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Novo método para obtenção de hidrolisado protéico, cálcio, quitina, carotenóides e glicosaminoglicanos de cabeças de camarãoCAHÚ, Thiago Barbosa 31 January 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010 / Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Nos últimos anos, a indústria pesqueira brasileira tem vivenciado um período
importante de desenvolvimento. Mas, juntamente com o crescimento na produção, temse
o aumento da quantidade de resíduos gerados no processamento do pescado, que
usualmente são descartados no ambiente, causando poluição. Os resíduos do
processamento são constituídos por cabeças, carcaças e vísceras de peixes, cabeças e
cascas de crustáceos e fauna acompanhante, e podem representar de 20 a 70% do
pescado comercializado. O aproveitamento dos resíduos incrementa a economia do
setor industrial pesqueiro e permite que essa atividade seja mais ecologicamente
sustentável e economicamente viável. O mal uso de subprodutos do processamento de
pescados é considerado por muitos um desperdício de moléculas biativas valiosas. As
cabeças de camarão representam um dos principais resíduos do processamento de
pescados e constituindo em até 50% do peso total do animal. Esse material é utilizado
atualmente como fonte de proteína e na produção de quitina das cascas, matéria prima
para produção comercial de quitosana. Diversos métodos são empregados para a
recuperação de hidrolisados protéicos e quitina, dentre eles a hidrólise utilizando
proteases exógenas. Entretanto, o emprego destas enzimas encarece o processo
tornando-o pouco adequado para o uso industrial. Nas cabeças de camarões estão
contidas as vísceras (parte do trato digestivo) que possuem enzimas hidrolíticas que
podem ser aplicadas na solubilização dos tecidos e deproteinização das cascas,
facilitando as etapas de extração e purificação dos produtos. No presente trabalho é
descrito um novo método para obtenção de vários compostos a partir de cabeças de
camarão (Litopenaeus vannamei) submetidas à autólise. No processo, foi obtido
hidrolisado protéico, carotenóides, quitina e quitosana e glicosaminoglicanos sulfatados.
A partir de 1kg de cabeças obteve-se 1,46L de hidrolisado protéico (solução a 9%) e
194mg de carotenóides totais, sendo 111,96mg de carotenóides não identificados e
82,56mg de astaxantina. A partir de 53g de carapaça foram obtidas cerca de 25g de
quitina e 17g de quitosana. Quitina e quitosana foram analisadas por espectroscopia de
13C-RMN e FT-IR para comprovar a efetiva desacetilação dos resíduos de Nacetilglucosamina.
O grau de desacetilação foi calculado por titulação potenciométrica,
análise elementar e FT-IR para quitosana produzidas a partir uma e duas desacetilações
bem como a quitosana purificada. Os valores obtidos encontram-se ente 60-80%. O
conteúdo de glicosaminoglicanos obtidos do sedimento após extração de carotenóides e lipídios foi de 23,32 μg kg-1 de subproduto e mostraram migração eletroforética
semelhante aos padrões de mamífero. As frações precipitadas foram suscetíveis à ação
das heparitinases I e II, o que sugere a presença de um heparam sulfato. As
biomoléculas recuperadas a partir de cabeças de camarão possibilitam um amplo
espectro de aplicações como na suplementação e formulação de rações animais, em
abordagens biomédicas e biotecnológicas
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Purifica??o e caracteriza??o parcial de duas N-acetil-?-hexosaminidases do Equinoderma marinho Echinometra lucunterLima, ?dila Lorena Morais 30 November 2006 (has links)
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Previous issue date: 2006-11-30 / Two b-N-acetylhexosaminidases (F11 e F15) were purified from Echinometra lucunter gonads extracts. The purified enzymes were obtained using ammonium sulfate fractionation, followed by gel filtration chromatographies (Sephacryl S-200, Sephadex G-75 and Sephacryl S-200). The F11 fraction was purified 192.47 -fold with a 28.5% yield, and F15 fraction 85.41 -fold with a 32.3% yield. The molecular weights of the fractions were 116 kDa for F11 and 42 kDa for F15 using SDS-PAGE. In Sephacryl S-200, F15 was 84 kDa, indicating that it is a dimeric protein. When p-nitrophenyl-?-D-glycosaminide was used as substrate, we determined an apparent Km of 0.257 mM and Vmax of 0.704 for F11 and for F15 the Km was 0.235 mM and Vmax of 0.9 mM of product liberated by hour. Both enzymes have optimum pH and temperature respectively at 5.0 and 45 ?C. The enzymes showed inhibition by silver nitrate, while the glucuronic acid was a potent activator. The high inhibition of F15 by N-etylmaleimide indicates that sulphydril groups are involved in the catalysis of synthetic substrate / Neste trabalho foram purificadas e caracterizadas parcialmente duas N-acetil-b- hexosaminidases (F11 e F15) extra?das de g?nadas do equinoderma marinho Echinometra lucunter. As enzimas foram purificadas com protocolo seq?encial por precipita??o com sulfato de am?nio e cromatografias de exclus?o molecular (Sephacryl S-200, Sephadex G-75 e Sephacryl S-200). A fra??o F11 foi purificada 192,47 vezes com recupera??o de 28,5% e F15 85,41 vezes com recupera??o de 32,3%. Suas massas moleculares, determinadas por eletroforese em gel de poliacrilamida com SDS, foram respectivamente 116 e 42 kDa. Em Sephacryl S-200 F15 apresentou massa molecular de 84 KDa, sugerindo que esta enzima possui forma dim?rica. Utilizando-se p-nitrofenil N-acetil-b-glicosamin?deo como substrato obtivemos Km aparente de 0,257 mM e Vmax de 0,704 unidades de absorb?ncia a 405 nm / h para a fra??o 11, e 0,235 mM e Vmax de 0,9 unidades de absorb?ncia a 405 nm / h para F15. Ambas fra??es apresentaram pH e a temperatura ?tima de cat?lise 5,0 e 45 ?C, respectivamente. A atividade N-acetil-b-glicosaminid?sica foi potencialmente inibida por prata, iodoacetamida, N-etilmaleimida e PMSF. A forte inibi??o de F15 por N-etilmaleimida indica o envolvimento de radicais sulfidrila na hidr?lise do substrato sint?tico, caracterizando tamb?m ser uma enzima altamente sensitiva a este sal
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