of virulent and resistant strains, from the gastrointestinal colony, studies that contribute to determine these agents that constitute the microbiota of patients, are important to know the natural story of nosocomial infections caused by yeasts. This work aims at evaluating the intestinal tract as a source of hospital infections by yeasts describing the remaining species in the first hours and a possible change depending on the time that may happen to virulent phenotypic and resistance to ant fungi. Two hundred eighty one yeast samples from sixty-six children attended in pediatric and semi-intensive units in 2 public hospitals located in São Paulo and Guarulhos cities in Brazil were analyzed. The fecal samples were collected at the first hours after and during their arrival at the hospital. To identify the yeasts according to their gender and species traditional methods were used, analyzing morphological and physiological aspects. The ability to produce enzymes phospholipase and proteinase was verified the same way it was proposed by Price et al. 1982 and Ruchel et al. 1982. The sensibility to antifungals: amphotericin B (AMB), f1uconazole (FZ), ketoconazole (CZ) e nistatin (NIS), was analyzed by the diffusion technical by disks (CECON São Paulo, Brazil). Resistant samples or with intermediate sensibility were confirmed by micro-dilution method according to NCCLS (1997) modified by EUCAST (2002). The isolated species were: Candida tropicalis (30%), C.parapsilosis (27%), C.krusei (4%), Trichosporon cutaneum e T.inkin (3%), Rhodotorula mucilaginosa e R.glutinis (2%), C.guilliermondii (2%), C.glabrata (1%) and C.kefyr (1%). Enzymatic activity was verified in most of the 84 C.albicans samples being 96% of phosfolipase and 95% of proteinase production. Among the non-albicans species of Candida it was observed 97% of phospholipase and 67% of proteinase activity. Less sensitive samples to azoic drugs including resistant or SDD sensibility, which depends on the achieved dose, were found in 4.3% of the 281 samples of yeast. The hugest percentage was observed in C.krusei (90%). We can conclude that different yeast species occur in stools of pediatric population hospitalized, including virulent strains and antifungal resistant phenotypes. The persistent of these phenotypes in the intestinal tract during hospitalization period may represents a risk facto r contributing to endogen infection, or play a role in dissemination of potential pathogens inside a nosocomial environment.

O objetivo deste estudo foi avaliar a possível associação entre os polimorfismos -260C/T do gene CD14, Arg753Gln do gene TLR2, Asp299Gli e Thr39911e do gene TLR4 e -174G/C do gene IL6 com o infarto do miocárdio em adultos jovens. Para isso, foi realizado um estudo caso controle, sendo o grupo de estudo constituído por 102 pacientes que tiveram de infarto do miocárdio (34,5 ± 5 anos) e o grupo controle (35,1±8,7 anos) por 108 indivíduos sem histórico de doenças cardiovasculares. A genotipagem foi realizada pela PCRRFLP. Houve ausência de associação entre a distribuição dos genótipos dos SNPs -260C/T do gene CD14, Arg753Gln do gene TLR2, Asp299Gli e Thr39911e do gene TLR4 e -174G/C do gene IL6 entre os dois grupos estudados (p<0,05). O perfil sérico inflamatório e hematológico relacionou-se com polimorfismo -174G/C IL-6 do grupo IAM. O genótipo GG relacionou com elevação nas concentrações de PAI-1 (p<0,0001), o genótipo GC com maiores quantidades de hemácias (p=0,02) e o genótipo CC com concentrações elevadas de fibrinogênio (p<0,01) e quantidade aumentada de leucócitos (p<0,05). O genótipo CC do polimorfismo -260C/T CD14 também mostrou relação com a elevação nas concentrações de PAI-1 (0,0001) e o genótipo CT com o de fibrinogênio (p<0,01). O genótipo GG do polimorfismo -174G/C IL-6 relacionou com elevação nas concentrações de glicose (p<0,05) e o genótipo CC com diminuição nas concentrações de apoA (p<0,01), HDL (p<0,001) e elevação nas de LDL (p<0,05), colesterol total (p<0,05). O genótipo CT do polimorfismo -260C/T CD14 também relacionou com concentrações elevadas de colesterol total (p<0,0001). Em conclusão, os polimorfismos não estão relacionados com o infarto do miocárdio em jovens, porém os SNPs -260CT CD14 e -174 IL-6 parecem estar relacionados com o perfil sérico inflamatório, hematológico e bioquímico de pacientes enfartados. / The objective of this study was to assess the possible association between the polymorphism - 260C/T of the gene CD14, Arg7S3Gln TLR2, Asp299Gli and Thr399lle TLR4 and - 174G/C of the gene IL6 with myocardial infarction in young adults. For that a case control study was conducted and the case group was formed by 102 patients who had myocardial infarction, and the control group by 108 individuals without history of cardiovascular disease. The genotyping was performed by PCR-RFLP. There was no association between the distribution of genotypes of SNPs - 260C/T of the gene CD14, Arg7S3Gln TLR2, Asp299Gli and Thr399lle TLR4 and -174G/C of the gene IL6 between the two groups studied (p<0.05). The serum inflammatory blood profile was related with polymorphism - 174G/C IL-6 in the group IAM. The GG genotype was linked with elevated PAI-1 concentrations (p<0.0001), the genotype GC with larger quantities of red blood cells (p=0.02) and CC genotype with high concentrations of fibrinogênio (p<0.01) and leucocytes increased quantity (p<0.05). The CC genotype of polymorphism of -260C/T CD14 also showed associated with the elevation in PAI-1 concentrations (p<0.0001) and the CT genotype with elevated fibrinogênio concentrations (p<0.01). The GG genotype of the -174G/C IL-6 polymorphism was related with elevated glucose concentrations (p<0.05) and CC genotype with decrease in the apoA (p <0.01) and HDL (p<0001) concentrations and elevation of the LDL (p <0.05), total cholesterol (p <0.05) concentrations. The CT genotype of -260C / T CD14 polymorphism also was Iinked with high total cholesterol concentrations (p <0.0001). In conclusion, the polymorphism is not associated with myocardial infarction in young patients, but the -260CT CD14 and -174 IL-6 SNPs appear to be related to the serum biochemical, hematological and inflammatory blood profile in patients that had myocardial infarction.

Resultados obtidos anteriormente pelo nosso grupo mostraram que a proteína de fase aguda amilóide sérica A (SAA) é um potente estímulo para a expressão de mRNA e liberação de TNF-&#945;, IL-1-&#946; e IL-8 em leucócitos humanos, além de atuar como priming para a liberação de espécies reativas de oxigênio (EROs) por neutrófilos. Nosso objetivo, nesse trabalho, foi mostrar a presença de SAA em exsudatos e definir sua origem, além de verificar sua atividade pró-inflamatória in vivo. Para tanto, utilizamos soro e exsudatos pleurais de 32 pacientes com pneumonia. Mostramos primeíramente a presença da SAA no material inflamatório através de SDS-PAGE, immunoblotting e HPLC. A quantificação de SAA nas amostras foi realizada por ELISA. Nestas amostras também foram determinadas as concentrações de proteína total, proteína C reativa (PCR), apo A-I, apo A-II, apo B, colesterol total, triglicérides, TNF-&#945;, IL-1-&#946; e IL-8. A análise integrada dos nossos resultados indica que há uma passagem preferencial da HDL para o foco inflamatório, quando comparada as demais lipoproteínas. A SAA presente em exsudatos é originada do soro e deve sofrer intensa degradação ou associação com células. O efeito da SAA no exsudato é pró-inflamatório, sendo que esta proteína poderia ser um dos alvos para as enzimas proteolíticas e EROs presentes em exsudatos. Acreditamos que este trabalho contribua significamente para a compreensão do, ainda incerto, papel da SAA no processo inflamatório e dá nova abrangência para as funções da HDL e sua participação na reposta imune. / Previous results from our lab showed that the acute phase protein serum amyloid A (SAA) is a potent stimulus for the expression of mRNA and secretion of TNF-&#945;, IL-1-&#946; and IL-8 from human leukocytes. Furthermore SAA primes neutrophils for the generation of reactive oxygen species (ROS). Our goal here was to show the presence of SAA in exudates and define its origin, besides the verification of its proinflammatory activity in vivo. To achieve this goal we used serum and pleural exudates from 32 patients with pneumonia. At first, we showed the presence of SAA in the exudate through SDS-PAGE, immunoblotting and HPLC. SAA was quantified by ELISA. Besides SAA, we also determined the concentrations of total protein, C reactive protein, apo A-I, apo A-II, apo B, cholesterol, triglyceride, TNF-&#945;, IL-1-&#946; e IL-8. The integrate analysis of our results indicates that there is a preferential leakage of HDL to the inflammatory focus when compared to other lipoproteins. SAA present in exudates is originated from serum and may be intensively degraded or associated to cells. The effect of SAA in the exudate is proinflammatory and this protein may be a target for proteolytic enzymes and for ROS present in exudates. We believed that this work adds new insights to the, yet undefined, role of SAA in the inflammatory process and gives a broader compreension to the functions of HDL and its participation in the on the immune response.

Objetivou-se, com o presente estudo, verificar a ocorrência de Cryptosporidium spp entre crianças do município de Taubaté-SP e realizar a genotipagem de isolados clínicos do parasito. Foram selecionadas 13 creches municipais, que atendiam crianças de 4 a 72 meses de idade, realizando-se implantação de um programa para busca ativa de casos de diarréia, com acompanhamento da população durante o ano de 2002. Para se conhecer o perfil coproparasitológico, realizou-se estudo transversal em quatro das 13 creches selecionadas. Foram examinadas 483 amostras fecais processadas pelo método de concentração em formalina-acetato de etila e, para a visualização de oocistos, esfregaços fecais foram corados pelo método de Kinyoun. No estudo prospectivo, Cryptosporidium spp foi encontrado em 11,1 % (3/27) das amostras, não se evidenciando outras espécies parasitárias. No estudo transversal, foram detectados oocistos em 0,2% (1/456) das amostras e a freqüência para outras espécies parasitárias foi de 30,5% (139/456). No estudo de genotipagem, foram analisadas 14 amostras de humanos, uma de bovino e uma de cão. Dentre os isolados de humanos, quatro eram de crianças de Taubaté-SP, cinco de crianças de uma favela de São Paulo-SP e cinco de pacientes HIV positivos, de Sorocaba-SP. O DNA extraído a partir das amostras fecais foi submetido a Nested-PCR, amplificando-se um segmento de 553pb de um gene que codifica proteína de parede de Cryptosporidium (COWP). Os produtos amplificados foram submetidos a processo de digestão enzimática (RPLP-PCR), e os perfis obtidos por eletroforese evidenciaram três espécies: Cryptosporidium hominis em oito amostras, Cryptosporidium parvum em quatro e Cryptosporidium meleagridis em duas. Dos isolados de Taubaté, dois foram correspondentes a C. hominis e dois a C. parvum. As amostras de bovino e de cão foram positivas para C. parvum. O genótipo dos isolados de Taubaté, humanos e de animais, foram confirmados por análise da sequência do fragmento de 553pb do gene COWP, comparando-se com as sequências disponíveis no GenBank. / The aims of this study were to investigate the occurrence of infection by Cryptosporidium spp in children living in Taubaté, São Paulo, Brazil, and to realize the molecular characterization of the parasite isolates. Thirteen day-care centers were selected and 4-72 months old children were involved in prospective study to detect diarrhea, during the 2002 year. In four of these day-care centers, a transversal study was performed in the beginning of the study to know the prevalence of intestinal parasites of children\'s community. A total of 483 stool samples were examined by the modified formalin-etil acetate concentration method, and the acid-fast Kinyoun stain was used to visualize oocysts. In the prospective study Cryptosporidium spp were detect in 11.1 % (3/27) of stool samples and no other parasites were found. In the transversal study oocysts were detected in 0.2% (1/456) of the samples and the frequency of infection by other parasites was 30.5% (139/456). In the genotyping study, 14 stool samples from humans and one sample from bovine and another from dog were analyzed. Among the human isolates, four were from children of Taubaté, five were from children living in a slum of São Paulo city and the other five from HIV-positive patients of Sorocaba, São Paulo. The animal samples were collected in Taubaté region. A DNA fragment of 553 pb of the Cryptosporidium oocyst wall protein (COWP) gene was amplified from stool samples by Nested-PCR, and Restriction Fragment Length Polymorphism analysis identified three species: Cryptosporidium hominis in eight samples, Cryptosporidium parvum in four samples and Cryptosporidium meleagridis in two samples. Among samples from Taubaté, two were positive for C. hominis and two for C. parvum. The bovine and dog samples were positive for C. parvum. The findings trom Taubaté were confirmed by sequence analysis of the 553bp amplicons and comparison of the COWP gene available in the GenBank.

Objetivou-se, com o presente estudo, verificar a ocorrência de Cryptosporidium spp entre crianças do município de Taubaté-SP e realizar a genotipagem de isolados clínicos do parasito. Foram selecionadas 13 creches municipais, que atendiam crianças de 4 a 72 meses de idade, realizando-se implantação de um programa para busca ativa de casos de diarréia, com acompanhamento da população durante o ano de 2002. Para se conhecer o perfil coproparasitológico, realizou-se estudo transversal em quatro das 13 creches selecionadas. Foram examinadas 483 amostras fecais processadas pelo método de concentração em formalina-acetato de etila e, para a visualização de oocistos, esfregaços fecais foram corados pelo método de Kinyoun. No estudo prospectivo, Cryptosporidium spp foi encontrado em 11,1 % (3/27) das amostras, não se evidenciando outras espécies parasitárias. No estudo transversal, foram detectados oocistos em 0,2% (1/456) das amostras e a freqüência para outras espécies parasitárias foi de 30,5% (139/456). No estudo de genotipagem, foram analisadas 14 amostras de humanos, uma de bovino e uma de cão. Dentre os isolados de humanos, quatro eram de crianças de Taubaté-SP, cinco de crianças de uma favela de São Paulo-SP e cinco de pacientes HIV positivos, de Sorocaba-SP. O DNA extraído a partir das amostras fecais foi submetido a Nested-PCR, amplificando-se um segmento de 553pb de um gene que codifica proteína de parede de Cryptosporidium (COWP). Os produtos amplificados foram submetidos a processo de digestão enzimática (RPLP-PCR), e os perfis obtidos por eletroforese evidenciaram três espécies: Cryptosporidium hominis em oito amostras, Cryptosporidium parvum em quatro e Cryptosporidium meleagridis em duas. Dos isolados de Taubaté, dois foram correspondentes a C. hominis e dois a C. parvum. As amostras de bovino e de cão foram positivas para C. parvum. O genótipo dos isolados de Taubaté, humanos e de animais, foram confirmados por análise da sequência do fragmento de 553pb do gene COWP, comparando-se com as sequências disponíveis no GenBank. / The aims of this study were to investigate the occurrence of infection by Cryptosporidium spp in children living in Taubaté, São Paulo, Brazil, and to realize the molecular characterization of the parasite isolates. Thirteen day-care centers were selected and 4-72 months old children were involved in prospective study to detect diarrhea, during the 2002 year. In four of these day-care centers, a transversal study was performed in the beginning of the study to know the prevalence of intestinal parasites of children\'s community. A total of 483 stool samples were examined by the modified formalin-etil acetate concentration method, and the acid-fast Kinyoun stain was used to visualize oocysts. In the prospective study Cryptosporidium spp were detect in 11.1 % (3/27) of stool samples and no other parasites were found. In the transversal study oocysts were detected in 0.2% (1/456) of the samples and the frequency of infection by other parasites was 30.5% (139/456). In the genotyping study, 14 stool samples from humans and one sample from bovine and another from dog were analyzed. Among the human isolates, four were from children of Taubaté, five were from children living in a slum of São Paulo city and the other five from HIV-positive patients of Sorocaba, São Paulo. The animal samples were collected in Taubaté region. A DNA fragment of 553 pb of the Cryptosporidium oocyst wall protein (COWP) gene was amplified from stool samples by Nested-PCR, and Restriction Fragment Length Polymorphism analysis identified three species: Cryptosporidium hominis in eight samples, Cryptosporidium parvum in four samples and Cryptosporidium meleagridis in two samples. Among samples from Taubaté, two were positive for C. hominis and two for C. parvum. The bovine and dog samples were positive for C. parvum. The findings trom Taubaté were confirmed by sequence analysis of the 553bp amplicons and comparison of the COWP gene available in the GenBank.

Resultados obtidos anteriormente pelo nosso grupo mostraram que a proteína de fase aguda amilóide sérica A (SAA) é um potente estímulo para a expressão de mRNA e liberação de TNF-&#945;, IL-1-&#946; e IL-8 em leucócitos humanos, além de atuar como priming para a liberação de espécies reativas de oxigênio (EROs) por neutrófilos. Nosso objetivo, nesse trabalho, foi mostrar a presença de SAA em exsudatos e definir sua origem, além de verificar sua atividade pró-inflamatória in vivo. Para tanto, utilizamos soro e exsudatos pleurais de 32 pacientes com pneumonia. Mostramos primeíramente a presença da SAA no material inflamatório através de SDS-PAGE, immunoblotting e HPLC. A quantificação de SAA nas amostras foi realizada por ELISA. Nestas amostras também foram determinadas as concentrações de proteína total, proteína C reativa (PCR), apo A-I, apo A-II, apo B, colesterol total, triglicérides, TNF-&#945;, IL-1-&#946; e IL-8. A análise integrada dos nossos resultados indica que há uma passagem preferencial da HDL para o foco inflamatório, quando comparada as demais lipoproteínas. A SAA presente em exsudatos é originada do soro e deve sofrer intensa degradação ou associação com células. O efeito da SAA no exsudato é pró-inflamatório, sendo que esta proteína poderia ser um dos alvos para as enzimas proteolíticas e EROs presentes em exsudatos. Acreditamos que este trabalho contribua significamente para a compreensão do, ainda incerto, papel da SAA no processo inflamatório e dá nova abrangência para as funções da HDL e sua participação na reposta imune. / Previous results from our lab showed that the acute phase protein serum amyloid A (SAA) is a potent stimulus for the expression of mRNA and secretion of TNF-&#945;, IL-1-&#946; and IL-8 from human leukocytes. Furthermore SAA primes neutrophils for the generation of reactive oxygen species (ROS). Our goal here was to show the presence of SAA in exudates and define its origin, besides the verification of its proinflammatory activity in vivo. To achieve this goal we used serum and pleural exudates from 32 patients with pneumonia. At first, we showed the presence of SAA in the exudate through SDS-PAGE, immunoblotting and HPLC. SAA was quantified by ELISA. Besides SAA, we also determined the concentrations of total protein, C reactive protein, apo A-I, apo A-II, apo B, cholesterol, triglyceride, TNF-&#945;, IL-1-&#946; e IL-8. The integrate analysis of our results indicates that there is a preferential leakage of HDL to the inflammatory focus when compared to other lipoproteins. SAA present in exudates is originated from serum and may be intensively degraded or associated to cells. The effect of SAA in the exudate is proinflammatory and this protein may be a target for proteolytic enzymes and for ROS present in exudates. We believed that this work adds new insights to the, yet undefined, role of SAA in the inflammatory process and gives a broader compreension to the functions of HDL and its participation in the on the immune response.

O objetivo deste estudo foi avaliar a possível associação entre os polimorfismos -260C/T do gene CD14, Arg753Gln do gene TLR2, Asp299Gli e Thr39911e do gene TLR4 e -174G/C do gene IL6 com o infarto do miocárdio em adultos jovens. Para isso, foi realizado um estudo caso controle, sendo o grupo de estudo constituído por 102 pacientes que tiveram de infarto do miocárdio (34,5 ± 5 anos) e o grupo controle (35,1±8,7 anos) por 108 indivíduos sem histórico de doenças cardiovasculares. A genotipagem foi realizada pela PCRRFLP. Houve ausência de associação entre a distribuição dos genótipos dos SNPs -260C/T do gene CD14, Arg753Gln do gene TLR2, Asp299Gli e Thr39911e do gene TLR4 e -174G/C do gene IL6 entre os dois grupos estudados (p<0,05). O perfil sérico inflamatório e hematológico relacionou-se com polimorfismo -174G/C IL-6 do grupo IAM. O genótipo GG relacionou com elevação nas concentrações de PAI-1 (p<0,0001), o genótipo GC com maiores quantidades de hemácias (p=0,02) e o genótipo CC com concentrações elevadas de fibrinogênio (p<0,01) e quantidade aumentada de leucócitos (p<0,05). O genótipo CC do polimorfismo -260C/T CD14 também mostrou relação com a elevação nas concentrações de PAI-1 (0,0001) e o genótipo CT com o de fibrinogênio (p<0,01). O genótipo GG do polimorfismo -174G/C IL-6 relacionou com elevação nas concentrações de glicose (p<0,05) e o genótipo CC com diminuição nas concentrações de apoA (p<0,01), HDL (p<0,001) e elevação nas de LDL (p<0,05), colesterol total (p<0,05). O genótipo CT do polimorfismo -260C/T CD14 também relacionou com concentrações elevadas de colesterol total (p<0,0001). Em conclusão, os polimorfismos não estão relacionados com o infarto do miocárdio em jovens, porém os SNPs -260CT CD14 e -174 IL-6 parecem estar relacionados com o perfil sérico inflamatório, hematológico e bioquímico de pacientes enfartados. / The objective of this study was to assess the possible association between the polymorphism - 260C/T of the gene CD14, Arg7S3Gln TLR2, Asp299Gli and Thr399lle TLR4 and - 174G/C of the gene IL6 with myocardial infarction in young adults. For that a case control study was conducted and the case group was formed by 102 patients who had myocardial infarction, and the control group by 108 individuals without history of cardiovascular disease. The genotyping was performed by PCR-RFLP. There was no association between the distribution of genotypes of SNPs - 260C/T of the gene CD14, Arg7S3Gln TLR2, Asp299Gli and Thr399lle TLR4 and -174G/C of the gene IL6 between the two groups studied (p<0.05). The serum inflammatory blood profile was related with polymorphism - 174G/C IL-6 in the group IAM. The GG genotype was linked with elevated PAI-1 concentrations (p<0.0001), the genotype GC with larger quantities of red blood cells (p=0.02) and CC genotype with high concentrations of fibrinogênio (p<0.01) and leucocytes increased quantity (p<0.05). The CC genotype of polymorphism of -260C/T CD14 also showed associated with the elevation in PAI-1 concentrations (p<0.0001) and the CT genotype with elevated fibrinogênio concentrations (p<0.01). The GG genotype of the -174G/C IL-6 polymorphism was related with elevated glucose concentrations (p<0.05) and CC genotype with decrease in the apoA (p <0.01) and HDL (p<0001) concentrations and elevation of the LDL (p <0.05), total cholesterol (p <0.05) concentrations. The CT genotype of -260C / T CD14 polymorphism also was Iinked with high total cholesterol concentrations (p <0.0001). In conclusion, the polymorphism is not associated with myocardial infarction in young patients, but the -260CT CD14 and -174 IL-6 SNPs appear to be related to the serum biochemical, hematological and inflammatory blood profile in patients that had myocardial infarction.

A detecção de antígenos em amostras de líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes com neurocisticercose (NC) foi realizada empregando-se o teste ELISA com soros policlonais de coelhos imunizados com os antígenos total de Taenia solium (T-Tso), líquido vesicular de Taenia crassiceps (LV-Tcra) e peptídeos &#60;30kDa de LV-Tcra. Os soros policlonais foram fracionados para a obtenção da fração IgG - IgG anti-Tso, IgG antiTcra e IgG anti-Tcra&#60;30kDa. Também foi empregado o anticorpo monoclonal específico para o antígeno de excreção e secreção de Taenia crassiceps (ES-Tcra). A seleção dos clones foi realizada por ELISA empregando-se os antígenos T-Tso e LV-Tcra. Foram analisados diferentes grupos de amostras divididos em: grupo de pacientes com NC (grupo NC), incluindo pacientes em diferentes fases evolutivas da doença, grupo de pacientes \"suspeito\" de NC (grupo \"suspeito\" NC), grupo controle (grupo C) e grupo de outros patologias (grupo OP). No teste ELISA empregando-se as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e IgG anti-Tcra&#60;30kDa, a sensibilidade obtida foi de 70%, 82,5% e 95,8% e a especificidade de 82,5%, 98% e 100%, respectivamente nas amostras do grupo NC e grupo C. Nas amostras do grupo diferentes fases evolutivas da doença, não houve diferença significativa de reatividade entre as amostras com as frações empregadas. Para as 21 amostras do grupo NC - fase ativa da doença, com a fração IgG anti-Tcra e o anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra, respectivamente, 13 e 16 amostras foram positivas para a pesquisa de antígenos. As amostras de LCR do grupo C não apresentaram reatividade com os anticorpos empregados nos ensaios. Também foram ensaiadas 68 amostras de LCR de pacientes com \"suspeita\" de NC. De acordo com as características citoprotéicas além da reatividade para a pesquisa de anticorpos anti-T solium, as amostras de LCR apresentaram, neste grupo, padrão de reatividade para a pesquisa de antígenos que variou também de acordo com a presença de anticorpos, além das alterações de proteína e/ou células, que as amostras apresentavam ou não. Frações de 14 e 18kDa foram identificadas pelo teste imunoblot somente nas amostras de LCR de pacientes com NC utilizando as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra. O anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra mostrou-se eficiente para a pesquisa de antígenos no teste de competição por ELISA nas amostras de LCR de pacientes com NC e o antígeno ES-Tcra. / Antigen detection in cerebrospinal fluid (CSF) samples of patients with neurocysticercosis (NC) was performed through ELISA test using rabbits polyclonal sera immune with total antigens of Taenia solium (T-Tso) cysticercus, vesicular liquid of Taenia crassiceps (VL-Tcra) and vesicular liquid peptides (VLP-Tcra&#60;30kDa) cysticercus. The polyclonal sera were separated obtaining IgG-lgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra&#60;30kDa fractions. A specific monoclonal antibody was also applied for reaching the excretion and secretion antigen of the T. crassiceps (ES-Tcra) larvae culture. Clones selection was performed through Elisa test applying the T-Tso and VL-Tcra antigens. When IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra&#60;30kDa fractions were applied in the ELISA test, the accuracy obtained was 70%, 82,5% and 95,8% and the specificity of 82,5%, 98% and 100%, respectively, in samples of both NC and C groups. In the samples of the group in different stages of the disease there was no significant difference on reactivity between the samples when the fractions were applied. For the 21 samples of the NC group - active stage of the disease with IgG anti-Tcra fraction and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody respectively, 13 and 16 samples were positive for antigen analyses. The CSF samples of the C group did not present reactivity with the antibodies applied in the tests. Tests for 68 CSF samples of \"suspected\" NC group, were also conducted. According to the cytoproteic characteristics besides the reactivity for the anti-T. solium antibody study, the CSF samples of this group showed standard reactivity for antigen detection ranging also in accordance with the presence of antibodies and of the protein and/or cell alterations that the samples would or not present. Fractions of 14 and 18kDa were identified by immunoblot test only in the CSF samples of patients with NC using the IgG anti-Tso IgG anti-Tcra fractions and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody. The anti-ES-Tcra monoclonal antibody has shown to be efficient for analyzing antigens by a comparing method of the ELISA test in CSF samples of patients with NC and the ES-Tcra antigen.