Orientador: Antônio Carlos Monteiro / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Banca: Lúcia Padilha Cury Thomaz de Aquino / Banca: Inajá Marchizeli Wenzel / Banca: Fernando Antonio de Ávila / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar "in vitro", a ação de Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae, para larvas, ninfas e adultos machos e fêmeas não alimentadas de Rhipicephalus sanguineus e para onde as mesmas fases do ciclo de vida do ácaro mantidas alimentadas em cães por meio de câmaras de alimentação coladas no dorso do animal. A ação no ambiente habitado pelo cão foi avaliada por meio de infestações naturais em boxes com todos os estádios do ácaro. Foram usadas suspensões contendo 108 conídios mL-1 de cada isolado. Nos ensaios com as fases não alimentadas os estádios foram imersos nas suspensões dos fungos e no ensaio com de alimentação no cão os diversos estádios do ciclo biológico do carrapato foram imersos ou pulverizados com as suspensões de conídios, e no ensaio do ambiente do cão as suspensões foram pulverizadas em todo o canil. Nos ensaios "in vitro" foram avaliadas a mortalidade de larvas, ninfas e adultos machos e fêmeas, e no ensaio com alimentação no cão avaliou-se a mortalidade de cada estádio e os indivíduos sobreviventes foram colocados para ingurgitar em coelhos, para avaliação dos estádios subseqüentes do ciclo do carrapato, até se obter novamente a mesma fase em que iniciaram o ciclo. No ensaio do ambiente do cão foi avaliada diariamente a infestação dos animais com as diversas fases do ciclo de vida do ácaro. B. bassiana e M. anisopliae promoveram significativa redução da sobrevivência de todos os estádios não alimentados, deixando claro a atividade patogênica para a fase não alimentada de R. sanguineus. No experimento com a alimentação em cães, B. bassiana promoveu mortalidade de fêmea, mas não houve mortalidade de larvas e ninfas, fato este também observado para M. anisopliae ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This work aimed to assess the "in vitro" action of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae, for unfed larvae, nymphs and adult male and female of Rhipicephalus sanguineus and for the same stadiums the tick life cycle maintained fed on dogs through feeding cameras fixed on dog's dorsal region. The action on the ambient where the dog lives was also evaluated through natural infestations with all of the stadiums of the acarid. Suspensions containing 108 conidia mL-1 of each isolated were used. In every assay with the unfed phase, the stadiums were immersed in the suspensions of the fungus and in the assays with feeding cameras, all the phases of the biological cycle of the tick were immersed or powdered with the conidial suspension and in the assay in the ambient suspensions were spread powdered in the whole box. In the "in vitro" assays it was evaluated the larvae, nymphs and adult male and female mortality. In the feeding cameras assay, the mortality of each stadium was evaluated and the surviving individuals were put for engorged in rabbits, to evaluate subsequent stadiums of the cycle of the tick, until obtain the same stadium wich was attained at the moment they began the cycle. In the environmental assay it was daily evaluated the infestation of the animals with all the phases of the life cycle of the acarid. B. bassiana and M. anisopliae promoted a significant reduction of the survival rate of all unfed stadiums of the tick what brings a strong evidence of pathogenicicity to unfed phases of R. sanguineus. In the experiment with feeding cameras, B. bassiana promoted female mortality, but mortality of larvae and nymphs were not observed fact this also observed for M. anisopliae. In the environment of the dog naturally infested with the stadiums of R. sanguineus was possible to observe that B. bassiana reduced the number of unfed and engorged larvae in the first week after treatment ...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Antonio Batista Filho / Banca: Carlos Frederico Wilcken / Banca: José Eduardo Marcondes Almeida / Resumo: O trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar a patogenicidade dos fungos Beauveria bassiana (isolado IBCB 66), Metarhizium anisopliae (isolado IBCB 425) e Lecanicillium lecanii (isolado JAB 02) sobre o psilídeo da goiabeira Triozoida sp. (HEMIPTERA: PSYLLIDAE) e a compatibilidade destes isolados com agrotóxicos. Os psilídeos, provenientes do campo, foram transferidos para ramos de goiabeira, contidos em tubos de PVC cuja extremidade inferior estava apoiada em placas de Petri com papel filtro umedecido. Cada ramo de goiaba foi pulverizado com 20mL das seguintes concentrações do patógeno: 5 OE 106, 1 OE 107, 5 OE 107, 1 OE 108 e 5 OE 108 conídios/mL, mais uma testemunha (água esterilizada). A partir das porcentagens de mortalidade de Triozoida sp., que variaram entre 26 e 77% para B. bassiana, 26 e 43% para M. anisopliae e 74 e 90% para L. lecanii, foi determinada a CL50 de 3,02 OE 107, 3,43 OE 1011 e 1,53 OE 107, para as três espécies respectivamente. A compatibilidade em laboratório foi observada incorporando-se os agrotóxicos ao meio de cultura BDA que, após a solidificação, foi inoculado com os fungos em três pontos eqüidistantes da placa de Petri, a qual foi mantida em câmara tipo B.O.D. por um período de 15 dias. Após este período, foram avaliados o crescimento vegetativo, esporulação, viabilidade e virulência dos entomopatógenos. Em condições de semi-campo, preparações dos produtos químicos e dos entomopatógenos foram pulverizadas em mudas de goiaba de três diferentes formas, a saber: a) primeiramente os produtos químicos e depois o fungo; b) primeiro o fungo e posteriormente o produto químico e c) os dois simultaneamente. 2 Após a aplicação, três folhas de cada ramo foram coletadas e lavadas obtendo-se uma suspensão que foi plaqueada em BDA para avaliação da esporulação, viabilidade e virulência dos conídios dos fungos. Observou-se... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: This study was carried out to evaluate the pathogenicity of the fungi Beauveria bassiana (IBCB 66 isolate), Metarhizium anisopliae (IBCB 425 isolate) and Lecanicillium lecanii (JAB 02 isolate) on the guava psyllid Triozoida sp. and their compatibility with agrochemical products. The psyllids were transferred to guava branches, inside a plastic tube hold between Petri dishes containing a wet filter paper. The insects were sprayed with 20 mL of dosages containing 5 OE 106, 1 OE 107, 5 OE 107, 1 OE 108 e 5 OE 108 conidia/mL, for the control, sterilized water was sprayed on. The mortality rates of Triozoida sp., ranged from 26 to 77% for B. bassiana, 26 to 43% for M. anisopliae and 74 to 90% for L. lecanii. The LC50 were 3,02 OE 107, 3,43 OE 1011 and 1,53 OE 107, respectively. The compatibility to agrochemicals was verified by adding the products to the PDA medium. After solidification, the medium was inoculated with each fungus in three different points of the Petri dish, which were maintained in acclimatized chamber BOD for a 15 days period. After this period, the evaluated parameters were the vegetative growth, sporulation, viability and virulence of the entomopathogens. In semi-field conditions, the chemical products mixed with the fungi were sprayed on guava plants at three different ways: a) the fungi were sprayed on after the pulverization of the chemical products; b) chemical products were sprayed on after the pulverization of the fungi; c) chemical products and fungi were sprayed on all together. Subsequently, three leaves of each treatment were collected and washed to obtain a suspension that were inoculated on PDA medium to evaluate the sporulation, viability and virulence of the fungus. In laboratory conditions, most of the fungicides and insecticides was classified as toxic or very toxic for the 4 three fungi evaluated. In semi-field conditions, a large variation of conidia... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Orientador: Antônio Carlos Monteiro / Banca: Marcelo Augusto Boechat Morandi / Banca: Kátia Cristina Kupper / Resumo: O conhecimento das condições adequadas de cultivo e a busca por meios de cultura e métodos de produção que favoreçam o crescimento e a esporulação de fungos e, principalmente, viabilizem economicamente o processo de produção são aspectos importantes a serem considerados na produção massal de um agente de biocontrole. O objetivo deste trabalho foi avaliar o crescimento, a esporulação e a viabilidade de B. euphorbiae sob o efeito de diferentes valores de pH inicial do meio de cultivo, da temperatura e do regime de iluminação além de analisar a tolerância dos conídios à luz solar e a radiação ultravioleta e selecionar meios de cultura de baixo custo e fácil obtenção para produção do fungo. O fungo foi cultivado em meios de cultura com vários valores de pH (4, 5, 6, 7, 8, 9 e 10), exposto a diversas temperaturas (13, 16, 19, 22, 25, 28, 31 e 34°C) e distintos fotoperíodos (0, 12 e 24 hs). Conídios do fungo foram submetidos ao efeito da luz emitida por simulador solar e radiação ultravioleta germicida, e avaliou-se, em ensaios distintos, a produção de B. euphorbiae em diferentes concentrações de meios líquidos obtidos de resíduos e subprodutos agroindustriais (vinhaça, melaço de cana-de-açúcar, leite de levedura, soro de queijo, água da prensa da mandioca e milhocina®), em misturas de substratos sólidos obtidos de grãos e derivados (sorgo em grão com casca de soja e quirela de trigo e casca de soja com quirela de trigo) e, posteriormente, a combinação dos meios líquidos e sólidos que proporcionaram melhores resultados em um sistema bifásico de cultivo. Nos ensaios dos fatores ambientais, a avaliação do desempenho do fungo foi baseada no crescimento radial das colônias, na produção de conídios por unidade de área de colônia e na viabilidade dos conídios em lâminas de microscopia. A determinação dos meios líquidos mais eficientes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The knowledge of adequate cultivate conditions, search for culture media and production methods that favor the growth and sporulation of fungi and, mainly, gain economical viability in the production process, are important aspects that must be considered in the massal production of an biocontrol agent. The objective of this work was to evaluate the growth, sporulation and viability of Bipolaris euphorbiae under the effects of different cultivation medium initial pH values, temperature and photoperiod, and also to analyze the tolerance of conidia to light emitted by solar and ultraviolet radiation and select media of low cost and easy purchase for the fungus production. The fungus was cultivated in media with several pH values (4, 5, 6, 7, 8, 9 and 10) and exposed do different temperatures (13, 16, 19, 22, 25, 28, 31 and 34°C) and photoperiods (0, 12, 24 hours). Conidia of the fungus were submitted to light effect, emitted by solar simulator and germicidal ultraviolet radiation. In a different experiment was evaluated the production of B. euphorbiae in different liquid media concentrations, obtained of agroindustrial residuals and byproducts (vinasse, sugar cane molasses, yeast cream, cheese whey, water of cassava bran and milhocina®) in combined mixtures of solid substracts obtained from different grains and derivates (sorghum grains with soybean hulls and cracked wheat and soybean hulls with cracked wheat) and, posteriorly, in combination of the liquid and solid media that demonstrated the best results in a two-phase cultivate system. In the experiments of environmental factors the fungus performance was based on the radial growth of the colonies, conidia production per colony area unit and viability of conidia in microscopic slide. The determination of the most efficient liquid media for the production of B. euphorbiae was based on the evaluation of production and viability of conidia... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Antônio Carlos Monteiro / Banca: José Eduardo Marcondes de Almeida / Banca: Sérgio Antonio de Bortoli / Resumo: A traça-das-crucíferas Plutella xylostella é relatada como uma das principais pragas das crucíferas no Brasil e no mundo. Sua principal forma de controle ainda é o químico, mas seu uso indiscriminado tem causado problemas de resistência de algumas populações, além de matar seus inimigos naturais e trazer malefícios para o ambiente e para o homem. Alguns estudos de controle biológico vêm sendo realizados para o controle dessa praga, dentre eles destacando-se o uso de fungos entomopatogênicos e de parasitóides. Assim, foi realizado um estudo com o objetivo de determinar a concentração e tempo letal 50 e 90 dos fungos entomopatogênicos Beauveria bassiana, Isaria fumosorosea e Metarhizium anisopliae para lagartas de P. xylostella, e a patogenicidade de isolados deste fungos para ovos, lagartas, pupas e adultos da praga. Foram utilizados cinco isolados de cada espécie fúngica, sendo que os mais patogênicos à todas as fases do ciclo de vida do inseto foram utilizados para investigar a interação dos entomopatógenos com os parasitóides Trichogramma pretiosum e T. exiguum e com o predador Podisus nigrispinus. As CL90 para B. bassiana, I. fumosorosea e M. anisopliae foram 2 x 108, 8,65 x 107 e 1,77 x 108 conídios mL-1, respectivamente, sendo que estas foram utilizadas em todos os experimentos posteriores. Os isolados CB 75 e IBCB 133 de I. fumosorosea mostraram uma ação patogênica eficiente para ovos da praga, causando, respectivamente, 66 e 70% de mortalidade. Para a fase de lagarta os isolados E9 e o IBCB 425 de M. anisopliae, causaram, respectivamente, 98 e 96% de mortes. Considerando a mortalidade total de pupas tratadas e seus adultos emergidos, a ação dos isolados AM 09, JAB 07, IBCB 74 e IBCB 87 não diferiu significativamente (p<0,01) causando, respectivamente, 94, 92, 82 e 100% de mortalidade do inseto. Para os adultos não houve diferença significativa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The diamondback moth Plutella xylostella is related as one of mainly pests in crucifers in Brazil. Its mainly control way still is chemical, but its indiscriminate use has been causing resistance in some populations, besides to kill its natural enemies and bring bad things for environment and human. Some studies of biological control have been made, outsdanding entomopathogenic fungi and parasitoids. Thus, it was determinated the lethal time and concentration 50 and 90 of entomopathogenic fungi Beauveria bassiana, Isaria fumosorosea and Metarhizium anisopliae to larvae of P. xylostella, and the pathogenicity of strains of these fungi to eggs, larvae, pupae and adults of the pest. It was used five strains of each fungal specie, and the most pathogenic were used to investigate the interaction between entomopathogens and the parasitoids Trichogramma pretiosum and T. exiguum and with the predator Podisus nigrispinus. The LC90 for B. bassiana, I. fumosorosea and M. anisopliae were 2 x 108, 8,65 x 107 e 1,77 x 108 conidia ml-1, respectively, being used in the following bioassays. The strains CB 75 and IBCB 133 of I. fumosorosea showed an efficient pathogenic action for the eggs of the pest, causing, respectively, 66 and 70% of mortality. For larvae the isolates E9 and IBCB 425 of M. anisopliae, caused, respectively, 98 and 96% of death. Considering the total mortality of treated pupae and its emerged adults, the action of AM 09, JAB 07, IBCB 74 and IBCB 87, did not differ significantly (p<0,01) causing, respectively, 94, 92, 82 e 100% of insect mortality. For adults there was no statistical difference between the B. bassiana strains. The isolates CB 75 and IBCB 133 of I. fumosorosea caused, respectively, 98 and 94% of adults death of P. xylostella and the strains E9, IBCB 159 and IBCB 425 of M. anisopliae, caused 100, 92 and 96% of death. For the obtained results in all the stages of this study... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

COSTA, Helen Paula Silva da. Purificação e caracterização de um inibidor de tripsina com atividade antimicrobiana da torta de pinhão-manso (Jatropha curcas L.). 118 f. : Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências, Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Fortaleza-CE, 2012. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-05-20T13:42:27Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_hpscosta.pdf: 3018720 bytes, checksum: eb4b6b465befb3e7211b53415f21b787 (MD5) / Approved for entry into archive by demia Maia (demiamlm@gmail.com) on 2016-05-23T12:00:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_hpscosta.pdf: 3018720 bytes, checksum: eb4b6b465befb3e7211b53415f21b787 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-23T12:00:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_hpscosta.pdf: 3018720 bytes, checksum: eb4b6b465befb3e7211b53415f21b787 (MD5) Previous issue date: 2012 / The residue (cake) obtained after the extraction of oil from jatropha (Jatropha curcas) seeds for biodiesel production is toxic. Despite of the obstacles related to its use in the animal feed, there are evidences that this residue has great potential for biotechnology applications due to its arsenal of molecules. Thus, the present study aimed to purify and characterize a trypsin inhibitor from jatropha cake, in order to make a better use of this residue. The centesimal composition analysis showed to be the jatropha cake mainly composed of proteins (37.21%), fiber (34.26%) and lipids (19.16%). The crude extract obtained from the jatropha cake under alkaline condition (100 mM sodium borate buffer, pH 10.0) showed the presence of lectin (319.76 HU/gF), papain inhibitor (1,287.38 IU/gF), protease (2.69 AU/gF) and, especially, trypsin inhibitor (1,649.7 IU/gF). The trypsin inhibitor, named JcTI, was purified by fractionation of the crude extract with trichloroacetic acid (2.5%) followed by affinity chromatography (trypsin-sepharose-4B) and molecular exclusion (sephacryl S-200). JcTI is a glycoprotein (6.4% carbohydrates) with molecular mass in the range of 20-21 kDa, pI of 6.6, NH2-terminal sequence (VRDICKKEAERQDLSSCENYITQRRGY) showing identity around 60% with plant albumins and highly stable to heat, pH and salinity. JcTI (500 µg/mL) slowed the growth of important phytopthogenic fungi, including Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum lindemuthianum, Fusarium oxysporum and Fusarium solani. This inhibitor also presented antibacterial activity against human pathogenic bacteria such as Bacillus subtilis, Salmonella choleraesuis and Staphylococcus aureus, with minimum inhibitory concentration less than 5 µg/mL. The results demonstrate the potential of JcTI for biotechnological application as a new defense protein against phytopthogenic fungi and human pathogenic bacteria. / O resíduo (torta) obtido após a extração de óleo das sementes de pinhão-manso (Jatropha curcas) para a produção de biodiesel é tóxico. Apesar dos entraves relacionados à sua utilização na alimentação animal, existem evidências de que esse resíduo tem grande potencial de utilização biotecnológica graças ao arsenal de moléculas que o constitui. Assim, o presente trabalho teve como foco a purificação e caracterização de um inibidor de tripsina da torta de pinhão-manso, vislumbrando um maior aproveitamento desse resíduo. A análise da composição centesimal revelou ser a torta de pinhão-manso composta principalmente por proteínas (37,21%), fibras (34,26%) e lipídios (19,16%). O extrato bruto obtido a partir da torta sob condição alcalina (tampão borato de sódio 100 mM, pH 10,0) mostrou a presença de lectina (319,76 UH/gF), inibidor de papaína (1.287,38 UI/gF), protease (2,69 UA/gF) e, principalmente, de inibidor de tripsina (1.649,7 UI/gF). O inibidor de tripsina, denominado JcTI, foi purificado do extrato bruto por fracionamento com ácido tricloroacético (2,5%) seguido de cromatografias de afinidade (tripsina-sepharose-4B) e de exclusão molecular (sephacryl S-200). JcTI é uma glicoproteína (6,4% de carboidratos) com massa molecular na faixa de 20-21 kDa, pI de 6,6, sequência NH2-terminal (VRDICKKEAERQDLSSCENYITQRRGY) exibindo similaridade em torno de 60% com albuminas vegetais e altamente estável ao calor, salinidade e pH. JcTI (500 µg/mL) retardou o crescimento de vários fungos fitopatogênicos de importância agrícola, incluindo Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum lindemuthianum, Fusarium oxysporum e Fusarium solani. Esse inibidor também mostrou atividade antibacteriana frente a bactérias patogênicas ao homem, tais como Bacillus subtilis, Salmonella choleraesuis e Staphylococcus aureus, com concentração inibitória mínima inferior a 5 µg/mL. Os resultados obtidos demonstram o potencial do JcTI para aplicação biotecnológica como uma nova proteína de defesa contra fungos fitopatogênicos e bactérias patogênicas ao homem.