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Participação da Fosfatidilserina exposta por Toxoplasma gondii na indução de Corpúsculos Lipídicos em MacrófagoRoberto Neto, João January 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Toxoplasma gondii é o agente causador da toxoplasmose, doença distribuída em grande parte do globo infectando vertebrados endotérmicos. T. gondii é um parasita intracelular obrigatório e não sintetiza colesterol, recrutando-o da célula hospedeira. Esse parasito é dividido em grupos, de acordo com a virulência, sendo a cepa RH e a cepa ME-49 representantes de parasitos de maior e de moderada virulência, respectivamente. Semelhante a outros parasitos protozoários, T. gondii expõem fosfatidilserina (PS) na membrana externa, sendo um exemplo do mimetismo apoptótico, o que tem sido sugerido como mecanismo de evasão. Corpúsculos lipídicos (CL) são organelas lipídicas comumente encontradas em uma gama de diferentes células, de plantas, parasitos e animais. CL são modulados positivamente por diferentes fatores, incluindo células apoptóticas, parasitos como Trypanosoma cruzi, Leishmania spp. e Plasmodium falciparum e citocinas, como o fator de transformação do crescimento (TGF-\03B2). Nosso trabalho visou investigar se a PS exposta na membrana plasmática de T. gondii pode induzir CL em macrófagos. Independente da virulência da cepa utilizada, T gondii foi capaz de induzir CL em macrófagos infectados. A indução foi maior com aumento da relação parasito/macrófago. Subpopulações de T. gondii, PS positivos (PS+) e PS negativo (PS-) foram obtidas e a subpopulação de PS + induziu mais CL em relação a subpopulação de PS-. A neutralização da PS dos parasitos PS+ ou da população total com anexina-V foi capaz de reduzir o número de CL nas células hospedeiras. Lipossomos contendo PS induziram mais CL em macrófagos quando comparados aos lipossomos sem PS
Curiosamente, parasitos PS- também foram capazes de aumentar o número de CL em macrófagos, sugerindo a participação de outros fatores nesse processo indutor. Após a interação de macrófagos com T. gondii, observamos aumento no número de CL tanto em células que continham o parasita quanto em células vizinhas não parasitadas. Esse achado sugere uma sinalização 18 parácrina entre as células. O TGF-\03B2 é descrito como sendo secretado após infecção por T. gondii, e sua neutralização causou inibição da formação de CL induzido por T. gondii, revelando sua participação nesse processo. Concluímos que T. gondii é capaz de induzir CL em macrófagos, e essa indução tem a participação da PS exposta em sua membrana. A indução dessas organelas ocorreu independente da virulência da cepa. Esse processo é potencializado pela ação parácrina do TGF-\03B2 / Toxoplasma gondii
is the causative agent of toxoplasmosis, a disease
largely
spread
across the globe infecting
almost any
endothermic vertebrates.
T. gondii
is an
obligatory intracellular
par
asite that
can
not synthesize cholesterol
thus relying on
recruiting
it from
the host cell. This parasite is divided into groups according to the
virulence, and the RH
strain and the ME
-
49
strain
representing
highly
and moderate
virulen
t
parasites, respect
ively. Similar to other protozoan parasites,
T. gondii
exposes phosphatidylserine (PS) on the outer membrane
,
an example of the
apoptotic mimicry
,
which
has been suggested as
a
mechanism
of evasion
,. Lipid
bodies (LB) are lipid organelles commonly found in
a range of different cells of plants,
animals and parasites. LB are positively modulated by different factors, including
apoptotic cells, parasites such as
Trypanosoma cruzi
,
Leishmania
spp. and
Plasmodium falciparum
and cytokines such as transforming gro
wth factor (TGF
-
β) .
Our study aimed to investigate whether the PS exposed on the plasma membrane of
T. gondii
in macrophages can induce
LB
.
T gondii
was capable of inducing LB in
infected macrophages,
i
ndependently of the virulence of
the
strain used
.
T
he
LB
induction was greater with increase in parasite / macrophage ratio. Subpopulations of
T gondii
posi
tive PS (PS
+) and negative (PS
-
) were obtained and PS+ subpopulation
induced
significantly greater
LB
formation compared to
PS
-
subpopulation. The
neutra
lization of PS with annexin
-
V was able to reduce the number of LB
o
n
PS+
parasites
or on the
total
parasite
population
, but not on
PS
-
parasites. Liposomes
containing PS induced more LB than liposomes without PS. Interestingly, PS
-
parasites induced LB
f
ormation
in macrophages, suggesting the involvement of other
factors.
After interaction of
T. gondii
with
macrophages
,
we observed
increased
LB
formation both in cells containing internalized
parasite
s as well as in bystander cells
without internalized par
asites
,
suggestive of
a paracrine signaling. TGF
-
β is
described as being secreted after infection with
T. gondii
and its neutralization
caused
inhibition of
T. gondii
-
induced
LB
formation
,
pointing to
TGF
-
β participation
in this process. We conclude that
T. gondii
is able to
induce
LB formation
in
macrophages
.
The induction of these
organelles
was independent of strain
virulence.
T. gondii
-
induced
LB
formation
occurs through
signaling triggered by
PS exposed on the
parasite
membrane. This process is
also amplified
by TGF
-
β
a
cting
in a paracrine fashion
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Papel da exposição da fosfatidilserina na infecção e destino intracelular do Toxoplasma gondii em células musculares esqueléticasSoares, Rafael Figueira January 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A fosfatidilserina (PS) é conhecida por seu papel na regulação da apoptose e interferir em várias vias de sinalização celular. Por meio da exposição da PS, as células apoptóticas são internalizadas de forma eficiente por fagócitos, prevenindo uma resposta inflamatória. Assim, durante a evolução, alguns protozoários se utilizaram do processo chamado de \201Cmimetismo apoptótico\201D para a evasão do sistema imune do hospedeiro. O Toxoplasma gondii é um protozoário parasito intracelular obrigatório e agente etiológico da toxoplasmose. Em taquizoítos de T. gondii da cepa RH, cepa do tipo I, virulenta, cerca de 50% dos parasitos expressam PS na sua superfície. No presente trabalho foram empregadas formas bradizoítas e taquizoítas de cepa ME49, a fim de elucidar a participação das subpopulações de T. gondii, PS positivas e negativas, na infecção de células musculares esqueléticas e seu papel no desenvolvimento da cistogênese, in vitro. Para essas análises os parasitos (cistos, taquizoítos e bradizoítos) incubados com anexina-FITIC foram analisados por técnicas de citometria de fluxo e microscopia de fluorescência. A parede cística e o interior dos cistos teciduais de T. gondii foram positivos para anexina, enquanto os taquizoítos e bradizoítos apresentaram subpopulações que expõem ou não PS em sua membrana
A infecção de células hospedeiras por essas subpopulações de parasitos foi testada e quantificada em culturas de células musculares esqueléticas. As infecções e proliferação dos parasitos foram maiores na população total de taquizoítos em comparação com as suas subpopulações. Em infecções com bradizoítos utilizando população total e PS+ não se observou diferenças significativas, enquanto a infecção da subpopulação PS- foi significantemente menor. Quanto ao desenvolvimento da cistogênese, a infecção com taquizoítos não gerou a formação de cistos teciduais, enquanto células infectadas com bradizoítos da população total e da PS+ foram capazes de alta indução da cistogênese comparada à população PS-. Esses dados evidenciam a participação da exposição de PS em infecções pelo T. gondii e seu destino intracelular, mostrando que a exposição de PS é um fator importante que favorece o encistamento espontâneo em células musculares esqueléticas quando as culturas foram infectadas com bradizoítos / Phosphatidylserine (PS) is known for its role in regulating apoptosis and
interferes with several cellular signaling pathways. Apoptotic cells, which exposure
PS, are internalized efficiently by phagocytes, preventing an inflammatory response.
Thus, during evolution, some protozoa use the process called "apoptotic mimicry" for
evasion of the host immune system. Toxoplasma gondii is an obligate intracellular
protozoan parasite and the causative agent of toxoplasmosis. In tachyzoites of T.
gondii RH strain, type I virulent, about 50% of the parasites have PS on their surface.
In the present work bradyzoites and tachyzoites forms of ME49 strain, type II
avirulent, were employed in order to elucidate the involvement of subpopulations of
T. gondii expressing positive and negative PS, during infection of skeletal muscle
cells and its role in the development of cystogenesis, in vitro. For these assays,
parasites (cysts, tachyzoites and bradyzoites) were incubated with annexin-FITIC
and analyzed by flow cytometry and fluorescence microscopy. Cyst wall and the
matrix of tissue cysts were positive for annexin, while tachyzoites and bradyzoites
showed subpopulations exposing or not PS on their surface. The able of infection
and proliferation of parasites were highest in the total population of tachyzoites
compared with their subpopulations. In infections with bradyzoites was observed that
total and PS+ populations showed no significant differences, while the PS- was
significantly lower. Regarding the development of cystogenesis, infection with
tachyzoites did not generate the formation of tissue cysts while bradyzoites, total
population and PS+ were capable of inducing high cystogenesis compared to
population PS-. These data show the involvement of PS exposure in infections with
T. gondii and its intracellular fate, showing that exposure of PS is an important factor
favoring the spontaneous encystment in skeletal muscle cells when the cell cultures
were infected with bradyzoites.
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