A fexofenadina (FEX) tem sido o fármaco de primeira escolha no tratamento sintomático de manifestações alérgicas, por ser um anti-histamínico dos receptores H1 de 2ª geração não sedativo. É o metabólito ativo e quiral da terfenadina (TERF), medicamento cuja produção e comercialização foram suspensas em função dos eventos adversos apresentados. Fungos têm se apresentado como uma alternativa promissora na produção de compostos com atividade biológica. Dessa forma, o objetivo desse projeto foi avaliar a capacidade de fungos em biotransformar enantiosseletivamente a terfenadina em seu metabólito ativo, a fexofenadina empregando fungos como agentes catalisadores. Para a análise enantiosseletiva da fexofenadina foi desenvolvido um método de separação cromatográfica empregando a coluna quiral Lux® cellulose-1, fase móvel constituída de água: metanol (35:65, v/v) + 0,3% trietilamina + 0,4% ácido acético, vazão de 0,5 mL min-1, com detecção em 220nm. Duas microtécnicas de preparação de amostras foram avaliadas na extração dos analitos do meio de cultura: a microextração liquido-liquido dispersiva (DLLME) e a microextração em fase liquida empregando membranas cilíndricas ocas (HF-LPME). Entre essas, a DLLME foi a microtécnica de escolha, pois forneceu melhores resultados tais como, maior valor de recuperação, cromatogramas sem picos de possíveis interferentes, maior rapidez e facilidade de preparação das amostras. As condições otimizadas da DLLME foram: clorofórmio (300 ?L) como solvente extrator, isopropanol (300 ?L) como solvente dispersor. Após a formação do ponto nuvem, as amostras foram submetidas à agitação por vórtex durante 15 segundos e centrifugação durante 10 minutos a 3000 rpm. As recuperações foram de 43% para ambos enantiômeros. O método se mostrou linear na faixa de concentração 2.0 - 15.0 ?g mL-1 para cada enantiômero da FEX (r > 0,990). O limite de quantificação foi de 2 ?g mL-1 para os enantiômeros da FEX. Dentre os sete fungos estudados (Papulaspora immersa Hotson SS13, Penicillium crustosum VR4, Mucor rouxii, Nigrospora sphaerica SS67, Fusarium oxysporum SS50, Cunninghamella echinulata var. elegans ATCC 8688A e Cunninghamella elegans NRRL 1393 ATCC 10028B) somente o fungo Fusarium oxysporum SS50 e Cunninghamella echinulata var. elegans ATCC 8688A apresentaram potencial para biotransformação da terfenadina em fexofenadina nas condições de incubação empregadas nesse trabalho. / Fexofenadine (FEX) has been the drug of choice for the symptomatic treatment of allergic manifestations, being an antihistamine H1 receptor 2nd generation non-sedating. It is the active and chiral metabolite of terfenadine (TERF), a drug whose production and marketing was suspended as a result of adverse events. Fungi have been presented as a promising alternative for the production of compounds with biological activity. Thus, the goal of this project was to evaluate the ability of fungi to biotransform asymmetric terfenadine to its active metabolite, fexofenadine using fungi as agents catalysts. For enantioselective analysis of fexofenadine a method for chromatographic separation was developed employing a chiral column Lux® cellulose -1, mobile phase water : methanol (35:65,v/v) + 0.3% triethylamine + 0.4% acetic acid, flow rate of 0.5 mL min-1, with detection at 220nm. Two sample preparation microtechnology were evaluated in the extraction of analytes from the culture medium: the dispersive liquid-liquid microextraction (DLLME) and hollow fiber liquid phase microextraction (HF- LPME). Between the two, the DLLME was the microtechnic chosen because it provided better results such as higher recovery values, chromatograms with no possible interfering peaks, greater speed and ease of sample preparation. The optimized conditions of DLLME were: chloroform (300 ?L) as extractor solvent, isopropanol (300 ?L) as disperser solvent. After the formation of the cloud point, the samples were subjected to agitation by vortexing for 15 seconds and centrifuging for 10 minutes at 3000 rpm. The recoveries were 43 % for both enantiomers. The method was linear in the concentration range from 2.0 -15.0 ?g mL-1 for each enantiomer of FEX (r > 0.990). The limit of quantification was 2 ?g mL-1 for the enantiomers of FEX. Among the seven fungi studied (Papulaspora immersa Hotson SS13, Penicillium crustosum VR4, Mucor rouxii, Nigrospora sphaerica SS67, Fusarium oxysporum SS50, Cunninghamella echinulata var. elegans ATCC 8688A e Cunninghamella elegans NRRL 1393 ATCC 10028B), only the fungi Fusarium oxysporum SS50 e Cunninghamella echinulata var. elegans ATCC 8688A showed potential for biotransformation of terfenadine in fexofenadine in the incubation conditions employed in this work.

A fexofenadina (FEX) tem sido o fármaco de primeira escolha no tratamento sintomático de manifestações alérgicas, por ser um anti-histamínico dos receptores H1 de 2ª geração não sedativo. É o metabólito ativo e quiral da terfenadina (TERF), medicamento cuja produção e comercialização foram suspensas em função dos eventos adversos apresentados. Fungos têm se apresentado como uma alternativa promissora na produção de compostos com atividade biológica. Dessa forma, o objetivo desse projeto foi avaliar a capacidade de fungos em biotransformar enantiosseletivamente a terfenadina em seu metabólito ativo, a fexofenadina empregando fungos como agentes catalisadores. Para a análise enantiosseletiva da fexofenadina foi desenvolvido um método de separação cromatográfica empregando a coluna quiral Lux® cellulose-1, fase móvel constituída de água: metanol (35:65, v/v) + 0,3% trietilamina + 0,4% ácido acético, vazão de 0,5 mL min-1, com detecção em 220nm. Duas microtécnicas de preparação de amostras foram avaliadas na extração dos analitos do meio de cultura: a microextração liquido-liquido dispersiva (DLLME) e a microextração em fase liquida empregando membranas cilíndricas ocas (HF-LPME). Entre essas, a DLLME foi a microtécnica de escolha, pois forneceu melhores resultados tais como, maior valor de recuperação, cromatogramas sem picos de possíveis interferentes, maior rapidez e facilidade de preparação das amostras. As condições otimizadas da DLLME foram: clorofórmio (300 ?L) como solvente extrator, isopropanol (300 ?L) como solvente dispersor. Após a formação do ponto nuvem, as amostras foram submetidas à agitação por vórtex durante 15 segundos e centrifugação durante 10 minutos a 3000 rpm. As recuperações foram de 43% para ambos enantiômeros. O método se mostrou linear na faixa de concentração 2.0 - 15.0 ?g mL-1 para cada enantiômero da FEX (r > 0,990). O limite de quantificação foi de 2 ?g mL-1 para os enantiômeros da FEX. Dentre os sete fungos estudados (Papulaspora immersa Hotson SS13, Penicillium crustosum VR4, Mucor rouxii, Nigrospora sphaerica SS67, Fusarium oxysporum SS50, Cunninghamella echinulata var. elegans ATCC 8688A e Cunninghamella elegans NRRL 1393 ATCC 10028B) somente o fungo Fusarium oxysporum SS50 e Cunninghamella echinulata var. elegans ATCC 8688A apresentaram potencial para biotransformação da terfenadina em fexofenadina nas condições de incubação empregadas nesse trabalho. / Fexofenadine (FEX) has been the drug of choice for the symptomatic treatment of allergic manifestations, being an antihistamine H1 receptor 2nd generation non-sedating. It is the active and chiral metabolite of terfenadine (TERF), a drug whose production and marketing was suspended as a result of adverse events. Fungi have been presented as a promising alternative for the production of compounds with biological activity. Thus, the goal of this project was to evaluate the ability of fungi to biotransform asymmetric terfenadine to its active metabolite, fexofenadine using fungi as agents catalysts. For enantioselective analysis of fexofenadine a method for chromatographic separation was developed employing a chiral column Lux® cellulose -1, mobile phase water : methanol (35:65,v/v) + 0.3% triethylamine + 0.4% acetic acid, flow rate of 0.5 mL min-1, with detection at 220nm. Two sample preparation microtechnology were evaluated in the extraction of analytes from the culture medium: the dispersive liquid-liquid microextraction (DLLME) and hollow fiber liquid phase microextraction (HF- LPME). Between the two, the DLLME was the microtechnic chosen because it provided better results such as higher recovery values, chromatograms with no possible interfering peaks, greater speed and ease of sample preparation. The optimized conditions of DLLME were: chloroform (300 ?L) as extractor solvent, isopropanol (300 ?L) as disperser solvent. After the formation of the cloud point, the samples were subjected to agitation by vortexing for 15 seconds and centrifuging for 10 minutes at 3000 rpm. The recoveries were 43 % for both enantiomers. The method was linear in the concentration range from 2.0 -15.0 ?g mL-1 for each enantiomer of FEX (r > 0.990). The limit of quantification was 2 ?g mL-1 for the enantiomers of FEX. Among the seven fungi studied (Papulaspora immersa Hotson SS13, Penicillium crustosum VR4, Mucor rouxii, Nigrospora sphaerica SS67, Fusarium oxysporum SS50, Cunninghamella echinulata var. elegans ATCC 8688A e Cunninghamella elegans NRRL 1393 ATCC 10028B), only the fungi Fusarium oxysporum SS50 e Cunninghamella echinulata var. elegans ATCC 8688A showed potential for biotransformation of terfenadine in fexofenadine in the incubation conditions employed in this work.

Interações medicamentosas envolvendo a glicoproteína-P (P-gp) intestinal e placentária são determinantes na disposição cinética e transferência placentária de medicamentos durante a gestação. A fexofenadina, fármaco anti-histamínico, está disponível na clínica como racemato com indicação de uso durante a gravidez para o tratamento da rinite alérgica sazonal e urticária crônica. Considerando a fexofenadina como um substrato da P-gp e a fluoxetina, fármaco antidepressivo indicado durante a gravidez, um inibidor da P-gp, o presente estudo investiga a influência da fluoxetina na disposição cinética enantiosseletiva da fexofenadina em parturientes e suas relações com a transferência placentária in vivo e ex vivo. No estudo in vivo foram investigadas 16 parturientes, sendo 8 incluídas no grupo Controle e 8 incluídas no grupo Interação. Todas as parturientes investigadas receberam dose única oral de 60mg de fexofenadina racêmica, enquanto as parturientes do grupo Interação receberam também dose única oral de 40mg de fluoxetina racêmica 3 h antes da administração da fexofenadina. As amostras seriadas de sangue e urina foram colhidas até 48 h após a administração da fexofenadina. Na resolução do parto (2-3 h após a administração da fexofenadina) foram coletadas simultaneamente amostras de sangue materno, venoso e arterial do cordão umbilical e do espaço interviloso placentário. No modelo ex vivo, a farmacocinética transplacentária dos enantiômeros da fexofenadina foi avaliada em 4 lóbulos de placenta humana. Os enantiômeros da fexofenadina foram determinados nas amostras de plasma, urina e solução de perfusão placentária por LC-MS/MS acoplado a coluna de fase estacionária quiral Chirobiotic® V. A análise farmacocinética foi realizada empregando o programa WinNonlin e os testes estatísticos foram realizados com o auxílio do programa R. A disposição cinética da fexofenadina é enantiosseletiva no plasma materno com maiores valores de AUC0-? (423,20 vs 267,67 ng×h/mL) e menores valores de volume de distribuição aparente (621,37 vs 889,83 L), clearance total aparente (66,20 vs 105,05 L/h) e clearance renal aparente (5,25 vs 8,78 L/h) para o distômero (R)-(+)-fexofenadina. A transferência placentária da fexofenadina é limitada com razões de concentrações plasmáticas veia umbilical/veia materna de aproximadamente 0,16 para ambos os enantiômeros. As razões enantioméricas R-(+)/S-(-) de aproximadamente 1,7 nos compartimentos materno e fetal sugerem que a P-gp placentária não discrimina entre os enantiômeros da fexofenadina. A administração de dose única oral de 40 mg de fluoxetina racêmica 3 h antes da administração da fexofenadina aumentou os valores de AUC0-? (376,09 vs 267,67 ng×h/mL) e reduziu os valores de clearance total aparente (74,37 vs 105,05 L/h) e clearance renal aparente (3,50 vs 8,78 L/h) somente para o eutômero (S)-(-)-fexofenadina, inferindo inibição enantiosseletiva da P-gp intestinal. A administração de dose única oral de 40 mg de fluoxetina racêmica 3 h antes da administração da fexofenadina [concentrações plasmáticas materna no momento da extração fetal de 11, 9, 7 e 3 ng/mL, respectivamente para os enantiômeros (S)-(+)-fluoxetina, (R)-(-)-fluoxetina, (S)-(+)-norfluoxetina e (R)-(-)-norfluoxetina] não altera as razões de concentrações plasmáticas veia umbilical/veia materna e as razões enantioméricas R-(+)/S-(-) nos compartimentos materno e fetal. No modelo ex vivo, a transferência placentária da fexofenadina é lenta e limitada com razões de concentrações reservatório ii fetal/reservatório materno de aproximadamente 0,18 para ambos os enantiômeros. As razões enantioméricas R-(+)/S-(-) de aproximadamente 1,0 nos compartimentos materno e fetal confirmam que a P-gp placentária não discrimina entre os enantiômeros da fexofenadina. As concentrações clinicamente relevantes de 50 ng de cada enantiômero da fluoxetina/mL não alteram as razões de concentrações reservatório fetal/reservatório materno, a velocidade de transferência placentária e as razões enantioméricas R-(+)/S-(-) nos compartimentos materno e fetal. As razões de concentrações dos enantiômeros da fexofenadina reservatório fetal/reservatório materno obtidas no modelo ex vivo são similares às razões obtidas no estudo clínico de concentrações plasmáticas veia umbilical/veia materna, inferindo a validade do modelo ex vivo de predição da transferência placentária in vivo dos enantiômeros da fexofenadina. Concluindo, os estudos in vivo e ex vivo permitem inferir que a fluoxetina inibe de maneira enantiosseletiva a P-gp intestinal e não inibe a P-gp placentária em concentrações clinicamente relevantes / Drug-drug interaction on the intestinal and placental P-glycoprotein (P-gp) plays an important role in the kinetics disposition and placental transfer of drugs during pregnancy. Fexofenadine is an antihistamine drug for seasonal allergic rhinitis and chronic urticaria treatment during pregnancy and it is available as a racemic mixture. Taken together fexofenadine as a P-gp substrate and fluoxetine, antidepressant drug used in pregnancy, as a P-gp inhibitor, this study asses the effect of fluoxetine on the enantioselective kinetic disposition of fexofenadine in pregnant women at term and their relationships with in vivo and ex vivo transplacental transfer. The in vivo study investigated 16 parturients, 8 included in Control group and 8 included in Interaction group. All of parturients received 60 mg of racemic fexofenadine in a single oral dose, while Interaction group subjects were also given 40 mg of racemic fluoxetine in a single oral dose 3 h before fexofenadine administration. Serial blood and urine samples were collected for 48 h after fexofenadine administration. Maternal blood, venous and arterial umbilical cord blood, as well as placental intervillous space blood samples were simultaneously collected at delivery (2-3 h after fexofenadine administration). The transplacental pharmacokinetics of fexofenadine enantiomers was assayed in 4 placental lobule using ex vivo placental perfusion model. Fexofenadine enantiomers were determined in plasma, urine and placental perfusate samples by LC-MS/MS equipped with the chiral column Chirobiotic® V. Pharmacokinetic parameters were determined using WinNonlin and statistical analyses were performed using R statistical software. Fexofenadine kinetics disposition is enantioselective in maternal plasma with higher AUC0-? values (423.20 vs. 267.67 ng×h/mL) and lower apparent volume of distribution values (621.37 vs. 889.83 L), apparent total clearance (66.20 vs. 105.05 L/h) and apparent renal clearance (5.25 vs. 8.78 L/h) for (R)-(+)-fexofenadine distomer. Fexofenadine placental transfer is limited, with umbilical vein/maternal vein plasma concentration ratios of approximately 0.16 for both enantiomers. R-(+)/S-(-) enantiomeric ratios of approximately 1.7 in both maternal and fetal compartments indicate that placental P-gp might not have ability of fexofenadine\'s chiral discrimination. Single oral dose administration of 40 mg of racemic fluoxetine 3 h before fexofenadine administration increased AUC0-? values (376.09 vs. 267.67 ng×h/mL) and lowered both apparent total clearance values (74.37 vs. 105.05 L/h) and apparent renal clearance (3.50 vs. 8.78 L/h) only for (S)-(-)-fexofenadine eutomer, inferring intestinal P-gp enantioselective inhibition. Single oral dose administration of 40 mg of racemic fluoxetine 3 h before fexofenadine administration [maternal plasma concentrations at delivery of 11, 9, 7 and 3 ng/mL for (S)-(+)-fluoxetine, (R)-(-)-fluoxetine, (S)-(+)-norfluoxetine and (R)-(-)-norfluoxetine enantiomers, respectively] does not change either umbilical vein/maternal vein plasma concentration ratios or R-(+)/S-(-) enantiomeric ratios in maternal and fetal compartments. In the ex vivo model, placental transfer of fexofenadine is slow and limited, presenting fetal/maternal reservoirs concentration ratios of approximately 0.18 for both enantiomers. R-(+)/S-(-) enantiomeric ratios of approximately 1.0 on maternal and fetal compartments confirm placental P-gp does not have ability of fexofenadine\'s chiral discrimination. Clinically relevant concentrations of 50 ng of each fluoxetine enantiomer/mL neither alter fetal/maternal reservoirs concentration ratios, placental transfer rate nor R-(+)/S-(-) enantiomeric ratios in maternal and fetal iv compartments. Fetal/maternal reservoirs concentration ratios of fexofenadine enantiomers obtained in the ex vivo model are similar to those obtained in the clinical study of umbilical vein/maternal vein plasma concentrations, implying the validity of ex vivo model to predict placental transfer of fexofenadine enantiomers in vivo. In conclusion, both in vivo and ex vivo studies allow us to infer that fluoxetine enantioselectively inhibits intestinal P-gp and yet does not inhibit placental P-gp at clinically relevant concentrations.

Este trabalho objetivou o desenvolvimento e validação de métodos analíticos para determinação de fexofenadina em cápsulas e comprimidos revestidos e o estudo de fotoestabilidade do fármaco. A determinação da faixa de fusão e a espectrofotometria no infravermelho permitiram identificar fexofenadina substância química de referência. Os métodos por cromatografia em camada delgada, espectrofotometria no ultravioleta (UV), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC) foram utilizados para análise qualitativa do fármaco nas formas farmacêuticas. A determinação quantitativa foi realizada através da validação dos métodos por UV e CLAE para cápsulas e comprimidos e EC para cápsulas, avaliando-se os parâmetros descritos pelas guias de validação. Os métodos propostos não apresentaram diferença estatística para um nível de significância de 1%. O teste de dissolução foi desenvolvido e validado utilizando HCl 0,01 M como meio de dissolução, cestas a 100 rpm e pás a 75 rpm para cápsulas e comprimidos revestidos, respectivamente. Perfis de dissolução de cápsulas dos medicamentos referência e similar e comprimidos revestidos dos medicamentos referência, similar e genérico foram realizados e comparados através dos fatores de diferença e semelhança e da eficiência de dissolução e não apresentaram-se semelhantes. Estudo preliminar de estabilidade de fexofenadina frente à degradação ácida, alcalina, oxidativa, térmica e fotolítica mostrou a oxidação e a luz como fatores importantes de degradação. A cinética de fotodegradação de fexofenadina em soluções metanólica e aquosa demonstrou cinética de segunda ordem de reação. A estabilidade acelerada da fexofenadina foi realizada utilizando-se soluções metanólicas pH=6 e pH=11, as quais foram expostas às lâmpadas metal haleto e UVC 254 nm, havendo formação dos produtos majoritários, denominados PD-21 e PD-37, os quais foram isolados por cromatografia em coluna e CCD preparativa. A fotólise do pó de comprimidos e de comprimidos demonstrou haver formação dos mesmos produtos de degradação obtidos em solução. Os produtos foram identificados por ressonância magnética nuclear e espectrometria de massas como derivados benzofenona (PD-21) e isopropílico (PD-37) da fexofenadina. / The aim of this study was the development and validation of analytical methods to the determination of fexofenadine in capsules and coated tablets and the photostability study of the drug. The melting range determination and infrared spectrophotometry allowed fexofenadine standard reference identification. Methods of thin-layer chromatography (TLC), ultraviolet spectrophotometry (UV), high performance liquid chromatography (HPLC), and capillary electrophoresis (CE) were employed to the qualitative analysis of the drug in pharmaceutical formulations. The quantitative determination was performed through the validation of UV and HPLC for capsules and coated tablets, and CE for capsules, evaluating the guidances validation parameters. The proposed methods were not statistically different to a 1% significance level. The dissolution test was developed and validated using HCl 0,01 M as dissolution medium, basket at 100 rpm and paddle at 75 rpm to capsules and coated tablets, respectively. Dissolution profiles of reference and similar capsule products and reference, similar and generic coated tablets products were performed and compared using difference factor, similarity factor and the dissolution efficiency, showing not similarity. Preliminary stability study of fexofenadine through acid, alkaline, oxidative, thermal, and photolytic degradation shows sensibility to oxidation and light. The kinetic of photodegradation of fexofenadine in methanol and water solutions show second order kinetic of reaction. The accelerated stability was evaluated using fexofenadine methanolic solutions pH=6 and pH=11, which were exposed to a metal halide lamp and to a fluorescent lamp UVC 254 nm, giving two majority degradation products, assigned PD-21 and PD-37. The separation was carried out by HPLC and TLC. The products were isolated by column chromatography and preparative TLC techniques. The analysis of the powder of tablets and tablets, which were exposed to light, showed the same degradation products presented for solutions. The majority degradation products of fexofenadine were identified by nuclear magnetic resonance and mass spectrometry as a benzophenone derivative (PD-21) and isopropyl derivative (PD-37).

Este trabalho objetivou o desenvolvimento e validação de métodos analíticos para determinação de fexofenadina em cápsulas e comprimidos revestidos e o estudo de fotoestabilidade do fármaco. A determinação da faixa de fusão e a espectrofotometria no infravermelho permitiram identificar fexofenadina substância química de referência. Os métodos por cromatografia em camada delgada, espectrofotometria no ultravioleta (UV), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC) foram utilizados para análise qualitativa do fármaco nas formas farmacêuticas. A determinação quantitativa foi realizada através da validação dos métodos por UV e CLAE para cápsulas e comprimidos e EC para cápsulas, avaliando-se os parâmetros descritos pelas guias de validação. Os métodos propostos não apresentaram diferença estatística para um nível de significância de 1%. O teste de dissolução foi desenvolvido e validado utilizando HCl 0,01 M como meio de dissolução, cestas a 100 rpm e pás a 75 rpm para cápsulas e comprimidos revestidos, respectivamente. Perfis de dissolução de cápsulas dos medicamentos referência e similar e comprimidos revestidos dos medicamentos referência, similar e genérico foram realizados e comparados através dos fatores de diferença e semelhança e da eficiência de dissolução e não apresentaram-se semelhantes. Estudo preliminar de estabilidade de fexofenadina frente à degradação ácida, alcalina, oxidativa, térmica e fotolítica mostrou a oxidação e a luz como fatores importantes de degradação. A cinética de fotodegradação de fexofenadina em soluções metanólica e aquosa demonstrou cinética de segunda ordem de reação. A estabilidade acelerada da fexofenadina foi realizada utilizando-se soluções metanólicas pH=6 e pH=11, as quais foram expostas às lâmpadas metal haleto e UVC 254 nm, havendo formação dos produtos majoritários, denominados PD-21 e PD-37, os quais foram isolados por cromatografia em coluna e CCD preparativa. A fotólise do pó de comprimidos e de comprimidos demonstrou haver formação dos mesmos produtos de degradação obtidos em solução. Os produtos foram identificados por ressonância magnética nuclear e espectrometria de massas como derivados benzofenona (PD-21) e isopropílico (PD-37) da fexofenadina. / The aim of this study was the development and validation of analytical methods to the determination of fexofenadine in capsules and coated tablets and the photostability study of the drug. The melting range determination and infrared spectrophotometry allowed fexofenadine standard reference identification. Methods of thin-layer chromatography (TLC), ultraviolet spectrophotometry (UV), high performance liquid chromatography (HPLC), and capillary electrophoresis (CE) were employed to the qualitative analysis of the drug in pharmaceutical formulations. The quantitative determination was performed through the validation of UV and HPLC for capsules and coated tablets, and CE for capsules, evaluating the guidances validation parameters. The proposed methods were not statistically different to a 1% significance level. The dissolution test was developed and validated using HCl 0,01 M as dissolution medium, basket at 100 rpm and paddle at 75 rpm to capsules and coated tablets, respectively. Dissolution profiles of reference and similar capsule products and reference, similar and generic coated tablets products were performed and compared using difference factor, similarity factor and the dissolution efficiency, showing not similarity. Preliminary stability study of fexofenadine through acid, alkaline, oxidative, thermal, and photolytic degradation shows sensibility to oxidation and light. The kinetic of photodegradation of fexofenadine in methanol and water solutions show second order kinetic of reaction. The accelerated stability was evaluated using fexofenadine methanolic solutions pH=6 and pH=11, which were exposed to a metal halide lamp and to a fluorescent lamp UVC 254 nm, giving two majority degradation products, assigned PD-21 and PD-37. The separation was carried out by HPLC and TLC. The products were isolated by column chromatography and preparative TLC techniques. The analysis of the powder of tablets and tablets, which were exposed to light, showed the same degradation products presented for solutions. The majority degradation products of fexofenadine were identified by nuclear magnetic resonance and mass spectrometry as a benzophenone derivative (PD-21) and isopropyl derivative (PD-37).

Este trabalho objetivou o desenvolvimento e validação de métodos analíticos para determinação de fexofenadina em cápsulas e comprimidos revestidos e o estudo de fotoestabilidade do fármaco. A determinação da faixa de fusão e a espectrofotometria no infravermelho permitiram identificar fexofenadina substância química de referência. Os métodos por cromatografia em camada delgada, espectrofotometria no ultravioleta (UV), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC) foram utilizados para análise qualitativa do fármaco nas formas farmacêuticas. A determinação quantitativa foi realizada através da validação dos métodos por UV e CLAE para cápsulas e comprimidos e EC para cápsulas, avaliando-se os parâmetros descritos pelas guias de validação. Os métodos propostos não apresentaram diferença estatística para um nível de significância de 1%. O teste de dissolução foi desenvolvido e validado utilizando HCl 0,01 M como meio de dissolução, cestas a 100 rpm e pás a 75 rpm para cápsulas e comprimidos revestidos, respectivamente. Perfis de dissolução de cápsulas dos medicamentos referência e similar e comprimidos revestidos dos medicamentos referência, similar e genérico foram realizados e comparados através dos fatores de diferença e semelhança e da eficiência de dissolução e não apresentaram-se semelhantes. Estudo preliminar de estabilidade de fexofenadina frente à degradação ácida, alcalina, oxidativa, térmica e fotolítica mostrou a oxidação e a luz como fatores importantes de degradação. A cinética de fotodegradação de fexofenadina em soluções metanólica e aquosa demonstrou cinética de segunda ordem de reação. A estabilidade acelerada da fexofenadina foi realizada utilizando-se soluções metanólicas pH=6 e pH=11, as quais foram expostas às lâmpadas metal haleto e UVC 254 nm, havendo formação dos produtos majoritários, denominados PD-21 e PD-37, os quais foram isolados por cromatografia em coluna e CCD preparativa. A fotólise do pó de comprimidos e de comprimidos demonstrou haver formação dos mesmos produtos de degradação obtidos em solução. Os produtos foram identificados por ressonância magnética nuclear e espectrometria de massas como derivados benzofenona (PD-21) e isopropílico (PD-37) da fexofenadina. / The aim of this study was the development and validation of analytical methods to the determination of fexofenadine in capsules and coated tablets and the photostability study of the drug. The melting range determination and infrared spectrophotometry allowed fexofenadine standard reference identification. Methods of thin-layer chromatography (TLC), ultraviolet spectrophotometry (UV), high performance liquid chromatography (HPLC), and capillary electrophoresis (CE) were employed to the qualitative analysis of the drug in pharmaceutical formulations. The quantitative determination was performed through the validation of UV and HPLC for capsules and coated tablets, and CE for capsules, evaluating the guidances validation parameters. The proposed methods were not statistically different to a 1% significance level. The dissolution test was developed and validated using HCl 0,01 M as dissolution medium, basket at 100 rpm and paddle at 75 rpm to capsules and coated tablets, respectively. Dissolution profiles of reference and similar capsule products and reference, similar and generic coated tablets products were performed and compared using difference factor, similarity factor and the dissolution efficiency, showing not similarity. Preliminary stability study of fexofenadine through acid, alkaline, oxidative, thermal, and photolytic degradation shows sensibility to oxidation and light. The kinetic of photodegradation of fexofenadine in methanol and water solutions show second order kinetic of reaction. The accelerated stability was evaluated using fexofenadine methanolic solutions pH=6 and pH=11, which were exposed to a metal halide lamp and to a fluorescent lamp UVC 254 nm, giving two majority degradation products, assigned PD-21 and PD-37. The separation was carried out by HPLC and TLC. The products were isolated by column chromatography and preparative TLC techniques. The analysis of the powder of tablets and tablets, which were exposed to light, showed the same degradation products presented for solutions. The majority degradation products of fexofenadine were identified by nuclear magnetic resonance and mass spectrometry as a benzophenone derivative (PD-21) and isopropyl derivative (PD-37).

Interações medicamentosas envolvendo a glicoproteína-P (P-gp) intestinal e placentária são determinantes na disposição cinética e transferência placentária de medicamentos durante a gestação. A fexofenadina, fármaco anti-histamínico, está disponível na clínica como racemato com indicação de uso durante a gravidez para o tratamento da rinite alérgica sazonal e urticária crônica. Considerando a fexofenadina como um substrato da P-gp e a fluoxetina, fármaco antidepressivo indicado durante a gravidez, um inibidor da P-gp, o presente estudo investiga a influência da fluoxetina na disposição cinética enantiosseletiva da fexofenadina em parturientes e suas relações com a transferência placentária in vivo e ex vivo. No estudo in vivo foram investigadas 16 parturientes, sendo 8 incluídas no grupo Controle e 8 incluídas no grupo Interação. Todas as parturientes investigadas receberam dose única oral de 60mg de fexofenadina racêmica, enquanto as parturientes do grupo Interação receberam também dose única oral de 40mg de fluoxetina racêmica 3 h antes da administração da fexofenadina. As amostras seriadas de sangue e urina foram colhidas até 48 h após a administração da fexofenadina. Na resolução do parto (2-3 h após a administração da fexofenadina) foram coletadas simultaneamente amostras de sangue materno, venoso e arterial do cordão umbilical e do espaço interviloso placentário. No modelo ex vivo, a farmacocinética transplacentária dos enantiômeros da fexofenadina foi avaliada em 4 lóbulos de placenta humana. Os enantiômeros da fexofenadina foram determinados nas amostras de plasma, urina e solução de perfusão placentária por LC-MS/MS acoplado a coluna de fase estacionária quiral Chirobiotic® V. A análise farmacocinética foi realizada empregando o programa WinNonlin e os testes estatísticos foram realizados com o auxílio do programa R. A disposição cinética da fexofenadina é enantiosseletiva no plasma materno com maiores valores de AUC0-? (423,20 vs 267,67 ng×h/mL) e menores valores de volume de distribuição aparente (621,37 vs 889,83 L), clearance total aparente (66,20 vs 105,05 L/h) e clearance renal aparente (5,25 vs 8,78 L/h) para o distômero (R)-(+)-fexofenadina. A transferência placentária da fexofenadina é limitada com razões de concentrações plasmáticas veia umbilical/veia materna de aproximadamente 0,16 para ambos os enantiômeros. As razões enantioméricas R-(+)/S-(-) de aproximadamente 1,7 nos compartimentos materno e fetal sugerem que a P-gp placentária não discrimina entre os enantiômeros da fexofenadina. A administração de dose única oral de 40 mg de fluoxetina racêmica 3 h antes da administração da fexofenadina aumentou os valores de AUC0-? (376,09 vs 267,67 ng×h/mL) e reduziu os valores de clearance total aparente (74,37 vs 105,05 L/h) e clearance renal aparente (3,50 vs 8,78 L/h) somente para o eutômero (S)-(-)-fexofenadina, inferindo inibição enantiosseletiva da P-gp intestinal. A administração de dose única oral de 40 mg de fluoxetina racêmica 3 h antes da administração da fexofenadina [concentrações plasmáticas materna no momento da extração fetal de 11, 9, 7 e 3 ng/mL, respectivamente para os enantiômeros (S)-(+)-fluoxetina, (R)-(-)-fluoxetina, (S)-(+)-norfluoxetina e (R)-(-)-norfluoxetina] não altera as razões de concentrações plasmáticas veia umbilical/veia materna e as razões enantioméricas R-(+)/S-(-) nos compartimentos materno e fetal. No modelo ex vivo, a transferência placentária da fexofenadina é lenta e limitada com razões de concentrações reservatório ii fetal/reservatório materno de aproximadamente 0,18 para ambos os enantiômeros. As razões enantioméricas R-(+)/S-(-) de aproximadamente 1,0 nos compartimentos materno e fetal confirmam que a P-gp placentária não discrimina entre os enantiômeros da fexofenadina. As concentrações clinicamente relevantes de 50 ng de cada enantiômero da fluoxetina/mL não alteram as razões de concentrações reservatório fetal/reservatório materno, a velocidade de transferência placentária e as razões enantioméricas R-(+)/S-(-) nos compartimentos materno e fetal. As razões de concentrações dos enantiômeros da fexofenadina reservatório fetal/reservatório materno obtidas no modelo ex vivo são similares às razões obtidas no estudo clínico de concentrações plasmáticas veia umbilical/veia materna, inferindo a validade do modelo ex vivo de predição da transferência placentária in vivo dos enantiômeros da fexofenadina. Concluindo, os estudos in vivo e ex vivo permitem inferir que a fluoxetina inibe de maneira enantiosseletiva a P-gp intestinal e não inibe a P-gp placentária em concentrações clinicamente relevantes / Drug-drug interaction on the intestinal and placental P-glycoprotein (P-gp) plays an important role in the kinetics disposition and placental transfer of drugs during pregnancy. Fexofenadine is an antihistamine drug for seasonal allergic rhinitis and chronic urticaria treatment during pregnancy and it is available as a racemic mixture. Taken together fexofenadine as a P-gp substrate and fluoxetine, antidepressant drug used in pregnancy, as a P-gp inhibitor, this study asses the effect of fluoxetine on the enantioselective kinetic disposition of fexofenadine in pregnant women at term and their relationships with in vivo and ex vivo transplacental transfer. The in vivo study investigated 16 parturients, 8 included in Control group and 8 included in Interaction group. All of parturients received 60 mg of racemic fexofenadine in a single oral dose, while Interaction group subjects were also given 40 mg of racemic fluoxetine in a single oral dose 3 h before fexofenadine administration. Serial blood and urine samples were collected for 48 h after fexofenadine administration. Maternal blood, venous and arterial umbilical cord blood, as well as placental intervillous space blood samples were simultaneously collected at delivery (2-3 h after fexofenadine administration). The transplacental pharmacokinetics of fexofenadine enantiomers was assayed in 4 placental lobule using ex vivo placental perfusion model. Fexofenadine enantiomers were determined in plasma, urine and placental perfusate samples by LC-MS/MS equipped with the chiral column Chirobiotic® V. Pharmacokinetic parameters were determined using WinNonlin and statistical analyses were performed using R statistical software. Fexofenadine kinetics disposition is enantioselective in maternal plasma with higher AUC0-? values (423.20 vs. 267.67 ng×h/mL) and lower apparent volume of distribution values (621.37 vs. 889.83 L), apparent total clearance (66.20 vs. 105.05 L/h) and apparent renal clearance (5.25 vs. 8.78 L/h) for (R)-(+)-fexofenadine distomer. Fexofenadine placental transfer is limited, with umbilical vein/maternal vein plasma concentration ratios of approximately 0.16 for both enantiomers. R-(+)/S-(-) enantiomeric ratios of approximately 1.7 in both maternal and fetal compartments indicate that placental P-gp might not have ability of fexofenadine\'s chiral discrimination. Single oral dose administration of 40 mg of racemic fluoxetine 3 h before fexofenadine administration increased AUC0-? values (376.09 vs. 267.67 ng×h/mL) and lowered both apparent total clearance values (74.37 vs. 105.05 L/h) and apparent renal clearance (3.50 vs. 8.78 L/h) only for (S)-(-)-fexofenadine eutomer, inferring intestinal P-gp enantioselective inhibition. Single oral dose administration of 40 mg of racemic fluoxetine 3 h before fexofenadine administration [maternal plasma concentrations at delivery of 11, 9, 7 and 3 ng/mL for (S)-(+)-fluoxetine, (R)-(-)-fluoxetine, (S)-(+)-norfluoxetine and (R)-(-)-norfluoxetine enantiomers, respectively] does not change either umbilical vein/maternal vein plasma concentration ratios or R-(+)/S-(-) enantiomeric ratios in maternal and fetal compartments. In the ex vivo model, placental transfer of fexofenadine is slow and limited, presenting fetal/maternal reservoirs concentration ratios of approximately 0.18 for both enantiomers. R-(+)/S-(-) enantiomeric ratios of approximately 1.0 on maternal and fetal compartments confirm placental P-gp does not have ability of fexofenadine\'s chiral discrimination. Clinically relevant concentrations of 50 ng of each fluoxetine enantiomer/mL neither alter fetal/maternal reservoirs concentration ratios, placental transfer rate nor R-(+)/S-(-) enantiomeric ratios in maternal and fetal iv compartments. Fetal/maternal reservoirs concentration ratios of fexofenadine enantiomers obtained in the ex vivo model are similar to those obtained in the clinical study of umbilical vein/maternal vein plasma concentrations, implying the validity of ex vivo model to predict placental transfer of fexofenadine enantiomers in vivo. In conclusion, both in vivo and ex vivo studies allow us to infer that fluoxetine enantioselectively inhibits intestinal P-gp and yet does not inhibit placental P-gp at clinically relevant concentrations.

The fexofenadina is an antihistamine non sedative that acts as antagonistic selective in the outlying receivers H1 of the histamine, being used in the symptomatic treatment of allergic manifestations as medication of first choice. The project in subject has the objective of to determine and to validate methods physical-chemistries, for the evaluation of fexofenadine hydrochloride in covered tablets, for liquid chromatographic of high efficiency and zone capillary electrophoresis, both with detection for diodo array detector, for ends of to accomplish dissolution studies and to compare the quantitative methods. The two quantitative methods presented linearity, accurate, precision, specificity and robust.Dissolution of tablets of 120 and 180 mg was realize utilizing distillate water, HCl 0.1 M, buffer phosphate pH 4.5 and buffer phosphate pH 6,8 with dissolution medium, using apparatus II. The dissolution profiles obtained of each medium were compared through the comparison factors: f1, f2 and ED. Different resultes were obted of the likeness the formulation.The method based on the application of ANOVA in the use of the dissolution efficiency (ED) it is more discriminative than the f-factors. If we used the factor f2 as comparison parameter, all the means don't present difference in the formulations, but only in the medium of HCl 0,1 M, the formulations showed similarity for the parameters f1, f2 and ED, allowing to affirm that the two formulations are similar and with same performance in alive. The described methods, HPLC and CEZ, availability for variance analysis, presented equivalence for quantification of fexofenadine hydrochloride. / A fexofenadina é um anti-histamínico não sedativo que age como antagonista seletivo nos receptores periféricos H1 da histamina, sendo usada no tratamento sintomático de manifestações alérgicas como medicamento de primeira escolha. O trabalho em questão tem o objetivo de determinar e validar metodologias físico-químicas, para a avaliação de cloridrato de fexofenadina em comprimidos revestidos por cromatografia líquida de alta eficiência e eletroforese capilar de zona, ambas com detecção por DAD, para fins de realizar estudos de dissolução e comparar as metodologias quantitativas. Os dois métodos quantitativos apresentaram-se lineares, específicos, exatos, precisos e robustos. A dissolução dos comprimidos de 120 e 180 mg foi realizada nos meios de água destilada, HCL 0,1 M, tampões fosfato pH 4,5 e pH 6,8, utilizando o métodos das pás. Os perfis de dissolução obtido para as formulações em cada meio foram comparados pelos fatores de comparação: f1, f2 e ED, apresentando resultados diferentes quanto à semelhança das formulações. O método baseado na aplicação de ANOVA na utilização da eficiência de dissolução (ED) é mais discriminativo que os f-fatores. Quando usamos o fator f2 como parâmetro de comparação, os meios não apresentaram diferença nas formulações, mas somente no meio de HCl 0,1 M, as formulações mostraram similaridade para os parâmetros f1, f2 e ED, podendo apresentar o mesmo desempenho in vivo. Possibilitando a realizado de estudo de biodisponibilidade apenas com a formulação de maior dosagem.Os métodos, CLAE eECZ, avaliados por análise de variância, apresentaram-se equivalentes para quantificação de cloridrato de fexofenadina.