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Efeito da lectina jacalina (artocarpus integrifolia) sobre a sobrevivência e ativação in vitro de folículos primordiais caprinos / Effect of jacalin lectin (Artocarpus integrifolia) on survival and activation in vitro goat primordial follicles

Ribeiro, Regislane Pinto January 2013 (has links)
RIBEIRO, R.P. Efeito da lectina jacalina (artocarpus integrifolia) sobre a sobrevivência e ativação in vitro de folículos primordiais caprinos. 2013. 89 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2013. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-01T13:14:04Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_rpribeiro.pdf: 973114 bytes, checksum: 26b8c3ca48857ad4fe2a0408971c17f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-10-03T14:46:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_rpribeiro.pdf: 973114 bytes, checksum: 26b8c3ca48857ad4fe2a0408971c17f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T14:46:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_rpribeiro.pdf: 973114 bytes, checksum: 26b8c3ca48857ad4fe2a0408971c17f5 (MD5) Previous issue date: 2013 / The aims of this study were to investigate the effect of different concentrations of jacalin and the interaction of jacalin and FSH on survival, activation and gene expression of goat primordial follicles cultured in vitro. For this, fragments of ovarian cortex were cultured in Minimum Essential Medium (MEM) supplemented with different concentrations of jacalin (0, 10, 25, 50 and 100 mg/mL - experiment I) for one and six days. After the end of cultured period, the fragments of ovarian cortex were fixed for histology. Then, the percentage of primordial follicles in uncultured or cultured ovarian tissue in different treatments were evaluated. After determining the most effective concentration of jacalin (50 μg/mL), ovarian cortex fragments were cultured in MEM supplemented with jacalin (50 μg/ml), FSH (50 ng/ml) or both (experiment II). After 6 days of culture, the ovarian fragments were fixed for histology. Furthermore, for each treatment, tissue samples were collected to evaluate the expression profile of mRNA for c-kit, KL, GDF-9, BMP-15 and PCNA in goats ovarian follicles cultured in vitro for 6 days. The results showed that after six days of culture, the presence of 50 μg/ml jacalin in culture medium increased the percentage of normal follicles, and promoted a reduction in the percentage of primordial follicles and increase of developing follicles, when compared to control medium. In experiment II, jacalin or FSH stimulated primordial follicle activation and contributed to maintain follicle viability, but there was no positive interaction between these two substances. The levels of mRNA for BMP-15 and KL after in vitro culture of ovarian fragments in different treatments was not altered. However, the presence of FSH increased levels of mRNA for c-kit and PCNA, while the GDF-9 expression was reduced in medium supplemented with jacalin. In conclusion, jacalin and FSH were able to promote the survival and activation of goat primordial follicles after 6 days of culture. The presence of FSH increased expression mRNA of PCNA and c-kit, while the presence of jacalin reduced the expression of GDF-9. / Os objetivos deste estudo foram investigar o efeito de diferentes concentrações de jacalina e da interação de jacalina e FSH sobre a sobrevivência, ativação e expressão gênica em folículos primordiais caprinos cultivados in vitro. Para isto, os fragmentos do córtex ovariano foram cultivados em Meio Essencial Mínimo (MEM) suplementado com diferentes concentrações de jacalina (0, 10, 25, 50 e 100 μg/mL - experimento I), por um e seis dias. Após o término do período de cultivo, os fragmentos de córtex ovariano foram fixados para histologia clássica. Em seguida, avaliou-se a percentagem de folículos primordiais ou em desenvolvimento no controle não cultivado e no tecido ovariano cultivado nos diferentes tratamentos. Após a determinação da concentração de jacalina mais eficiente (50 μg/mL), realizou-se o cultivo de fragmentos de córtex ovariano em MEM suplementado com a jacalina (50 μg/mL), FSH (50 ng/mL) ou ambos (experimento II). Após 6 dias de cultivo, os fragmentos ovarianos foram fixados para histologia clássica. Além disso, para cada tratamento, foram coletadas amostras de tecido para avaliar o perfil de expressão de RNAs mensageiros para BMP-15, KL, c-kit, GDF-9 e PCNA em folículos ovarianos caprinos cultivado in vitro por 6 dias. Os resultados demonstraram que após seis dias de cultivo, a presença de 50 μg/mL de jacalina no meio de cultivo promoveu um aumento de folículos morfologicamente normais, bem como uma redução da percentagem de folículos primordiais e aumento de folículos em desenvolvimento, quando comparado ao meio controle. No experimento II, demonstrou-se que jacalina ou FSH estimulam a ativação dos folículos e contribuem para a manutenção da viabilidade, mas não foi observada uma interação positiva entres essas duas substâncias. A expressão de RNAm para a BMP-15 e KL após o cultivo in vitro de fragmentos de ovário nos diferentes tratamentos por 6 dias não foi alterada. No entanto, a presença de FSH aumentou os níveis de RNAm para o c-kit e para o PCNA, enquanto que o GDF-9 teve sua expressão reduzida em meio suplementado com jacalina. Em conclusão, jacalina e FSH foram capazes de promover a sobrevivência e ativação de folículos primordiais caprinos após 6 dias de cultivo. A presença de FSH aumentou a expressão do RNAm para PCNA e c-kit, enquanto que a presença da jacalina reduziu a expressão do GDF-9.
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Expressão do sistema interleucina 1 (il-1) em folículos ovarianos bovinos e efeitos in vitro da il-1β na ativação de folículos primordiais. / Expression of interleukin 1 system members in bovine ovarian follicles and effects of interleukin -1β on primordial follicle activation in vitro.

Passos, José Renato de Sousa January 2015 (has links)
PASSOS, J.R.S. Expressão do sistema interleucina 1 (il-1) em folículos ovarianos bovinos e efeitos in vitro da il-1β na ativação de folículos primordiais. 2015. 95 f. Dissertação (DISSERTAÇÃO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2015. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-08-23T13:25:03Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_jrdspassos.pdf: 2733592 bytes, checksum: c3aee8f721ab539ee80cb2a9ae2c6aa4 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-26T16:00:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_jrdspassos.pdf: 2733592 bytes, checksum: c3aee8f721ab539ee80cb2a9ae2c6aa4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T16:00:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_jrdspassos.pdf: 2733592 bytes, checksum: c3aee8f721ab539ee80cb2a9ae2c6aa4 (MD5) Previous issue date: 2015 / This study aims to investigate the expression of interleukin 1 system (proteins and mRNA of ligands and receptors) and its distribution in ovaries of cyclic cows, as well as to evaluate the effects of IL-1β on the survival and activation of primordial follicles in vitro. The ovaries were processed for localization of interleukin 1 system in preantral and antral follicles by immunohistochemical, qPCR and western blot analysis. For in vitro studies, ovarian fragments were cultured in α-MEM+ supplemented with IL-1β (0, 1, 10, 50 or 100 ng/mL), and aftes 6 days the tissues cultured were processed for histological analysis. Immunohistochemical results showed that the proteins for interleukin 1 system (IL-1β, IL-1RA, IL-1RI and IL-1RII) were detected in the various follicular compartments. Unfortunately, IL-1α antibodies tested did not react in bovine ovaries. All the proteins tested were observed in the cytoplasm of oocytes and granulosa cells from all follicular categories, and theca cells of antral follicles, with the exception that IL-1α has not been found in any analyzed cell. Variable levels of mRNA for the interleukin 1 system in the follicular size and classes analysed. After 6 days of culture, the presence of IL-1β (10 or 50 ng/mL) was effective in maintaining the percentage of normal follicles and in promoting primordial follicle activation. In conclusion, interleukin 1 system is differentially expressed in the ovarian cells according to the stage of follicular development. Moreover, IL-1β promotes the development of primordial follicles. These results suggest an important role of the interleukin 1 system in the regulation of folliculogenesis in bovine species. / O objetivo deste estudo foi investigar a expressão do sistema interleucina 1 (proteínas e RNAm de ligantes e receptores) e sua distribuição nos ovários de vacas cíclicas, bem como avaliar os efeitos da IL-1β na sobrevivência e ativação de folículos primordiais in vitro. Os ovários foram processados para a localização do sistema interleucina 1 em folículos pré-antrais e antrais utilizando as técnicas de imunohistoquímica, qPCR e análise de Western blot. Para os estudos in vitro, fragmentos ovarianos foram cultivados em α-MEM+ suplementado com IL-1β (0, 1, 10, 50 ou 100 ng/mL), e após 6 dias foram processados para análise histológica. Os resultados de imunohistoquímica mostraram que a proteína para os integrantes do sistema interleucina I (IL-1β, IL-1RA, IL-1RI e IL-1RII) foram detectados em diferentes compartimentos foliculares. Infelizmente, o anticorpo testado para localização de IL-1α não reagiu em ovários bovinos. Todas as proteínas testadas foram observados no citoplasma dos oócitos e nas células da granulosa de todas as categorias foliculares, e nas células da teca de folículos antrais, com a exceção da IL-1α, que não foi encontrada em nenhuma das célula analisados. Foram observados níveis variáveis de RNAm para o sistema interleucina 1 nas diferentes categorias foliculares analisadas. Após 6 dias de cultivo, a presença de IL-1β (10 ou 50 ng/mL) foi capaz de manter a percentagem de folículos normais e de promover a ativação dos folículos primordiais. Em conclusão, os componentes do sistema de interleucina 1 são expressos diferencialmente em células ovarianas de acordo com a fase do desenvolvimento folicular. Além disso, a IL-1β promove o desenvolvimento de folículos primordiais in vitro. Estes resultados sugerem um importante papel do sistema interleucina 1 na regulação da foliculogênese em bovinos.

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