Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-09-03T21:06:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Heloiza Maria da Silva Oliveira.pdf: 1343350 bytes, checksum: bede1d8395fba6bf1d4dda9b86a7e0b1 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-26T20:46:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Heloiza Maria da Silva Oliveira.pdf: 1343350 bytes, checksum: bede1d8395fba6bf1d4dda9b86a7e0b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-26T20:46:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Heloiza Maria da Silva Oliveira.pdf: 1343350 bytes, checksum: bede1d8395fba6bf1d4dda9b86a7e0b1 (MD5) Previous issue date: 2011-02-24 / FACEPE / Infecções fúngicas em imunossuprimidos aumentaram significativamente nas últimas décadas, sendo uma das principais causas de morbidade e mortalidade. Fatores de virulência, como produção de enzimas pelos agentes infecciosos, contribui no dano causado aos pacientes. Neste contexto, os objetivos deste trabalho foram detectar, isolar e identificar fungos em amostras clínicas, principalmente das vias respiratórias, de pacientes com pneumopatias crônicas, internos no Setor de Pneumologia do Hospital Geral Otávio de Freitas – PE e caracterizar os agentes quanto à patogenicidade. Foram realizadas coletas em 137 pacientes, sendo obtidas 327 (92,2%) amostras de escarro, 20 (5,6%) de lavado bronco-alveolar, quatro (1,1%) de secreção da cavidade oral e quatro (1,1%) de fragmentos de tecido pulmonar. Em 10 pacientes (7,29%), foi diagnosticada aspergilose pulmonar, em quatro, (2,9%) colonização causada por espécies de Candida e Geotrichum clavatum, em três (2,1%), colonização por leveduras associada à candidíase oral, em um, (0,7%) feohifomicose pulmonar e em um (0,7%), candidíase oral. Foram obtidos 21 isolados, sendo oito (38,09%) de Aspergillus fumigatus, um (4,76%) de A. flavus, oito (38,09%) de C. albicans, dois (9,54%) de C. tropicalis, um (4,76%) de G. clavatum e um fungo filamentoso demáceo, Cladophialophora devriesii (4,76%). As culturas apresentaram diferentes perfis em relação a capacidade elastinolítica, proteolítica e fosfolipásica, não permitindo estabelecer relação entre os danos ao hospedeiro e a detecção enzimática. O diagnóstico diferencial precoce e preciso é imprescindível para terapêutica adequada e bom prognóstico do paciente. / Opportunistic fungal infections have increased significantly in recent decades, and it is a major cause of morbidity and mortality. Virulence factors, such as enzyme production, contributes to the damage caused to patients. In this context, the objectives were to detect, isolate and identify the fungi occurring in clinical samples, mainly respiratory tract of patients with chronic respiratory disorders, inmates in Pneumology sector of the Hospital Geral Otávio de Freitas - PE and to characterize them in respect to pathogenicity. From the 137 patients collected, 327 (92.2%) were obtained by sputum samples, 20 (5.6%) from bronchoalveolar lavage, four (1.1%) from secretion of the oral cavity and four (1, 1%) from of fragments of lung tissue. In 10 patients (7.29%), it was diagnosed pulmonary aspergillosis, in four patients (2.9%) presented a yeast colonization caused by Candida species and Geotrichum clavatum, three patients (2.1%) presented colonization by yeasts associated with oral candidiasis, one (0.7%) had pulmonary phaeohyphomycosis and one (0.7%), oral candidiasis. From 21 isolates obtained, eight (38.09%) were identified as Aspergillus fumigatus, one (4.76%) isolate as A. flavus, eight (38.09%) as C. albicans, two (9.54%) as C. tropicalis, one (4.76%) G. clavatum and a dematiaceous filamentous fungus, Cladophialophora devriesii (4.76%). The cultures presented different profiles in relation to their capacities to produce elastinolytic, proteolytic and phospholipolytic enzymes, which did not albw to establish a correlation between the host damage and enzymatic detection. The early and accurate differential diagnosis is imperative for appropriate therapy and prognosis for the patients.

Orientador: Eduardo Bagagli / Resumo: O reino fungi é constituído por amplos grupos de organismos com reconhecida importância ecológica, industrial ou médica. O solo é um importante reservatório para microrganismos, especialmente fungos, que atuam na decomposição e reciclagem de nutrientes ou se associam com animais e plantas em relações simbióticas ou causando patogenias. Ainda são poucos os estudos relacionados a estrutura do micobioma, sendo rasa a compreensão da diversidade e ecologia de fungos. A compreensão dos padrões de distribuição da diversidade fúngica é essencial para mensurar as mudanças naturais e antrópicas relacionadas a estas comunidades, tal como entender a ecologia e epidemiologia dos fungos considerados patogênicos. Neste trabalho caracterizamos a diversidade fúngica das amostras de solo em diferentes ambientes no município de Botucatu (Brasil), descrevendo a estrutura da comunidade fúngica e mensurando a prevalência dos fungos patogênicos, mediante a técnica de Sequenciamento de Nova Geração (NGS). No sequenciamento mediante plataforma Illumina, analisamos 44 amostras provenientes de 8 ambientes diferentes, em dois períodos (outono e primavera), incluindo tocas de tatus, corujas e outros ambientes relacionados. A riqueza e diversidade variaram entre os ambientes, sendo favorecido nas amostras ambientais da floresta sazonal semidecidual e das tocas de tatus, os quais possuem uma maior cobertura vegetal. Ainda, ambientes mais antropizados, com menores efeitos de cobertura vegetal, como edifício... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Fungos filamentosos com capacidade de produzir micotoxinas podem estar presentes em alimentos, desde o cultivo até o produto após industrialização. Devido a isso, estratégias para controlar o crescimento fúngico devem ser investigadas, a fim de evitar o desenvolvimento desses microrganismos, bem como a produção de suas toxinas nos alimentos. Neste trabalho, duas abordagens para o controle de fungos toxigênicos foram avaliadas. A primeira estratégia foi a utilização de bactérias provenientes de diferentes ambientes aquáticos, sendo que 10 linhagens de Bacillus spp. e a linhagem Pseudomonas sp. 4B foram testadas quanto à influência sobre os parâmetros de crescimento (taxas de crescimento micelial, esporulação e germinação de esporos) de fungos toxigênicos (Aspergillus e Penicillium) e formação de micotoxinas. Todas as bactérias foram capazes de inibir o crescimento dos fungos em meio de cultura, apresentando halos de inibição variando de 1,0 até 15,7 mm. Bacillus sp. P11 apresentou resultados mais expressivos em relação às demais linhagens do gênero Bacillus com maiores valores de redução na maioria dos parâmetros de crescimento. Além disso, Bacillus sp. P11 e Pseudomonas sp. 4B apresentaram efeito sobre as taxas de crescimento micelial, esporulação e germinação de esporos, com níveis de redução acima de 43,3, 32,1 e 84,1% respectivamente. Mesmo assim, as demais linhagens também apresentaram resultados satisfatórios sobre esses parâmetros. Estas bactérias também reduziram a síntese de aflatoxina B1 e ocratoxina A em mais de 94 e 63%, respectivamente, quando cultivadas simultaneamente com os fungos produtores de cada micotoxina. Adicionalmente, a capacidade de Bacillus sp. P11 em produzir os lipopeptídeos iturina A (167,9 mg/mL de extrato butanólico) e surfactina (361,9 mg/mL de extrato butanólico) foi confirmada. Estes compostos podem ter contribuído para a atividade antifúngica desta bactéria. A segunda estratégia investigada neste estudo para controlar o desenvolvimento de fungos toxigênicos foi o emprego de nanofibras de poli-ɛ-caprolactona (PCL) incorporadas com cetoconazol e natamicina como material antimicrobiano. Nesta abordagem, as nanofibras foram produzidas pela técnica de eletrofiação e posteriormente caracterizadas e avaliadas quanto ao seu potencial antifúngico. Nanofibras funcionalizadas com cetoconazol ou natamicina apresentaram atividade antifúngica contra os isolados toxigênicos uma vez que zonas de inibição variando de 6 a 44 mm foram observadas. Além disso, as análises de microscopia eletrônica e espectroscopia demonstraram que a incorporação dos antifúngicos não altera de forma expressiva as principais características das nanofibras. Também foi possível verificar a capacidade de liberação controlada dos antifúngicos durante 72 h de contato das nanofibras com diferentes soluções simulantes. Valores próximos a 80 e 45 μg/mL de cetoconazol e natamicina, respectivamente, foram observados em solução de Tween 20 (5%). Portanto, o processo de eletrofiação foi capaz de agregar propriedades antifúngicas às nanofibras de PCL. Os resultados demonstraram que as bactérias e os nanomateriais investigados neste estudo são promissores para o controle de fungos toxigênicos e produção de micotoxinas. / Filamentous fungi that have the potential to produce mycotoxins may be present in food, from cultivation to after industrialization. Therefore, several strategies to control fungal growth must be investigated in order to avoid the development of these microorganisms and the production of their toxins in food. In this work, two approaches to toxigenic fungi control were evaluated. The first one was the use of bacteria from different aquatic environments as biocontrol agents in which 10 Bacillus spp. strains and the Pseudomonas sp. 4B strain were tested in relation to the effect on growth parameters (mycelial growth, sporulation and spore germination rates) of toxigenic fungi (Aspergillus and Penicillium) and mycotoxin formation. All bacteria were able to inhibit the fungal growth in culture medium with inhibition zones ranging from 1.0 to 15.7 mm. It was also observed that Bacillus sp. P11 had better results compared to other Bacillus strains with larger reduction values in most of growth parameters. Furthermore, Bacillus sp. P11 and Pseudomonas sp. 4B exhibited effect on mycelial growth, sporulation and spore germination rates with reduction values above of 43.3, 32.1 and 84.1%, respectively. Even so, the other strains also showed satisfactory results on these parameters. Finally, these bacteria reduced the synthesis of aflatoxin B1 and ochratoxin A at levels above 94 and 63%, respectively, when co-cultivated with each mycotoxin producing fungi. Additionally, the ability of Bacillus sp. P11 to produce lipopeptides such as iturin A (167.9 mg/ml of butanolic extract) and surfactin (361.9 mg/ml of butanolic extract) was confirmed. These compounds may have contributed to antifungal activity of this bacterium. The second investigation of this work in order to control the growth of toxigenic fungi was the use of poly-ε-caprolactone nanofibers incorporated with ketoconazole and natamycin as antimicrobial material. In this approach, nanofibers were produced by the electrospinning technique and subsequently characterized and evaluated for their antifungal potential. Both nanofibers functionalized with ketoconazole and natamycin showed antifungal activity against toxigenic isolates since inhibitory zones ranging from 6 to 44 mm were observed. In addition, scanning electron microscopy and infrared spectroscopy analysis showed that the antifungals incorporation does not change the characteristics of nanofibers. It was also possible to verify the ability of controlled drug release during 72 h of nanofibers contact with different simulants solutions. Values near 80 and 45 μg/ml of ketoconazole and natamycin, respectively, were observed in the solution containing 5% Tween 20. Therefore, the electrospinning process was able to provide antifungal properties to the nanofibers. The results showed that bacteria and nanomaterials investigated in this study are promising for developing control strategies of toxigenic fungi and mycotoxin production.

Submitted by Márcio Ropke (ropke13marcio@gmail.com) on 2017-06-19T11:47:46Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Avaliação do Efeito Antifúngico de Fixadores de Dentaduras Modificados pelo.pdf: 1806073 bytes, checksum: 0b5aa896a1b70dd68b4d7fd54819230d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T11:47:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Avaliação do Efeito Antifúngico de Fixadores de Dentaduras Modificados pelo.pdf: 1806073 bytes, checksum: 0b5aa896a1b70dd68b4d7fd54819230d (MD5) Previous issue date: 2015-04-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O uso de próteses totais convencionais configura-se como um importante método de reabilitação bucal devido principalmente a vantagem econômica, sendo a principal queixa quanto ao seu uso a falta de retenção e estabilidade. A fim de melhorar essas características existem no mercado produtos com propriedades adesivas chamados de fixadores de dentadura. O principio de ação desse material resume-se na absorção de líquidos do meio, aumento da viscosidade e aumento da adesividade a mucosa. O presente trabalho foi dividido em três artigos. O artigo 1 objetivou avaliar o estado da técnica e o estado da arte através de revisão sistematizada em banco de patentes e de artigos referentes a fixadores de dentaduras. Para o monitoramento do estado da técnica e da arte, foi realizada uma pesquisa bibliográfica de estudos publicados entre 1960 e 2014, em sete bases de dados MEDLINE ( PubMed), Web of Science , Lilacs , IBECS , Biblioteca Cochrane , Scielo e Scopus . Além disso, os seguintes bancos de dados de patentes foram rastreados: USPTO , EPO , JPO , INPI , Derwent Innovations Index, Patentscope e Questel Orbit . Os dados foram tabulados e analisados pelo Microsoft Office Excel 2013 software e Questel Orbit. Um total de 54 artigos e patentes 78 foram incluídos na análise referente ao monitoramento bibliográfico e tecnológico. Os estudos mais predominantes foram realizados in vivo (n=30), e os tipos de adesivos mais estudados foram em creme ou pó (n=14). Os avanços recentes de tais materiais têm sido mais relacionados com a apresentação comercial do que com os efeitos adicionais de adesivos para próteses dentárias. O artigo 2 objetivou avaliar uma nova metodologia confiável para o teste de adesividade dos fixadores de dentadura frente às variáveis como: meio (saliva artificial, saliva natural e água destilada) e método (imersão e molhamento). Para a validação da metodologia confiável de adesividade dos fixadores este foi definido usando um planejamento experimental com fatores fixos e variáveis. Foi utilizado para tal proposito uma maquina de ensaios universais operando com célula de carga de 100 N e velocidade de 1 mm/min. O método de ensaio estabelecido mostrou que o meio em que o teste é realizado, saliva artificial, água e saliva natural e o método utilizado, imersão ou molhamento, foram determinantes para o resultado de adesividade dos fixadores de dentadura. O artigo 3 objetivou caracterizar e avaliar o efeito do acréscimo de um antifúngico alternativo, derivado de pirazois, em fixadores de dentadura comerciais em três diferentes apresentações (pó, pasta e creme). Os fixadores de dentadura comerciais foram modificados com a inclusão de antifúngicos (Nistatina e Pirazol) em três concentrações por porcentagem em massa diferentes (30%; 3% e 0.3%). A ação antifúngica foi determinada através dos testes de disco difusão e contato direto. O teste de contato direto foi mensurado em 1, 4, 8 e 12 horas. A atividade citotóxica foi avaliada em fibroblastos de camundongos (NIH/3T3) pelo ensaio colorimétrico de redução do MTT. Os resultados obtidos demonstraram que as inclusões dos antifúngicos não afetam a adesividade dos fixadores de dentadura (p>0,05). O teste de disco difusão e de contato direto demonstraram que a inclusão de Nistatina e de Pirazol nos fixadores de dentadura comercial promoveram nestes ação antifúngica frente a Candida albicans. Os fixadores formulados com pirazol se mostraram atividade antifúngica similar aqueles formulados com nistatina. Em relação a citotoxicidade, a concentração mais alta (30%) foi significativamente a mais citotóxica (p<0,05), sendo que as concentrações subsequentes se mostraram com baixa citotoxicidade. Os fixadores com pirazol de comportaram semelhantes a nistatina em relação a citotoxidade nas concentrações 2(3%) e 3(0,3%). Considerando-se as limitações do presente estudo, conclui-se que há possibilidade do uso de fixadores de dentadura como sistema de entrega de antifúngicos comerciais (Nistatina) ou não (pirazol) sendo a segunda concentração (3%) a mais eficiente, que independe da apresentação comercial é menos citotóxica. / The use of conventional dentures still appears as the main oral rehabilitation method of total edentulous patients mainly because the economic advantage of this kind of treatment. Despite these prostheses were made for several years, the main complaint about their use remains the lack of retention and stability. In order to improve these characteristics exists in the market products with adhesive properties called denture adhesives. These denture adhesives have a variety of formulations and commercial presentation, but the principle of action summarized in the absorption of the liquid medium, increased viscosity and increased adhesion to the mucosa. There are controversies in the literature about the effect of these denture adhesives in the oral microbiota and the possibility that these promote accumulation of biofilm which in turn cause chronic infections, such as chronic atrophic candidiasis. This work was divided into three articles. Article 1 aimed to evaluate the state of the art and state of the art through systematic review on bank of patents and articles related to denture adhesives. For monitoring the technique and art state, was performed a literature search of studies published between 1960 and 2014 in seven MEDLINE (PubMed), Web of Science, Lilacs, IBECS, Cochrane Library, SciELO and Scopus. In addition, the following patent databases were screened: USPTO, EPO, JPO, PTO, Derwent Innovations Index, Questel Orbit and Patentscope. Data were tabulated and analyzed using Microsoft Office Excel 2013 software and Questel Orbit. A total of 54 papers and patents 78 were included in the analysis related to bibliographic and technological monitoring. The results showed that the highest number of patents (n = 19) was deposited by Procter & Gamble Company (Cincinnati, Ohio). A total of 54 papers and patents 78 were included in the analysis related to bibliographic and technological monitoring. Furthermore, the most prevalent in vivo studies were performed (n = 30), and the types of adhesives have been most studied cream or powder (n = 14). Recent advances of such materials have been related more to the presentation than for the additional effects of denture adhesives. Article 2 aimed to evaluate a new methodology for the reliable adhesive test of front denture adhesives the variables as a (artificial saliva, natural saliva and distilled water) and method (immersion and wetting). The commercial denture adhesives were modified with the inclusion of antifungals (Pyrazol and nystatin) in three different concentrations in percentages by weight (30%, 3% and 0.3%). To validate the adhesiveness reliable methodology for fixing this was defined using an experimental design with fixed and variable factors. Was used for this purpose universal testing a machine operating with a 100 N load cell and speed of 1 mm / min. The established test method showed that the environment in which the test is performed, artificial saliva, water and natural saliva and the method used, dipping or wetting, was decisive for the outcome of the denture adhesives. It is essential that researchers analyze their methodologies before predicting and say which product is more or less efficient, avoiding misconceptions about them. Article 3 aimed to characterize and evaluate the effect of the addition of an alternative antifungal derived from pyrazoles, in commercial denture adhesives in three different presentations (powder, tape and cream). The antifungal activity was determined by the disk diffusion testing and direct contact. Direct contact test was measured at 1, 4, 8 and 12 hours. The cytotoxic activity was evaluated on mouse fibroblasts (NIH /3T3) using the colorimetric MTT reduction assay. The results showed that the inclusion of antifungals did not affect the adhesion of the denture adhesives (p> 0.05). The disk diffusion test results and demonstrated that direct contact include nystatin and pyrazole in commercial denture adhesives promoted to these antifungal activity against Candida albicans. Adhesives dentures formulated with pyrazol proved similar antifungal those formulated with nystatin. With respect to cytotoxicity, the highest concentration was significantly more cytotoxic (p <0.05), and subsequent concentrations showed low cytotoxicity. The dentures adhesives with pyrazole behaved like nystatin relative cytotoxicity at concentrations of 3% and 0.3%. Considering the limitations of this study, it is concluded that there is possibility of using denture adhesives as delivery system of trade antifungal (Nystatin) or not (pyrazole) and the second concentration (3%) to more efficient, which is independent commercial and less cytotoxic presentation.

Orientador: Cleslei Fernando Zanelli / Coorientadora: Tatiana Maria de Souza Moreira / Banca: Alexandra Ivo de Mendeiros / Banca: Geisiany Maria de Queiroz-Fernandes / Resumo: O fator de tradução de eucariotos eIF5A é descrito como a única proteína que apresenta o aminoácido hipusina, o qual é gerado por uma modificação pós-traducional essencial para a proliferação celular em todos os eucariotos estudados até o momento, sendo que a enzima desoxi-hipusina sintase (DHPS) é responsável pela primeira etapa da formação desse aminoácido em eIF5A. Portanto, a inibição de DHPS também impede a modificação de eIF5A, tornando esta proteína não funcional, o que pode ter aplicação no tratamento dos tipos de câncer em que o fator está envolvido. Embora N1-guanil-1,7-diamino-heptano (GC7) seja potente inibidor da enzima DHPS, foram observados outros efeitos na célula devido à atuação do composto em alvos não específicos. Desta forma, o presente trabalho tem como objetivo a busca por novos inibidores de DHPS, com baixa citotoxicidade e que reduzam a proliferação celular ou que inibam o crescimento de micro-organismos eucarióticos patogênicos, como algumas espécies de fungos. Primeiramente, foi avaliada a citotoxicidade de diferentes compostos com núcleo guanidínico frente a macrófagos murinos. Entre os compostos testados, aqueles que apresentaram menor citotoxicidade foram o composto GC7 e os compostos de núcleo guanidínico com um grupo fenil substituído em para por uma metila e outro por um flúor. A partir deste resultado, os compostos foram submetidos à avaliação de sua atividade antiproliferativa frente às mesmas células. GC7 promoveu inibição da proliferação c... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Eukaryotic translation factor eIF5A is described as the only protein that presents the amino acid hypusine that is generated by a post-translational modification, which is essential for cell proliferation in all the eukaryotes studied to date. The enzyme deoxyhypusine synthase (DHPS) is responsible for the first stage of formation of this amino acid in eIF5A. Therefore, the inhibition of DHPS also prevents the modification of the eIF5A, making this protein non-functional, which may have application in the treatment of cancer kinds in which this factor is involved. Although N1-guanyl-1,7-diaminoheptane (GC7) is a strong inhibitor of the DHPS enzyme, other effects on the cell were observed due to the acting of the compound on non-specific targets. Thus, the present work aims to search for new DHPS inhibitors, with low cytotoxicity and able to reduce cell proliferation or inhibit the growth of pathogenic eukaryotic microorganisms such as some fungal species. Firstly, the cytotoxicity of different compounds with guanidinic nucleus against murine macrophages was evaluated. Among the compounds tested, those that showed the lowest cytotoxicity were the GC7 compound and the guanidine core compounds with a phenyl group substituted in para for one methyl and another with fluorine. From these data, the antiproliferative activity of the compounds towards the same cells was evaluated. GC7 promoted inhibition of proliferation as already described in the literature, but the compounds tested... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Fungos filamentosos com capacidade de produzir micotoxinas podem estar presentes em alimentos, desde o cultivo até o produto após industrialização. Devido a isso, estratégias para controlar o crescimento fúngico devem ser investigadas, a fim de evitar o desenvolvimento desses microrganismos, bem como a produção de suas toxinas nos alimentos. Neste trabalho, duas abordagens para o controle de fungos toxigênicos foram avaliadas. A primeira estratégia foi a utilização de bactérias provenientes de diferentes ambientes aquáticos, sendo que 10 linhagens de Bacillus spp. e a linhagem Pseudomonas sp. 4B foram testadas quanto à influência sobre os parâmetros de crescimento (taxas de crescimento micelial, esporulação e germinação de esporos) de fungos toxigênicos (Aspergillus e Penicillium) e formação de micotoxinas. Todas as bactérias foram capazes de inibir o crescimento dos fungos em meio de cultura, apresentando halos de inibição variando de 1,0 até 15,7 mm. Bacillus sp. P11 apresentou resultados mais expressivos em relação às demais linhagens do gênero Bacillus com maiores valores de redução na maioria dos parâmetros de crescimento. Além disso, Bacillus sp. P11 e Pseudomonas sp. 4B apresentaram efeito sobre as taxas de crescimento micelial, esporulação e germinação de esporos, com níveis de redução acima de 43,3, 32,1 e 84,1% respectivamente. Mesmo assim, as demais linhagens também apresentaram resultados satisfatórios sobre esses parâmetros. Estas bactérias também reduziram a síntese de aflatoxina B1 e ocratoxina A em mais de 94 e 63%, respectivamente, quando cultivadas simultaneamente com os fungos produtores de cada micotoxina. Adicionalmente, a capacidade de Bacillus sp. P11 em produzir os lipopeptídeos iturina A (167,9 mg/mL de extrato butanólico) e surfactina (361,9 mg/mL de extrato butanólico) foi confirmada. Estes compostos podem ter contribuído para a atividade antifúngica desta bactéria. A segunda estratégia investigada neste estudo para controlar o desenvolvimento de fungos toxigênicos foi o emprego de nanofibras de poli-ɛ-caprolactona (PCL) incorporadas com cetoconazol e natamicina como material antimicrobiano. Nesta abordagem, as nanofibras foram produzidas pela técnica de eletrofiação e posteriormente caracterizadas e avaliadas quanto ao seu potencial antifúngico. Nanofibras funcionalizadas com cetoconazol ou natamicina apresentaram atividade antifúngica contra os isolados toxigênicos uma vez que zonas de inibição variando de 6 a 44 mm foram observadas. Além disso, as análises de microscopia eletrônica e espectroscopia demonstraram que a incorporação dos antifúngicos não altera de forma expressiva as principais características das nanofibras. Também foi possível verificar a capacidade de liberação controlada dos antifúngicos durante 72 h de contato das nanofibras com diferentes soluções simulantes. Valores próximos a 80 e 45 μg/mL de cetoconazol e natamicina, respectivamente, foram observados em solução de Tween 20 (5%). Portanto, o processo de eletrofiação foi capaz de agregar propriedades antifúngicas às nanofibras de PCL. Os resultados demonstraram que as bactérias e os nanomateriais investigados neste estudo são promissores para o controle de fungos toxigênicos e produção de micotoxinas. / Filamentous fungi that have the potential to produce mycotoxins may be present in food, from cultivation to after industrialization. Therefore, several strategies to control fungal growth must be investigated in order to avoid the development of these microorganisms and the production of their toxins in food. In this work, two approaches to toxigenic fungi control were evaluated. The first one was the use of bacteria from different aquatic environments as biocontrol agents in which 10 Bacillus spp. strains and the Pseudomonas sp. 4B strain were tested in relation to the effect on growth parameters (mycelial growth, sporulation and spore germination rates) of toxigenic fungi (Aspergillus and Penicillium) and mycotoxin formation. All bacteria were able to inhibit the fungal growth in culture medium with inhibition zones ranging from 1.0 to 15.7 mm. It was also observed that Bacillus sp. P11 had better results compared to other Bacillus strains with larger reduction values in most of growth parameters. Furthermore, Bacillus sp. P11 and Pseudomonas sp. 4B exhibited effect on mycelial growth, sporulation and spore germination rates with reduction values above of 43.3, 32.1 and 84.1%, respectively. Even so, the other strains also showed satisfactory results on these parameters. Finally, these bacteria reduced the synthesis of aflatoxin B1 and ochratoxin A at levels above 94 and 63%, respectively, when co-cultivated with each mycotoxin producing fungi. Additionally, the ability of Bacillus sp. P11 to produce lipopeptides such as iturin A (167.9 mg/ml of butanolic extract) and surfactin (361.9 mg/ml of butanolic extract) was confirmed. These compounds may have contributed to antifungal activity of this bacterium. The second investigation of this work in order to control the growth of toxigenic fungi was the use of poly-ε-caprolactone nanofibers incorporated with ketoconazole and natamycin as antimicrobial material. In this approach, nanofibers were produced by the electrospinning technique and subsequently characterized and evaluated for their antifungal potential. Both nanofibers functionalized with ketoconazole and natamycin showed antifungal activity against toxigenic isolates since inhibitory zones ranging from 6 to 44 mm were observed. In addition, scanning electron microscopy and infrared spectroscopy analysis showed that the antifungals incorporation does not change the characteristics of nanofibers. It was also possible to verify the ability of controlled drug release during 72 h of nanofibers contact with different simulants solutions. Values near 80 and 45 μg/ml of ketoconazole and natamycin, respectively, were observed in the solution containing 5% Tween 20. Therefore, the electrospinning process was able to provide antifungal properties to the nanofibers. The results showed that bacteria and nanomaterials investigated in this study are promising for developing control strategies of toxigenic fungi and mycotoxin production.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2017. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: Capítulos 5,6,7 e 8. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-07-24T17:06:17Z No. of bitstreams: 1 2017_TatianeSilvadosSantos_PARCIAL.pdf: 449028 bytes, checksum: 8c8cb73576e3120a9c5059ea29c736a2 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-09-20T13:42:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_TatianeSilvadosSantos_PARCIAL.pdf: 449028 bytes, checksum: 8c8cb73576e3120a9c5059ea29c736a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-20T13:42:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_TatianeSilvadosSantos_PARCIAL.pdf: 449028 bytes, checksum: 8c8cb73576e3120a9c5059ea29c736a2 (MD5) Previous issue date: 2017-09-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). / O fungo Cryptococcus neoformans é um agente causador da micose sistêmica criptococose, que tem levado a óbito cerca de 181 mil pessoas por ano ao redor do mundo. A doença atinge principalmente pessoas imunodeprimidas e adquiriu maior importância clínica a partir da década de 1980, com o aparecimento da AIDS. Como em outras doenças fúngicas, o diagnóstico e o tratamento dessa doença ainda não são ideais, reforçando a necessidade de estudar-se melhor a relação parasito-hospedeiro na busca por melhores estratégias para reverter esses problemas. Nos últimos anos tem se mostrado que pequenos metabólitos podem ter um importante papel na interação parasita-hospedeiro. Demonstrou-se previamente, que moléculas de baixo peso molecular (menor que 1 KDa) presentes no meio condicionado (CM) de culturas estacionários de C. neoformans da linhagem H99, afetavam o crescimento planctônico e em biofilmes desse fungo, bem como a produção de melanina e a secreção de polissacarídeos capsulares por esse fungo. Em continuidade a esses estudos, no presente trabalho analisou-se a influência dessas mesmas moléculas secretadas pelo fungo na sua interação com macrófagos murinos primários. Fungos e macrófagos foram co-incubados por períodos de 2h ou 24h em uma razão de infecção de 2:1 na presença ou não do CM e foram analisados os possíveis efeitos na fagocitose dos fungos, na sobrevivência fúngica pós-interação e na produção de citocinas por esses macrófagos (TNF-α, IL-12, IL-1β, IL-6 e MCP-1, e IL-10). Observou-se uma potencial atividade antifagocítica de metabólitos presentes no CM, uma vez que na presença do CM houve um menor percentual de fagocitose dos fungos. Além disso, o CM produziu um aumento significativo no número de unidades formadoras de colônia do fungo após a interação com os macrófagos por 24h, sugerindo, portanto, a possibilidade de existir nessas amostras, moléculas capazes de estimular o crescimento extra e/ou intracelular do fungo. Interessantemente, após 24 h de fagocitose, observa-se um número bem menor de fungos intracelulares nos macrófagos contendo fungo, do que nas amostras controle sem CM. A produção de citocinas só foi avaliada no período de 2h de interação e não foram observadas diferenças significativas na produção de TNF-α, IL-1β, IL-6, apenas uma diminuição da produção de MCP-1 na presença de CM indicando um potencial papel anti-inflamatório de moléculas presentes nessa amostra. Em resumo, foi possível constatar que os pequenos metabólitos presentes no CM podem afetar a viabilidade e/ou crescimento fúngico na sua interação com macrófagos, possivelmente inibindo a sua internalização por fagócitos e inibindo a produção de citocinas pró-inflamatórias. Dessa maneira, um maior conhecimento das moléculas presentes no CM bem com o melhor detalhamento de suas atividades podem ajudar no melhor entendimento das interações fungo-hospedeiro na criptococcose. / The fungus Cryptococcus neoformans is a causative agent of the systemic mycosis cryptococcosis, a disease leading to about 181 thousand deaths per year worldwide. The disease affects mainly immunocompromised individuals and gained greater clinical importance from the 1980s, with the onset of AIDS. As in other fungal diseases, the diagnosis and treatment of this pathology is still far from ideal, reinforcing the need to better study the host-parasite interaction in the seek for best strategies to revert these problems. In the recent years, small metabolites were shown to play important roles in host-parasite interactions. It was previously demonstrated that low molecular weight molecules (lower than 1 KDa), present in conditioned medium (CM) from stationary cultures of C. neoformans strain H99, affected the planktonic and biofilm growth of this fungus, as well the production of melanin and secretion of capsular polysaccharides by this fungus. To further study the role of those molecules, in the present work we analyzed the influence of these secreted molecules, during fungal interaction with primary murine macrophages. Fungal cells and macrophages were co-incubated for periods of 2h or 24h in an infection ratio of 2:1, in the presence or absence of CM. Then we analyzed the possible effects of these molecules on fungal phagocytosis by macrophages, fungal survival, and macrophage cytokine production (TNF-α, IL-12, IL-1β, IL-6, MCP-1, and IL-10). We observed a potential anti-phagocytic activity of metabolites present in CM, which samples showed a lower percentage of fungal internalization. In addition, the CM produced a significant increase in the number of colony forming units of the fungus, obtained after 24h interaction with macrophages. This suggests that molecules capable to stimulate the extra and/or intracellular growth of the fungus might exist in these samples. Interestingly, after 24h phagocytosis, a significantly lower number of intracellular fungi were observed in fungus-containing macrophages when compared to control samples without CM. The production of cytokines was evaluated only within a period of 2h interaction and no significant differences were observed in the production of TNF-α, IL-1β, IL-6. Only a decrease in the production of MCP-1 in the presence of CM was detected, suggesting a potential anti-inflammatory role of the molecules present in this sample. In summary, it was possible to confirm that small metabolites present in CM might affect fungal viability and/or growth while interacting with macrophages, possibly inhibiting their internalization by these phagocytes and the production of pro-inflammatory cytokines. Thus, a better characterization of the molecules present in CM and of their activities could improve the understanding of fungus-host interactions in cryptococcosis.

Submitted by ALEXANDRA DANIELA BARRIOS EGUILUZ (alexandra_be88@hotmail.com) on 2018-04-26T15:34:00Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Alexandra Daniela Barrios Eguiluz.pdf: 2081089 bytes, checksum: 486c23815d757cd635ac788df1396c47 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Carolina Gonçalves Bet null (abet@iq.unesp.br) on 2018-05-02T19:02:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 eguiluz_adb_me_araiq_int.pdf: 2011000 bytes, checksum: becbe4b2b7cc79b7be570531023dc459 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-02T19:02:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 eguiluz_adb_me_araiq_int.pdf: 2011000 bytes, checksum: becbe4b2b7cc79b7be570531023dc459 (MD5) Previous issue date: 2018-04-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O fator de tradução de eucariotos eIF5A é descrito como a única proteína que apresenta o aminoácido hipusina, o qual é gerado por uma modificação pós-traducional essencial para a proliferação celular em todos os eucariotos estudados até o momento, sendo que a enzima desoxi-hipusina sintase (DHPS) é responsável pela primeira etapa da formação desse aminoácido em eIF5A. Portanto, a inibição de DHPS também impede a modificação de eIF5A, tornando esta proteína não funcional, o que pode ter aplicação no tratamento dos tipos de câncer em que o fator está envolvido. Embora N1-guanil-1,7-diamino-heptano (GC7) seja potente inibidor da enzima DHPS, foram observados outros efeitos na célula devido à atuação do composto em alvos não específicos. Desta forma, o presente trabalho tem como objetivo a busca por novos inibidores de DHPS, com baixa citotoxicidade e que reduzam a proliferação celular ou que inibam o crescimento de micro-organismos eucarióticos patogênicos, como algumas espécies de fungos. Primeiramente, foi avaliada a citotoxicidade de diferentes compostos com núcleo guanidínico frente a macrófagos murinos. Entre os compostos testados, aqueles que apresentaram menor citotoxicidade foram o composto GC7 e os compostos de núcleo guanidínico com um grupo fenil substituído em para por uma metila e outro por um flúor. A partir deste resultado, os compostos foram submetidos à avaliação de sua atividade antiproliferativa frente às mesmas células. GC7 promoveu inibição da proliferação como já descrito na literatura, mas os compostos testados não tiveram efeito na proliferação. Por meio de avaliação in vitro da inibição direta sobre a enzima DHPS, os compostos de núcleo guanidínico com um grupo fenil substituído em para por Br, I e sem substituição mostraram inibição da atividade enzimática com uma resposta dose-dependente. Pela avaliação da susceptibilidade, o composto TrisBrEsp, com três grupos guanidínicos substituídos, apresentou as menores concentrações inibitória e fungicida mínimas contra espécies de Candida, Cryptococcus e Paracoccidioides, enquanto que GC7 mostrou inibição do crescimento apenas para as espécies de Cryptococcus. Assim, embora GC7 e os compostos testados com núcleo guanidínico contendo uma fenila substituída por um grupo halogênio ou um apolar apresentem inibição direta sobre a enzima DHPS, não foi possível, nas concentrações testadas, confirmar a atividade que o inibidor GC7 possui, que é a de retardar a proliferação celular. Por outro lado, o mecanismo da inibição do crescimento dos fungos aqui testados deve ser melhor estudado, visto que GC7 apresentou pouco efeito inibidor e o composto com melhor atividade não inibiu a DHPS diretamente nas concentrações testadas. / Eukaryotic translation factor eIF5A is described as the only protein that presents the amino acid hypusine that is generated by a post-translational modification, which is essential for cell proliferation in all the eukaryotes studied to date. The enzyme deoxyhypusine synthase (DHPS) is responsible for the first stage of formation of this amino acid in eIF5A. Therefore, the inhibition of DHPS also prevents the modification of the eIF5A, making this protein non-functional, which may have application in the treatment of cancer kinds in which this factor is involved. Although N1-guanyl-1,7-diaminoheptane (GC7) is a strong inhibitor of the DHPS enzyme, other effects on the cell were observed due to the acting of the compound on non-specific targets. Thus, the present work aims to search for new DHPS inhibitors, with low cytotoxicity and able to reduce cell proliferation or inhibit the growth of pathogenic eukaryotic microorganisms such as some fungal species. Firstly, the cytotoxicity of different compounds with guanidinic nucleus against murine macrophages was evaluated. Among the compounds tested, those that showed the lowest cytotoxicity were the GC7 compound and the guanidine core compounds with a phenyl group substituted in para for one methyl and another with fluorine. From these data, the antiproliferative activity of the compounds towards the same cells was evaluated. GC7 promoted inhibition of proliferation as already described in the literature, but the compounds tested had no effect on proliferation. By means of in vitro evaluation of direct inhibition on the DHPS enzyme, the guanidine core compounds with a phenyl group substituted in the para position by Br, I and without substitution showed inhibition of enzyme activity with a dose-dependent response. By the susceptibility evaluation, the TrisBrEsp compound with three-substituted guanidine groups showed the lowest concentrations for inhibitory and minimum fungicidal against Candida, Cryptococcus and Paracoccidioides species. Whereas, the GC7 showed inhibition of growth only for Cryptococcus species. Thus, although GC7 and compounds tested with a guanidine nucleus containing a phenyl substituted by a halogen or a nonpolar group show direct inhibition on the DHPS enzyme, it was not possible, at the concentrations tested, to confirm the activity of the GC7 inhibitor, which is to retard cell proliferation. On the other hand, the mechanism of inhibition of the growth of the fungi tested here should be better studied, since the GC7 showed little inhibitory effect and the compound with the best activity did not inhibit the DHPS directly at the tested concentrations.

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Coorientador: Luis Carlos Spolidorio / Banca: José Francisco Hofling / Banca: Flavia Sammartino Mariano Rodrigues / Banca: Cristiane Duque / Banca: Janaina de Cassia Orlandi Sardi / Resumo: A esporotricose é uma infecção causada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckiii, o qual contamina o hospedeiro através de locais com pequenos traumas, causando lesões cutâneas, subcutâneas que podem se disseminar para outros tecidos. Os mecanismos imunológicos envolvidos na prevenção e controle da esporotricose sugerem que a imunidade mediada por células apresenta um importante papel na proteção do hospedeiro contra S. schenckii. Os receptores Toll-like (TLR), presentes nas células do sistema imune inato, destacam-se pelo seu papel central na ligação de patógenos e iniciação da resposta imune. A ativação desses receptores por padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs) induz a fagocitose, a liberação de citocinas e mediadores químicos que atuam no sistema imune eliminando ou favorecendo a infecção. O TLR-2 está envolvido na resposta do hospedeiro contra uma variedade de fungos. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar a participação do TLR-2 na resposta imunológica induzida pelo S. schenckii. Foram utilizados camundongos C57BL/6 (WT) e C57BL/6 TLR-2 Knockout (TLR-2-/-) para que se conseguisse verificar, durante um período de 10 semanas de infecção esporotricótica, a influência do TLR-2 na produção das citocinas IL-1β, IL-12 e TNF-α por macrófagos; a estimulação dos macrófagos através da liberação de NO, a participação do TLR-2 na geração dos perfis celulares Th1, Th2 e Th17 e, por fim, a influência desse receptor na produção de IFN-γ, IL-6, IL-10, IL-4, IL-17 e TGF-β. Entre os antígenos do fungo S. schenckii utilizados como estímulo nas culturas celulares, verificou-se que o antígeno lipídico é o mais eficaz na capacidade de estimular a produção dos mediadores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sporotrichosis is an infection caused by the dimorphic fungus Sporothrix schenckii, which infects the host through local minor trauma, causing skin and subcutaneous lesions which can spread to other tissues. The immunological mechanisms involved in sporotrichosis prevention and control suggest that cell-mediated immunity plays an important role in protecting the host against S. schenckii. The Toll-like receptors (TLR), found on innate immune system cells, for their central role in pathogen-binding and immune response initiation. The activation of these receptors by pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) induces phagocytosis and the release of chemical mediators and cytokines which direct the immune system in favoring or eliminating the infection. TLR-2 is involved in host responses against a variety of fungi. Therefore, the aim of this study was to evaluate the involvement of TLR-2 in the immune response induced by S. schenckii. C57BL/6 mice (WT) and C57BL/6 TLR-2 knockout (TLR-2-/-) were used in order to evaluate, over a period of 10 weeks of sporotrichotic infection, the influence of TLR-2 over macrophages production of the cytokines IL-1β , IL-12 and TNF-α, their stimulation level by NO release, the involvement of TLR-2 in the generation of Th1, Th2 and Th17 cell profiles and, finally, the influence of this receptor in the production of IFN -γ, IL-6, IL-10, IL-4, IL-17 and TGF-β. Among all the S. schenckii antigens used as stimulus in cell cultures, it was found that the lipid antigen is the most effective in regard... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Banca: Gilda Maria Barbaro Del Negro / Banca: Fernando Góngora Rubio / Resumo: As Infecções relacionadas à Assistência à Saúde (IRAS) estão entre as principais causas de morbidade e de mortalidade em ambiente hospitalar. Neste panorama, destacam-se as fungemias, que são estabelecidas quando há um comprometimento da resposta da resposta imune do hospedeiro. Os avanços médicos nas últimas duas décadas melhoraram a sobrevida dos pacientes críticos, o que levou a um aumento de infecções em UTI. O método diagnóstico atualmente utilizado para este tipo de infecção (hemocultura) é lento e apresenta baixa sensibilidade. Demais alternativas de diagnóstico rápido são essenciais por permitir a adoção da terapia antimicrobiana correta e diminuir o tempo de internação, evitando gastos e sobrecarga ao sistema de saúde. Deste modo, métodos moleculares são promissores por serem mais rápidos, precisos e sensíveis. Sendo assim, o objetivo geral deste estudo foi avaliar comparativamente técnicas laboratoriais diagnósticas para fungemia - método molecular (nested PCR) versus cultura - e associar aos aspectos clínicos dos pacientes, tempo de realização e custos. A população foi composta por 89 pacientes, sendo 67 provenientes de UTI Geral e 22 de UTI Neonatal, todos com suspeita de infecção sistêmica. Foram colhidas 118 amostras de sangue no total. Parte deste sangue era enviada ao Hospital, seguindo a rotina de hemocultura. Outra parte era destinada a realização da metodologia molecular. Após padronização, foi obtido como limiar de detecção da técnica, 10 células fúngicas por 4 ml de amostra. Em 46 (51,7%) foi detectada fungemia pelo nested PCR. Correlacionando com os fatores de risco, as doenças de caráter pulmonar, cardíaco e renal foram as doenças de base prevalentes; enquanto que o uso de cateter venoso central, ventilação mecânica e terapia antimicrobiana prévia foram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Health-care associated infections (HAI) are among the leading causes of morbidity and mortality in a hospital environment. Medical advances over the past two decades have improved the survival of critically ill patients, which led to an increase of infections in ICU. In this scenario, stand out the fungemias, which are established when there is an impairment of host immune response. The diagnostic method currently used for this type of infection (blood cultures) is slow and has low sensitivity. A rapid diagnosis is essential to allow the adoption of the correct antimicrobial therapy and reduce hospitalization time, avoiding expenses and a burden the health-care system. Therefore, molecular methods for diagnosis are promising because they are faster, more accurate and more sensitive than conventional methods. Thus, the main objective of this study was to comparatively evaluate laboratory diagnostic techniques for fungemia - molecular method (nested PCR) versus culture - in association with clinical features of patients, performance time and its costs. The population consisted of 89 patients, 67 from General ICU and 22 from Neonatal ICU, all with suspicion of systemic infection. Were collected a total of 118 blood samples. A portion of this blood was sent to hospital, following the normal routine. Another part was destined to realization of the molecular method. After standardization, the detection threshold found was 10 fungal cells per 4 ml of sample. Considering the patients, in 46 (51.7%) fungemia was detected by nested PCR. Correlating with risk factors, pulmonary, cardiac and renal diseases were the most relevant underlying diseases; whereas, the use of central venous catheters, mechanical ventilation and prior antimicrobial therapy were the most important clinical features. In comparison, both methods... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre