Orientador: José Anchieta Gomes Neto / Banca: Massao Ionashiro / Banca: Ivo Milton Raimundo Junior / Resumo: Um sistema de injeção de fluxo com preparação da amostra em linha foi desenvolvido para a determinação seqüencial de fosfito e fosfato em fertilizantes líquidos por espectrofotometria. Após a injeção da amostra, fosfito é oxidado a fosfato por solução ácida de permanganato de potássio (1,0 10-2 mol L-1 KMnO4 + 1,0 mol L-1 H2SO4) e o fosfato é determinado pelo método Azul de Molibdênio. O complexo azul formado, monitorado a 700 nm, é registrado na forma de um pico cuja altura é proporcional a concentração de fosfito e fosfato presentes na amostra. Quando a amostra percorre o mesmo percurso, mas sem a adição do oxidante ao sistema, o sinal de absorbância registrado corresponde somente à concentração de fosfato. Pela diferença entre os sinais, é possível calcular a concentração de fosfito na amostra de fertilizante. A influência da concentração dos reagentes e do volume de amostra injetado foi investigada. A velocidade analítica do sistema proposto é correspondente a aproximadamente 15 determinações por hora [0,05 - 0,40% m/v H3PO3; r2 = 0,99912], consumindo 100 æL de amostra, 4,3 mg KMnO4, 135 mg (NH4)6Mo7O24.4H2O, 27 mg de ácido ascórbico e 260 mg de ácido sulfúrico por determinação. O limite de detecção (L.O.D) e o limite de quantificação (L.O.Q) foram 9,64 10-4% (m/v) e 32,1 10-4% (m/v), respectivamente. Os resultados obtidos são precisos [r.s.d. = 3.6% para 0,10% (m/v) H3PO3, n = 13] e concordantes com os valores obtidos por amperometria em fluxo ao nível de 95% de confiança. A precisão e exatidão do método foram também avaliadas pelo teste de adição e recuperação do analito e o intervalo de recuperação foi de 94 a 100%. / Abstract: A flow injection system with online sample preparation was developed for the sequential determination of phosphite and phosphate in liquid fertilizers by spectrophotometry. After loop-based injection, phosphite is oxidized to phosphate by an acid potassium permanganate solution (1.0 10-2 mol L-1 KMnO4 + 1.0 mol L-1 H2SO4). The phosphate generated is determined by the molybdenum blue method. The blue complex formed is monitored to 700 nm and the analytical signal is registered in the form of a pick whose height is proportional to the concentration of phosphite and phosphate presents in the sample. When the sample travels the same road, but without the oxidizer addition to the system, the transient absorbance sign corresponds to the concentration of phosphate. By the difference between the two signals it is possible to calculate the concentration of phosphite in the sample of fertilizer. The effects of the concentration of the reagents, injected sample volume and dispersion were investigated. The analytical throughput speed of the proposed system is approximately 15 determinations per hour [0.05 - 0.40% m/v H3PO3; r2 = 0,99912], consuming 100 æL of sample, 4.3 mg KMnO4, 135 mg (NH4)6Mo7O24.4H2O, 27 mg of ascorbic acid and 260 mg of sulfuric acid per determination. The limit of detection (L.O.D) and the limit of quantification (L.O.Q.) were 9.64 10-4% (m/v) and 32.1 10-4% (m/v), respectively. Results are precise [r.s.d. = 3.6% for 0.10% m/v H3PO3, n = 13] and in agreement with those obtained by flow-injection chronoamperometry at 95% confidence level. The accuracy of the proposed method was evaluated by an addition-recovery experiment and all recovered values were in the 94-100% range. / Mestre

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Tese de doutoramento. Engenharia Metalúrgica e de Materiais. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2005

Orientadora: Denise Pedrini / Coorientador: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Banca: Douglas Roberto Monteiro / Banca: Carla Oliveira Favretto / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a energia livre de superfície (γS) da dentina após tratamento com trimetafosfato de sódio (TMP) associado ou não ao fluoreto (F), exposto ou não ao cálcio (Ca), bem como, a adsorção de TMP, F e Ca na dentina. Blocos de dentina bovino (4 mm x 4 mm, n=12 blocos/grupo) foram tratados por meio da imersão em soluções contendo TMP nas concentrações: 0%; 1%; 3% e 9% seguido da aplicação ou não de Ca. Estas concentrações de TMP foram associadas ou não ao F na concentração de 1100 ppm F. Foram determinadas as concentrações de F, Ca e TMP nas soluções antes e após o tratamento para calcular a adsorção destes a dentina. Para analisar a energia livre de superfície (γS) da dentina, os componentes apolar (γSLW) e polar (γSAB) eram determinados após os tratamentos por meio da medida do ângulo de contato. Os dados foram submetidos à análise de variância a dois critérios seguidos pelo teste Student-Newman-Keuls (p<0,05). O TMP reduziu a γS da dentina e aumentou os sítios doadores de elétrons (γS). Houve correlação positiva entre a adsorção de TMP e os valores de γS (Pearson's r=0,801; p<0,001). Maiores valores de γS levou a maior adsorção de Ca (p<0,001). A associação F/TMP não alterou a γS e γSLW e reduziu os valores de γS, entretanto houve maior adsorção de Ca. Houve correlação positiva entre a adsorção de TMP e F (Pearson's r=0,871; p<0,001). Concluiu-se que o TMP aumentou a γS e adsorção de Ca, e reduziu a γS. A associação com o F aumentou... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate in vitro the free surface energy (γS) of dentin after treatment with sodium trimetaphosphate (TMP) associated or not to fluoride (F), exposed or not to calcium (Ca), as well as the adsorption of TMP, F and Ca in dentin. Bovine dentin blocks (4 mm x 4 mm, n=12 blocks/group) were treated by immersion in solutions containing TMP at concentrations: 0%; 1%; 3% and 9% followed or not by the application of Ca. These concentrations of TMP were or not associated with F at the concentration of 1100 ppm F. Concentrations of F, Ca and TMP were determined in the solutions before and after the treatment to calculate the adsorption to the dentin. To analyze the free surface energy (γS) of the dentin, the apolar (γSLW) and polar (γSAB) components were determined after the treatments by means of the contact angle measurement. Data were submitted to analysis of variance at two criteria followed by the Student-Newman-Keuls test (p<0.05). The results showed that TMP reduces γS of dentin and increases electron donor sites (γS). There was a positive correlation between the adsorption of TMP and the values of γS, (Pearson's r=0.801; p<0.001). Higher values of γS led to higher adsorption of Ca (p<0.001). The F/TMP association did not change γS and γSLW and reduced the values of γS,, but the adsorption of calcium was higher. There was a positive correlation between the adsorption of TMP and F (Pearson's r=0.871, p<0.001). TMP increased γS and Ca adsorp... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Doctor en Bioquímica / La macroautofagia, comúnmente referida como “autofagia” es la principal vía de degradación de proteínas, organelos y material citoplasmático, permitiendo de este modo el reciclaje del material intracelular. Este proceso consiste en el englobamiento de fracciones citosólicas por una estructura multimembranar llamada “autofagosoma”, el cual posteriormente se fusiona con el lisosoma para formar el “autofagolisosoma”. Luego el material comprendido en el autofagolisosoma es degradado por enzimas hidrolíticas. Un estudio mostró que la inhibición de la enzima inositolmonofosfatasa (IMPasa) usando litio y L690.330, inducía una disminución de los niveles basales del IP3 y en consecuencia la generación de autofagia. Nuestros resultados confirmaron estos datos previos, demostrando que el pre tratamiento con mio-inositol revierte la autofagia inducida por litio y L-690.330. Además se demuestra que el pre tratamiento con mio-inositol también revertía la autofagia inducida por privación de nutrientes. IP3 es ligando de su receptor de IP3 (IP3R), el cual es el principal canal de Ca2+ a nivel del retículo endoplásmico. El principal objetivo de esta tesis es evaluar el rol del IP3R en la regulación de la autofagia. Los resultados mostraron que la disminución de los niveles proteicos del IP3R usando siRNA específicos, así como el tratamiento con antagonistas químicos del IP3R, tales como xestosponginas B y C, estimulaban significativamente el aumento en los niveles de autofagia. Además, xestospongina B, así como también la privación de nutrientes, indujo una pérdida en la interacción entre Bcl-2 y Beclin-1, los cuales interactúan en condiciones basales. El tratamiento con xestospongina B no perturbó los niveles de Ca2+, tanto en retículo endoplásmico como en el citosol, concluyendo que la autofagia inducida por xestospongina B es independiente de una fluctuación del Ca2+. Los experimentos de inmunoprecipitación mostraron que Beclin-1 (regulador clave en la inducción de la autofagia) interactúa tanto con IP3R así como con Bcl-2 en condiciones basales, y la interacción de este complejo es atenuado bajo condiciones de privación de nutrientes o por tratamiento con ABT737, el cual es un mimetizador de dominios BH3. Este resultado sugiere la presencia de un complejo proteico en la regulación de la autofagia. El papel del retículo endoplásmico en el desarrollo de la autofagia toma gran significancia debido al reclutamiento de proteínas clave (IP3R, Beclin-1 and Bcl-2). La relación entre autofagia y estrés de retículo no es clara y por lo tanto se evaluó el efecto de agentes inductores de estrés de retículo en la inducción de la autofagia. Los resultados mostraron que tunicamicina, tapsigargina y brefeldina-A (agentes inductores de estrés de retículo) activaron el UPR (respuesta a proteínas mal plegadas) e indujeron autofagia. La disminución de los niveles de proteínas claves en el desarrollo de la autofagia (Atg5, Atg10, Atg12, Vps34 y Beclin-1) usando específicos RNAs interferentes atenuaron la autofagia inducida por agentes inductores de estrés de retículo y xestospongina B. Además, la sobreexpresión de Bcl-2 y Bcl-XL con destinación a retículo endoplásmico atenuó la autofagia inducida por xestospongina B e inhibidores de la IMPasa. Esta tesis muestra novedosos resultados, los cuales dan cuenta de un complejo proteico IP3R/Beclin-1/Bcl-2 en la regulación de la autofagia. / Macroautophagy (herein referred to as “autophagy”) is the major catabolic pathway for entire organelles, long-lived/ aberrant proteins and superfluous portions of the cytosol. It consists of the stepwise engulfment of substrate elements into distinctive multimembraned “autophagosomes”, which after fusion with lysosomes form singlemembraned autophagolysosomes. Into the autophagolysosome, the engulfed material is degradated by lisosomal hidrolytic enzymes, leading the recyclage of intracellular material. A study has suggested that myo-inositol-1,4,5-trisphosphate (IP3) could regulate autophagy because inhibition of inositol monophosphatase (IMPasa) by lithium or L-690.330 stimulates autophagy through the depletion of IP3. Our results have confirmed that the reduction of intracellular IP3 levels by IMPasa inhibitors (lithium and L.690.330) stimulates autophagy, whereas the enhancement of IP3 levels by pre treatment whit mio-inositol inhibits the lithium and L.690.330 effect. Moreover we have demostred that autophagy induced by nutrient privation was also inhibited by treatment with mio-inositol, but the effect of nutrient privation in the intracellular IP3 basal levels was not evaluated. IP3 acts on the IP3 receptor (IP3R), an IP3‑activated Ca2+ channel of the endoplasmic reticulum membrane and consequently we wanted to evaluate de roll of IP3R in the regulation of autophagy. The results obtained in this thesis show that knockdown of the IP3 receptor (IP3R) with specifics small interfering RNAs and pharmacological IP3R antagonist (xestospongin B and C) are a strong stimulus for the induction of autophagy, in addition, xestospongin B (like nutrient starvation) induced loss in the interaction between Beclin-1 and Bcl-2. Moreover, the autophagy promoted by xestospongin B not produced alterations in the steady-state Ca2+ levels in the ER or in the cytosol, therefore the autophagy induced by xestospongin B was Ca2+-independent. Immunoprecipitation assays shown that Beclin- 1 (key protein in the regulation of autophagy) interacts with IP3R and Bcl-2 in basal conditions, and this interaction may be attenuated both by nutrient starvation or ABT737 treatment, which is a mimetic compound of BH3. These results suggest the presence of a protein complex in the regulation of autophagy. The treatment whit ER stressors such as tunicamycin, thapsigargin and brepheldine A induced Unfolded Protein Responses (UPR) and autophagy. The autophagy induced by these agents showed to be IRE1α dependent, but the inhibition of autophagy showed an increase in the cell death, indicating a pro survival function of the autophagy upon endoplasmic reticumum stress conditions. The autophagy induced by treatment with xestospongin B and ER stressors was inhibited by knockdown of Atg5, Atg10, Atg12, Vps34 and Beclin-1, which are keys proteins in the autophagic process. We have also evaluated the roll of Bcl-2 and Bcl-XL in the inhibition of autophgy, and the results showed that Autophagy triggered by IMPasa inhibitors and xestospongin B was inhibited by Bcl-2 and Bcl-XL over expression specifically targeted to ER but not Bcl-2 or Bcl-XL proteins targeted to mitocondria. Altogether, these results suggest that IP3R form a regulator complex with Bcl-2 and Beclin-1, which exerts a major role in the physiological control of autophagy

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T18:06:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 326339.pdf: 1378845 bytes, checksum: 37b75c942bd844e63a81b4c81e08f2bd (MD5) Previous issue date: 2014

SAMPAIO, N. S. F. S. Estudo da formação de coacervatos com nitrosilos complexos de rutênio. 2013. 75 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2014-11-26T21:13:16Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_nsfssampaio.pdf: 6573398 bytes, checksum: df38cc1de438d15d468f16728faeb5ec (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-11-25T12:31:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_nsfssampaio.pdf: 6573398 bytes, checksum: df38cc1de438d15d468f16728faeb5ec (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-25T12:31:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_nsfssampaio.pdf: 6573398 bytes, checksum: df38cc1de438d15d468f16728faeb5ec (MD5) Previous issue date: 2013 / This work reports the preparation of a new coacervate by mixture of aqueous solution of sodium polyphosphate and nitrosyl ruthenium complexes. The complexes used were: cis-[Ru(bpy)2(L)(NO)]n+, where L = 1-methylimidazole (MeimN), imidazole (ImN) and sulfite (SO32-). The preparation of the coacervates is possible only when ethanol is used. In accord of characterization of the coacervates the electronic absorption spectroscopy (UV-Vis) shows the characteristics bands of complex indicating their presence in the coacervates. Even after the preparation of the coacervates the infrared spectra show the presence of the NO+ group. Therefore, the preparation doesn’t change the form (oxidation state) of the NO ligand attached in the complexes. The nuclear magnetic resonance (NMR) 1H spectra have showed the signals of the hydrogen of the ligands into the coordination sphere of the complexes. Several compositions to coacervates are possible only changing the initial concentration of the complexes into mixture. The aqueous solution of sodium polyphosphate and the coacervates have showed interesting features related to conversion process nitrosyl-nitro. The conversion process nitrosyl-nitro occurs slowly into aqueous solution of the sodium polyphosphate at pH 7,0 but into the coacervates there’s no evidence of conversion process nitrosyl-nitro during 12 months. The shifting of the metal-ligand charge-transfer (MLCT) band from 332nm to 450nm was used to evaluated the conversion process nitrosyl-nitro by electronic absorption spectroscopy (UV-Vis). The release of the nitric oxide in the coacervates was induced by photochemical and chemical reduction. In both situations the release occurred and the complexes showed the properties of the nitric oxide releasing. / O trabalho reporta o estudo da formação de um novo coacervato preparado a partir da mistura de soluções aquosas de polifosfato de sódio e nitrosilos complexos de rutênio. Foram utilizados os nitrosilos complexos cis-[Ru(bpy)2(L)(NO)]n+, com L=1-metilimidazol (MeimN), imidazol (ImN) ou sulfito (SO32-). A formação dos coacervatos se mostrou possível alterando a metodologia tradicional pela adição de etanol. Com relação à caracterização dos coacervatos a espectroscopia eletrônica na região do UV-Vis mostra as bandas características dos complexos indicando a presença deles nos coacervatos. A espectroscopia de absorção na região do infravermelho indica que após a coacervação, o oxido nítrico (NO) mantém-se coordenado ao complexo na forma NO+ sugerindo que os coacervatos não interferem no estado de oxidação do NO nos complexos. Os espectros de ressonância magnética nuclear de 1H apontam a presença dos ligantes (L) que fazem parte da esfera de coordenação dos complexos, mais uma vez sugerindo a presença dos complexos nos coacervatos. Os resultados mostram que é possível controlar a quantidade de complexo no coacervato simplesmente aumentando a quantidade de complexo no início da mistura. Os resultados mostram que as soluções de polifosfato e os coacervatos exercem um efeito muito interessante no processo de conversão nitrosilo-nitro. Em soluções de polifosfato o processo de conversão ocorre lentamente em pH 7,0 enquanto nos coacervatos o complexo permanece estável por até 12 meses sem sofrer conversão. O processo de conversão foi monitorado por espectroscopia eletrônica a região do UV-Vis pelo deslocamento da banda de transferência de carga metal-ligante (MLCT) de 332nm para 450nm. A liberação do óxido nítrico foi estudada nos coacervatos em testes baseados na redução fotoquímica e na redução química. Em ambos a liberação foi possível mostrando que os complexos nos coacervatos mantem sua capacidade de liberadores de NO.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química / Made available in DSpace on 2012-10-26T12:27:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 302841.pdf: 3680662 bytes, checksum: 748bacb79b25a3c43bf0d51576fa796c (MD5) / As substituições nucleofílicas em ésteres de fosfato são amplamente estudadas na literatura. Os parâmetros estudados nestas reações são: sensibilidade ao grupo de saída e aos nucleófilos, medidas através de ?LG e ?Nu, respectivamente, a partir de Relações Lineares de Energia Livre (RLELs) de Brønsted. Quanto à reatividade de triésteres de fosfato, poucas evidências encontradas na literatura sugerem que grupos espectadores têm mínima influência. Neste trabalho foram preparados e estudadas as reações de hidrólise dos triésteres de fosfato tri-piridil fosfato (TPP), metil-di-piridil fosfato, di-etil-piridil fosfato, tri-4-nitrofenil fosfato (T4NPP), tri-3-nitrofenil fosfato (T3NPP) e tri-3-clorofenil fosfato (T3ClPP). A alta constante de hidrólise espontânea do TPP (2,2×10-5 s-1) e o alto efeito isotópico (kH/kD = 3,15) foram, inicialmente, interpretados como evidências de catálise básica geral intramolecular. Porém, estudos cinéticos posteriores com os triésteres triarílicos T4NPP, T3NPP e T3ClPP mostraram que os mesmos são mais reativos que sistemas di-alquil arílicos. Assim, os grupos espectadores, alquil ou aril, podem aparentemente contribuir em diferentes extensões para a reatividade dos triésteres de fosfato. A partir de RLELs de Brønsted, a influência dos grupos espectadores pode ser determinada e um novo parâmetro definido como ?NLG foi proposto para caracterizar a participação destes grupos. / In the present work phosphate triesters pyridyl tri-phosphate (9), di-ethyl-2-pyridyl phosphate (22), methyl-di-2-pyridyl (23) phosphate, tri-3 -nitrophenyl phosphate (25a) tri-4-nitrophenyl phosphate (25b), and tri-3-chlorophenyl phosphate (25c) were prepared. The spontaneous hydrolysis of the reactions containing the pyridyl group were studied under different conditions of temperature, pH and solvent. Due to low water solubility of the 25a-c, the hydrolyses reactions were followed in different mixtures of acetonitrile / water in order to obtain, by extrapolation, the constants of the spontaneous hydrolysis of each triester. The high value of spontaneous hydrolysis constant of triester 9 (2.2 × 10-5 s-1) and the high isotope effect (kH / kD = 3.15) were initially interpreted as evidence for intramolecular general base catalysis. However, subsequent kinetic studies with the triaryl phosphates 25a-c showed that these compounds are considerably more reactive than the corresponding dialkyl aryl system. Thus, the spectator groups, alkyl or aryl, can apparently contribute in different extents to the reactivity of phosphate triesters. So, in nucleophilic substitution reactions of phosphate triesters, besides the sensitivities to the leaving group and to the nucleophile, measured as ßLG and ßNu, respectively, the role of spectator groups becomes important. From Brønsted type linear free energy relationship # the influence of spectator groups can be determined, and a new parameter defined as ßNLG was proposed to characterize the participation of spectator groups. Regarding the reactivity of phosphate triesters, evidence found in the literature suggested that spectators groups had little or no influence and the correlation of Khan and Kirby had been used to calculate or predict the reactivity of these compounds. However, new evidence presented in this work indicate that triaryl phosphate triesters have reactivities that depend upon the spectator groups. The values of ßNLG found for triaryl and dialkyl aryl systems were 0.29 and 0.60 respectively. In fact, despite suffering smaller influence from spectator groups, the triaryl phosphate triesters are more reactive than di-alkyl aryl triesters and, the latter are more influenced by spectator groups. Finally, the results of this study add to existing literature new linear free energy correlations, clarifying and quantifying the effects of spectator groups in the hydrolysis of phosphate triesters, aspects previously considered unimportant in this type of reaction.