Os enantiômeros de um fármaco administrado como mistura racêmica, podem manifestar diferentes efeitos farmacológicos e toxicológicos. A fluvastatina (FV), um inibidor da HMG-CoA redutase, é comercializada como mistura racêmica dos enantiômeros (-)-3S,5R e (+)-3R,5S (eutômero) e com eliminação no homem essencialmente dependente do CYP2C9. O metanol, amplamente usado como solvente, combustível e em processos de sínteses, é um inibidor do CYP2C9 em humanos. Diante do exposto, o estudo visou avaliar a influência do metanol na farmacocinética enantiosseletiva da fluvastatina administrada sob forma racêmica a ratos. Foram investigados ratos machos Wistar tratados com dose única de 5 mg/kg de fluvastatina racêmica administrada por gavagem. Os animais foram divididos em três grupos: controle e expostos a metanol em concentrações de 262 mg/m3 e 1048 mg/m3. A exposição ao metanol foi feita em câmara de exposição do tipo apenas pelo nariz, em sessões consecutivas de 6 horas com intervalos de 2 horas, durante o período de 30 horas de coletas seriadas de sangue. Os enantiômeros da FV foram analisados em HPLC com amostrador automático e detecção por fluorescência, operando em 305 nm para excitação e 390 nm para emissão. A análise farmacocinética foi realizada por modelo bicompartimental e cinética de primeira ordem. Os resultados são reportados como medianas, médias e respectivos intevalos de confiança (95%). A farmacocinética da fluvastatina é enantiosseletiva em ratos do grupo controle com acúmulo plasmático do enantiômero (-)-3S,5R, com AUC0-? (2,97 vs 0,99 ?g.h.mL-1), volume de distribuição (9,80 vs 44,60 L.kg-1) e clearance aparente (0,85 vs 2,52 L.h-1.kg-1). A disposição cinética da fluvastatina nos animais do grupo metanol 262 mg/m3, à semelhança do grupo controle foi enantiosseletiva com observação de acúmulo plasmático do enantiômero (-)-3S,5R. Não foram observadas diferenças nas razões enantioméricas entre os animais do grupo controle e metanol 262 mg/m3. As diferenças para o eutômero (+)-3R,5S entre os grupos controle e metanol (1048 mg/m3) foram respectivamente: Cl/F 2.52 (1.64- 3.40) vs 1.51 (1.01-2.06) L.h-1.Kg-1; Vd/F 44.60 (19.20-55.49) vs 10.45 (7.20-15.96) L.Kg-1; t1/2? 10.85 (5.92-14,47) vs 5.23 (4.22-6.27) h; ? 0.06 (0.04-0.11) 0.13 (0.10- 0.16)h-1, AUC 0-? 991.79 (689.57-1491.00) vs 1647.20 (1155.30-2391.60) ng.h.mL-1,e AUC(-)/AUC(+) 2.50 (2.03-4.06) vs 1.22 (0.96-1.56). Em resumo, os dados evidenciam que a exposição ao metanol (1048 mg/m3) resulta em perda da enantiosseletividade com inibição do metabolismo somente do eutômero (+)-3R,5S, alterando portanto de maneira enantiosseletiva a disposição cinética da FV administrada a ratos. / Dislipidemia is one of the main causes of cardiovascular illness and very frequent in the adults population. Fluvastatin, a racemic mixture of the (-)-3S,5R and (+)-3R,5S enantiomers, has been shown to be a potent competitive inhibitor of HMGCoA reductase used in the hypercholesterolemia treatment and with elimination in the man essentially dependent of the CYP2C9. Methanol is used by solvent and is an inhibitor of the CYP2C9 in human beings. The present study reports the influence of methanol inhalation on the enantiosselective pharmacokinetics of fluvastatin in rats. Fluvastatin was administrated by oral gavage (5 mg/Kg) to the animals (n=6/time) and blood samples were collected until 30 hours. The enantiomers were analysed by HPLC using Chiralcel® OD-H column and fluorescence detection. The pharmacokinetics parameters were analysed by Wilcoxon and Mann-Witney tests. The results are reported as mean (95% CI). Kinetic disposition of FV for animals exposed to methanol (262mg/m3), as for control group, was enantiosselective with plasma accumulation of (-)-3S,5R enantiomer. The following differences (p< 0.05) were observed between the control and methanol (1048 mg/m3), apparent total clearance (Cl/F) of 2.52 (1.64-3.40) vs 1.51 (1.01-2.06) L.h-1.Kg-1; apparent volume of distribution (Vd/F) of 44.60 (19.20-55.49) vs 10.45 (7.20-15.96) L.Kg-1; elimination half life (t1/2?) of 10.85 (5.92-14,47) vs 5.23 (4.22-6.27) h; elimination rate constant (?) of 0.06 (0.04-0.11) 0.13 (0.10-0.16) h-1, area under the plasma concentration versus time curve (AUC 0-?) of 991.79 (689.57-1491.00) vs 1647.20 (1155.30- 2391.60) ng.h.mL-1, and AUC(-)/AUC(+) 2.50 (2.03-4.06) vs 1.22 (0.96-1.56). The data demonstrated that methanol inhalation at 1048 mg/m3 results in loss of enantioselectivity with plasmatic accumulation of (+)-3R5S, modifying the enantioselective kinetic disposition of Fluvastatin in rats.

Os enantiômeros de um fármaco administrado como mistura racêmica, podem manifestar diferentes efeitos farmacológicos e toxicológicos. A fluvastatina (FV), um inibidor da HMG-CoA redutase, é comercializada como mistura racêmica dos enantiômeros (-)-3S,5R e (+)-3R,5S (eutômero) e com eliminação no homem essencialmente dependente do CYP2C9. O metanol, amplamente usado como solvente, combustível e em processos de sínteses, é um inibidor do CYP2C9 em humanos. Diante do exposto, o estudo visou avaliar a influência do metanol na farmacocinética enantiosseletiva da fluvastatina administrada sob forma racêmica a ratos. Foram investigados ratos machos Wistar tratados com dose única de 5 mg/kg de fluvastatina racêmica administrada por gavagem. Os animais foram divididos em três grupos: controle e expostos a metanol em concentrações de 262 mg/m3 e 1048 mg/m3. A exposição ao metanol foi feita em câmara de exposição do tipo apenas pelo nariz, em sessões consecutivas de 6 horas com intervalos de 2 horas, durante o período de 30 horas de coletas seriadas de sangue. Os enantiômeros da FV foram analisados em HPLC com amostrador automático e detecção por fluorescência, operando em 305 nm para excitação e 390 nm para emissão. A análise farmacocinética foi realizada por modelo bicompartimental e cinética de primeira ordem. Os resultados são reportados como medianas, médias e respectivos intevalos de confiança (95%). A farmacocinética da fluvastatina é enantiosseletiva em ratos do grupo controle com acúmulo plasmático do enantiômero (-)-3S,5R, com AUC0-? (2,97 vs 0,99 ?g.h.mL-1), volume de distribuição (9,80 vs 44,60 L.kg-1) e clearance aparente (0,85 vs 2,52 L.h-1.kg-1). A disposição cinética da fluvastatina nos animais do grupo metanol 262 mg/m3, à semelhança do grupo controle foi enantiosseletiva com observação de acúmulo plasmático do enantiômero (-)-3S,5R. Não foram observadas diferenças nas razões enantioméricas entre os animais do grupo controle e metanol 262 mg/m3. As diferenças para o eutômero (+)-3R,5S entre os grupos controle e metanol (1048 mg/m3) foram respectivamente: Cl/F 2.52 (1.64- 3.40) vs 1.51 (1.01-2.06) L.h-1.Kg-1; Vd/F 44.60 (19.20-55.49) vs 10.45 (7.20-15.96) L.Kg-1; t1/2? 10.85 (5.92-14,47) vs 5.23 (4.22-6.27) h; ? 0.06 (0.04-0.11) 0.13 (0.10- 0.16)h-1, AUC 0-? 991.79 (689.57-1491.00) vs 1647.20 (1155.30-2391.60) ng.h.mL-1,e AUC(-)/AUC(+) 2.50 (2.03-4.06) vs 1.22 (0.96-1.56). Em resumo, os dados evidenciam que a exposição ao metanol (1048 mg/m3) resulta em perda da enantiosseletividade com inibição do metabolismo somente do eutômero (+)-3R,5S, alterando portanto de maneira enantiosseletiva a disposição cinética da FV administrada a ratos. / Dislipidemia is one of the main causes of cardiovascular illness and very frequent in the adults population. Fluvastatin, a racemic mixture of the (-)-3S,5R and (+)-3R,5S enantiomers, has been shown to be a potent competitive inhibitor of HMGCoA reductase used in the hypercholesterolemia treatment and with elimination in the man essentially dependent of the CYP2C9. Methanol is used by solvent and is an inhibitor of the CYP2C9 in human beings. The present study reports the influence of methanol inhalation on the enantiosselective pharmacokinetics of fluvastatin in rats. Fluvastatin was administrated by oral gavage (5 mg/Kg) to the animals (n=6/time) and blood samples were collected until 30 hours. The enantiomers were analysed by HPLC using Chiralcel® OD-H column and fluorescence detection. The pharmacokinetics parameters were analysed by Wilcoxon and Mann-Witney tests. The results are reported as mean (95% CI). Kinetic disposition of FV for animals exposed to methanol (262mg/m3), as for control group, was enantiosselective with plasma accumulation of (-)-3S,5R enantiomer. The following differences (p< 0.05) were observed between the control and methanol (1048 mg/m3), apparent total clearance (Cl/F) of 2.52 (1.64-3.40) vs 1.51 (1.01-2.06) L.h-1.Kg-1; apparent volume of distribution (Vd/F) of 44.60 (19.20-55.49) vs 10.45 (7.20-15.96) L.Kg-1; elimination half life (t1/2?) of 10.85 (5.92-14,47) vs 5.23 (4.22-6.27) h; elimination rate constant (?) of 0.06 (0.04-0.11) 0.13 (0.10-0.16) h-1, area under the plasma concentration versus time curve (AUC 0-?) of 991.79 (689.57-1491.00) vs 1647.20 (1155.30- 2391.60) ng.h.mL-1, and AUC(-)/AUC(+) 2.50 (2.03-4.06) vs 1.22 (0.96-1.56). The data demonstrated that methanol inhalation at 1048 mg/m3 results in loss of enantioselectivity with plasmatic accumulation of (+)-3R5S, modifying the enantioselective kinetic disposition of Fluvastatin in rats.

Pythium insidiosum, um micro-organismo do Reino Stramenopila, é o agente etiológico da pitiose em mamíferos, uma doença difícil de tratar. O presente estudo investigou a atividade inibitória in vitro da terbinafina, itraconazol, caspofungina, fluvastatina e ibuprofeno contra 15 isolados brasileiros de P. insidiosum em combinações duplas e triplas e determinou as correlações in vivo usando coelhos com pitiose experimental. Além disso, este estudo objetivou relatar o crescimento paradoxal de isolados de P. insidiosum quando submetidos a testes de suscetibilidade in vitro com caspofungina. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada pelo protocolo M 38-A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute, e as interações in vitro foram avaliadas usando um método de microdiluição checkerboard. Para o estudo in vivo, 20 coelhos inoculados com zoósporos de P. insidiosum foram divididos em quatro grupos: o grupo 1 foi tratado com terbinafina e itraconazol; o grupo 2 foi tratado com terbinafina, itraconazol e fluvastatina; o grupo 3 foi tratado com terbinafina e caspofungina; e o grupo 4 foi o grupo controle. As combinações de terbinafina com caspofungina ou ibuprofeno foram sinérgicas para 47% dos isolados, e antagonismo não foi observado em nenhuma das combinações duplas. As combinações triplas foram principalmente indiferentes, mas sinergismo e antagonismo também foram observados. O crescimento paradoxal foi observado em 50% dos isolados testados a concentrações acima da CIM variando de 16 a 128 mg/ml. No estudo in vivo, o aspecto histológico das lesões foi similar entre os grupos, mas o grupo 2 mostrou a menor quantidade de hifas e diferiu significativamente dos outros grupos. Os melhores resultados in vivo foram observados quando utilizada a combinação tripla de terbinafina, itraconazol e fluvastatina (grupo 2). O presente estudo foi o primeiro estudo de suscetibilidade in vitro e in vivo com P. insidiosum usando combinações de três fármacos, e o fenômeno do efeito paradoxal envolvendo oomicetos foi descrito aqui pela primeira vez.

Pythium insidiosum, um micro-organismo do Reino Stramenopila, é o agente etiológico da pitiose em mamíferos, uma doença difícil de tratar. O presente estudo investigou a atividade inibitória in vitro da terbinafina, itraconazol, caspofungina, fluvastatina e ibuprofeno contra 15 isolados brasileiros de P. insidiosum em combinações duplas e triplas e determinou as correlações in vivo usando coelhos com pitiose experimental. Além disso, este estudo objetivou relatar o crescimento paradoxal de isolados de P. insidiosum quando submetidos a testes de suscetibilidade in vitro com caspofungina. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada pelo protocolo M 38-A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute, e as interações in vitro foram avaliadas usando um método de microdiluição checkerboard. Para o estudo in vivo, 20 coelhos inoculados com zoósporos de P. insidiosum foram divididos em quatro grupos: o grupo 1 foi tratado com terbinafina e itraconazol; o grupo 2 foi tratado com terbinafina, itraconazol e fluvastatina; o grupo 3 foi tratado com terbinafina e caspofungina; e o grupo 4 foi o grupo controle. As combinações de terbinafina com caspofungina ou ibuprofeno foram sinérgicas para 47% dos isolados, e antagonismo não foi observado em nenhuma das combinações duplas. As combinações triplas foram principalmente indiferentes, mas sinergismo e antagonismo também foram observados. O crescimento paradoxal foi observado em 50% dos isolados testados a concentrações acima da CIM variando de 16 a 128 mg/ml. No estudo in vivo, o aspecto histológico das lesões foi similar entre os grupos, mas o grupo 2 mostrou a menor quantidade de hifas e diferiu significativamente dos outros grupos. Os melhores resultados in vivo foram observados quando utilizada a combinação tripla de terbinafina, itraconazol e fluvastatina (grupo 2). O presente estudo foi o primeiro estudo de suscetibilidade in vitro e in vivo com P. insidiosum usando combinações de três fármacos, e o fenômeno do efeito paradoxal envolvendo oomicetos foi descrito aqui pela primeira vez.

Pythium insidiosum, um micro-organismo do Reino Stramenopila, é o agente etiológico da pitiose em mamíferos, uma doença difícil de tratar. O presente estudo investigou a atividade inibitória in vitro da terbinafina, itraconazol, caspofungina, fluvastatina e ibuprofeno contra 15 isolados brasileiros de P. insidiosum em combinações duplas e triplas e determinou as correlações in vivo usando coelhos com pitiose experimental. Além disso, este estudo objetivou relatar o crescimento paradoxal de isolados de P. insidiosum quando submetidos a testes de suscetibilidade in vitro com caspofungina. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada pelo protocolo M 38-A2 do Clinical and Laboratory Standards Institute, e as interações in vitro foram avaliadas usando um método de microdiluição checkerboard. Para o estudo in vivo, 20 coelhos inoculados com zoósporos de P. insidiosum foram divididos em quatro grupos: o grupo 1 foi tratado com terbinafina e itraconazol; o grupo 2 foi tratado com terbinafina, itraconazol e fluvastatina; o grupo 3 foi tratado com terbinafina e caspofungina; e o grupo 4 foi o grupo controle. As combinações de terbinafina com caspofungina ou ibuprofeno foram sinérgicas para 47% dos isolados, e antagonismo não foi observado em nenhuma das combinações duplas. As combinações triplas foram principalmente indiferentes, mas sinergismo e antagonismo também foram observados. O crescimento paradoxal foi observado em 50% dos isolados testados a concentrações acima da CIM variando de 16 a 128 mg/ml. No estudo in vivo, o aspecto histológico das lesões foi similar entre os grupos, mas o grupo 2 mostrou a menor quantidade de hifas e diferiu significativamente dos outros grupos. Os melhores resultados in vivo foram observados quando utilizada a combinação tripla de terbinafina, itraconazol e fluvastatina (grupo 2). O presente estudo foi o primeiro estudo de suscetibilidade in vitro e in vivo com P. insidiosum usando combinações de três fármacos, e o fenômeno do efeito paradoxal envolvendo oomicetos foi descrito aqui pela primeira vez.

Atualmente, as doenças cardiovasculares constituem as principais causas de morte no Brasil e no mundo. As estatinas são consideradas os agentes mais efetivos e mais bem tolerados para o tratamento do aumento excessivo dos níveis de colesterol no sangue, ou hipercolesterolemia. A fluvastatina (FLV), um fármaco hipolipêmico, de segunda geração, pertencente à classe das estatinas, e é comercializada como mistura racêmica, ou seja, uma mistura equimolar da (+)-3R, 5S-FLV e (-)-3S, 5R-FLV. Além disso, é descrito na literatura que o enantiômero (+)- 3R, 5S- FLV possui atividade cerca de trinta vezes maior do que seu antípoda, o que justifica a importância e necessidade de métodos para análise enantiosseletiva de fármacos que possuam um ou mais centros de assimetria. Assim, este trabalho teve como objetivo a extração dos enantiômeros da FLV de matriz biológica (plasma) utilizando uma técnica de eletromigração em capilar, a cromatografia eletrocinética (EKC). A análise da FLV por cromatografia eletrocinética empregou como técnica de concentração online o stacking por injeção de grande volume, em um capilar de sílica fundida não revestido, de 50,0 cm de comprimento efetivo e 75 ?m de diâmetro interno, solução tampão tetraborato de sódio 50 mmol L-1, pH 9,5; adicionado de 20 mmol L-1 de 2-hidroxipropil-?-ciclodextrina como eletrólito de corrida, tensão de +25 kV, temperatura de 15 °C, injeção hidrodinâmica (0,5 psi por 30 segundos) e detecção em 300 nm. A separação dos enantiômeros foi obtida com valores de resolução de 3,0 e eficiência de 255840 e 150056, e tempos de migração de 7,2 e 7,4 minutos para a (+)-3R, 5S- FLV e (-)-3S, 5R- FLV, respectivamente. O procedimento de preparo de amostra foi baseado na extração em fase sólido-líquida (SLE), com a adição de 0,5 mL de solução tampão fosfato de sódio 0,1 mol L-1 pH 7,0 em 0,5 mL de plasma, previamente fortificado com padrão de FLV. A amostra foi aplicada na coluna e depois de 15 minutos, a FLV foi eluída com 4 mL de éter etílico. O método analítico foi validado avaliando os parâmetros seletividade, linearidade, precisão e exatidão inter e intra-dia, limite de quantificação, carry-over, efeito matriz, integridade da diluição e estudos de estabilidade. Além disso, foi realizado o estudo de racemização. Os resultados apresentaram linearidade na faixa de concentração plasmática de 250 a 725 ng mL-1 para cada enantiômero, sendo o limite de quantificação a concentração de 250 ng mL-1. Os estudos de precisão e exatidão apresentaram valores aceitáveis, com variação menor do que 15%. Além disso, não foi observado efeito carry-over e as amostras foram estáveis quando submetidas a ciclos de congelamento e descongelamento, estabilidade de curta e longa duração, pós-processamento e não foi observada racemização dos enantiômeros. Em relação ao efeito matriz, procedimentos alternativos foram usados com sucesso para análise de amostras lipêmicas e hemolisadas de plasmas. Sendo assim, este é o primeiro método bioanalítico desenvolvido, rápido e confiável, para quantificar os enantiômeros da FLV em amostras de plasma por EKC usando a SLE como técnica de preparo de amostra. / Nowadays, cardiovascular diseases are the main causes of death in Brazil and worldwide. Statins are considered the most effective and well tolerated agents for the excessive increase in cholesterol blood levels, or hypercholesterolemia. Fluvastatin (FLV), a hypolipidemic second generation drug belongs to statin drug class, and it is commercialized as a racemate, that is, a equimolar mixture of (+)-3R, 5S- FLV and (-)-3S, 5R- FLV. Moreover, literature describes that (+)-3R, 5S- FLV enantiomer activity is thirty times higher than its antipode, which justifies the importance and necessity of methods for the stereoselective analysis of drugs which possess one or more than one asymmetry centers. Thus, this work aims the extraction of FLV enantiomers from a biological matrix (plasma) using one of the electromigration techniques, the EKC. FLV analysis by EKC employed large volume sample stacking as sample on-column concentration technique using a fused-silica capillary with 50.0 cm effective length and 75 ?m internal diameter, 50 mmol L-1 sodium tetraborate buffer, pH 9,5 plus 20 mmol L-1 2-hydroxipropyl-?-cyclodextrin as a background electrolyte, voltage of +25 kV, temperature of 15ºC, with sample injected in hydrodynamic injection mode (0,5 psi for 30 seconds) and detection using a diode array detector set at 300 nm. The enantiomers resolution was achieved with a resolution value of 3.0, and efficiency of 255840 and 150056, migration times of 7.2 and 7.4 minutes for (+)-3R, 5S- FLV and (-)-3S, 5R- FLV, respectively. Supported liquid extraction was the chosen sample preparation procedure, with the addition of 0.5 mL of 0.1 mol L-1 pH 7.0 phosphate buffer to 0.5 mL of plasma, the mixture was applied to the column and allowed to wet for 15 minutes, 4 mL of ethyl ether was then applied to the top of the column, allowed to percolate by gravity and the eluted solvent was collected in an ambar tube, the solvent was submitted to evaporation under nitrogen flow and the residue was ressuspended for injection in the capillary electrophoresis equipment. The analytical method was validated covering selectivity, linearity, within-run and between-run precision and accuracy, limit of quantification, carry-over, matrix effect, dilution integrity and stability studies parameters. The racemization study was also performed. The results support that the analytical method is linear in the range of concentrations from 250 to 725 ng mL-1for each enantiomer, and the limit of quantification was 250 ng mL-1; the method is precise and accurate, with variation under 15%. Besides, no carry-over effect was observed, and both enantiomers showed to be stable under thaw and freeze cycles, short and long term stability studies, autosampler stability, and also no racemization was observed. Related to matrix effect, alternative procedures were employed sucessfully in case of analysis of lipemeic and hemolized matrices. So, this is the first bioanalytical method developed, fast and reliable, to quantify FLV enantiomers in plasma samples using EKC with SLE as sample preparation procedure.

Atualmente, as doenças cardiovasculares constituem as principais causas de morte no Brasil e no mundo. As estatinas são consideradas os agentes mais efetivos e mais bem tolerados para o tratamento do aumento excessivo dos níveis de colesterol no sangue, ou hipercolesterolemia. A fluvastatina (FLV), um fármaco hipolipêmico, de segunda geração, pertencente à classe das estatinas, e é comercializada como mistura racêmica, ou seja, uma mistura equimolar da (+)-3R, 5S-FLV e (-)-3S, 5R-FLV. Além disso, é descrito na literatura que o enantiômero (+)- 3R, 5S- FLV possui atividade cerca de trinta vezes maior do que seu antípoda, o que justifica a importância e necessidade de métodos para análise enantiosseletiva de fármacos que possuam um ou mais centros de assimetria. Assim, este trabalho teve como objetivo a extração dos enantiômeros da FLV de matriz biológica (plasma) utilizando uma técnica de eletromigração em capilar, a cromatografia eletrocinética (EKC). A análise da FLV por cromatografia eletrocinética empregou como técnica de concentração online o stacking por injeção de grande volume, em um capilar de sílica fundida não revestido, de 50,0 cm de comprimento efetivo e 75 ?m de diâmetro interno, solução tampão tetraborato de sódio 50 mmol L-1, pH 9,5; adicionado de 20 mmol L-1 de 2-hidroxipropil-?-ciclodextrina como eletrólito de corrida, tensão de +25 kV, temperatura de 15 °C, injeção hidrodinâmica (0,5 psi por 30 segundos) e detecção em 300 nm. A separação dos enantiômeros foi obtida com valores de resolução de 3,0 e eficiência de 255840 e 150056, e tempos de migração de 7,2 e 7,4 minutos para a (+)-3R, 5S- FLV e (-)-3S, 5R- FLV, respectivamente. O procedimento de preparo de amostra foi baseado na extração em fase sólido-líquida (SLE), com a adição de 0,5 mL de solução tampão fosfato de sódio 0,1 mol L-1 pH 7,0 em 0,5 mL de plasma, previamente fortificado com padrão de FLV. A amostra foi aplicada na coluna e depois de 15 minutos, a FLV foi eluída com 4 mL de éter etílico. O método analítico foi validado avaliando os parâmetros seletividade, linearidade, precisão e exatidão inter e intra-dia, limite de quantificação, carry-over, efeito matriz, integridade da diluição e estudos de estabilidade. Além disso, foi realizado o estudo de racemização. Os resultados apresentaram linearidade na faixa de concentração plasmática de 250 a 725 ng mL-1 para cada enantiômero, sendo o limite de quantificação a concentração de 250 ng mL-1. Os estudos de precisão e exatidão apresentaram valores aceitáveis, com variação menor do que 15%. Além disso, não foi observado efeito carry-over e as amostras foram estáveis quando submetidas a ciclos de congelamento e descongelamento, estabilidade de curta e longa duração, pós-processamento e não foi observada racemização dos enantiômeros. Em relação ao efeito matriz, procedimentos alternativos foram usados com sucesso para análise de amostras lipêmicas e hemolisadas de plasmas. Sendo assim, este é o primeiro método bioanalítico desenvolvido, rápido e confiável, para quantificar os enantiômeros da FLV em amostras de plasma por EKC usando a SLE como técnica de preparo de amostra. / Nowadays, cardiovascular diseases are the main causes of death in Brazil and worldwide. Statins are considered the most effective and well tolerated agents for the excessive increase in cholesterol blood levels, or hypercholesterolemia. Fluvastatin (FLV), a hypolipidemic second generation drug belongs to statin drug class, and it is commercialized as a racemate, that is, a equimolar mixture of (+)-3R, 5S- FLV and (-)-3S, 5R- FLV. Moreover, literature describes that (+)-3R, 5S- FLV enantiomer activity is thirty times higher than its antipode, which justifies the importance and necessity of methods for the stereoselective analysis of drugs which possess one or more than one asymmetry centers. Thus, this work aims the extraction of FLV enantiomers from a biological matrix (plasma) using one of the electromigration techniques, the EKC. FLV analysis by EKC employed large volume sample stacking as sample on-column concentration technique using a fused-silica capillary with 50.0 cm effective length and 75 ?m internal diameter, 50 mmol L-1 sodium tetraborate buffer, pH 9,5 plus 20 mmol L-1 2-hydroxipropyl-?-cyclodextrin as a background electrolyte, voltage of +25 kV, temperature of 15ºC, with sample injected in hydrodynamic injection mode (0,5 psi for 30 seconds) and detection using a diode array detector set at 300 nm. The enantiomers resolution was achieved with a resolution value of 3.0, and efficiency of 255840 and 150056, migration times of 7.2 and 7.4 minutes for (+)-3R, 5S- FLV and (-)-3S, 5R- FLV, respectively. Supported liquid extraction was the chosen sample preparation procedure, with the addition of 0.5 mL of 0.1 mol L-1 pH 7.0 phosphate buffer to 0.5 mL of plasma, the mixture was applied to the column and allowed to wet for 15 minutes, 4 mL of ethyl ether was then applied to the top of the column, allowed to percolate by gravity and the eluted solvent was collected in an ambar tube, the solvent was submitted to evaporation under nitrogen flow and the residue was ressuspended for injection in the capillary electrophoresis equipment. The analytical method was validated covering selectivity, linearity, within-run and between-run precision and accuracy, limit of quantification, carry-over, matrix effect, dilution integrity and stability studies parameters. The racemization study was also performed. The results support that the analytical method is linear in the range of concentrations from 250 to 725 ng mL-1for each enantiomer, and the limit of quantification was 250 ng mL-1; the method is precise and accurate, with variation under 15%. Besides, no carry-over effect was observed, and both enantiomers showed to be stable under thaw and freeze cycles, short and long term stability studies, autosampler stability, and also no racemization was observed. Related to matrix effect, alternative procedures were employed sucessfully in case of analysis of lipemeic and hemolized matrices. So, this is the first bioanalytical method developed, fast and reliable, to quantify FLV enantiomers in plasma samples using EKC with SLE as sample preparation procedure.

As estatinas são os fármacos mais usados para tratamento das hiperlipidemias em prevenção primária e secundária, com o propósito de diminuir os níveis de lipoproteínas plasmáticas ricas em colesterol e reduzir os riscos de doença arterialcoronária (DAC) (WITZTUM, 2005). Estes efeitos são resultantes da atividade inibidora das estatinas sobre a enzima HMG-CoA redutase (hidroximetilglutaril-CoA redutase), com a propriedade de bloquear a conversão do substrato HMG-CoA em ácido mevalônico, inibindo os primeiros passos da biossíntese de colesterol. Estas substâncias, (fluvastatina FS, atorvastatina ATC e rosuvastatina RC) são capazes de mimetizar o substrato natural. Podem ser divididas em naturais e sintéticas e diferem fundamentalmente, em termos de potência, perfil farmacocinético, interação farmacológica e efeito indesejado relacionado à miotoxicidade. Na presente pesquisa foram desenvolvidos e validados métodos analíticos de separação (cromatografia liquida de alta eficiência e eletroforese capilar) para cada fármaco. Estes métodos foram aplicados a medicamentos comercializados no Brasil. O método por CLAE foi realizado em coluna LiChrospher® RP-18 (125x4 mm, 5&#181;m) Merck® e uma fase móvel composta por metanol:água (70:30 v/v) para FS e ATC, (60:40 v/v) para RC, com 5 mM trietilamina e pH ajustado para 3.0 com ácido ortofosfórico. O método mostrou boa linearidade (r 0,9915), (LD 2,02 e LQ 6,12) FS; (r 0,9959), (LD 0,44 e LQ 1,34) ATC e (r 0,9945), (LD 1,55 e LQ 4,70) RC. A exatidão foi expressa em porcentagem de recuperação (R% 99,59) FS, (R% 100,24) ATC e (R% 99,2). Pelo método MEKC foi realizado utilizando capilar de sílica fundida de 40,2 cm x 75 m d. i. (30 cm até detector); eletrólito: tampão borato 20 mM: SDS 30 mM: metanol10% v/v pH 9,24; voltagem aplicada: +22 kV; injeção: hidrodinâmica 0,5 psi/3s, apresentaram linearidade (r 0,9997), (LD 0,94 e LQ 2,85) FS; (r 0,9999), (LD 2,36 e LQ 7,17) ATC. A porcentagem de recuperação (R% 104,61) FS, (R% 103,96) ATC. Pelo método CZE foi realizado utilizando sílica fundida de 40,2 cm de cumprimento sendo 30 cm até o detector, 75 &#181;m de d.i. e 375 &#181;m de d.d., eletrólito: tampão tetraborato de sódio 20 mM, pH 9,20; voltagem aplicada: +25kV; injeção: hidrodinâmica 0,5 psi/5s, apresentou linearidade (r 0,9989), (LD 4,92 e LQ 14,91) RC; A porcentagem de recuperação (R% 100,66) RC. / Statins are the drugs most commonly used for treatment of hyperlipidemia in primary and secondary prevention, with the aim of reducing levels of lipoproteins rich in cholesterol and reduce the risk of coronary-artery disease (CAD) (Witztum, 2005). These effects are due to the inhibitory activity of statins on the enzyme HMG-CoA reductase (hydroxymethylglutaryl CoA reductase), with the property to block the conversion of the substrate HMG-CoA to mevalonic acid, inhibiting the first steps of cholesterol biosynthesis. These substances (fluvastatin FS, atorvastatin ATC and rosuvastatin RC) may mimic the natural substrate, can be divided into natural and synthetic, and differ fundamentally in terms of potency, pharmacokinetics, drug interactions and unwanted effects related to muscle-toxicity. In the present study were developed and fully validated analytical methods of separation (high efficiency liquid chromatography and capillary electrophoresis) for each drug. These methods were applied to drugs marketed in Brazil. The method was performed by HPLC column LiChrospher® RP-18 (125x4 mm, 5mm) Merck® and a mobile phase consisting of methanol: water (70:30 v / v) for FS and ATC (60:40 v / v) to RC, with 5 mM triethylamine and pH adjusted to 3.0 with orthophosphoric acid. The method showed good linearity (r 0.9915), (2.02 LD and LQ 6.12) FS; (r 0.9959), (0.44 LD and LQ 1.34) ATC; (r 0.9945), (1.55 LD and LQ 4.70) for RC. The accuracy was expressed as a percentage of recovery (R% 99.59%) FS, (R% 100.24) ATC and (R 99.2%) RC. The MEKC method was performed using a fused silica capillary of 40.2 cm x 75 m d. i. (30 cm to detector); electrolyte: 20 mM borate buffer: 30 mM SDS: metanol10% v / v pH 9.24, applied voltage: +22 kV, injection: hydrodynamic psi/3s 0.5 showed linearity (r 0, 9997), (LQ 0.94 and LD 2.85) FS, (r 0.9999), (LQ 2.36 and LD 7.17) ATC. The percentage recovery (% R 104.61) FS, (R 103.96%) ATC. The CZE method was performed using fused silica of 40.2 cm long and 30 cm to the detector, 75 mm in di and 375 mm in dd, electrolyte: sodium tetraborate buffer 20 mM, pH 9.20, applied voltage: +25 kV, injection: hydrodynamic psi/5s 0.5, showed linearity (r 0.9989), (4.92 LD and LQ 14.91) RC; The percentage recovery (% R 100.66) RC.

As estatinas são os fármacos mais usados para tratamento das hiperlipidemias em prevenção primária e secundária, com o propósito de diminuir os níveis de lipoproteínas plasmáticas ricas em colesterol e reduzir os riscos de doença arterialcoronária (DAC) (WITZTUM, 2005). Estes efeitos são resultantes da atividade inibidora das estatinas sobre a enzima HMG-CoA redutase (hidroximetilglutaril-CoA redutase), com a propriedade de bloquear a conversão do substrato HMG-CoA em ácido mevalônico, inibindo os primeiros passos da biossíntese de colesterol. Estas substâncias, (fluvastatina FS, atorvastatina ATC e rosuvastatina RC) são capazes de mimetizar o substrato natural. Podem ser divididas em naturais e sintéticas e diferem fundamentalmente, em termos de potência, perfil farmacocinético, interação farmacológica e efeito indesejado relacionado à miotoxicidade. Na presente pesquisa foram desenvolvidos e validados métodos analíticos de separação (cromatografia liquida de alta eficiência e eletroforese capilar) para cada fármaco. Estes métodos foram aplicados a medicamentos comercializados no Brasil. O método por CLAE foi realizado em coluna LiChrospher® RP-18 (125x4 mm, 5&#181;m) Merck® e uma fase móvel composta por metanol:água (70:30 v/v) para FS e ATC, (60:40 v/v) para RC, com 5 mM trietilamina e pH ajustado para 3.0 com ácido ortofosfórico. O método mostrou boa linearidade (r 0,9915), (LD 2,02 e LQ 6,12) FS; (r 0,9959), (LD 0,44 e LQ 1,34) ATC e (r 0,9945), (LD 1,55 e LQ 4,70) RC. A exatidão foi expressa em porcentagem de recuperação (R% 99,59) FS, (R% 100,24) ATC e (R% 99,2). Pelo método MEKC foi realizado utilizando capilar de sílica fundida de 40,2 cm x 75 m d. i. (30 cm até detector); eletrólito: tampão borato 20 mM: SDS 30 mM: metanol10% v/v pH 9,24; voltagem aplicada: +22 kV; injeção: hidrodinâmica 0,5 psi/3s, apresentaram linearidade (r 0,9997), (LD 0,94 e LQ 2,85) FS; (r 0,9999), (LD 2,36 e LQ 7,17) ATC. A porcentagem de recuperação (R% 104,61) FS, (R% 103,96) ATC. Pelo método CZE foi realizado utilizando sílica fundida de 40,2 cm de cumprimento sendo 30 cm até o detector, 75 &#181;m de d.i. e 375 &#181;m de d.d., eletrólito: tampão tetraborato de sódio 20 mM, pH 9,20; voltagem aplicada: +25kV; injeção: hidrodinâmica 0,5 psi/5s, apresentou linearidade (r 0,9989), (LD 4,92 e LQ 14,91) RC; A porcentagem de recuperação (R% 100,66) RC. / Statins are the drugs most commonly used for treatment of hyperlipidemia in primary and secondary prevention, with the aim of reducing levels of lipoproteins rich in cholesterol and reduce the risk of coronary-artery disease (CAD) (Witztum, 2005). These effects are due to the inhibitory activity of statins on the enzyme HMG-CoA reductase (hydroxymethylglutaryl CoA reductase), with the property to block the conversion of the substrate HMG-CoA to mevalonic acid, inhibiting the first steps of cholesterol biosynthesis. These substances (fluvastatin FS, atorvastatin ATC and rosuvastatin RC) may mimic the natural substrate, can be divided into natural and synthetic, and differ fundamentally in terms of potency, pharmacokinetics, drug interactions and unwanted effects related to muscle-toxicity. In the present study were developed and fully validated analytical methods of separation (high efficiency liquid chromatography and capillary electrophoresis) for each drug. These methods were applied to drugs marketed in Brazil. The method was performed by HPLC column LiChrospher® RP-18 (125x4 mm, 5mm) Merck® and a mobile phase consisting of methanol: water (70:30 v / v) for FS and ATC (60:40 v / v) to RC, with 5 mM triethylamine and pH adjusted to 3.0 with orthophosphoric acid. The method showed good linearity (r 0.9915), (2.02 LD and LQ 6.12) FS; (r 0.9959), (0.44 LD and LQ 1.34) ATC; (r 0.9945), (1.55 LD and LQ 4.70) for RC. The accuracy was expressed as a percentage of recovery (R% 99.59%) FS, (R% 100.24) ATC and (R 99.2%) RC. The MEKC method was performed using a fused silica capillary of 40.2 cm x 75 m d. i. (30 cm to detector); electrolyte: 20 mM borate buffer: 30 mM SDS: metanol10% v / v pH 9.24, applied voltage: +22 kV, injection: hydrodynamic psi/3s 0.5 showed linearity (r 0, 9997), (LQ 0.94 and LD 2.85) FS, (r 0.9999), (LQ 2.36 and LD 7.17) ATC. The percentage recovery (% R 104.61) FS, (R 103.96%) ATC. The CZE method was performed using fused silica of 40.2 cm long and 30 cm to the detector, 75 mm in di and 375 mm in dd, electrolyte: sodium tetraborate buffer 20 mM, pH 9.20, applied voltage: +25 kV, injection: hydrodynamic psi/5s 0.5, showed linearity (r 0.9989), (4.92 LD and LQ 14.91) RC; The percentage recovery (% R 100.66) RC.