Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-12-17Bitstream added on 2014-06-13T19:15:14Z : No. of bitstreams: 1 tiano_gc_me_araca.pdf: 753020 bytes, checksum: 112d8897b7c84b5e590dd8fe0fffdb91 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O declínio mundial da cárie dentária é atribuído ao uso abrangente do flúor. Embora esse elemento seja capaz de proteger os dentes, seu uso excessivo pode levar a uma ação citotóxica causando a inibição do crescimento celular, da síntese de proteínas e até mesmo a morte celular. O primeiro objetivo deste estudo foi investigar a concentração ideal do NaF (NaF) capaz de ativar os fibroblastos gengivais de camundongos sem induzir morte celular. Observou-se que, nesses fibroblastos, a concentração de 40 μg F/mL induziu morte celular de 62,6 %. Na concentração de 20 μg F/mL a morte celular foi de apenas 22,1%. Com base nesses resultados, optou-se por utilizar a concentração de 20 μg F/mL como dose máxima para investigar os mecanismos envolvidos na ativação dos fibroblastos gengivais. Dessa forma, avaliou-se a capacidade do NaF induzir a expressão de MMP-2 e MMP-9 pelos fibroblastos gengivais de camundongos na presença ou ausência de LPS, assim como a produção da quimiocina CCL-3/MIP-1α e óxido nítrico. Avaliou-se também a participação das vias de sinalização intracelular p44/42, p38, PI3K e NF-кB envolvidas durante essa ativação, por meio da utilização dos respectivos inibidores PD98059 (50 μM), SB202190 (10 μM), LY294002 (30 μM) e dexametasona (10 μM). Observou-se que o NaF foi capaz de estimular os fibroblastos gengivais a expressarem MMP-9, mas não MMP-2, na concentração de 20 μg F/mL com pico máximo 6 horas após, retornando aos níveis normais 24 horas após. A produção da quimiocina CCL3/MIP-1α pelos fibroblastos estimulados pelo NaF também foi observada com a concentração de 20 μg F/mL com pico máximo 6 horas após estímulo. Na presença de LPS, observou-se uma potenciação da expressão de MMP-9 e produção de CCL3/MIP-1α na concentração de 20 μg F/mL, 6 horas após. / The worldwide decline of the dental caries is attributed to the widespread use of fluoride. Although this element is capable of protecting the teeth, its excessive use, can lead to a cytotoxic action, causing an inhibition of the cell growth, of the protein synthesis and even the cellular death. Based on these results, we have chosen to use a concentration of 20 μ g F/mL as maximum concentration to investigate the mechanisms involved in the activation of the gingival fibroblasts. It was observed that, on those fibroblasts, the concentration of 40 μg F/mL has resulted in a death cellular index of 62.6%. In the concentration of 20 μg F/mL the cellular death was of 22.1% only. Based on these results, the concentration of 20 μg F/mL has been chosen as maximum concentration to investigate the mechanisms involved in the activation of the gingival fibroblasts. Later, the ability of NaF to induce the expression of MMP-2 and MMP-9 in gingival fibroblasts of mice in the presence or absence of LPS has been assessed, as well as the production of chemokine CCL-3/MIP-1a and nitric oxide. It also evaluated the participation of intracellular signaling pathways p44/42, p38, PI3K e NF-kB involved in this activation, through inhibitors PD98059 (50 μM), SB202190 (10 μM), LY294002 (30 μM) e dexamethasone (10 μM). It was observed that the NaF was capable to stimulate the gingival fibroblasts to express MMP-9, at the concentration of 20 μgF/mL with maximum peak 6 hours after, returning to normal levels 24 hours after. The expression of MMP-2 was not observed. The production of chemokine CCL3/MIP-1α was also observed with the concentration of 20 μgF/mL with maximum peak 6 hours after the stimulation. In the presence of LPS, it was observed an intensification in the expression of MMP-9 and also in the production of CCL3/MIP-1α at the concentration of 20 μgF/mL, 6 hours later.

Submitted by JAIME GAZOLA FILHO (DINTER) null (jaime@saolucas.edu.br) on 2017-01-13T22:14:56Z No. of bitstreams: 1 Tese Jaime pdf.pdf: 1161900 bytes, checksum: 88085fe3b7f98950a6283f7926a857fd (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-01-17T19:27:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gazolafilho_j_dr_araca.pdf: 1161900 bytes, checksum: 88085fe3b7f98950a6283f7926a857fd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-17T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gazolafilho_j_dr_araca.pdf: 1161900 bytes, checksum: 88085fe3b7f98950a6283f7926a857fd (MD5) Previous issue date: 2016-12-16 / Streptococcus mutans é conhecido por sua capacidade de aderir, colonizar e formar biofilme nas superfícies dentárias. Para sobreviver na cavidade bucal, S. mutans coordena a expressão de vários genes em resposta aos fatores ambientais, como na presença de agentes antimicrobianos. Os objetivos deste estudo foram: 1) avaliar a influência de concentrações subinibitórias (sub-MIC) de fluoreto de sódio (NaF) e digluconato de clorexidina (Chx) sobre o crescimento planctônico; 2) avaliar a influência desses antimicrobianos em concentrações sub-MIC na formação de biofilme das cepas de S. mutans; 3) avaliar a expressão dos genes covR e vicR de cepas de S. mutans expostas aos sub-MIC de Chx e NaF. Cepas de S. mutans padrão (ATCC 25175 e UA159) e isolada de criança com cárie precoce da infância (3FV2) foram reativadas em BHI caldo e expostas a Chx e NaF para determinação da MIC e MBC. A partir desses valores, curvas de crescimento foram obtidas para as cepas de S. mutans expostas a concentrações sub-MIC de Chx (0,25 x MIC a 0,75 x MIC) e NaF (0,125 x MIC a 0,75 x MIC). Ensaios de biofilme foram realizados para as cepas de S. mutans expostas ou não aos sub-MIC dos agentes antimicrobianos (0,25 x MIC; 0,5 x MIC e 0,75 x MIC). A expressão dos genes covR e vicR foram avaliadas por PCR quantitativo para as cepas de S. mutans em condições planctônicas expostas a 0,125/0,25/0,5 x MIC de NaF e Chx. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística considerando p≤0,05. Os resultados mostraram que sub-MIC de Chx e de NaF afetaram o crescimento planctônico das cepas de S. mutans, de maneira dose-dependente. Sub-MIC de Chx afetou somente a formação de biofilme de 3VF2 e valores de NaF acima de 0,5 x MIC causaram redução do crescimento do biofilme para todas as cepas testadas, de maneira dose-dependente, com exceção da cepa ATCC 25175, que foi afetada igualmente por todas as concentrações avaliadas. Concentrações sub-MIC gradativas de Chx induziram a expressão crescente do gene vicR das cepas avaliadas. Quando NaF e Chx foram associados, o gene covR teve sua expressão reduzida quando expostas a 0,5 x MIC. Conclui-se que concentrações sub-MICs de NaF acima de 0,5 x MIC causaram redução do crescimento planctônico e em biofilme das cepas de S. mutans. Concentrações sub-MIC de Chx induzem a expressão de vicR podendo favorecer a formação de biofilme pelas cepas de S. mutans. / Streptococcus mutans is known for its ability to adhere, colonize and form biofilm on dental surfaces. To survive in the oral cavity, S. mutans coordinates the expression of several genes in response to environmental factors, such as in the presence of antimicrobial agents. The objectives of this study were: 1); to evaluate the influence of subinhibitory concentrations (sub-MIC) of chlorhexidine (Chx) and sodium fluoride (NaF) on planktonic growth 2) to evaluate the influence of sub-MIC of these agents on biofilm formation of S. mutans strains; 3) to evaluate the expression of the covR and vicR genes of S. mutans strains exposed to sub-MIC of Chx and NaF. Standard strains of S. mutans (ATCC 25175 or UA159) and clinical strain isolated from child with caries (3FV2) were reactivated in BHI broth and exposed to Chx and NaF for determination of MIC and MBC. From these values, growth curves were obtained for S. mutans strains exposed to sub-MIC concentrations of Chx (0.25 x MIC to 0.75 x MIC) and NaF (0.125 x MIC to 0.75 x MIC). Biofilm assays were performed for S. mutans strains exposed or not to the sub-MIC of antimicrobial agents (0.25, 0.5 and 0.75 x MIC). Expression of covR and vicR genes were evaluated by quantitative PCR for strains of S. mutans under plankton conditions exposed to 0.125 / 0.25 / 0.5 x MIC of NaF and Chx. The data were submitted to statistical analysis considering p≤0.05. The results showed that Chx and NaF sub-MIC affected planktonic growth of S. mutans strains in a dose-dependent manner. Sub-MIC of Chx only affect the biofilm formation for ATCC 25175, and, NaF values above 0.5 x MIC caused reduction of the biofilm growth for all tested strains, in a dose-dependent manner, except for ATCC 25175, which was also affected by all concentrations evaluated. Gradual sub-MIC concentrations of Chx induced increasing expression of the vicR gene of the strains evaluated. When NaF and Chx were related, the covR gene had its expression reduced when exposed to 0.5xMIC. It is concluded that sub-MICs concentrations of NaF above 0.5 x MIC caused reduction of planktonic and biofilm growth of S. mutans strains. Sub-MICs concentrations of Chx induce vicR expression and may favor biofilm formation by S. mutans strains.

Entre as várias terapêuticas propostas para o tratamento da osteoporose, a administração de altas doses de fluoreto é uma alternativa que ainda apresenta controvérsia na literatura. O fluoreto se destaca por influenciar na atividade dos osteoblastos, os quais são responsáveis por mediar a síntese de moléculas que compõem o osso. No entanto, o mecanismo de ação do fluoreto em células do tecido ósseo (osteoblastos, osteócitos e osteoclastos) ainda não está bem esclarecido. Neste trabalho foram utilizados camundongos com diferentes densidades ósseas, sendo 32 da linhagem C57BL/6J (menor densidade óssea) e 32 da linhagem C3H/HeJ (maior densidade óssea) com 60 dias de vida, os quais receberam água deionizada ou água com 50 ppm de fluoreto (na forma de NaF). Realizou-se os procedimentos cirúrgicos extraindo o incisivo superior esquerdo e posteriormente os animais foram eutanasiados 7, 14, 21 e 28 dias após a extração. Imediatamente após a eutanásia, foi removida a peça com alvéolo dental esquerdo. Foram feitas análises descritiva e morfométrica das lâminas obtidas (coloração em Hematoxilina Eosina). Foi utilizada análise ANOVA a quatro critérios seguida da análise de Tukey (p<0,05). Em geral, para todos os grupos, a análise histológica mostrou neoformação óssea à partir das paredes do alvéolo e formação de ilhotas ósseas invadindo o centro dos alvéolos, substituindo o tecido conjuntivo existente. O tecido ósseo neoformado substituiu aos poucos o tecido conjuntivo ao longo dos períodos experimentais, sendo esse fenômeno ligeiramente mais evidente nos camundongos da linhagem C57BL/6J. A análise morfométrica confirmou os achados histológicos em relação à quantidade de tecido ósseo neoformado e mostrou diminuição do tecido ósseo neoformado no último período (28 dias) nos animais C3H/HeJ (grupos controle e experimental). Concluimos que o processo de reparo ósseo alveolar é semelhante nas duas linhagens estudadas, porém apresentam padrão de formação óssea diferentes entre elas. O fluoreto parece influenciar as etapas do processo de reparo alveolar nas duas linhagens, aumentando a quantidade de osso neoformado, no entanto, a linhagem de camundongos C57BL/6J é mais propensa aos efeitos do flúor. / Among the various therapeutic proposals for the osteoporosis treatment, the administration of high doses of fluoride is an alternative that still has controversies in literature. Fluoride is highlighted by influencing the activity of osteoblasts, which are responsible for mediating the synthesis of bone. But, the mechanism of action of fluoride on bone cells (osteoblasts, osteocytes and osteoclasts) is not well understood. This way, this study aims to evaluate the alveolar bone repair in rats under the effect of fluoride (NaF) administered in the water. This work were used four groups of strains C57BL/6J mice (total of 32) and C3H/HeJ (total of 32) for 60 days, which received deionized water or water with 50 ppm of fluoride. The surgical procedures were made by extracting the upper left incisor and then the animals were euthanized 7, 14, 21 and 28 days. Histological analysis (Hematoxylin Eosin staining), by light microscopy, were made. The statistical analysis were made using the statistical test one-way ANOVA complemented by Tukey\'s test (p <0.05). Generally, for all groups, the histological analysis showed a new bone formed from the alveolar walls, replacing the connective tissue. The newly formed bone tissue gradually replaces the connective tissue over time; wich was more evident in C57BL/6J mice. Morphometric analisys confirmed the histological findings of the new bone formed and showed a decrease in the new formed bone in the last period (28 days) of the C3H/HeJ animals. We concluded that the process of alveolar repair is similar when it respects to the stages of repair, however they presents different pattern of new bone formation. The fluoride influences the stages of alveolar repair in both lineages, increasing the amount of bone formed, however the mice lineage of C57BL/6J is more prone to the effects of fluoride.

O balanço do fluoreto (F) dentro do corpo é modulado por sua ingestão, absorção e remoção, e os rins, responsáveis pela sua excreção do organismo, são particularmente vulneráveis à toxicidade do F. Os efeitos nefrotóxicos do F envolvem mudanças estruturais marcantes nos rins, além disso, estudos proteomicos têm mostrado grandes alterações no perfil de proteínas envolvidas em pontos chave na transdução de sinal. Estes efeitos podem influenciar negativamente no transporte iônico nos rins. A vista deste fato, o transporte iônico no canal de sódio epitelial (ENaC) é limitante para a taxa de reabsorção de sódio nos rins, sendo essencial para a manutenção do equilíbrio eletrolítico e homeostase do corpo. Assim, este trabalho objetivou investigar os efeitos do F, utilizando concentrações semelhantes às que podem ser encontradas no néfron durante a fluorose dentária, na viabilidade celular e expressão de transportadores de membrana (ENaC) em linhagem celular renal M-1. Para os ensaios de viabilidade das células da linhagem M-1 foi empregado os testes colorimétricos Cristal Violeta e MTT, utilizando as concentrações de tratamento com fluoreto de sódio (NaF) a 10, 40, 100, 200 e 400 M, durante períodos experimentais de 24, 48, 72 e 96 h. As mesmas concentrações e os mesmos tempos foram utilizados no tratamento com cloreto de sódio (NaCl), utilizado como controle na possível interferência de Na+ na modulação das células. Para a investigação da influência do F: 1) nos canais ENaC foi utilizada a técnica de imunofluorescência e 2) para a análise de expressão gênica das subunidades que formam o ENaC, foi utilizada a técnica RT-PCR. Em nossos resultados pudemos observar que as maiores concentrações tanto de NaF quanto de NaCl provocaram a diminuição da viabilidade celular para ambos os ensaios de viabilidade, no entanto, foi possível observar algumas diferenças na resposta do tratamento com NaF em comparação com NaCl, por meio do ensaio Cristal Violeta. Não foi observado diferenças nas imagens de imunofluorescêcia, mas outros aspectos morfológicos foram vistos nessas imagens, como o aparecimento de domes celular, sugerindo que até mesmo a maior concentração de F não foi capaz de inibir a proliferação celular. Nosso resultado mais significativo foi em relação à expressão das subunidades dos canais de ENaC, onde a concentração de 400 M foi capaz de diminuir bruscamente a expressão das três subunidades do ENaC, enquanto as concentrações de 100 e 200 M mostraram apresentar expressão igual e em alguns casos até maior que o grupo controle. Pudemos concluir que doses de F na ordem de micromolares podem modular a expressão das subunidades formadoras do ENaC, positivamente quando em baixas concentrações e negativamente quando em concentrações elevadas. / The balance of fluoride (F) within the body is modulated by its ingestion, absorption and removal, and the kidneys, responsible for their excretion of the organism, are particularly vulnerable to the toxicity of F. The nephrotoxic effects of F involve marked structural changes in the kidneys , in addition, proteomic studies have shown large changes in the profile of proteins involved in key points in signal transduction. These effects may negatively influence ion transport in the kidneys. In view of this fact, the ionic transport in the epithelial sodium channel (ENaC) is limiting to the rate of sodium reabsorption in the kidneys, being essential for the maintenance of the electrolyte balance and homeostasis of the body. Thus, the objective of this work was to investigate the effects of F, using concentrations similar to those found in the nephron during dental fluorosis, cell viability and expression of membrane transporters (ENaC) in renal cell line M-1. For the M-1 cell line viability assays, the Crystal Violet and MTT colorimetric assays were used, using the 10, 40, 100, 200 and 400 M sodium fluoride (NaF) treatment concentrations during experimental periods of 24, 48, 72 and 96 h. The same concentrations and the same times were used in the treatment with sodium chloride (NaCl), used as control in the possible interference of Na + in the modulation of the cells. For the investigation of the influence of F: 1) in the ENaC channels, the immunofluorescence technique was used and 2) for the analysis of gene expression of the subunits that form the ENaC, the RT-PCR technique was used. In our results it was observed that the higher concentrations of NaF and NaCl caused a decrease in cell viability for both viability assays, however, it was possible to observe some differences in NaF treatment response in comparison to NaCl, through test Crystal Violet. No differences were observed in immunofluorescence images, but other morphological aspects were seen in these images, such as the appearance of cellular \"domes\", suggesting that even the highest F concentration was not able to inhibit cell proliferation. Our most significant result was the expression of the subunits of the ENaC channels, where the concentration of 400 M was able to decrease expression of the three subunits of the ENaC, whereas the concentrations of 100 and 200 M showed equal expression and in some cases even higher than the control group. We can conclude that doses in the order of micromolar the F can modulate the expression of the ENaC forming subunits, positively when in low concentrations and negatively when in high concentrations.

O tecido ósseo possui alto grau de rigidez e resistência à pressão, característica relacionada às suas funções de proteção, sustentação e locomoção. Patologias como periodontite, artrite reumatóide e osteoporose decorrem do desequilíbrio da dinâmica óssea, que ocorre quando os osteoclastos estão em maior atividade em relação aos osteoblastos. O fluoreto (F-) é incorporado nos tecidos mineralizados após ingestão e a sua administração aumenta a formação óssea in vivo, de maneira dependente da dose e da linhagem dos animais. As linhagens A/J e 129P3/J possibilitam a análise dos fenômenos moleculares envolvidos na suscetibilidade e resistência de células ósseas aos efeitos do F- no osso. Neste estudo, avaliou-se a administração in vivo de F- na osteoclastogênese, através da análise da atividade da enzima fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP), contagem de células TRAP- positivas e quantificação da atividade das metaloproteinases MMP-2 e -9. Para tal, células hematopoiéticas provenientes da medula óssea de camundongos das linhagens 129P3/J e A/J foram cultivadas com M-CSF e RANKL em associação ou não com F-, nas concentrações de 10- 9, 10-7, 10-5, 5x10-5, 5x10-5, 10-4 e 10-3 M. Os dados mostraram que a atividade da TRAP foi semelhante entre as células das duas linhagens de animais, independente do F-. Concomitante à diferenciação osteoclástica, o tratamento das células com F-, independente da concentração, aumentou significativamente a atividade da TRAP em células da linhagem A/J. O aumento da atividade de TRAP foi associada com o aumento do número de osteoclastos formados, na concentração de 10-3 M F-. Já em células dos animais 129P3/J, o F- não alterou a atividade da TRAP bem como a osteoclastogênese. A atividade de MMP-9 foi aumentada em relação à da MMP-2, porém ambas não foram moduladas pelo F-, independente da linhagem. Assim, concluiu-se que as células de ambas as linhagens não diferem com relação à diferenciação de osteoclastos, mas respondem diferentemente ao F-, sendo as células dos animais A/J e 129P3/J sensíveis e resistentes à osteoclastogênese induzida pelo F-, respectivamente. / The bone tissue has a high degree of rigidity and pressure resistance, characteristic related to its protection, support and locomotion functions. Diseases such as periodontitis, osteoporosis and rheumatoid arthritis arise from dynamic bone imbalance that occurs when osteoclasts present increased activity compared to osteoblasts. Fluoride (F-) is incorporated in mineralized tissues after ingestion and its administration increases in vivo bone formation in dose and strain-dependent manner. The strains A/J and 129P3/J make possible the analysis of molecular phenomena involved in susceptibility and resistance of bone cells to the effect of F- in bone. In this study, we evaluated the effect of F- on the in vitro osteoclastogenesis, by analyzing the fosfatase tartrate-resistant acid (TRAP) activity, TRAP positive cell counts and the activity of MMP-2 and -9 measurements in A/J and 129P3/J differentiated hematopoietic stem cells. Hematopoietic cells were differentiated with M-CSF and RANKL and treated or not with F- in the concentrations of 10-9, 10-7, 10-5, 5x10-5, 5x10-5, 10-4 and 10-3 M.The data show that TRAP activity, an osteoclast marker, was similar between cells from both strains of mice, regardless of F-. In addition, the treatment of A/J cells with F- significantly increased TRAP activity, in a dose-independent manner. This was accompained by the increased TRAP+-osteoclast counts, at 10-3 M F- dose. However, while the MMP-9 activity was aumented when compared to MMP-2, it was not altered by F-, regardless of the strain. Thus, we concluded that cells from both strains do not differ regarding the osteoclast differentiation potential, but they respond differently to F-, whereas A/J and 129P3/J cells are sensitive and resistant to F--induced osteoclastogenesis, respectively.

O íon fluoreto (F) provém do elemento flúor. Sua absorção é inversamente relacionada ao pH e ocorre rapidamente no estômago e posteriormente no intestino delgado. Após sua absorção, o F é distribuído pelos tecidos através da corrente sanguínea e armazenado nos tecidos calcificados e moles. Sua excreção acontece por via renal. Trata-se de um elemento relevante em termos de Saúde Pública, devido às suas propriedades de prevenir ou reverter lesões cariosas em indivíduos de todas as idades. No entanto, sua ingestão excessiva é capaz de afetar o metabolismo ósseo e desenvolvimento do esmalte dentário. Estudos sugerem que o F pode interferir em vias metabólicas, inibindo a ação de diversas enzimas. Entretanto, a literatura é conflitante em relação aos seus efeitos na homeostasia da glicose, o que poderia, talvez, ser explicado pela diferença genética entre as linhagens utilizadas. Sabe-se que camundongos da linhagem A/J são extremamente sensíveis aos efeitos do F, enquanto que os camundongos da linhagem 129P3/J são altamente resistentes ao tratamento com esse íon. Por este motivo, foi investigado se esses animais que sabidamente apresentam uma expressão proteica diferencial em função do F devido ao seu background genético apresentam também respostas diferentes em parâmetros bioquímicos (glicemia jejum, insulinemia, índice de resistência à insulina [HOMA2-IR] e teste de tolerância à insulina) e imunológicos (TNF-&alpha;). Após aprovação da Comissão de ética, 156 animais (78 da linhagem A/J e 78 da linhagem 129P3/J) foram divididos em 3 grupos para cada linhagem, e tratados por um período de 42 dias com doses de 0, 15 ou 50 ppm de F na água e ração com baixo teor de F. Após o término do tratamento, os camundongos foram eutanasiados para a obtenção de amostras de sangue. Os dados foram analisados por ANOVA a 2 critérios e testes de Tukey e Sidak para comparações individuais (p<0,05). Para a glicemia, os animais A/J que receberam água sem F e com a dose de 15 ppm F tiveram glicemia significativamente mais alta que os animais 129P3/J que receberam o mesmo tratamento. Para as dosagens de insulina no plasma, houve diferença significativa apenas entre os camundongos A/J 0 ppm F e 50 ppm F, sendo mais baixa a insulinemia para os animais tratados. O índice HOMA2-IR mostrou diferença significativa somente entre os animais da linhagem A/J, sendo que o grupo que recebeu água contendo 50 ppm F apresentou valores menores quando comparado para os grupos 0 ppm F e 15 ppm F. Quanto ao TNF-&alpha;, não foi observada diferença significativa entre as linhagens e entre os tratamentos. Entretanto, houve uma tendência para seu aumento nos grupos tratados com água contendo 15 ppm F nas duas linhagens. Para o teste de tolerância à insulina, também não foram observadas diferenças significativas entre as linhagens, nem entre os tratamentos. Levando em consideração os resultados, percebe-se que as diferentes concentrações de F alteram os resultados para os parâmetros analisados, e, as linhagens respondem diferentemente a essas alterações. No entanto, é necessário que se analisem outras variáveis para que esse assunto seja melhor elucidado. / Fluoride (F) comes from the element fluorine. Its absorption is inversely related to the pH and occurs quickly in the stomach and later in the small intestine. After absorption, F is distributed to the tissues through the bloodstream and stored in calcified and soft tissues. Excretion occurs via the kidneys. It is an important element in terms of public health, due to its properties to prevent or reverse caries in individuals of all ages. However, its excessive intake can affect bone metabolism and the development of tooth enamel. Studies suggest that F can interfere with metabolic pathways, by inhibiting the action of several enzymes. However, there is contradiction in the literature regarding its effects on glucose homeostasis, which could possibly be explained by genetic differences between the strains used. A/J mice are extremely sensitive to the effects of F, whereas 129P3/J mice are highly resistant to treatment with this ion. For this reason, it was investigated whether these animals which are known to exhibit differential protein expression upon exposure to F due to their genetic background also exhibit distinct responses in biochemical (fasting glucose, insulin, insulin resistance index [HOMA2-IR] and insulin tolerance test) and immune (TNF-&alpha;) parameters. After approval by the Ethics Committee, 156 animals (78 of A/J strain and 78 of 129P3/J strain) were obtained, divided into 3 groups for each strain and treated for a period of 42 days with 0, 15 or 50 ppm F in the drinking water. They received low-F diet. After treatment, the mice were euthanized and blood samples were obtained. Data were analyzed by 2-way ANOVA and Tukey and Sidak tests for individual comparisons (p<0.05). For blood glucose analysis, A/J mice treated with water containing no F containing 15 ppm F had significantly higher levels of glucose than 129P3/J animals receiving the same treatment. For plasma insulin, there was significant difference only between A/J mice treated with no F and 50 ppm F, with lower values for the treated animals. HOMA2-IR index showed a significant difference only between A/J animals, where the group received water containing 50 ppm F had lower values when compared to those receiving water containing no F or 15 ppm F. Regarding TNF-&alpha;, no significant differences were observed between the strains or among the treatments. However, there was a trend towards an increase in the groups treated with water containing 15 ppm F for both strains. For insulin tolerance test, also no significant differences between the strains or among treatments were observed. The results suggest that the different F concentrations alter the results of the parameters analyzed, and the strains respond differently to these changes. However, it is necessary to analyze other variables in order to better elucidate these findings.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-03-29T17:49:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO - DANIEL AZEVEDO.pdf: 2684891 bytes, checksum: c5cf0ad3eed5c462740d0bce638484d1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-29T17:49:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO - DANIEL AZEVEDO.pdf: 2684891 bytes, checksum: c5cf0ad3eed5c462740d0bce638484d1 (MD5) Previous issue date: 2015-05-13 / FACEPE / As radiações ionizantes são amplamente utilizadas em aplicações médicas e industriais, requerendo sempre o uso de dosímetros para a avaliação da dose recebida pelos trabalhadores e pacientes, bem como para o controle de qualidade dos processos. Dentre os materiais sensíveis utilizados para a dosimetria das radiações destaca-se o fluoreto de cálcio (CaF2) que apresenta uma resposta termoluminescente sensível a baixas doses de radiação. Este trabalho tem por objetivo a síntese do CaF2 dopado com túlio através do método de combustão e sua caracterização para aplicações dosimétricas das radiações ionizantes. A análise por difração de raios X mostrou que o material produzido era de fato CaF2 e estudos do espectro de emissão TL mostraram a presença das linhas espectrais do Tm3+, sendo as principais linhas centradas em 455 nm 482 nm. Dentre os parâmetros de fabricação, observou-se que a melhor concentração do dopante foi de 0,20 mol% em relação ao cálcio; a condição de temperatura, tempo e atmosfera de sinterização que mais aumentou a intensidade TL foi 400 °C por 8 h no ar. A resposta em função da dose para a radiação gama do 137Cs e 60Co mostrou ser linear para a faixa entre 100 μGy e 100 Gy. A partir dos resultados pode-se concluir que o CaF2:Tm produzido pelo método de combustão tem potencial para ser utilizado como dosímetro em aplicações das radiações ionizantes. / Ionizing radiations are widely used for medical and industrial applications, always requiring the presence of dosimeters to evaluate the absorbed dose on workers and patients, as well as for quality control of processes. Among the materials available for radiation dosimetry, calcium fluorite (CaF2) is one of the most sensitive thermoluminescent (TL), used in low radiation dosimetry. The aim of this work is to synthesize a thulium doped CaF2 by the combustion method, and characterize it for dosimetric applications of ionizing radiations. The X-ray diffraction analysis showed that CaF2 was in fact produced. Studies of TL emission spectrum, after irradiation with 60Co, showed the presence of Tm3+ spectral lines, with larger intensities for 455 nm and 482 nm. The optimum fabrication parameters were: Tm concentration of 0.20 mol% in relation to calcium, with 400 °C post combustion sintering for 8 h, in air. The analysis of TL response a linear dose response in the range of 100 μGy to 100 Gy. Therefore, it was concluded that CaF2:Tm produced by the combustion method can be used as a dosimeter for ionizing radiation.

Submitted by Mirian Silva (mirian.pereira@uniceub.br) on 2015-10-08T23:33:03Z No. of bitstreams: 1 Influencia do tempo (6) ok.pdf: 358016 bytes, checksum: 31f9923438aa951579acb64080ccce3b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-08T23:33:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Influencia do tempo (6) ok.pdf: 358016 bytes, checksum: 31f9923438aa951579acb64080ccce3b (MD5) Previous issue date: 2012 / A dosagem da glicemia é empregada para estudo do metabolismo da glicose tanto no controle de produção, consumo e também no armazenamento, assim podem ser diagnosticados os diversos estados de hiperglicemia e hipoglicemia, podendo ser medidos por exames laboratoriais utilizando sangue venoso. É visto que após a coleta do sangue, as células sanguíneas continuam a degradar a glicose gerando um decréscimo de aproximadamente 10mg/dL por hora à temperatura ambiente a não ser que se adicione um preservativo, sendo o fluoreto o mais indicado por ser inibidor da glicólise. Este estudo teve por objetivo comparar o uso de dois anticoagulantes diferentes (fluoreto e EDTA) para avaliar a estabilidade da glicemia em temperatura ambiente e ainda correlacionar as glicemias obtidas para os dois tipos de anticoagulantes determinando a diferença entre elas devido ao fator de tempo. Para a realização do trabalho foram coletadas 30 amostras de sangue total por punção venosa de voluntários de ambos os sexos sem restrição de idade e sem necessidade de jejum. Os resultados obtidos confirmaram que na primeira hora houve a queda de aproximadamente 10mg/dL para os dois anticoagulantes utilizados, seguido de estabilização com o anticoagulante fluoreto e um decréscimo progressivo com o uso do anticoagulante EDTA. Isto concorda com o fato de que o tempo é um fator determinante na dosagem da glicemia influenciando na estabilidade da amostra e na confiabilidade dos resultados podendo gerar resultados não verdadeiros.

A cidade de Ribeirão Preto é abastecida com água proveniente do Aquífero Guarani, sendo apenas fluoretada e clorada antes da distribuição. O objetivo desse trabalho foi avaliar a qualidade da água que a população está consumindo com relação às concentrações de fluoreto, chumbo e ferro. Além disso, foi investigada se a concentração de ferro poderia ser utilizada como marcadora da contaminação por chumbo na água potável. Foram investigadas 145 residências de 4 bairros antigos de Ribeirão Preto (casas com mais de 40 anos), havendo pelo menos uma criança moradora por residência. Um bairro novo (menos de 10 anos) foi escolhido para controle. Amostras de água foram coletadas na torneira da cozinha e do quintal, sendo a 1ª alíquota coletada após pelo menos 6 h de estagnação e a 2ª alíquota após 5 minutos de escoamento. A concentração dos íons fluoreto foi determinada por eletrodo combinado íon-seletivo e cromatografia iônica; chumbo por ET AAS e ICP-MS; e ferro por espectrofotometria. As concentrações de fluoreto nas amostras (n = 281) variaram de 0,052 a 1,01 mg L-1. Considerando apenas 1 algarismo significativo e as amostras provenientes da cozinha, observou-se que 30% das casas estiveram fora do padrão de potabilidade estabelecido pela Resolução SS-65 (2005), isto é, de 0,6 a 0,8 mg L-1. Considerado 2 algarismos, essa percentagem passou para 45%. Um baixo consumo de fluoreto pelas crianças pode não prevenir eficientemente a formação de cáries, enquanto que concentrações elevadas podem levar à fluorose dentária. As concentrações de chumbo variaram de 0,025 a 58,4 µg L-1 (n = 562), sendo que a concentração máxima permitida pela Portaria 2.914 (Ministério da Saúde) é de 10,0 µg L-1. Para todas as casas avaliadas, as concentrações de chumbo na água da torneira da cozinha não ultrapassaram 5,00 µg L-1, caracterizando um baixo risco de contaminação por chumbo por essa via. Para 2 alíquotas de água coletadas na torneira do quintal, a concentração de chumbo ultrapassou o limite tolerável para chumbo, porém, o uso dessa água para ingestão é pouco usual. Possivelmente a contaminação observada seja oriunda da própria torneira e outras partes metálicas, pois após escoamento da água por 5 minutos, a concentração de chumbo caiu dentro dos valores permitidos. As concentrações de ferro variaram de 13,40 a 4.119 µg L-1 (n = 189; 1ª alíquota), sendo a concentração máxima permitida de 300 µg L-1 (Portaria 2.914). Em 4 casas a água do quintal apresentou concentração superior a permitida, mas na água da cozinha a concentração foi de 8 a 66 vezes menor. Isso indica que a torneira do quintal pode ser uma grande fonte de contaminação de ferro. Apesar do coeficiente de correlação linear entre a concentração de ferro e chumbo na água ser estatisticamente significativo (r = 0,410; n = 184), essa correlação foi relativamente baixa para sugerir o uso do ferro como marcador da contaminação por chumbo. / The city of Ribeirão Preto is supplied with water from the Guarani Aquifer, that is only fluoridated and chlorinated before distribution. The objective of this study was to evaluate the quality of drinking water that the population is consuming with respect to the concentrations of fluoride, lead and iron. Furthermore, it was investigated if the concentration of iron could be used as a marker to infer lead contamination in drinking water. We investigated 145 residences with more than 40 years of age in 4 districts of Ribeirão Preto, with at least one resident child. One new district (less than 10 years) was selected as a control group. Water samples were collected from the kitchen and the yard taps. The 1st aliquot was collected after at least 6 h of stagnation and the 2nd after leaving the water running for 5 minutes. The concentration of fluoride ions was determined by combined ion-selective electrode and ion chromatography; lead by ET AAS and ICP-MS; and iron by spectrophotometry. The fluoride concentrations in the samples varied from 0.052 to 1.01 mg L-1 (n = 281). Considering only 1 significant digit and the kitchen samples, it was observed that 30% of the homes did not attend the legislation for fluoride in drinking water (Resolution SS-65, 2005), that is, from 0.6 to 0.8 mg L-1. Considering 2 significant digits, this percentage increased to 45%. A low intake of fluoride by children cannot effectively prevent the formation of dental caries, while high concentrations can cause dental fluorosis. Lead concentrations ranged from 0.025 to 58.4 µg L-1 (n = 562), and the maximum permited by the law 2,914 (Ministry of Health) is 10.0 µg L-1. For all homes investigated, lead concentrations from the kitchens tap water did not exceed 5.00 µg L-1, showing there is a low risk of lead contamination through this pathway. For 2 aliquots of water collected from the yards tap, the concentration of lead exceeded the tolerable limit, however, the use of this water for ingestion is unusual. Possibly this contamination might come from the tap itself and from others metal parts, because after running the water for 5 minutes the lead concentration fell below the permitted value. Iron concentrations varied from 13.40 to 4,119 µg L-1 (n = 189, 1st aliquot), and the tolerable limit is 300 µg L-1 (law 2.914). In 4 houses the water from the year tap had concentrations above the limit, while in the kitchen water iron concentrations were from 8 to 66 times lower. This indicates that the tap material from the yard can be a large source of iron contamination. Although the linear correlation coefficient between iron and lead concentrations in the drinking water was statistically significant (r = 0.410; n = 184), this correlation was relatively low to suggest the use of iron as a marker of contamination by lead.

Fluoreto presente em águas de abastecimento, pode ser determinado por titulação condutométrica, usando-se La(NO3)3 como titulante. O método proposto no presente trabalho exige a separação prévia de fluoreto da amostra, por destilação a 135&#186;C. O pH do destilado é ajustado entre 5,5 - 6,0; etanol é adicionado até atingir-se a proporção de 50%, titulando-se a solução resultante com La(NO3)3. Nessas soluções, fluoreto nas concentrações de 500 ppb e 2,0 ppm podem ser determinadas com precisões de 5% e 4%, respectivamente. Amostras naturais foram analisadas condutometricamente pelo método proposto, potenciometricamente com eletrodo íon seletivo de fluoreto, obtendo-se resultados compatíveis. / Fluoride ions in drinking water can be easily determined by condutometric titraction using La(NO3)3 as titrant. The sample must be destilled in H2S04 previously to separate the fluoride ions, at 1350 C. The destillated, in 50% ethanol is titrated with La(NO3)3 In these conditions, fluoride ions at the concentrations of 500 ppb and 2,0 ppm are determined with accuracy of, respectively, 5% and 4%. Natural samples of drinking water were analysed by this method and by the ion-selective method, with agreement among the results.