Resumo: A hepcidina é uma proteína que faz parte do sistema imune inato e desempenha um papel fundamental na regulação da homeostase do ferro. Este peptídeo foi previamente caracterizado em várias espécies, entretanto, até agora, não em ovinos. O objetivo deste estudo foi de determinar a sequência do RNAm codificante da hepcidina, bem como caracterizar e realizar a análise da expressão gênica deste peptídeo em diferentes tecidos de ovinos saudáveis. A região codificante da hepcidina consiste em 249 pares de base, as quais codificam um peptídeo contendo 82 aminoácidos. Este precursor, da forma bioativa da hepcidina, apresenta maior homologia com as sequências de Bos taurus e Bubalus bubalis. A hepcidina foi expressa predominantemente no fígado dos ovinos, contudo foram observados altos níveis de expressão no abomaso e baixos níveis nos outros tecidos. Estes resultados ampliam o conhecimento comparativo deste peptídeo, mostrando a relação da hepcidina ovina com a de outras espécies de mamíferos e será útil para estudos futuros sobre o metabolismo de ferro e do processo inflamatório nos ovinos. / Abstract: Hepcidin is part of the innate immune system, and plays a central role in the regulation of iron homeostasis. This peptide has been previously characterized in several species but not in sheep until now. The aim of this study was to sequence, characterize and perform hepcidin gene expression analysis in different tissues of healthy sheep. The resulting ORF consisted of 249 bp predicted to encode an 82 amino acids peptide. The deduced precursor was mostly homologous to Bos taurus and Bubalus bubalis. Hepcidin was predominantly expressed in liver, although high expression was present in abomasum and lower level expression occurred in other tissues. These findings extend our comparative knowledge of this peptide, showing the relationship between sheep hepcidin and other mammalian hepcidins and might be helpful for additional studies on iron metabolism and inflammatory process in sheep. / Orientador: Alexandre Secorun Borges / Coorientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: João Pessoa Araújo Júnior / Banca: Juliana Regina Peiró / Mestre

Orientador: Gilson Hélio Toniollo / Coorientador: Silvia Regina Rogatto / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Luís Gustavo Gosuen Gonçalves Dias / Banca: Carolina Franchi João / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Resumo: O processo degenerativo progressivo em consequência a resposta exagerada do endométrio à exposição crônica de progesterona e estrógeno, endógeno ou exógeno, resulta em hiperplasia endometrial cística (HEC) na maioria das cadelas idosas, e consequente degeneração tecidual, distensão glandular e acúmulo de secreções, que pode resultar em contaminação bacteriana, inflamação supurativa e degenerativa do endométrio, com acúmulo de exsudato nas glândulas endometriais e lúmen uterino, bacteremia, afecção hepatorenal e toxemia. A análise oligoarrays tem sido aplicada com sucesso no estudo da expressão gênica do endométrio; o único tecido com capacidade dinâmica de sofrer remodelação em resposta a variações cíclicas de hormônios esteróides e fatores locais autócrinos e parácrinos. Objetivou-se com este estudo identificar os genes diferencialmente expressos responsáveis pela proliferação e hiperplasia no endométrio de fêmeas caninas acometidas por HEC, mucometra e piometra, comparado com o tecido endometrial normal de fêmeas caninas na fase de diestro. Foi utilizado teste estatístico SAM (Significance Analysis Of Microarray), do programa TMeV v.4.5, por meio de teste estatístico paramétrico (teste t), p<0,05 e ajuste pelo teste de Bonferroni, considerando apenas os conjuntos de genes que com False Discovery Rate iguais ou inferiores a zero, e fold-change > ou < que 3,0. O grupo HEC apresentou 33 genes com expressão aumentada (upregulated) e 45 genes com expressão diminuída (downregulated) em relação ao grupo diestro, com 15 moléculas envolvidas no desenvolvimento, crescimento e proliferação celular e morfologia tumoral. O grupo mucometra apresentou 189 genes upregulated e 150 genes downregulated em relação ao grupo diestro, sendo 26 moléculas associadas ao desevolvimento embrionário e 21 moléculas envolvidas com movimentação celular, desenvolvimento e funcionamento do sistema ... / Abstract: Hyperplasic and cystic alteration of the canine endometrium compromise reproduction and fertility and may lead to a degenerative inflammation and infection of endometrium. The progressive process usually proposed as the initiating lesion, is mediated by progesterone and potentially aggravated by estrogens. A separate process caused by local uterine irritation to trophoblastic reaction and bacterial proliferation has been recently proposed as an alternate mechanism leading to pyometra. In order to identify molecular similarity and potential targets for therapeutic intervention and biomarkers for endometrium proliferative conditions in humans and dogs, gene expression profiles were performed in fifteen endometrial biopsy samples from female dogs during luteal phase (diestrus), fifteen affected by endometrial cystic hyperplasia, fifteen by mucometra and fifteen by pyometra, and processed on Affymetrix Canine 1.0 ST array. The transcriptome analysis revealed expression of 115, 23 and 284 significantly genes (p<0,05) altered in the hyperplasic compared with normal endometrium, hyperplasic and aseptic secretory compared with hyperplasic endometrium, and infected compared to hyperplasic and aseptic secretory endometrium, respectively. Gene ontology enrichment analysis revealed genes associated with the cell development, growth, proliferation, function and maintenance, and cell-to-cell signaling and interaction were altered in the hyperplasic and proliferative lesion, and also in aseptic secretory endometrium, such as elevated expression of CYR61, EGR1, FOS, GALNT14, IGKC, SLC47A2, IGFBP3, and low expression of ESR2, SOCS3 and MCOLN3. The proliferative to secretory transition revealed genes associated with immune cell trafficking, and cell-mediated immune response, such as FOSB, MAL, CCL4 and SLPI. The infected endometrium due to bacterial infection revealed elevated expression of chemokines (CCL2, CCL3, CXCS), cytokines (IL8, IL6), proteases ... / Doutor

Orientador:Edwil Aparecida Gattás / Coorientador: . Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Jose Roberto Ernandes / Banca: Andre Ricardo Alcarde / Banca: Rosimeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro / Banca: Ana Marisa Fusco Almeida / Resumo: O processo de fermentação para produção de álcool combustível inclui a reutilização da biomassa de levedura, situação em que as células de levedura são expostas a condições de estresse, como temperaturas elevadas, aumento da concentração de etanol e baixos valores de pH. Este processo pode ocasionar uma redução da viabilidade celular, diminuindo de forma significativa o rendimento da fermentação. Algumas linhagens de Saccharomyces cerevisiae, no entanto, apresentam termotolerância ou resistência a maiores concentrações de etanol, sendo capazes de se adaptar ao meio em que estão. Neste trabalho, uma linhagem de levedura industrial foi isolada da dorna de fermentação ao final de safra por apresentar capacidade de permanência no processo fermentativo e ser boa fermentadora. Com o intuito de avaliar quais genes estão envolvidos com essas características, a levedura isolada foi esporulada e dissecada para geração de novos segregantes, que foram analisados e selecionados quanto a termo e álcool resistência e capacidade fermentativa. Os resultados mostraram que dois dos segregantes avaliados apresentaram-se promissores com relação a capacidade fermentativa e resistência a altas temperaturas e concentrações de etanol quando comparados às linhagens industriais PE-2, CAT-1 e SA-1, largamente utilizadas nas usinas produtoras de etanol. Em seguida, foi realizado o ensaio de PCR em Tempo Real, para avaliar a relação dos genes APJ1, FPS1, MKT1, SWS2 e HSP12 com a tolerância ao etanol. Além disso, foi avaliado também a possibilidade do gene HSP12 ser um marcador molecular de estresse nas leveduras de linhagens industriais. Para isso, foram utilizadas duas linhagens de levedura: uma resistente ao etanol (MA-12) e não resistente (MA-139), excluída no início dos experimentos. Todos os genes avaliadosapresentaram expressão significativa nas situações de estresse para a linhagem resistente MA-12, o que não aconteceu... / Abstract: Fuel-ethanol fermentation process includes a reutilization of the yeast biomass, in which yeast cells are exposed tostress conditions as high temperature, increasing alcohol concentration and low pH values. This enviroment may cause a significant delay in fermentation and drop in cell viability. Some Saccharomyces cerevisiaestrains, however, have thermotolerance or resistance to higher ethanol concentrations, while being able to adapt to the environment in which they are. In this work, the industrial resistant yeast strain was isolated from fermented sugar cane at the end of the harvest to be good leavening. Aiming to study genetic features associated with cell resistance to sustained stress in an industrial yeast strain, they wereinduced to sporulation and the ascospores were dissected in order to generate homozygous derivatives andwere ramdomly selected for further phenotype analysis. The results have shown that two of segregating presented to be promising with the fermentative capacity and resistance to high temperature and ethanol concentration as compared to industrial strains PE-2, CAT-1 and SA-1. Following that,the real time PCR assay was performed to assess the relationship of APJ1, FPS1, MKT1, SWS2 and HSP12 genes with ethanol tolerance. Furthermore, was also analyzed the differential expression of the HSP12 gene as a molecular marker for stress-resistance in industrial yeast.The PCR was performed with two yeast strains: a resistant yeast (MA-12) and non-resistant (MA-139, ruled in the early experiments) and shows wich all genes evaluated revealed a significant expression in stress situations for the resistantstrain MA-12, which did not happen in the sensitive yeast (except for APJ1 gene), which shows that the selected genes are directly related to stress resistance. The results also suggest that HSP12 gene can be used as a molecular marker of stress in industrial yeast strains, since they have shown significant expression in the ... / Doutor

Orientador: Edmundo Medici Filho / Resumo: Existe uma proporção constante identificada no corpo humano e na natureza, sendo conhecida e denominada como Proporção Áurea, gerada a partir da proporcionalidade que se expressa pelo número 1,618033, geralmente utilizado 1,618 (GIL, 2001). Conhecendo-se a importância estética e funcional de uma face considerada como sendo bela, o nosso propósito neste estudo foi colaborar com o Cirurgião-Dentista na busca do belo em indivíduos de dois grupos faciais; dolicofaciais e mesofaciais. Com isso, verificamos, por meio de radiografias cefalométricas laterais de indivíduos na faixa etária entre 17 e 25 anos de idade e com oclusão Classe I de Angle, se algumas medidas apresentavam-se em Proporção Áurea no esqueleto crânio-facial de 24 indivíduos dolicofaciais e 24 mesofaciais. A análise dos resultados obtidos nos permitiu concluir que, das oito razões estudadas, a Proporção Áurea esteve presente em quatro razões no grupo de indivíduos mesofaciais e em apenas uma razão no grupo de indivíduos dolicofaciais. / Abstract: There is a constant proportion identified in the human body and nature, known and denominated as Divine Proportion, generated from the proportionality that is expressed by the number 1.618033, generally used as 1.618 (GIL, 2001). Knowing the esthetic and functional importance of a face considered beautiful, the proposal of this study was to collaborate with the Dentist in search of beauty in individuals of two facial groups; dolichofacials and mesofacials. With this we verified, by means of lateral cephalometric radiographs of individuals between 17 and 25 years old and with Class 1 Angle occlusion, if some measurements in Divine Proportion were present in the facial skull of 24 dolichofacial individuals and 24 mesofacial individuals. The analysis of the obtained results allowed us to conclude that of the eight ratios studied, the Divine Proportion was present in four ratios in the group of mesofacial individuals and in just one ratio in the group of dolichofacial individuals. / Mestre

Orientador: Sergio Ricardo Batlouni / Coorientador: Renata Guimarães Moreira / Banca: Laura Satiko Okada Nakaghi / Banca: Maria Inês Borella / Banca: Wagner Cotroni Valenti / Resumo: Este estudo é parte de uma proposta mais abrangente intitulada "Cultivo do mapará e do camarão-da-amazônia em sistemas multiespaciais e multitróficos". Esta proposta é uma parceria entre o Centro de Aquicultura da Universidade Estadual Paulista (CAUNESP), a Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo e Empresa Vale do Rio Doce (Parceria para Inovação Tecnológica - PITE). Na proposta inicial, mais abrangente e com diversos outros pesquisadores envolvidos, estavam previstas a execução de três subprojetos que tinham como objetivo final desenvolver conhecimento e tecnologia para desenvolver sistemas sustentáveis para a produção aquícola de mapará e do camarão-da-amazônia com uma abordagem ecossistêmica. Assim, a este estudo coube realizar, inicialmente, as primeiras tentativas de domesticar e transportar o mapará para viveiros de reprodutores localizados no CAUNESP. Por se tratar de uma proposta inédita de bioprospecção não era possível prever a resposta do mapará frente às tentativas de domesticá-lo, pois mesmo sendo intensamente explorado, não existia sequer uma única informação sobre seu cultivo. A espécie se mostrou extremamente sensível ao manejo, o que nos fez tentar substituir o transporte de reprodutores por tentativas de indução à desova de matrizes selvagens nos locais de desova (sendo este um dos temas desta tese desde o início). Assim, neste estudo, focamos em dois principais objetivos: o ciclo reprodutivo da espécie (manuscrito I) e a padronização de um protocolo para sua desova induzida (manuscrito II). Esta tese é então composta por dois manuscritos, sendo que o primeiro gerou informações para a execução do segundo. A escassez de informações e o problema com barragens na região do estudo nos levou a permear assuntos, necessários, mas não antes previstos, como a interrupção de rotas migratórias, o impacto da barragem sobre a população do mapará e sobre... / Abstract: This study is part of a broader proposal entitled "Culture of mapará and Amazon shrimp in multiespaciais and multitrophic systems." This proposal is a partnership between the Aquaculture Center of the São Paulo State University (CAUNESP), the Foundation for Research of the State of São Paulo and Company of Vale do Rio Doce (Partnership for Technological Innovation - PITE). In the original proposal, broader and with several other researchers involved it was planned to execute three subprojects, that had the main objective to develop knowledge and technology to develop sustainable systems for aquaculture production of mapará and amazon shrimp with an ecosystem approach. Thus, initially this study had to make, the first attempts to domesticate and transport mapará breeders to a pond located in CAUNESP. Since this is an unprecedented proposal for bioprospecting, it was not possible to predict the response of mapará on the attempts of domestication, because even being intensively explored, there was not even a single information about its cultivation. The specie proved to be extremely sensitive to handling, which made us try to replace the breeders transport by attempts to induce spawning of wild breeders in their natural spawning location (being this, one of the objetive of this thesis from the beginning). In this study we focus on two main objectives: the reproductive cycle of the species (manuscript I) and the standardization of a protocol for induced spawning (manuscript II). This study is than composed by two manuscripts, which the first generated information for the second. The lack of information and the problem with dams in the study region led us to approach others subjects, necessary but not predicted, such as the interruption of migratory routes, the dam impact on the population of mapará and about their reproductive biology. As a result, we found that the species presents reproductive peculiarities, because despite having ... / Doutor

Orientador: Henrique Ferreira / Banca: Patricia Pasquali Parise Maltempi / Banca: Mauricio Bacci Junior / Banca: José Belasque Júnior / Banca: Helvécio Della Coletta Filho / Resumo: A citricultura é uma das atividades mais importantes do setor agrícolabrasileiro. A incidência de doenças como o cancro cítrico afetasobremaneira a produtividade dos pomares. Seu agente etiológico, a bactériaXanthomonas citri subsp. citri (Xac) é capaz de infectar todas as espéciescultivadas, não havendo cura para plantas afetadas. O controle eficaz para o cancro cítrico constitui a eliminação de plantas infectadas em programas rigorosos para conter a propagação da bactéria. No entanto, o relaxamento recente nas políticas de combate ao cancro cítrico em áreas como o estado de São Paulo - Brasil está contribuindo para uma maior incidência da doença. Neste aspecto, o conhecimento da biologia deste patógeno de plantas é de grande importância para o desenvolvimento de novas estratégias de controle da doença. No presente trabalho,estudamosa função da ORF XAC1226, que apresenta homologia com o gene minCde E. coli. Nesta ultima, minCcodifica para uma proteína inibidora da polimerização de FtsZ e com função de seleção de sítio de montagem do anel de divisão celular. MinCxac demonstrou ter uma função semelhanteque seus homólogos em Escherichia coli e Bacillus subtilis.Para fazer a caracterização funcional de minC de Xac fizemos sua deleção, que resultou nos fenótipos de filamentação e minicélula, que são encontrados em E. colie B. subtilise notamos que o mutante Xac minC apresenta ramificações que podem estar relacionadas a um posicionamento errôneo do septo. Posteriormente investigamos o padrão de localização sub-celular de GFP-MinC em Xac e percebemos um padrão de acúmulo da proteína num dos polos e um tempo depois esse acúmulo oscilava para o polo oposto demonstrado o mesmo padrão de oscilação como é observado em E. coli. Em seguida verificamos se Xac minC perdia a capacidade de infectar os hospedeiros e inoculamos em folhas de laranja pera. (Resumo completo clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Citriculture is one of the most important activities of Brazilian agriculturalsector. The incidence of diseases such as citrus canker affectsdrastically the orchards productivity. Its etiologic agent, the bacteriumXanthomonas citri subsp. citri (Xac) is able to infect all citric cultivars, withoutany treatment to the diseased plants.Effective control for citrus canker is the elimination of infected plants in rigorous programs to contain the spread of the bacteria. However, the recent relaxation in the policies against the fight of citrus canker in areas such as the state of São Paulo - Brazil is contributing to the further spread of the disease. The knowledge of the biology of this pathogen and also the mechanisms involved in plant-pathogen interactions are great worth in supporting the development of new strategies to deal with this disease.In this aspect, the knowledge of the biology of the plant pathogen is of great importance for the development of new strategies of control of the disease. In this paper, we study the function of ORF XAC1226, which has homology to the minC gene of E. coli. minC encodes an inhibitor protein of FtsZ polymerization and the cell division ring mounting site selection function. MinCxac shown to have a similar function as their counterparts in Escherichia coli and Bacillus subtilis. To make the functional characterization of Xac's MinC we made a deletion which resulted in phenotypes of minicell and filamentation, which are found in E. coli and B. subtilis and we noticed that the mutant Xac minC has branches that may be related to a wrong position of the septum. Subsequently we investigated the pattern of sub-cellular GFP-MinC in Xac and noticed a protein accumulation pattern in one of the poles and a while after this protein oscillated to the opposite pole showing the same pattern of oscillation as observed in E. coli. Then we check if Xac minC lost (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Paula Rahal / Coorientador: Marilia de Freitas Calmon Saiki / Banca: Wilson Araújo da Silva Junior / Banca: Patricia Simone Leite Vilamaior / Banca: Flávia Cristina Rodrigues Lisoni / Resumo: O carcinoma renal de células claras (ccRCC) é o mais comum dos subtipos histológicos de carcinoma renal. Este carcinoma é histologicamente caracterizado pela presença de células com citoplasma claro e abundante. O processo inicial de metástase pode ser atribuída à transição epitélio mesênquima (EMT). Neste estudo, buscou-se identificar genes diferencialmente expressos em ccRCC, construindo assim um perfil molecular para este tumor. Nós selecionamos genes descritos na literatura que apresentam relação com EMT, diferenciação e proliferação celular. Analisou-se por PCR quantitativo e imuno-histoquímica a expressão dos genes e suas proteínas, respectivamente, e os possíveis mecanismos epigenético que regulam a sua expressão em amostras de ccRCC e linhagem celular. Os genes OCLN e GAS1 foram encontrados com baixa expressão em ccRCC, e nós sugerimos que o miR-122 e miR- 34a podem regular sua expressão, respectivamente, neste tipo de câncer. Além disso, mostramos, por qPCR e imuno-histoquímica, a alta expressão de SLC2A1 foi significantemente alta em ccRCC. O conjunto de genes identificados neste estudo possibilita a compreensão das bases moleculares e de desenvolvimento do ccRCC / Abstract: Clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common histological subtype of kidney cancer. This carcinoma is histologically characterized by the presence of clear and abundant cytoplasm. The initial process of ccRCC metastatic tumor formation can be attributed to epithelial- mesenchymal transition (EMT). In this study, we sought to identify genes differentially expressed in ccRCC and build a molecular profile of this cancer. We selected genes described in the literature to be related to EMT, cellular differentiation and proliferation. We analyzed the gene and protein expression by quantitative PCR and immunohistochemistry, respectively, and examined possible epigenetic mechanisms that regulate their expression in ccRCC samples and cell lines. OCLN and GAS1 genes were under-expressed in ccRCC, and we report that miR-122 and miR- 34a, respectively, may regulate their expression in this cancer. Furthermore, we showed by quantitative PCR (qPCR) and immunohistochemistry that SLC2A1 was significantly over-expressed in ccRCC. The set of genes identified in this study furthers our understanding of the molecular basis and development of ccRCC / Doutor

Orientador: Maria Inês Tiraboschi Ferro / Banca: Flávia Maria de Souza Carvalho / Banca: Samira Domingues Carlin Cavallari / Resumo: Atualmente, a cana-de-açúcar (Saccharum spp.) tem sido ameaçada pela infestação por cigarrinha-das-raízes (Mahanarva fimbriolata) e a preocupação com efeitos danosos por ela ocasionados são crescentes, especialmente em função do aumento de condições ambientais favoráveis ao desenvolvimento dessa praga, devido ao sistema de colheita em expansão, em que não há a queima da palhada. A fim de identificar Fragmentos Diferencialmente Expressos (FDE) em raízes de cana-de-açúcar infestadas por ninfas de cigarrinha, foi realizada a técnica de cDNA-AFLP. Assim, foram cultivadas e posteriormente infestadas, plantas de uma variedade suscetível (SP80-1816) e de uma variedade resistente ("menos infestada") (SP83-5073). As amostras das raízes foram coletadas e congeladas a cada 1, 2, 7 e 14 dias de infestação. A posterior análise através da técnica de cDNA-AFLP, a partir de 3 combinações de oligonucleotídeos, permitiu observar 21 FDE, os quais foram sequenciados e revelaram similaridades com proteínas envolvidas em diferentes atividades, como a transposição de DNA, o transporte de aminoácidos e a transcrição gênica, além de outras proteínas sem similaridade encontrada. Os alinhamentos apresentaram similaridades para os genes expressos e é possível considerar que o caráter de resistência esteja relacionado a uma ação conjunta de diversos genes, além disso, alguns dos FDE obtidos não apresentam similaridades e podem exercer importante papel no mecanismo de resistência. / Abstract: Currently, the sugarcane (Saccharum spp.) has been threatened by the infestation of froghopper (Mahanarva fimbriolata) and the concern about the harmful effects caused by it are growing, especially due to the increase of environmental conditions favorable the development of this pest, due to the expanding harvest system, in which there is no burning of stubble. In order to identify Differentiall Fragments Expression (FDE) in roots of sugarcane infested by froghopper nymphs was performed cDNA-AFLP technique. Thus, were grown and subsequently infested plants of a susceptible variety (SP80-1816) and a resistant variety ("least infested") (SP83-5073). Samples of roots were collected and frozen every 1, 2, 7 and 14 days of infestation. The subsequent analysis by cDNA-AFLP technique from three combinations of primers allowed the observation FDE 21 which were sequenced and revealed similarities to proteins involved in various activities, such as transposition of DNA, amino acid transport and gene transcription, in addition to other proteins without similarity found. The alignments showed similarities to genes expressed and it is possible to consider the character of resistance is related to a joint action of several genes, in addition, some of the FDE obtained do not show similarities and may have an important role in the mechanism of resistance. / Mestre

Orientador: Maria Inês Tiraboschi Ferro / Coorientador: Miguel Ângelo Mutton / Banca: Flávia Maria de Souza Carvalho / Banca: Luciana Rossini Pinto / Banca: Poliana Fernanda Giachetto / Banca: Samira Domingues Carlin / Resumo: A cultura de cana-de-açúcar se destaca mundialmente pela produção de açúcar e etanol. O Brasil comercializa mais da metade do açúcar no mundo. Esta cultura passa por diversos estresses ambientais, sendo a seca o fator ambiental que causa maiores impactos econômicos. O estudo de genes diferencialmente expressos em resposta ao déficit hídrico em cana-de-açúcar foi o principal objetivo deste trabalho. Inicialmente, foram monitorados os níveis dos teores de prolina para verificar o estudo de tolerância ao déficit hídrico entre as cultivares RB867515 (tolerante) e SP86-155 (sensível). Por meio da técnica de cDNA-AFLP foram realizadas análises comparativas entre as duas cultivares analisadas quando submetidas ao déficit hídrico por 1, 3, 5 e 10 dias. Nove combinações de oligonucleotídeos seletivos EcoRI/MseI permitiram visualizar em gel de poliacrilamida 173 fragmentos diferencialmente expressos na cultivar tolerante estressada (FDE-CvTE) quando comparada à cultivar sensível. Destes, 72 FDECvTE foram clonados, seqüenciados e categorizados (UniProtKB). As análises de similaridade revelaram homologia com proteínas envolvidas em atividades de chaperonas, inibidoras de protease, ao ácido abscísico, glutationa peroxidase 4 (ROS), fatores de transcrição (Myb; bHLH), domínios (NBS-LRR; zinc-finger) e proteínas com nenhuma similaridade encontrada (não classificados). As expressões gênicas dos FDE-CvTE, correspondentes a Proteína dissulfeto isomerase, Trealose, HSP70 e um fragmento não classificado, foram confirmadas pela técnica de RTqPCR. Nossos resultados comprovam que múltiplos genes estão atuando em funções importantes nas respostas de tolerância ao déficit hídrico. / Abstract: Worldwide, sugar cane is the primary source for the production of sugar and ethanol. Brazil produces more than half of the sugar in the world. There are several environmental stresses that sugar cane crops are subjected to. Drought is the environmental factor that causes major economical impact. The analysis of differentially expressed sugar cane genes towards water stress deficiency were the aim of this study. Proline levels were monitored to check for drought tolerance among the two cultivars, one of them tolerant (RB867515) and one sensitive (SP86-155). Using cDNA-AFLP technique, a comparative analysis was performed on two sugar cane cultivars subjected to water deficit for 1, 3, 5 and 10 days period. Nine combinations of EcoRI/MseI selective oligonucleotides allowed us to visualize using polyacrylamide gels 173 differentially expressed fragments in the stressed tolerant cultivar (DEF-ETCv) when compared to the sensitive one. Of those, 72 DEF-ETCv were cloned, sequenced and categorized (UniProtKB). The analysis of similar proteins showed homology those involved in chaperone activity, protease inhibitors, abscisic acid, glutathione peroxidase 4 (ROS), transcription factors (Myb; bHLH), domains NBS-LRR and zinc-finger and proteins with no similarity (no hits). RT-qPCR technique confirmed the expression of the following proteins for the DEF-ETCv: disulfide isomerase protein, Trehalose, HSP70 and one no hit. Our results showed that multiple genes were acting in important roles in response to drought tolerance. / Doutor

Made available in DSpace on 2015-04-30T14:06:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000467096-Texto+Parcial-0.pdf: 1073610 bytes, checksum: d2c51163d0ec3d074e37881caa72a6d5 (MD5) Previous issue date: 2015 / Background: Emotions are fundamental across human development. Recognizing emotional face expressions in others is a valuable strategy of non-verbal communication and is particularly relevant throughout childhood given that language skills are not yet fully developed and the first interactions with peers have just started. Despite this, few studies focus on face processing in children and most of the work uses adult face stimuli, since stimuli sets with children pictures are rare. The current dissertation aimed to fill this gap through the development of the Child Emotions Pictures Set (CEPS) and investigating developmental markers of recognition of emotional faces in children aged between six and 11 years-old and the effect of age, sex and length of presentation on it. Methods: The dissertation is composed of two studies. Study I was developed in order to have a complete database that could allow Study II. The second study reports an empirical investigation of developmental markers of recognition of emotional faces in children between six and 11 years-old and the effect of sex, age and length of presentation on it. An experiment based on CEPS was presented to 90 children divided in three age groups (6-7 years-old; 8-9 years-old; 10-11 years-old) of boys and girls. Results: The final version of CEPS consists of 225 photos of 17 children, boys and girls, aged six to 11 years-old from multiracial backgrounds posing or naturally expressing the six basic emotions – happiness, fear, disgust, surprise, sadness and anger – in three intensities – low, medium and high – and neutrality. Study II reveled that happiness had the higher means of accuracy followed in sequence by disgust, surprise, anger, fear and sadness. Development of emotional face expressions recognition denote to follow childhood chronological course, although, results demonstrate a non-existence of a female advantage length of presentation does not show significant differences. Conclusion: CEPS contributes for the scientific field by making available a child face stimuli set, which is intended to be used in further developmental studies and also enables the development of cross-cultural studies in the field. We also provide further evidence about developmental markers of emotional face expressions recognition and the chronological course that it follows through childhood showing the non-existence of a female advantage on this skill and that longer exposure to stimuli does not facilitate the recognition. This method is susceptible to replication, allowing the establishment of developmental markers of emotional face expressions recognition. / Introdução: Emoções são fundamentais em todo o desenvolvimento humano. Reconhecer expressões faciais de emoções em terceiros é uma estratégia valiosa de comunicação não-verbal e é particularmente relevante durante toda a infância, uma vez que a linguagem ainda não está plenamente desenvolvida e as primeiras interações com os pares estão começando. Apesar disso, poucos estudos focam no reconhecimento de faces em crianças e a maior parte dos trabalhos utiliza estímulos adultos, uma vez que os conjuntos de estímulos com crianças são raros. A dissertação teve como objetivo preencher esta lacuna através do desenvolvimento da Child Emotions Pictures Set (CEPS) e investigar marcadores de desenvolvimento de reconhecimento de faces emocionais em crianças com idade entre seis e 11 anos e os efeitos da idade, do sexo e do tempo de apresentação sobre ele.Método: A dissertação é composta por dois estudos. O estudo I foi desenvolvido de forma a ter uma base de dados completa que poderia permitir estudo II. O segundo estudo relata uma investigação empírica de marcadores desenvolvimentais de reconhecimento de faces emocionais em crianças entre seis e 11 anos e o efeito do sexo, da idade e do tempo de apresentação do mesmo. Um experimento com base no CEPS foi apresentado a 90 crianças divididas em três grupos etários (6-7 anos de idade; 8-9 anos de idade; 10-11 anos de idade) de meninos e meninas. Resultados: A versão final do CEPS é composta de 225 fotos de 17 crianças, meninos e meninas, com idade entre seis e 11 anos de idade, de origens multirraciais que posaram ou naturalmente expressaram as seis emoções básicas - alegria, medo, nojo, surpresa, tristeza e raiva - em três intensidades - fraca, média e forte - e neutralidade. O estudo II revelou que alegria apresenta as maiores médias de acurácia e é seguida em sequencia por: nojo, surpresa, raiva, medo e tristeza. O desenvolvimento do reconhecimento das expressões de faces emocionais denota seguir o curso cronológico da infância, contudo os resultados demonstram a inexistência de uma vantagem feminina e a duração da exposição dos estímulos não apresentam diferenças significativas. Conclusão: O CEPS contribui para o campo científico, disponibilizando estímulos infantis que se destina a ser utilizado em estudos de desenvolvimento e também permite o desenvolvimento de estudos transculturais no campo. Essa dissertação fornece também mais evidências sobre os marcadores de desenvolvimento do reconhecimento de faces emocionais e do curso cronológico que decorre ao longo da infância, além de demonstrar a não-existência de uma vantagem feminina nesta habilidade e que maior tempo de exposição a estímulos não facilita o reconhecimento. Este método é suscetível a replicação, permitindo o estabelecimento de marcadores de desenvolvimento do reconhecimento de expressões faciais de emoções.